镜像法与电轴法

电穿孔系统技术参数

多功能电穿孔系统 1、工作条件： 电源：100 – 120 VAC or 220 – 240 VAC, 50/60 Hz. 功率：最大240W 室温：0 - 35?C, 相对湿度：0 – 95%, (non-condensing) 2、总则用于原核和真核细胞电转化 3、详细技术指标及规格： 3.1 系统配置：带有方波输出功能的主机、原核细胞组件及哺乳动物细胞组件，0.1/0.2/0.4cm电激转 化杯。该细胞转化仪用于原核细胞、真菌以及哺乳动物细胞的电击转化试验，包括外源DNA导入和细胞融合等。 技术要求和参数： *（1）系统输出波形：指数衰减和方波两种输出，适合不同应用需要。 （2）输出电压：10 – 3,000伏，最小调节量1伏。 *（3）电容容量：10 – 500伏：25 – 3275 μF以25 μF 递增，适合哺乳动物细胞需要。 500 – 3000伏：10, 25, 50 μF三种调节，适应原核细胞要求。 （4）电阻（并联）：50 – 1,000 Ω以50 Ω递增，及无限大设置 *（5）样品电阻：在10 – 2,500 V时，最小20 Ω 在2,500 – 3,000 V时，最小600 Ω （6）方波放电时间：10 – 500 V档位: 持续时间0.05 – 10 ms时，以0.05 ms递增， 持续时间10 – 100 ms时，以1 ms 递增，

可设1 – 10 次脉冲重复，0.1 – 10 sec 间隔 500 – 3,000 V档位: 持续时间0.05 – 5 ms时，以0.05 ms递增， 可设1 – 2 次脉冲重复，5 sec 最小间隔 （7）主机： 输出波形：指数衰减和方波两种输出波形 输出电压; 200 – 3,000伏 放电容量：10, 25, 50 μF，三档调节 样品电阻：最小20 Ω，在10 – 2,500 V档位， 最小600 Ω，在2,500 – 3,000 V档位， 方波放电时间：持续时间0.05 – 5 ms时，以0.05 ms递增， 可设1 – 2 次脉冲重复，5 sec 最小间隔 *实验方法预存：24种程序预设，方便用户优化自己的实验条件 用户自定义方法储存：最多144个程序方便用户储存自己的实验方法。 脉冲波形检测：实时监测并显示脉冲波形。 （8）原核细胞系统 *输出波形：指数衰减或方波 输出电压; 200 – 3,000伏 放电容量：10, 25, 50 μF *样品电阻：在10 – 2,500 V ，20 Ω最小 在2,500 – 3,000 V，600 Ω最小 *方波放电时间：持续时间0.05 – 5 ms以0.05 ms递增， 1 – 2 次脉冲，5 sec 最小间隔

电磁场与电磁波 镜像法习题.

如图所示，一个点电荷q 放在60? 的接地导体角域内的点(1,1,0)处。试求：(1) 所有镜像电荷的位置和大小；(2) 点P (2,1,0) 处的电位。 解：(1) 这是一个多重镜像的问题，共有（2n-1）=2×3-1=5个像电荷，分布在以点电荷q '1'1'1'2' 2'2'3'3'3'4'4'4'5750.366, 75 1.3661.366,0.366 1.366,0.366 2850.366,285 1.366,x q q y x q q y x q q y x q q y x q q ?????????==?=-?==???==-?=?==???==-?=-?==-???==?=?= =-??= -'5'51 3151 y ???==??==-?? 点P (2,1,0) 处的电位 35124012345090 1(2,1,0)()4π(10.5970.2920.2750.3480.447)4π0.321 2.89104πq q q q q q R R R R R R q q qV ?εεε'''''= +++++'''''= -+-+-= =?

1．空气（介电常数10εε=）与介电常数（204εε=）的分界面是z=0的平面。若已知空气中的电场强度124x z E e e =+，则电介质中的电场强度为（ ）。 a. 2216x z E e e =+ b. 284x z E e e =+ c. 22x z E e e =+ 3. 在分析恒定磁场时，引入矢量磁位A ，并令B=A ??的依据是（ ）。 a. 0A ??= b. B J μ??= c. 0B ??= 4． 用镜像法求解静电场边值问题时，判断镜像电荷设置是否正确的依据是（ ）。 a.镜像电荷的位置是否与原电荷相称； b.镜像电荷是否与原电荷等值异号； c.待求区域内的电位函数所满足的方程与边界条件是否保持不变 6． 穿透深度（或趋肤深度）δ与频率f 及媒质参数（电导率为σ、磁导率为μ）的关系是（ ）。 a. f δπμσ= b. δ c. δ= 8． 矩形波导的截止波长与波导内填充的媒质（ ）。 a. 无关 b.有关 c. 关系不确定，还需看传播什么波型 10． 在电偶极子的远区，电磁波是（ ）。 a. 非均匀平面波 b.非均匀球面波 c. 均匀平面波

