真菌葡聚糖酶活力测定

前 言

本标准与Novozymes A/S标准方法：EB-SM-0572.02/02 FBG. Fungal Beta-Glucanase activity by Konelab analyzer(英文版)的一致性程度为等同。

附录A为规范性附录。

本标准由诺维信（中国）生物技术有限公司提出。

本标准由诺维信（中国）生物技术有限公司负责起草。

本标准主要起草人：蔺继尚、关越、翟文景。

本标准于2004年04月首次发布。

诺维信分析方法

第112部分：用Konelab分析真菌β-葡聚糖酶活力，FBG

1 范围

本方法规定了使用Konelab分析真菌β-葡聚糖酶活力的步骤。

本方法适用于所有Novozymes内部分析真菌β-葡聚糖酶样品的实验室。

2 原理

β-葡聚糖酶能水解β-葡聚糖，生成还原糖。该反应通过加入含有PAHBAH和铋盐（Bi3+）的碱性溶液中止。含有的PAHBAH和铋盐能与还原糖形成有颜色的混合物，在405nm下检测。生成的颜色与β-葡聚糖酶活力成比例。该过程由Konelan分析仪自动完成。

2.1 反应条件(反应体系中)

酶反应

β-葡聚糖浓度： 0.50%

β-葡聚糖酶浓度： （1-5）FBG/L

缓冲液： 28 mM磷酸缓冲液

pH： 5.0

温度: 50℃

时间: 20 min

酶空白反应

β-葡聚糖浓度： 0.50%

β-葡聚糖酶浓度： （1-5）FBG/L

缓冲液： 28 mM磷酸缓冲液

pH： 5.0

温度: 50℃

时间: 20 min

显色反应

PAHBAH浓度： 42 mM

酒石酸盐浓度： 56 mM

铋盐浓度： 4.5 mM

NaOH浓度： 146 mM

pH： 碱性

温度: 50℃

时间: 20 min

测定波长： 405 nm

2.2 样品条件(样品溶液中)

工作范围： （6-30）FBG/L

Q/12KF 3568.112-2004

定量范围： （13-30）FBG/L

3 单位定义

1 FBG等于在给定条件下每分钟生成相当于1μmol葡萄糖的还原糖所需的酶的量。该活力相对于一个Novozymes A/S标准酶测得。

4 样品类型

本方法适用于最终成品，同样也适用于来自发酵、回收和研发的样品。

5 专一性和灵敏度

如果样品在405 nm处有天然的高本底，或样品中酶活力较低而含的还原糖较多，这些都会导致本方法失效。上述情况会掩盖真实的样品本底，这些情况可从实验中不正常的高吸光度发现。

未稀释样品的检测限为6 FBG/L。定量限为13 FBG/L或0.13 FBG/g（样品稀释为1 g到10 mL）。

方法的灵敏度为：0.064 [0.043-0.085] A/(FBG/L)。

6 仪器

Konelab 30分析机，Thermo Clinical Labsystems

稀释器，Hamilton Microlab 1000

分析天平

pH计

7 试剂

7.1 FBG-B（磷酸缓冲液，33mM，pH 5.0）

如配制2 L：

Na2HPO4y2H2O ………………………………………………………………… (0.0960±0.0005) g KH2PO4…………………………………………………………………………… (8.9864±0.0005) g 去离子水 ……………………………………………………………………………… 加至 2 000 mL 贮存：室温下2周。

7.2 FBG-A（β-葡聚糖，5.9 g/L）

如配制50 mL：

β-葡聚糖（诺维信标准底物） ………………………………………………… (0.2950±0.0005) g FBG-B（溶液7.1） ………………………………………………………………………… 约40 mL 搅拌加热到90℃至溶解，然后冷却到室温。调节溶液的pH到5.00±0.05。

FBG-B（溶液7.1） ……………………………………………………………………… 加至 50 mL 贮存：室温下24小时。

7.3 Brij溶液（225 mg/L）

如配制1 L：

Brij 35（30%） ………………………………………………………………………………… 750 μL 去离子水 ……………………………………………………………………………… 加至 1 000 mL 贮存：室温下24小时。

