改良银盐染色法在幽门螺旋杆菌(HP)临床检验中的应用价值探讨
改良银盐染色法在幽门螺旋杆菌（HP）临床检验中的应用价值探讨
目的介绍我院对传统银盐染色法的改良方法及在幽门螺旋杆菌临床检验中的应用效果与价值。方法对我院收治的417例患者采用我院改良银盐染色法进行幽门螺旋杆菌的检验，同时与快速尿素酶试验和14C-尿素呼气试验两种检验方法进行对比。结果我院改良银盐染色法对幽门螺旋杆菌的阳性检出率、敏感度以及特异度均显著高于其他两种方法，比较均有统计学意义（P＜0.05）。结论我院改良银盐染色法在幽门螺旋杆菌临床检验中不仅阳性检出率、敏感度、特异度均令人满意，而且较传统银盐染色法在操作流程方面更为合理简便，建议在临床进一步推广使用。
标签：幽门螺旋杆菌；检验；银盐染色法；改良
幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori，Hp）为一种微需氧的革兰阴性螺旋状细菌，其不仅是慢性活动性胃炎与消化性溃疡的重要致病菌，而且也是萎缩性胃炎与肠上皮化生等癌前病变的促成因子之一，故国际卫生组织（WHO）已将其列为第一类致癌因子，并建议临床应加强对Hp的检验工作[1]。但就其检验方法来看，银盐染色法（Warthin-Sharry，W-S）可谓是目前应用最为普遍同时效果也最为满意的检验方法之一，但基于该方法在操作方面的复杂性，以至于在不同区域不同医疗机构中的具体开展流程时常存在有不同程度的差别，且多数均又存在不尽相同的不完善之处[2]。近些年内，我院在传统W-S法基础上进行了一定改良工作并在临床实践中获得了颇为满意的效果，现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料选择于2012年5月～2014年6月因表现有不同程度消化系统症状并在我院接受胃镜检查的417例患者作为本研究对象，其中包括男255例，女162例；年龄18～71岁，平均（40.8±15.6）岁。所有患者均排除近1个月内有使用过任何抑酸药物及抗Hp药物者以及近1 w内有出现急性消化道出血者。
1.2方法所有患者均在接受检查前保持12 h以上的空腹，准备妥当后即在电子胃镜辅助下于距幽门3 cm处取胃黏膜3块待检。其中2块分别常规采用快速尿素酶试验（RUT法）与14C-尿素呼气试验（14C-UBT法）进行檢验[3]。另1块则采用我院改良W-S法进行检验，具体方法为：首先对标本采用0.14 mol/L 的甲醛水溶液进行固定处理，石蜡包埋切片（以4 um厚度为宜），接着采用二甲苯脱石蜡，之后再进行脱苯处理，采用各级乙醇过度到蒸馏水的程序进行刷洗，最后再将样本在避光条件下置于维持温度在60℃浓度为0.06 mol/L的AgNO3水溶液中进行1 h的侵染处理，完成染色后再次进行双蒸馏水刷洗，接着将样本置于显影液中进行显影，若在2～4 min内观察到有出现组织变为棕褐色时即可结束显影，同时倾倒出显影液，并用自来水对切片适当涮洗，最后再将切片脱水处理至透明，采用光学树脂封固后即可供医生阅片诊断。
1.3阳性标准RUT法中若标本在试剂中放置30 min内变为红色即认为是阳
幽门螺旋杆菌染色液(MGG法)使用说明
幽门螺旋杆菌染色液(MGG法)使用说明 货号:G1930 有效期：24个月有效。 产品组成： 名称2×100ml Storage 试剂(A)A1:May-Grunwald Stain50ml RT避光 A2:MG磷酸盐缓冲液50ml RT 取A1、A2等量混合，即为May-Grunwald工作液，不宜预先配制。 试剂(B)B1:Giemsa Stain50ml RT避光 B2:Giemsa磷酸盐缓冲液50ml RT 取A1、A2等量混合，即为Giemsa工作液，不宜预先配制。 产品说明： 胃幽门螺杆菌(Helicobacter Pyloric，HP)又称胃幽门弯曲菌(Campylobacter Pyloric)。 现已证实这种细菌与慢性胃炎和消化性溃疡有密切关系。胃幽门螺杆菌一般呈弧形、S形或 海鸥状，有时可见3～4个弯曲呈螺旋状，常呈鱼群状分布。该菌多见于胃黏膜表面上皮与 黏膜层之间，并贴近表面上皮细胞，部分进入上皮细胞胞质内，胃小凹和黏膜浅层腺腔内亦 有此菌。幽门螺旋杆菌染色主要有亚甲蓝法、硝酸银法、迈格林华-姬姆萨法 (May-Grunwald-Giemsa，MGG法)、碱性品红法等。硝酸银法对比清楚，染片可以长期保存， 但操作较为麻烦、耗时。其他方法较为简便，但染片容易褪色。May-Grunwald-Giemsa染 色液主要由迈格林华染液和姬姆萨染液组成，染色后胃幽门螺旋杆菌呈蓝色，胶原纤维呈红 色，红细胞呈绿色，胃黏膜上皮呈淡蓝色，细胞核呈深蓝色。HP多位于胃黏膜上皮表面的 黏液中，特别在胃小凹中数量较多。 自备材料： 1.10%福尔马林固定液 2.蒸馏水 3.系列乙醇