细胞的脂质体转染法和电穿孔法

细胞的脂质体转染法和电穿孔转染法 （一）脂质体转染 一、实验试剂及器材 Lipofectamine? 3000 Transfection Reagent，质粒DNA(0.5-5 μg/μL储液)，Opti-MEM?减血清培养基，培养板，酒精灯，离心机，微量移液器，离心管等。 二、实验步骤 1. 接种细胞至70－90%汇合度时转染； 2. 使用Opti-MEM?减血清培养基稀释Lipofectamine? 3000试剂（2管），充分混匀（6孔板Opti-MEM?培养基为125 μL× 2，Lipofectamine? 3000为 3.75和7.5 μL）； 3. 在每管已稀释的Lipofectamine? 3000试剂中加入稀释的DNA（用P3000TM试剂稀释）（1:1比例）； 4. 室温孵育5分钟； 5. 加入DNA－脂质体复合物至细胞中； 6. 37°C(PK-15在39°C下培养)孵育细胞2–4天，然后分析转染细胞。 三、注意事项 1. 在无血清培养基（如Opti-MEM?减血清培养基）中制备DNA－Lipofectamine? 3000脂质体复合物，直接将其加入含细胞培养基的细胞中（在血清／抗生素存在或不存在时均可）； 2. 转染后无需去除转染复合物或者更换／添加培养基；

3. Lipofectamine? 3000试剂用量各有不同，测试推荐的两种浓度的Lipofectamine? 3000试剂，以确定最佳用量，开始新的转染； 4. Lipofectamine? 3000试剂应放在4℃储存（切勿冷冻）。 附上Lipofectamine 3000 REagent Protocol：

活体电穿孔法介绍 1、什么是活体电穿孔 活体电穿孔法(in vivo ...

活体电穿孔法介绍 1、什么是活体电穿孔 活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115μm ,这种通道能维持几毫秒到几秒,然后自行恢复。在此期间生物大分子如DNA 可通过这种微小的通道进入细胞。近年来活体电穿孔法用于转基因研究的报道不断增多,在基因治疗方面的优势也日趋显著,是一种很好的活体基因导入方法。 活体电穿孔法可用于检测瞬时表达系统中载体的表达状况。大量的研究表明活体电穿孔法在基因治疗方面有非常好的应用前景。因此目前国内外对活体电穿孔法介导外源基因转移的研究越来越多。 2、活体电穿孔的法的特点 活体电穿孔法基因导入和表达效率较高,它的特点主要在以下几个方面: 首先,靶器官的选择面广,理论上任何组织和器官都可以作为活体电穿孔的靶器官。 在用于基因治疗方面，要考虑到靶器官组织生理特性。如果所选择的局部组织细胞不能把所转移基因的表达产物分泌到外周血液循环中,则在某种意义上说已失去了基因导入的价值,这在基因治疗中是关键性的问题。当使用组织特异性表达载体时,研究人员应根据所构建的表达载体来选择基因转移和表达的靶器官组织。例如鱼精蛋白21 启动子可指导外源基因在精母细胞中特异性表达,以小鼠的睾丸作为靶器官将含有鱼精蛋白21启动子的表达载体导入,获得外源基因的表达量远远高于该基因在肝脏和骨骼肌中的表达。 其次,对导入的外源基因片段的大小没有限制,从几KB 或十几KB 的表达载体, 到100～200KB 的Y AC、BAC 基因组,都有成功导入并获得表达的报道。 此外活体电穿孔法操作简单快速,电穿孔的时间只有几秒钟,而且DNA片段不需要特殊的纯化操作。 但电穿孔法也存在一些的缺点:首先,外源基因表达持续的时间很短,虽然外源基因导入后最快可在215 小时有表达,但大多1～2 月后表达量降至很低。外源基因表达的时间主要由于所构建的表达载体和基因导入的靶细胞组织器官不同而存在巨大差异。 由于应用不同的表达载体,Muramatsu 在小鼠肝脏进行电穿孔7天后则检测不到外源基因的表达,而Heller 21 天后还可以检测到外源基因的表达。如果选择代谢和酶活动旺盛的组织器官如肝脏,则表达持续时间会较短,表达时间在 1 个月以内,但以骨骼肌为靶组织,表达可持续15个月。