7.4 NaOH溶液（500 mM）

取清洁的锥形瓶到天平上，回零。取4片氢氧化钠到锥形瓶中，计重量为W。然后加入去离子水。最终的重量为50W±0.01 g。

贮存：室温下8小时。

Q/12KF 3568.112-2004 7.5 PAHBAH溶液

如配制25 mL：

PAHBAH ……………………………………………………………………………… 0.5000±0.0005 g 酒石酸钾钠 ………………………………………………………………………… 1.2500±0.0005 g 醋酸铋 ……………………………………………………………………………… 0.1380±0.0005 g NaOH（溶液7.4）……………………………………………………………………………… 加至25 mL 贮存：铝膜避光。室温下24小时，或溶液从无色变为浅黄色。

8 样品和标准

样品的储备液在室温下可贮存8小时。在Konelab样品杯中的样品最终稀释液在室温下可贮存8小时。

8.1 标准

储备液

精确称取（1.3941±0.0005）g的Energex标准品93-11101（标识酶活215.2 FBG/g）到100 mL的容量瓶中。用Brij溶液（溶液7.3）定容。搅拌15 min溶解。然后再用Brij溶液（溶液7.3）稀释10倍备用。

酶标准溶液

按下表用Brij溶液（溶液7.3）稀释储备液到终体积25 mL，得到标准曲线：

FBG/L 储备液，mL 稀释倍数

6 0.5 50

12 1.0 25

17.6 1.467 17

23.1 1.925 13

30 2.5 10

8.2 标准对照

在每次分析中使用一个Celluclast标准对照品。

标准对照品用Brij溶液（溶液7.3）稀释到最终浓度在标准曲线的范围之内。

精确称取（1.0000±0.0005）g的Celluclast标准品3-1196到100 mL的容量瓶中。用Brij溶液（溶液7.3）定容。搅拌15 min溶解。然后再用Brij溶液（溶液7.3）稀释300倍备用。

8.3 样品

样品至少稀释：

——固体样品：25倍；

——液体样品：10倍。

如：

称取（1.0±0.1000）g的样品到100 mL的容量瓶中，记重。用Brij溶液（溶液7.3）定容。搅拌15 min 溶解。CT型的颗粒样品一般要溶解在250 mL的容量瓶中，用Brij溶液（溶液7.3）搅拌溶解2小时。最后按估计活性再用Brij溶液（溶液7.3）稀释到活性约为20（范围12-30）FBG/L。

9 试验步骤

9.1 样品的设置

标准、标准对照和样品按如下顺序放置：

——位置1-5：标准（浓度从低到高）；

——位置6：标准对照；

——位置7及以后：样品。

一次分析最多能分析37个样品（包括标准和标准对照）。

9.2 Konelab的设定

Q/12KF 3568.112-2004

将溶液FBG-A、FBG-B和PAHBAH分别放置在Konelab的溶液容器中。

选择FBG程序。

FBG的Konelab试验定义见附录A。

9.3 Konelab自动分析步骤

步骤 描述

1 温控装置升温到50℃

2 加110 μL的FBG-A到一个空的比色皿中

3 加110 μL的FBG-B到另一个空的比色皿中

4 两比色皿在50℃预热480 s

5 分别加入20 μL的样品

6 混合均匀

7 50℃反应1200 s

8 分别加入60 μL的PAHBAH

9 混合均匀

10 50℃再次反应1200 s

11 读取溶液的吸光度

12 计算：“结果”= FBG-A的吸光度 - FBG-B的吸光度

9.4 Konelab信号

“主空白”在Konelab真实样品模式中被叫做“结果”。该值是所有信号（酶反应信号+β-葡聚糖本底+样品本底）减去样品本底得来的。β-葡聚糖本底被保留在所有的结果中。这个本底会在从标准曲线上读数据的时候消除掉。