特殊染色对显示幽门螺杆菌的效果影响对比分析
特殊染色对显示幽门螺杆菌的效果影响对比分析 发表时间：2017-09-12T15:57:53.123Z 来源：《医药前沿》2017年9月第26期作者：王璐 [导读] 幽门螺杆菌（HP）大量存在于人类胃液中，为多种胃部疾病发生以及发展的重要致病因子[1]。 （浙江大学医学院附属第四医院病理科浙江金华 322000） 【摘要】目的：分析Giemsa染色法以及中性红染色法显示幽门螺杆菌的效果情况。方法：收集2016年1月-2016年10月我科室胃镜活检诊断为慢性胃炎（活动性）的蜡块60个，将每个蜡块分别切片2张，分为两组，每组60张，分别实施改良Giemsa染色以及中性红染色。比较结果。结果：中性红染色的样本形状为弯曲状或短杆状，鲜红色，分布胃小凹以及腺腔内。改良Giemsa染色的样本形状为短杆状，S 型，蓝色，分布为胃小凹中，一般呈现为聚集样或者鱼群样排列。改良Giemsa染色阳性率为86.67%，中性红染色阳性率为80.00%。组间数据存在显著差异，P＜0.05.(χ2=5.284）。结论：和中性红染色法相比，改良Giemsa染色法检查HP的特异性更高，对于基层医院而言，推荐使用改良Giemsa染色法进行HP检测。 【关键词】 Giemsa染色法；中性红染色法；幽门螺杆菌；特异性；对比分析 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）26-0184-01 幽门螺杆菌（HP）大量存在于人类胃液中，为多种胃部疾病发生以及发展的重要致病因子[1]。特殊染色为准确性较高的染色方式。当前特殊染色方式有很多，其中以改良Giemsa染色及中性红染色的应用范围较为广泛。结合实际，本文全面分析上述两种染色方式在显示HP的情况进行全面比较，现报告如下。 1.资料与方法 1.1 一般资料 选择2016年1月-2016年10月我科室60例胃粘膜活检组织标本为研究样本。炎症类型为：浅表性胃炎，慢性胃炎以及萎缩性胃炎。收集部位：胃窦，胃体以及十二指肠。 本实验所选择的标本均使用浓度为10%福尔马林固定，后常规脱水，包埋。切片厚度规格为4μm。 1.2 方法 1.2.1染色液配置 Giemsa染色液：100ml甘油、100ml甲醇，4.8g Giemsa染色料混合。 中性红染色液：1g 中性红染色料、100ml无水乙醇混合。 1.2.2染色方法将每个标本蜡块分别切片分为2张，分为两组，每组60例。分别实施改良Giemsa染色以及中性红染色。详细为： 中性红染色：切片脱蜡至水，使用蒸馏水流水清洗2min，使用中性红染色液对组织进行染色，时间为5min，后使用蒸馏水二次清洗，切片60℃烤箱烤干之后，利用二甲苯中性树胶完成固定封存。 改良Giemsa染色：切片脱蜡至水，使用蒸馏水流水清洗2min,放入Giemsa染色液内浸染30min，后蒸馏水流水清洗多余染色液，并使用1%冰醋酸分化，直至显微镜下显示细胞核变蓝。细胞核结构可见时间大约30s[2]。后将切片60℃烤箱烤干之后，利用二甲苯中性树胶完成固定封存。 1.3 观察指标 （1）分析两种染色方式显示HP的颜色和形状。 （2）分析两种染色方式的阳性率：在光镜下观察Hp的显示情况,以查见Hp菌体2条以上判定为阳性,2条以下为阴性。 1.4 统计学原理 本实验使用SPSS21.0软件包，对计量资料使用t值计算，计数资料使用χ2计算，当P＜0.05.视为存在统计学差异。 2.结果 2.1 两种染色方式显示HP的颜色和形状 中性红染色：样本形状为弯曲状或短杆状，鲜红色，分布胃小凹以及腺腔内。 改良Giemsa染色：样本形状为短杆状，S型，蓝色，分布为胃小凹中，一般呈现为聚集样或者鱼群样排列。 