电磁场镜像法

§1-8 镜像法 一、镜像法 1. 定义：是解静电场问题的一种间接方法，它巧妙地应用唯一性定理，使某些看来棘手的 问题很容易地得到解决。该方法是把实际上分区均匀媒质看成是均匀的，对于研究的场域用闭合边界处虚设的简单的电荷分布，代替实际边界上复杂的电荷分布来进行计算。即镜像法处理问题时不直接去求解电位所满足的泊松方程，而是在不改变求解区域电荷分布及边界条件的前提条件下，用假想的简单电荷分布（称为镜像电荷）来等效地取代导体面域（电介质分界面）上复杂的感应（半极化）电荷对电位的贡献，从而使问题的求解过程大为简化。 2. 应用镜像法应主意的问题 应主意适用的区域，不要弄错。在所求电场区域内： ① 不能引入镜像电荷；② 不能改变它的边界条件；③ 不能改变电介质的分布情况；④ 在 研究区域外引入镜像电荷，与原给定的电荷一起产生的电荷满足所求解（讨论）的边界条件；⑤其求得的解只有在所确定的区域内正确且有意义。 3. 镜像法的求解范围 应用于电场E u r 和电位?的求解；也可应用于计算静电力F u r ；确定感应电荷的分布 (),,ρστ等。 二、镜像法应用解决的问题 一般是边界为平面和球面的情况 1. 设与一个无限大导电平板（置于地面）相距h 远处有一点电荷q ，周围介质的介电常数 为ε，求解其中的电场E u r 。 解：在电介质ε中的场E u r ，除点电荷q 所引起的场外，还应考虑无限大导电平板上的感应电 荷的作用，但其分布不知（σ未知），因此无法直接求解。用镜像法求解该问题。 对于ε区域，除q 所在点外，都有2 0??= 以无限远处为参考点()0θ?= 在边界上有：044q q r r ???πεπε+--=+=+ = 即边界条件未变。 由唯一性定理有11444q q q r r r r ?πεπεπε+ - +-??= - = - ??? 对于大场E 不存在()0E = 推广到线电荷τ的情况，对于无限长线电荷也适合上述方法求解。 例1-15. P54 求空气中一个点电荷q 在地面上引起的感应电荷分布情况。 解：用镜像法求解

电穿孔系统

电穿孔系统 BJ5183电转感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。BJ5183为重组腺病毒质粒构建专用菌株，能够表达供pAdEasy骨架质粒和pAdEasy穿梭质粒进行同源重组的所有组分。pUC19质粒检测感受态细胞的转化。 1.电极间距为0.1cm的电转杯（Gene Pulser?/MicroPulser? electroporation cuvettes）插入碎冰中，压实冰面，冰中静置5分钟，使电转杯充分降温。（电转杯重复使用方法：每次用完后，用大量的自来水冲洗干净去掉菌液和DNA，用蒸馏水洗3遍，将其泡在75%乙醇中30分钟，取出杯子，沥干液体，放在超净台中，使乙醇充分挥发，盖上盖子放干燥地方备用）； 2.取-70℃保存的感受态细胞插入冰中，待细胞刚化冻后，加入质粒DNA或连 接产物（洗脱或溶解质粒的溶液中离子不能太高，或用双蒸水稀释，对照pUC19可以用无菌水稀释到10pg/μl），用手指拨打管底轻轻混匀，立即插入冰中，在超净台中用无菌吸头将细胞/DNA混合物快速转移到电击杯中，避免产生气泡，确保细胞沉到杯底，盖上杯盖，空管保留待用。 3.启动电转仪，设置电击参数：2.0kV，200Ω，25μF（BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser）。用纸巾擦掉电转杯外部的水分，将电转杯放入电转槽中进行电击。完成后，将电转杯插入冰中，加入950μl无抗生素的SOC或LB培养基，并将液体转移到原来保留的感受态空管中，37℃，150-250rpm振荡培养1小时。 4.取100-200μl左右的菌液或稀释后的菌液，涂布于含相应抗生素的LB平板上， 倒置放于37℃培养箱培养12-18小时。 注意事项： 1.电转杯必须预冷。感受态细胞应该在冰水浴中化冻，加入DNA后应轻柔 混匀，加入DNA的体积小于细胞体积的1/10。 2.一旦DNA加入到细胞中，电击操作应该立即进行。 3.DNA 应该溶解在水或TE中，连接酶的存在会降低转化效率，必要时需 纯化连接产物。 4.电击时，电转杯中的气泡和含高浓度盐离子的DNA或转化产物会导致电 弧现象的发生。