在工作单上记下“结果”。

如果标准5的“结果”大于3.5，则重新试验。

如果样品的“结果”超出标准曲线范围，则重新稀释样品。

Konelab的操作见文件：EB-TE-0001.02。

10 计算

10.1 标准曲线

以标准点的浓度（FBG/L）为X轴、“结果”为Y轴绘制标准曲线。标准曲线为一次曲线。

步骤 描述

1 从Konelab上读取标准点的“结果”

2 标准曲线为 S = A + B x “结果”，其中：

3 S = 标准点的活力，FBG/L

4 A = 标准曲线的截距

5 B = 标准曲线的斜率，(FBG/L)/Abs

6 “结果”= 样品Konelab试验的吸光度

7 标准曲线的相关系数r2应大于0.990。

10.2 样品

步骤 描述

1 从标准曲线的2-5之间读取未知样品的吸光度

2 按上式计算S。

10.3 样品

Q/12KF 3568.112-2004

依下式计算未稀释样品的活力： FBG/g = 1000

×××W F V S 式中：

S —— 标准曲线上读出的分析结果（FBG/L）

V —— 容量瓶的体积（mL）

F —— 多次稀释倍数

W —— 样品称重（g）

1 000 —— mL到L的换算因子

结果给出3位有效数字。

11 精确度和准确度

单次测定的变异系数（CV%）在方法确认实验中为2.5%。

方法的重复性为3.3%。

12 存档

所有文件按照本地SOP的要求存档。

13 意外情况 所有与此SOP不符的情况须与负责的化学工程师讨论并记录在案。

Q/12KF 3568.112-2004

附 录 A

（规范性附录）

Konelab试验定义

表1 Konelab试验定义

Full name EB-SM-0572

Online Name FBG Test in use YES

Test type Photometric LOW H IGH

*

Abs/min

0.00000

Test

limit

Result unit Abs/min Initial absorbance. 0.000 * A

Number of Decim. 5 Dilution limit * * Abs/min

Secondary dil 1+ 0.0 0.0

limit * * Abs/min

Critical

Reflex test limit * * Abs/min

test

Reflex

Acceptance Automatic Reference class LOW H IGH In Use

Dilution 1+ 0.0

Sample type Sample type 5 Correction factor 1.00

Abs/min

0.00

bias

Correction

°C

Temperature

50.0

Calibration type None

Factor 1.00 Bias 0.00

Bias correction in use NO

Manual QC in use NO Routine QC in use NO

Blank Sample

cuvette

Fixed

(ul)

110

Reagent FBG-A Volume

Disp. with Extra Add. Volume (ul) 50

Wash reagent FBG-B Repl. reagent FBG-B

480

(sec.)

Incubation Time

Q/12KF 3568.112-2004

表1（续）

20

Sample Volume

(ul)

Disp. with Extra Add. Volume (ul) 50

Wash reagent Water Wash reagent None

1200

(sec.)

Incubation Time

60

(ul)

Reagent PAHBAH

Volume

Disp. with Extra Add. Volume (ul) 50

Wash reagent None

point

Measurement End

Wavelength (nm) 405 Side wavel. (nm) None

Meas. type Fixed timing

━━━━━━━━━━━━

QS2631内切-β-1,4-葡聚糖酶(Cx)活性测定试剂盒说明书

货号：QS2631 规格：50管/24样 内切-β-1，4-葡聚糖酶（Cx）活性测定试剂盒说明书 分光光度法 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： Cx存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，Cx主要作用于非晶态纤维素和水溶性纤维素衍生物，随机水解糖苷键，将其分解成葡萄糖、纤维二糖、纤维三糖和其他寡聚体。 测定原理： 采用3,5－二硝基水杨酸法测定Cx催化羧甲基纤维素钠降解产生的还原糖的含量。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 试剂的组成和配制： 提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存； 试剂二：液体 60mL×1 瓶，4℃保存； 样品测定的准备： 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）样品：直接检测。 测定步骤： 1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。 混匀， 90℃水浴 10min（盖紧，防止水分散失），冷却后，测 540nm 下吸光值 A，计 算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。 第1页，共2页