2.2 两种染色方式的阳性率 Giemsa染色阳性率为86.67 %，中性红染色阳性率为80.00 %。组间数据存在显著差异，P＜0.05.（χ2=5.284）详情见表。 3.讨论 从1983年外国学者第一次发现HP之后，证实其和胃溃疡，十二指肠溃疡，慢性胃炎，黏膜相关淋巴瘤以及胃癌存在相关性[3]。HP有着组织学诊断灵敏度以及特异性高的特征，因此，临床诊断HP组织学法得到了广泛使用。实施组织切片法对胃粘膜样本进行检测，要经乙醇固定，石蜡包埋，切片以及染色等步骤，完成后，将组织切片放在高倍镜下，观察HP的结构和分布情况，使用这种方式，判断样本是否被HP感染。当前，这种方式为检测HP的金标准。和以往相比，最近几年接受胃粘膜组织活检病理检查例数显著增多，多种疾病治疗方案确定都依赖于HP检测结果，由此可见，寻找一个精准性强，价格实惠，结果可靠的检测方式，有着极高临床意义。 改良之后的Giemsa染色法，组织以及HP均为蓝色，在高倍镜下可清楚辨别HP，灵敏性较强，染色剂配置简单，且能够实现长期保存，这种方式操作简单。值得说明的是，在进行染色时，应当注意1%冰醋酸分化时长，如果没有严格控制，就会导致背景不清晰情况发生。倘若过度分化，HP颜色就会变浅，不方便观察。 而中性染色法所显示的HP为鲜红色，在高倍镜下形态结构相对清晰，操作简单，试剂来源方便，价格实惠。但就灵敏性来看，不如
幽门螺旋杆菌染色液(亚甲蓝法)
幽门螺旋杆菌染色液(亚甲蓝法) 简介： 胃幽门螺杆菌(Helicobacter Pyloric ，HP)又称胃幽门弯曲菌(Campylobacter Pyloric)。现已证实这种细菌与慢性胃炎和消化性溃疡有密切关系。胃幽门螺杆菌一般呈弧形、S 形或海鸥状，有时可见3～4个弯曲呈螺旋状，常呈鱼群状分布。该菌多见于胃黏膜表面上皮与黏膜层之间，并贴近表面上皮细胞，部分进入上皮细胞胞质内，胃小凹和黏膜浅层腺腔内亦有此菌。幽门螺旋杆菌染色主要有亚甲蓝法、硝酸银法、迈格林华-姬姆萨法(May-Grunwald-Giemsa ，MGG 法)、碱性品红法等。硝酸银法对比清楚，染片可以长期保存，但操作较为麻烦、耗时，其他方法较为简便，但染片容易褪色。 Leagene 幽门螺旋杆菌染色液(亚甲蓝法)采用亚甲蓝法，价格便宜，保存时间长，质量稳定。临床上常亚甲蓝法对慢性胃炎和消化性溃疡的诊断和治疗效果的判断，Leagene 推荐采用亚甲蓝法作为鉴别幽门螺旋杆菌的常规染色方法。 组成： 自备材料： 1、10%福尔马林固定液 2、蒸馏水 3、系列乙醇 操作步骤(仅供参考)： 1、 组织固定于10%的福尔马林，常规脱水包埋。 2、 切片，常规脱蜡至水。 3、 蒸馏水洗。 4、 滴入HP Stain 染色。 5、 迅速水洗。 6、 稍吹干或烤干切片。 7、 二甲苯透明，中性树胶封固。 染色结果： 编号 名称 DM0053 Storage HP Stain(亚甲蓝法) 100ml RT 避光 使用说明书 1份
胃幽门螺旋杆菌蓝色 注意事项： 1、水洗后无需乙醇清洗，否则容易脱色。 2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 储存条件：12个月有效。 相关： 编号名称 CZ0061 台氏液(Tyrode's Solution) DC0032 Masson三色染色液 DM0001 姬姆萨染色液(即用型) DM0007 瑞氏-姬姆萨复合染色液 DM0015 标准革兰氏染色液 DM0035 抗酸染色液(Kinyoun冷染法) PW0053 Western抗体洗脱液(碱性) TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)
改良银盐染色法在幽门螺旋杆菌(HP)临床检验中的应用价值探讨