电穿孔法转化大肠杆菌TG1的条件优化

药　物　生　物　技　术 Pharmaceutical Biotechnology　2001,8(3):143～146 电穿孔法转化大肠杆菌TG1的条件优化Ξ 李　南,凌世淦2,吴梧桐1 (11中国药科大学生物制药学院,南京210009;21军事医学科学院基础医学研究所分子病毒学实验室,北京100850) 摘　要　研究了质粒pFab74X经电穿孔转化大肠杆菌TG1菌株的影响因素,并优化其转化条件。电场强度和脉冲时间的影响较为复杂,两者适当组合才可获得高转化效率。此外,采用对数生长早期的细菌,提高细菌浓度和降低筛选用氨苄青霉素的浓度均可提高转化效率。 关键词　电穿孔;转化效率;大肠杆菌TG1 中图分类号:Q68,Q936　文献标识码:A 文章编号:100528915(2001)0320143204 构建cDNA文库或基因文库时,转化效率高低是决定其多样性的关键因素之一。但常用的磷酸钙及原生质体等转化法转化效率均较低,批间差异较大,转化后再生时间长。电穿孔法(E lec2 troporation)则较好的解决了这个难题,它是利用瞬间高压电脉冲作用于受体细胞,使细胞表面产生暂时性的孔隙,从而将DNA、RNA、蛋白质等多种生物分子或颗粒导入胞内的方法,也称为电转化法。由于电穿孔是一个物理过程,适用范围广,转化效率高,特别是针对易受溶酶体消化的生物分子[1]及没有合适遗传转化系统或转化效率低的细胞,效果显著。目前,电穿孔法已经广泛应用于生物学、医药学、食品学等各个领域,成为转化细胞的常用方法。 电穿孔法最早是应用于真核细胞。1982年, W ong和Neumann成功的用电穿孔法转化小鼠成纤维细胞[2],但效率不高。现在,由于技术改进,操作简便快速,转化效率高,已广泛应用于原核细胞外源生物分子的导入。但影响转化效率的因素众多,不同的电穿孔体系[3]、受体细胞[4]、外源生物分子[5],其最佳转化条件均有一定差异。因此要获得高转化效率必须寻找这些因素的最佳组合。本文探讨了电场强度、脉冲时间、细菌浓度、细菌生长周期及转化子筛选过程氨苄青霉素浓度对TG1细菌转化效率的影响,并优化转化条件,以便利用TG1菌株建立高度多样性的基因文库,促进基因工程药物的发展。1　材料与方法 111　材料与仪器 E1coli TG1supE hsdΔ5thiΔ(lac2proAB)F’[traD36proAB+lacI q lacZΔM15]和质粒pFab74X (613kb,Ap r),由军事医学科学院基础医学研究所分子病毒学实验室保存;蛋白胨和酵母提取物为Ox oid公司产品,MOPS购自北京鼎国生物工程公司,氨苄青霉素(简称Ap)和其余试剂为进口或国产分析纯;S B培养基(3%蛋白胨,2%酵母提取物,1%MOPS,014%葡萄糖,10mm ol/L MgCl2, pH710),S OB培养基(2%蛋白胨,015%酵母提取物,0105%NaCl,215mm ol/L K Cl,10mm ol/L MgCl2, pH710),S OB2A培养基(含100mg/L Ap的S OB培养基),S OC培养基(S OB培养基,加20mm ol/L葡萄糖),S OC2A培养基(含100mg/L Ap的S OC培养基);I N2101型基因脉冲导入仪(天津理工学院), Lambda2UV/VIS型光谱分析仪(美国Perkin2 E lmer公司)。 112　菌株制备 将270℃冻存的TG1菌种分别于S OB和S OB2 A琼脂平板上划线培养,验证其为Ap s。从S OB 平板上挑取单菌落,37℃于S B培养基中培养至OD600约为110。取培养物按1∶100的比例重接于S B培养基中,37℃培养至OD600约为016。培养物冰浴中放置30min后,在4℃以4000r/min离心 341 Ξ收稿日期:2001203212 基金项目:北京市自然科学基金资助,N o.7002031 作者简介:李南(1976年生),男,江苏南京人,中国药科大学硕士生,分子生物学,E2mail:s outh-lee@etang1com