酶活力测定方法

蛋白酶活力测定: 参照中华人民共和国专业标准SB/ T10317-1999蛋白酶活力测定方法( Asha 等, 2007)。 纤维素酶DNS酶活力测定方法 DNS, 活力, 纤维素酶, 测定 1 定义" |0 `. y6 t9 b" ^ 2 x 1g固体酶粉在40℃和pH值4.2条件下，每分钟水解纤维素生成1微克葡萄糖的量为1个酶活力单位，以u/g表示。 2 原理 纤维素酶分解纤维素，产生纤维二糖、葡萄糖等还原糖，纤维二糖、葡萄糖等还原糖能将3，5二硝基水杨酸中的硝基还原成橙黄色的氨基化合物，利用比色法测定其还原物生成量，表示酶的活力。! Y" m& p' q; I& K B& e$ T( B4 } 3.试剂和溶液 3.1 1％葡萄糖标准溶液（同β－葡聚糖酶酶活测定） 3.2 羧甲基纤维素钠(CMC)溶液 取1g羧甲基纤维素钠（粘度300～600厘泊）,加入pH4.2的磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液(甲液414ml和乙液586ml并用pH计校正至pH为4.2)混合均匀,水浴加热至溶,冷却后用2M 盐酸或氢氧化钠调节pH到4.2,定溶至100ml,再用二层纱布过滤，此溶液在4℃冰箱贮存，有效期3天。取滤液100ml，20ml，蒸馏水40ml，混匀，贮冰箱备用。4 C) c+ }( l2 R( M( p! L 3.3 DNS 试剂（同β－葡聚糖酶酶活测定）; h1 a. l3 Z3 k6 t2 | 4仪器和设备 4.1恒温水浴锅(40℃±0.2℃) 4.2分光光度计 含10mm比色皿，可在550nm处测量吸光度。$ ]1 h& A) p) K 5测定步骤 5.1 标准曲线绘制. [* |! P6 u* G& u2 ^6 J4 Q 分别吸取1%葡萄糖标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml于50ml容量瓶中，用蒸馏水制成每ml分别含有葡萄糖0、200、400、600、800、1000、1200mg的稀标准液。各取不同浓度的稀标准液0.5ml于试管中，加入CMC溶液1.5ml、DNS试剂3.0ml，于沸水浴中沸腾7min，取出后立即加入蒸馏水10ml混匀。冷却后，用10mm比色皿，在波长550nm处用分光光度计分别测定其吸光度。以吸光度为纵坐标，相对应的葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线或计算回归方程。1 H, `% F/ `7 X/ U. W 5.2待测酶液的制备（同β－葡聚糖酶酶活测定） 1 L- {5 h8 W; q+ V4 u2 Y 5.3 比色测定 精确吸取经待测稀释酶液0.5ml，40℃预热5min，加入经40℃预热的CMC液1.5ml（每个样品同时作3支平行试管），于40℃水浴精确反应10min，立即加入DNS试剂3.0ml终止反应，以后按标准曲线制作步骤测定样品吸光度。 同时进行空白对照测定，取稀释酶液0.5ml，先加入DNS试剂3.0ml，再加入CMC液1.5ml，其余步骤同于样品测定。 6.计算0 W+ i$ S: }( _1 o7 ], R5 m( N