改良银盐染色法在幽门螺旋杆菌（HP）临床检验中的应用价值探讨 目的介绍我院对传统银盐染色法的改良方法及在幽门螺旋杆菌临床检验中的应用效果与价值。方法对我院收治的417例患者采用我院改良银盐染色法进行幽门螺旋杆菌的检验，同时与快速尿素酶试验和14C-尿素呼气试验两种检验方法进行对比。结果我院改良银盐染色法对幽门螺旋杆菌的阳性检出率、敏感度以及特异度均显著高于其他两种方法，比较均有统计学意义（P＜0.05）。结论我院改良银盐染色法在幽门螺旋杆菌临床检验中不仅阳性检出率、敏感度、特异度均令人满意，而且较传统银盐染色法在操作流程方面更为合理简便，建议在临床进一步推广使用。 标签：幽门螺旋杆菌；检验；银盐染色法；改良 幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori，Hp）为一种微需氧的革兰阴性螺旋状细菌，其不仅是慢性活动性胃炎与消化性溃疡的重要致病菌，而且也是萎缩性胃炎与肠上皮化生等癌前病变的促成因子之一，故国际卫生组织（WHO）已将其列为第一类致癌因子，并建议临床应加强对Hp的检验工作[1]。但就其检验方法来看，银盐染色法（Warthin-Sharry，W-S）可谓是目前应用最为普遍同时效果也最为满意的检验方法之一，但基于该方法在操作方面的复杂性，以至于在不同区域不同医疗机构中的具体开展流程时常存在有不同程度的差别，且多数均又存在不尽相同的不完善之处[2]。近些年内，我院在传统W-S法基础上进行了一定改良工作并在临床实践中获得了颇为满意的效果，现报道如下。 1资料与方法 1.1一般资料选择于2012年5月～2014年6月因表现有不同程度消化系统症状并在我院接受胃镜检查的417例患者作为本研究对象，其中包括男255例，女162例；年龄18～71岁，平均（40.8±15.6）岁。所有患者均排除近1个月内有使用过任何抑酸药物及抗Hp药物者以及近1 w内有出现急性消化道出血者。 1.2方法所有患者均在接受检查前保持12 h以上的空腹，准备妥当后即在电子胃镜辅助下于距幽门3 cm处取胃黏膜3块待检。其中2块分别常规采用快速尿素酶试验（RUT法）与14C-尿素呼气试验（14C-UBT法）进行檢验[3]。另1块则采用我院改良W-S法进行检验，具体方法为：首先对标本采用0.14 mol/L 的甲醛水溶液进行固定处理，石蜡包埋切片（以4 um厚度为宜），接着采用二甲苯脱石蜡，之后再进行脱苯处理，采用各级乙醇过度到蒸馏水的程序进行刷洗，最后再将样本在避光条件下置于维持温度在60℃浓度为0.06 mol/L的AgNO3水溶液中进行1 h的侵染处理，完成染色后再次进行双蒸馏水刷洗，接着将样本置于显影液中进行显影，若在2～4 min内观察到有出现组织变为棕褐色时即可结束显影，同时倾倒出显影液，并用自来水对切片适当涮洗，最后再将切片脱水处理至透明，采用光学树脂封固后即可供医生阅片诊断。 1.3阳性标准RUT法中若标本在试剂中放置30 min内变为红色即认为是阳
幽门螺旋杆菌染色液(MGG法)使用说明书
幽门螺旋杆菌染色液(MGG法)使用说明书 货号:G1930 有效期：24个月有效。 产品组成： 名称2×100ml Storage 试剂(A)A1:May-Grunwald Stain50ml RT避光A2:MG磷酸盐缓冲液50ml RT 取A1、A2等量混合，即为May-Grunwald工作液，不宜预先配制。 试剂(B)B1:Giemsa Stain50ml RT避光B2:Giemsa磷酸盐缓冲液50ml RT 取A1、A2等量混合，即为Giemsa工作液，不宜预先配制。 产品说明： 胃幽门螺杆菌(Helicobacter Pyloric，HP)又称胃幽门弯曲菌(Campylobacter Pyloric)。现已证实这种细菌与慢性胃炎和消化性溃疡有密切关系。胃幽门螺杆菌一般呈弧形、S形或海鸥状，有时可见3～4个弯曲呈螺旋状，常呈鱼群状分布。该菌多见于胃黏膜表面上皮与黏膜层之间，并贴近表面上皮细胞，部分进入上皮细胞胞质内，胃小凹和黏膜浅层腺腔内亦有此菌。幽门螺旋杆菌染色主要有亚甲蓝法、硝酸银法、迈格林华-姬姆萨法(May-Grunwald-Giemsa，MGG法)、碱性品红法等。硝酸银法对比清楚，染片可以长期保存，但操作较为麻烦、耗时。其他方法较为简便，但染片容易褪色。May-Grunwald-Giemsa染色液主要由迈格林华染液和姬姆萨染液组成，染色后胃幽门螺旋杆菌呈蓝色，胶原纤维呈红色，红细胞呈绿色，胃黏膜上皮呈淡蓝色，细胞核呈深蓝色。HP多位于胃黏膜上皮表面的黏液中，特别在胃小凹中数量较多。 自备材料： 1.10%福尔马林固定液 2.蒸馏水 3.系列乙醇 第1页，共2页