静电场中的镜像法与分离变量法

静电场中的镜像法与分离变量法 摘要：静电场的基本问题是求解给定边界条件下的泊松方程或拉普拉斯方程的解，本文分别阐述在求解区域内有和没有自由电荷分布的情况下，应用镜像法和分离变量法求解；同时，举例来演示应用镜像法和分离变量法的解题思路、步骤和结果讨论以及一些注意点，并在相同情况下分别应用镜像法和分离变量法进行对比讨论；深入理解镜像法和分离变量法及其特征。 关键词：静电场、镜像法、分离变量法。 The Method of Mirror Image and the Separate Variational Method in the Electrostatic Field Abstract: The basic problem of electrostatic field is to explore the solution of Poisson equation or Laplace equation under its given boundary condition. This article respectively explains the approaches to explore the solution using mirror image and separate variational methods under the to-be-explore solution area situation which has and which lacks freedom electric charge distribution .Meanwhile, it takes some instances to demonstrate the problem-solving thoughts and steps applying mirror image and separate variational methods. It also provides some discussions about the result and the points needing to be noted in the process of this demonstration. This writer also tries to help the readers todeeply

6 电穿孔方法向活体动物导入外源基因

实验六、电穿孔方法向活体动物导入外源基因 引言：在利用非病毒载体进行外源基因的转移过程中,活体电穿孔法基因导入和表达效率 较高,它的特点主要在以下几个方面:首先,在外源基因导入的靶器官的选择方面,理论上任何组织和器官都可以作为活体电穿孔的靶器官,在考虑到靶器官组织生理特性的基础上,如果所选择的局部组织细胞不能把所转移基因的表达产物分泌到外周血液循环中,则在某种意义上说已失去了基因导入的价值,这在基因治疗中是关键性的问题。活体电穿孔法对导入的外源基因片段的大小没有限制,从几kb 或十几kb 的表达载体, 到100～200kb 的YAC、BAC 基因组,都有成功导入并获得表达的报道[5 ] 。此外活体电穿孔法操作简单快速,电穿孔的时间只有几秒钟,而且DNA 片段不需要特殊的纯化操作。但电穿孔法也存在难以避免的缺点:首先,外源基因表达持续的时间很短。其次,活体电穿孔法与应用病毒载体法相比外源基因表达效率仍偏低。 电穿孔时在能量导入一定的情况下设计施加电压的值。电压过低或过高都会影响外源基因的表达。电压过低时,无法造成细胞膜表面状态的改变,因而外源DNA 不能进入细胞内。电压过高时,局部组织积聚过多热量,造成细胞的死亡或组织失去功能,即使外源基因导入细胞,也无法进行正常的表达。哺乳动物常用的活体电压大多为20～100V/cm ,最高电压在250～750V/cm。 由于电穿孔瞬间在局部会产生大量热,因此操作过程中,DNA 转染试剂应保持4 ℃,同时电穿孔操作部位的温度也应适当降低。此外在电穿孔操作部位温度降低的同时可以有效抑制局部组织的出血和外源DNA 的流失,这样也在一定程度上保证了基因的导入效率。 1 材料与方法 1.1 材料 实验室购买的金鱼、真核表达质粒pCMV/β-gal。实验在北京市北京科技大学理化楼120进行。 1.2 试剂 鱼安定溶液、PBS溶液、固定液、洗液1、洗液2、染液。 1.3 方法 1.3.1 电穿孔法转染质粒（第一天） 称取50mg鱼安定溶于100ml水中，制成麻醉液。将鱼放入麻醉液中麻醉，待鱼运动缓慢且无规则时取出。用PBS清洗微量注射器针头，再用微量注射器将10μl