魔芋葡甘聚糖膜的制备及改性

1 引言 1.1魔芋的基本性质 魔芋，多年生草本植物，我国有60多种，种植历史已达两千年之久，主要分布在在湖北、云南、四川、贵州等省，且多在山区，亩产可达数千斤。魔芋作为传统健康食品在我国和日本有悠久的历史。近年来关于KGM 在食品领域的应用研究日益引人注目。[1-2]其主要成分是魔芋葡甘聚糖（KGM），KGM 是由D-葡萄糖和D-甘露糖按1∶1.6 的比例以?-1，4 糖苷键连接的杂多糖，其分子量达106 D，在KGM 分子链上平均每17 个糖残基C-6 位上连有一个乙酰基[3-4]。是具有分支的大分子杂多糖。具有优良的亲水性、胶凝性、增稠性、黏滞性、可逆性、悬浮性、成膜性与赋味性等特性, 尤其优良的成膜性已引起国内外的重视[5].其水溶胶在适当条件下成膜, 可作为一种可食性和自然降解的膜材料。魔芋葡甘聚糖膜存在着成膜时间长、膜的强度低、抗菌能力差以及吸湿度大等问题。因此,已有应用各种方法对其进行改性以改善膜的性能.近年来魔芋葡甘聚糖改性产物在食品，医药，化工，纺织和环保等领域有很好的应用前景。因此，对魔芋葡甘聚糖膜进行改性对扩大其应用范围有重要意义。[6-7] 1.2.KGM的化学结构和性质 KGM的化学结构如图1： 图1. 魔芋葡甘聚糖的化学结构 KGM在酸性条件下分别经高峰淀粉酶，甘露糖酶和纤维素酶水解，其产物经薄层色谱和凝胶电泳分析表明，KGM是主链由D-甘露糖和D-葡萄糖以?-1，4吡喃苷键连接的杂多糖。根据来源不同，KGM分子中甘露糖和葡萄糖的摩尔比为1.6—4.2,在主链甘露糖的C 位上存在?-1，3键结合的支链结构，大约每32个糖残 3 基上有3个左右支链，支链仅含几个残基，并且在有些糖残基上有乙酰基团。约每19个糖残基上有一个，以酯的方式相结合。常见的KGM中甘露糖和葡萄糖的摩尔比约为1.5—1.7(通常为1.6)，乙酰基含量为15%。不同品种与来源的KGM 的分子量不同，一般来讲，其粘均分子量约为7—8*105，光散射法测得KGM的重

β-1,3 葡聚糖酶(β-1,3-glucanase,β-1,3-GA)试剂盒使用说明

β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-glucanase，β-1,3-GA）试剂盒使用说明 分光光度法货号：BC0830 规格：50管/24样 产品内容： 提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存； 试剂二：液体30mL×1瓶，4℃保存； 产品说明： β-1,3-GA(EC3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。 β-1,3-GA水解昆布多糖，内切β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率，来计算其酶活性。 自备仪器和用品： 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 操作步骤： 粗酶液提取： 按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。12000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤： 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。 2、样本测定（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）： 试剂名称（μL）测定管对照管 样本100100 蒸馏水100 试剂一100 充分混匀，放入37℃水浴60min。 试剂二600600 充分混匀，沸水浴5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却，550nm处记录各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式乘以相应稀释倍数），ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。 β-1,3-GA活性计算： 标准条件下测定回归方程为y=0.0958x-0.0192；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。 （1）按蛋白浓度计算 单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(U/mg prot)=[(ΔA+0.0192)÷0.0958×V1]÷(V1×Cpr)=10.438×(ΔA +0.0192)÷Cpr （2）按样本鲜重计算 单位的定义：每g组织每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(U/g鲜重)=[(ΔA+0.0192)÷0.09585×V1]÷(W×V1÷V2)=10.438×(ΔA

蛋白酶活力测定方法

酸性蛋白酶产品概述: 蛋白质由氨基酸组成，是自然界中发现的最复杂的有机化合物之一。由盐酸和蛋白酶分解成易被高等动物的肠道和微生物有机体的细胞膜吸收的氨基酸。包括人类在内的每种动物，必须要有足够的蛋白质来维持自身生长，来生成每个细胞所必需的氨基酸，一些特种蛋白质还是某些特殊细胞、腺体分泌物、酶和激素的功能性组成元素。蛋白酶是指一些有催化功能的酶，能够水解（断裂）蛋白质，因此也被称为蛋白水解酶。蛋白水解酶在许多的生理和病理过程中发挥着重要作用，在食品和乳品加工业也有着广泛应用。工作机理 蛋白水解酶制剂本产品能在酸性条件下水解蛋白质食品中的缩氨酸键，释放氨基酸或者多肽。在酒精、葡萄酒、果汁、啤酒、黄油和酱油生产中，添加酸性蛋白酶可澄清发酵液中的雾气。酵母在发酵阶段的生长可以通过悬浮蛋白质转化的氨基酸来加以促进，从而加速发酵并提高产量。本产品是一种酸性蛋白酶制剂，在酸性条件下具有较高活性，由酸性蛋白酶高产菌株——曲霉菌深层发酵而成。它广泛应用于饲料、纺织、废水处理和果汁提纯方面。 酸性蛋白酶（Acid protease ）是指蛋白酶具有较低的最适pH，而不是指酸性基团存在于酶的活性部位，酸性蛋白酶的最适PH从2左右（胃蛋白酶）到4左右。从酶的活力-PH曲线分析，在酶的活性部位中含有一个或更多的羟基。这一类蛋白酶中研究最彻底的是胃蛋白酶。（酸性蛋白酶537容易失活）