细胞电穿孔技术的研究

中国民航大学 硕士学位论文 细胞电穿孔技术的研究 姓名：孙云 申请学位级别：硕士专业：通信与信息系统指导教师：徐宝强 20070220

中Ｎ民航人学硕卜学位论叟： 物增敏、临床医学等诸多方面，给医疗技术带来了一场革命。 ２１世纪是生物工程的时代，电穿孔技术也在不断发展完善，在应用领域出现了方兴未艾的局面，有着巨大的应用潜力。因此分析研究细胞电穿孔的机理，研制我国具有自主知识产权的电转基因仪器和与之配套的多种电极，将具有重大意义，不仅会推动我国的生物工程的发展，而且必将产生良好的经济和社会效益。 １．２国内外研究现状 １．２．１细胞膜结构 细胞膜的结构非常复杂，主要是由脂质和蛋白质两类物质组成的复杂的超分子动态系统。１９７２年Ｓｉｎｇｅｒ和Ｎｉｃｏｌｓｏｎ提出的液态镶嵌模型１２４｜，目前已得到人们的承认。液态镶嵌模型认为细胞膜是一种可流动的、嵌有蛋白质的脂类双分子层结构。嵌入其中的蛋白质具有多种功能，如离子通道、受体及各种酶等。构成细胞膜的脂类主要有甘油磷脂、鞘磷脂、类固醇和糖脂，如图１－１所示。这些脂类除了类固醇外，都有亲水的极性的头部和疏水的非极性的尾部。脂类分子极性头部向外，疏水的尾部在内，构成细胞膜的基质——脂双分子层。 图１－１细胞膜的生物结构 １．２．２细胞膜电穿孔模型 对于细胞膜的可逆电穿孔，众多的理论模型都没有对电穿孔过程进行系统的描述，只有ＪａｍｅｓＷｅａｖｅｒ建立的瞬叁亲水孔模型１２５１，对电穿孔进行了宏观描述。 定性地说，电穿孔现象是由电能（因跨膜电位提高而产生的决定性能量）和“ＫＴ能量”（因热波动而产生的随机性能量）共同作用而引起的。大量的观察发现，电穿孔

Bio-rad MicroPulser电穿孔仪中文说明书

MicroPulser电穿孔仪操作手册 2018年12月27日 1、介绍 （1）基本原理 MicroPulser电穿孔仪用于细菌、酵母和其他众多微生物的电击转化，转化时，高压电脉冲作用于悬浮在小体积高阻介质中的样品。本系统由一个脉冲发生器（pulse generator）模块、一个电击腔（shocking chamber）和一个装有电极的电击杯（cuvette）组成。样本放置于电击杯的电极之间。MicroPulser模块包含一个电容器，将电容器充电至高电压，然后模块将电容器中的电流放电到试管中的样品中。 MicroPulser的电容放电电路产生具有指数衰减波形的电脉冲，如下图。当电容器放电至样品时，跨越电极的电压迅速上升至最大电压（or峰值电压，peak voltage；也称为初始电压，Vo），并随时间（t）减小，如下式： 其中τ=R·C，为时间常数，是脉冲长度的简便表达式。 R为电路电阻，单位为ohms（欧姆）。 C为电容，单位为microfarad（微法拉）。 根据方程1，τ是电压下降至峰值电压1/e（~37%）的时间。MicroPulser的内部电路被设计以使E.coli、酿酒酵母及其他许多微生物可以得到最佳电穿孔，最佳转化效率发生

在大约5ms的时间常数内。这些电穿孔条件是通过使用10微法拉电容器和将600欧姆电阻与样品池并联以及将30欧姆电阻与样品池串联来实现的。 除时间常数外，电场强度是另一个决定转化效率的重要参数。电场强度E，是施加于电极间的电压，公式为： 其中，V为施加的电压，d为电极间的距离，单位为cm。电场强度和细胞的尺寸（size）决定了横贯每个细胞的电压降，正是电压降可能是电穿孔中电压效应的重要表现。 30欧姆串联电阻的目的是在发生电弧的情况下保护设备电路。在正常操作条件下，当样本在高电阻介质中，电阻不会影响施加在样本上的电压。但是，当样本的电阻较低时，电阻将极大地降低施加在样品上的电压。施加在样品上的电压的分压降（fractional drop）由下式得到： 当R sample为600欧姆，对于样品就会有5%的电压降（30/（30+600）=0.048）。基于这个原因，当样品溶液的电阻低于600欧姆时，不应进行电穿孔试验。这包括培养基未彻底从细胞中去除的样本，残留有NaCl的DNA样本或连接混合物。MicroPulser能够测量样本的电阻，若样本介质电阻过低则不会进行操作。