简介：酸性蛋白酶是由隆科特黑曲霉优良菌种经发酵精制提炼而成，它能在低PH条件下，有效水解蛋白质，广泛应用于酒精、白酒、啤酒、酿造、食品加工、饲料添加、皮革加工等行业。 1、产品规格：，规格有5万u/g～10万u/g 液体型为黑褐色液体，规格有50000u/ml～10000u/ml. 2、酶活力定义：一个酶活力单位是1g酶粉或1ml酶液在40℃，PH3.0条件下，1分钟水解酪素产生1ug酪氨酸为一个酶活力单位（u/g或u/ml） 特性1、温度范围为：最适温度范围为40℃-50℃2、PH为：最适PH范围为2.5～3.5 使用方法 1、白酒工业： 本品用以淀粉为原料的生产酒精及白酒行业，提高出酒率0.25%个酒分，提高发酵速度。 2、食品工业： 食品上用以淀粉改良，提高食品风味、改良品质，因能提高氨基酸含量 3、啤酒生产： 能有效阻断双乙酰生成，缩短啤酒成熟期。 4 饲料添加剂：提高饲料利用率。 5、毛皮软化： 提高上色率，手感丰满，增加毛皮光泽。

葡甘露聚糖

性状 白色或奶油至淡棕黄色粉末。可分散于PH值为4.0~7.0的热水或冷水中并形成高粘度溶液。加热和机械搅拌可提高溶解度。如在溶液中加中等量的碱，可形成即使强烈加热也不熔融的热稳定凝胶。淡黄至褐色粉末。基本无臭、无味。其水溶液有很强的拖尾（拉丝）现象，稠度很高。对纤维物质有一定分解能力。主要成分为多糖。 用途 食品；保健品；医药用品；美容器具；胶凝剂；增稠剂；乳化剂；稳定剂；成膜剂。KGM在保健品中的运用机理葡甘露聚糖是自然界分子量最大、粘度最高的膳食纤维，具有极高的浓度。众所周知，可溶性膳食纤维最重要的品质在于其粘度，粘度是降低饭后所增加的血糖浓度指数并保持其总体稳定最重要的因素。粘度越高，功效越好。葡甘露聚糖具有最强的持水能力，能吸附其自身体积200倍的水分子形成粘稠的溶液。由于其特殊的葡萄糖和甘露糖的β-1-4链式结构，它不被人体的消化酶所影响，并不会产生热量。不含有糖份，脂肪，淀粉和蛋白质等具有热量的物质

●魔芋葡甘露聚糖的营养保健功能 由于魔芋葡甘露聚糖特殊的性能，现代医学证明，作为一种医药添加剂，它能够有效地降低胆固醇、血糖和减肥，在医药行业将有广泛的应用前景，可用于治疗高血脂、糖尿病、肥胖和便秘等 1.降血糖，增加胰岛素敏感度糖尿病患者通常需要检测食物的升糖指数（食物在体内转化成葡萄糖的能力）来控制饮食的健康。例如，软饮料中的糖和淀粉能够相对快速地转化成葡萄糖进入血管。糖尿病患者必须选择低升糖指数的食品，这是因为血糖的急速增加会加剧胰腺产生胰岛素，并导致胰岛素抵抗，这两个因素都会使饭后血糖浓度快速上升。葡甘露聚糖与低升糖指数食物效果相当。在消化过程中，营养物质通过食物流到达小肠的表面进而被吸收。葡甘露聚糖在溶解后形成的胶凝体在捕获到营养物质后将其包裹在胶体内，并能减缓食物在消化道内流动的速度。被包裹起来的营养物质因接触不到消化酶无法被小肠所吸收，魔芋葡甘露聚糖能够捕获膳食糖份中的营养物质如多糖和淀粉。因此，血液吸收糖的速度减缓了，糖尿病患者也能明显地体验到饭后稳定的血糖了。血糖的平稳使其对胰岛素的作用更敏感，从而避免血糖的高低波动给胰腺带来大的压力，同时对糖尿病患者和预防类型Ⅱ糖尿病（不能产生足够