电磁场镜像法

§18 镜像法 一、镜像法 1.定义:就是解静电场问题得一种间接方法,它巧妙地应用唯一性定理,使某些瞧来棘手得问 题很容易地得到解决。该方法就是把实际上分区均匀媒质瞧成就是均匀得,对于研究得场域用闭合边界处虚设得简单得电荷分布,代替实际边界上复杂得电荷分布来进行计算。即镜像法处理问题时不直接去求解电位所满足得泊松方程,而就是在不改变求解区域电荷分布及边界条件得前提条件下,用假想得简单电荷分布(称为镜像电荷)来等效地取代导体面域(电介质分界面)上复杂得感应(半极化)电荷对电位得贡献,从而使问题得求解过程大为简化。 2.应用镜像法应主意得问题 应主意适用得区域,不要弄错。在所求电场区域内: ①不能引入镜像电荷;②不能改变它得边界条件;③不能改变电介质得分布情况;④在研 究区域外引入镜像电荷,与原给定得电荷一起产生得电荷满足所求解(讨论)得边界条件; ⑤其求得得解只有在所确定得区域内正确且有意义。 3.镜像法得求解范围 应用于电场与电位得求解;也可应用于计算静电力;确定感应电荷得分布等。 二、镜像法应用解决得问题 一般就是边界为平面与球面得情况 1.设与一个无限大导电平板(置于地面)相距远处有一点电荷,周围介质得介电常数为,求解 其中得电场。 解:在电介质中得场,除点电荷所引起得场外,还应考虑无限大导电平板上得感应电荷得作用,但其分布不知(未知),因此无法直接求解。用镜像法求解该问题。 对于区域,除所在点外,都有 以无限远处为参考点 在边界上有: 即边界条件未变。 由唯一性定理有 对于大场不存在 推广到线电荷得情况,对于无限长线电荷也适合上述方法求解。 例115、P54 求空气中一个点电荷在地面上引起得感应电荷分布情况。 解:用镜像法求解 P点: , 感应电荷密度, (大地) 点电荷 例1-16P55 解:用镜像法,如图所示,边界条件 2.镜像法应用于求解两种不同介质中置于点电荷或电荷时得电场问题。 解:应用镜像法

电穿孔技术

电穿孔技术 电穿孔缓冲液： 配方1： 200mM/L葡萄糖, 5mM硫酸镁 2mM/L疏基乙醇 20mM/LTris-HCI ,pH值7.6 Universal Electroporation Solution 通用电转染缓冲液 性能特点： 1. 显著提高转染效率和细胞存活率 2. 适用于难转染细胞等几乎所有细胞类型 3. 与所有电融合/电穿孔仪兼容 产品货号： UES0001 产品规格： 1ml 保存： Universal Electroporation Solution保存于4度 建议-20度长期保存 保质期： 正确的使用和保存条件下，保质期为6个月 电转染次数： 1ml Universal Electroporation Solution 用0.4cm电极杯可进行5组实验 用0.2cm电极杯可进行10组实验 电转染条件： 电压260V 电容950μF 操作步骤： 1．收集细胞：用胰酶消化细胞，将细胞培养液吸入到15ml离心管中，1000rpm,

5min，弃其上清。 2．用不含血清的培养液洗涤一次，弃其上清。 3．取2～10ug质粒加入到100ul电转缓冲液中，充分混匀。 4．用100ul混有质粒的电转缓冲液充分溶解细胞，转入0.2cm电转导入杯中。5．将电转导入杯放入样品槽中，释放电脉冲，电击参数按电容1000 mF，电压150-500 V，间隔20V取值，取得最佳效果。 6．立即取出电击杯，分别用一次性吸管将混和液转移至加有完全培养基的一次性细胞培养瓶中，放入细胞培养箱中培养。 电穿孔法转染哺乳动物细胞 来源：https://www.sodocs.net/doc/a39392846.html, 发布时间：2009-08-31 查看次数：1935 站长注：下文是发表于Nature Methods中的一篇关于电穿孔转染方法的文章，站长对其作了注释，方便大家理解。电穿孔转染理论上可转染所有的组织细胞，因此对其他如脂质体、磷酸钙沉淀等方法转染效果不明显的细胞可选用此方法。电转过程中，最重要的就是电穿孔仪的电压、电容以及与电泳缓冲液的选择。提到电转仪，最出名的恐怕就属BIO-RAD了，他在1986年推出了世界上第一台电穿孔仪，并发布了多种细胞仪电转过程中的电压，电容，电转缓冲液等可省却大家很多的摸索过程，具体资料可到其主页上查找相关 Nature Methods 3, 67 - 68 (2006) Transfection of mammalian cells by electroporation Pulsed electrical fields can be used to introduce DNA into a wide variety of animal cells1, 2. Electroporation works well with cell lines that are refractive to other techniques, such as calcium phosphate–DNA coprecipitation. But as with other transfection methods, the optimal conditions for electroporation of untested cell lines must be determined experimentally. 电穿孔转染可用于磷酸钙转染效率低下的细胞，具有操作简便，转染效率高等优点，但对于不同的细胞，其转染条件有很大的不同，需要进行摸索。 Procedure Preparation of the cells 1.Collect the cells to be transfected from cultures in the mid- to late-logarithmic phase of growth. Use either a rubber policeman or trypsin to release adherent cells. Centrifuge at 500g at 4 °C for 5 min. 在对数生长期收集细胞，离心沉淀。 2.Resuspend the cell pellet in 0.5volume of the original growth medium and measure the cell number using a hemocytometer. 用培养基重悬细胞，计数 3.Collect the cells by centrifugation, as described in Step 1 and resuspend them in growth medium or phosphate-buffered saline (PBS; 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na 2HPO4 and 2 mM KH2PO4) at 15–25 °C at a concentration of 2.5 106 to 2.5 107 cells/ml. 离心收集细胞，重悬细胞于培养基或PBS中，调整细胞密度至 2.5 106to 2.5 107