酶活测定方法

酶活测定方法 还原法 酶与底物在特定的条件下反应,酶可以促使底物释放出还原性的基团。在此反应体系中添加 化学试剂,酶促反应的产物可与该化学试剂发生反应,生成有色物质。通过在特定的波长下 比色,即可求出还原产物的含量,从而计算出酶活力的大小。 色原底物法 通过底物与特定的可溶性生色基团物质结合,合成人工底物。该底物与酶发生反应后,生色基团可被释放出来,用分光光度法即可测定颜色的深浅,在与已知标准酶所做的曲线比较后,即可求出待测酶的活力。 粘度法 该法常用于测定纤维素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶的活力。木聚糖和β-葡聚糖溶液通常 情况下可形成极高的粘度,当酶作用于粘性底物时木聚糖和β-葡聚糖会被切割成较小的分子 使其粘度大为降低。基于Poiseuille定律我们知道,只要测定一定条件下溶剂和样品溶液的运动粘度,便可计算特性粘数,并以此来判断酶的活力。 高压液相色谱法 酶与其底物在特定的条件下充分反应后,在一定的色谱条件下从反应体系中提取溶液进行 色谱分析,认真记录保留时间和色谱图,测量各个样的峰高和半峰高,计算出酶促反应生成物 的含量,从而换算出酶活力的数值。 免疫学方法 常用于酶活性分析的免疫学方法包括:免疫电泳法、免疫凝胶扩散法。这两种方法都是根据酶与其抗体之间可发生特定的沉淀反应,通过待测酶和标准酶的比较,最终确定酶活力。 免疫学方法检侧度非常灵敏,可检侧出经过极度稀释后样品中的酶蛋白,但其缺点是不同厂 家生产的酶产品需要有不同特定的抗体发生反应。 琼脂凝胶扩散法 将酶作用的底物与琼脂混合熔融后,倒入培养皿中或载波片上制成琼脂平板。用打孔器在 琼脂平面上打出一个约4-5mm半径的小孔。在点加酶样并培养24h以后,用染色剂显色或用展开剂展开显出水解区,利用水解直径和酶活力关系测定酶活力。 蛋白酶活力的测定