用镜像法计算大型电力变压器漏磁场的研究

第9卷　第2期2005年3月 　 电　机　与　控　制　学　报 EL EC TR IC MACH I N ES AND CON TROL 　 Vol 19No 12Mar .2005 用镜像法计算大型电力变压器漏磁场的研究 杨平,　刘文里 (哈尔滨理工大学电气与电子学院,黑龙江哈尔滨150040) 摘　要:大型电力变压器漏电抗及电磁力的计算实际上就是变压器漏磁场的计算,采用镜像电流 法对变压器铁心窗中的漏磁场进行了计算,给出了场点处磁感应强度与最高镜像电流次数奇偶性的关系,用最高镜像次数相邻的镜像电流及实际电流算得的场点处磁感应强度的平均值近似场点处磁场感应强度的实际值。用此方法计算变压器的漏磁场,在编程及计算工作量相对较小的情况下,可获得具有很高精度的磁感应强度。 关键词:变压器漏磁场计算;镜像法;电磁场计算 中图分类号:T M153 文献标识码:A 文章编号:1007-449X (2005)01-0166-05 The research on leakage magneti c fi eld of l arge power transfor mer by i m age current Y ANG Ping,　L I U W en -li (College of Electrical &Electr onic Engineering,Harbin University of Science and Technol ogy,Harbin 150040,China ) Abstract:The calculati on of leakage reactance and magnetic forces is the calculati on of leakage magnetic field for transf or mer .The leakage magnetic field in transfor mer core aperture was calculated by i m age cur 2rent .The relati onshi p bet w een magnetic inducti on and parity of i m age current was given .The magnetic inducti on was app r oxi m ated by the average value of the t w o magnetic inducti ons in which one is p r oduced by actual currents and all the i m age currents the highest order of which is M and another is p r oduced by actual currents and all the i m age currents the highest order of which is M +1.By using the method t o cal 2culate leakage magnetic field,it takes shorter ti m e for p r ogra mm ing and calculating and has more accu 2rate results . Key words:the calculati on of transfor mer leakage magnetic filed;i m age current;the calculati on of elec 2tr omagnetic filed . 收稿日期:2004-08-31;修订日期:2005-01-08作者简介:杨　平(1956-),男,副教授,研究方向为电磁场理论及应用; 刘文里(1956-),男,教授,主要从事变压器理论研究与结构设计。 1　引　言 大型电力变压器漏电抗及短路电磁力的计算一 直是变压器设计者及从事变压器研究的工作者所关注的问题。这些问题的解决实质上可归结为变压器漏磁场的计算,漏磁场计算的问题解决了,漏电抗及短路电磁力的计算问题也就解决了。为了获得变压 器较准确的漏磁场,目前较多采用的方法是有限元法。本文用镜像法研究了大型电力变压器的漏磁场,得到了一种用较少计算量获得高准确度漏磁场的新方法。 本文作者在文献[1,2]中研究了用镜像电流法计算电力变压器铁心窗中的漏磁场及变压器的漏电抗。对于计算变压器的漏磁场而言,镜像法和有限