葡甘聚糖的提取工艺综述

魔芋葡甘聚糖的提取工艺综述 摘要目的:综述魔芋葡甘聚糖的提取及分离方法研究现状。方法:对国内外文献进行归纳、分析及总结。结果:魔芋葡甘聚糖是天然高分子多糖，理化性质稳定。结论:魔芋葡甘聚糖在医药、化工、食品等方面具有广泛的应用前景，在药用辅料方面值得开发。 关键词: 魔芋葡甘聚糖提取分离综述 0 前言 魔芋属天南星科, 多年生草木植物。研究表明, 魔芋精粉中约含40 %～70 %的葡甘聚糖, 还含有少量蛋白质、食物纤维、淀粉、游离还原糖、氨基酸及微量无机盐等[1 ]。魔芋的主要活性成分为葡甘聚糖,它是对魔芋进行深加工利用的重要成分。魔芋葡甘聚糖的含量高,分子量大,其精粉及其相应产品的质量就好。由于葡甘聚糖及其改性产物水溶胶的高粘度、稳定性、乳化性、高膨胀性、成膜性、凝胶性和特定的生物活性,使得它们在食品、医药、化工、日化、造纸、纺织、石油和环保等领域具有很好的应用前景。因此,研究魔芋葡甘聚糖的提取分离方法具有重要的意义。 1 魔芋葡甘聚糖(KGM)的提取[ 2 ] 1.1粗提 魔芋粉 80g→150ml石油醚→60cC-65℃加热回流0.5h→过滤斗回收石油醚后→150mL 90%乙醇→70-80℃加热回流0.5h→过滤→回收乙醇→滤渣→60℃干燥→粗魔芋葡甘露聚糖。样品重71g，产品收率为89%。用分光光度法[6.71测得葡甘露聚糖含量为74.2%o 1.2精制 1.2.1乙醇沉淀法 粗魔芋葡甘聚糖(5g)→配成1%溶胶→95%乙醇沉淀→80%乙醇洗涤两次→85%乙醇50℃洗涤30min→95%乙醇沉淀→60℃干燥→粉碎→KGM。用分光光度法16,71测得KGM的含量为90.1%，产品收率为90.5%o 1.2.2酸水解法 粗魔芋葡甘聚糖(5g) →配成1%溶胶酸→水解(10%HCI调pH2-pH3,85℃-90℃水解15h)→95%

β-1,3葡聚糖酶检测试剂盒使用说明

β-1,3葡聚糖酶检测试剂盒使用说明 分光光度法货号：BC0360 规格：50管/24样 产品内容： 提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存； 试剂二：液体42mL×1瓶，4℃保存； 标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1ml蒸馏水溶解，配制成10mg/ml葡萄糖溶液备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。 标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。 产品说明： β-1,3-GA(EC3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。 β-1,3-GA水解昆布多糖，内切β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率，来计算其酶活性。 自备仪器和用品： 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤： 粗酶液提取： 按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。12000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 测定步骤： 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。 2、样本测定（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）： 试剂名称（μL）测定管对照管标准管（葡萄糖溶液）样本或标准液100100100蒸馏水100100 试剂一100 充分混匀，放入37℃水浴60min。 试剂二600600600 充分混匀，沸水浴5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却，540nm处记录各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式乘以相应稀释倍数），ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。 β-1,3-GA活性计算： 根据标准管吸光度（x）和浓度（y，mg/ml）建立标准曲线，将ΔA带入公式中计算出样品中产生的还原糖的含量y值（mg/ml） （1）按蛋白浓度计算 单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y÷Cpr （2）按样本鲜重计算

β-葡聚糖测定方法

β-葡聚糖酶活力测定方法(NY/T911-2004) ? 1.原理 β-葡聚糖酶能将木聚糖降解成还原性糖。还原性糖在沸水浴条件下可以与3,5-二硝基水杨酸（DNS)试剂反应显色反应。反应液颜色的深度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中β-葡聚糖酶的活力成正比。因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液中β-葡聚糖酶的活力。 ? 2. 操作 ? 2.1.标准葡萄糖曲线的制作 2.1.1 吸取PH5.5的0.1M乙酸-乙酸钠+缓冲溶液4.0mL,加入DNS试剂5.0mL， 沸水浴加热5min。用自来水冷却至室温，用水定容至25.0mL,制成标准空白样。 2.1.2 分别吸取葡萄糖溶液1.00mL、2.00mL、 3.00mL、 4.00mL、 5.00mL、 6.00mL 和7.00mL,分别用PH5.5的0.1M醋酸缓冲溶液定容至100mL,配制成浓度为 0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.30mg/mL、0.40mg/mL、0.50mg、0.60mg/mL和0.70mg/mL 葡萄糖标准溶液。 2.1.3 分别取上述浓度系列的葡萄糖标准溶液各2.00mL（做两个平行），分别 加入到刻度试管中，再分别加入2.0mL缓冲液94.4)和5.0mLDNS试剂。电磁振荡3s-5s,沸水浴加热5min。然后用自来水冷却到室温，在用水定溶液至25mL。 以标准空白为对照调零，在540min处测定吸光度A值。 以葡萄糖糖浓度为Y轴、吸光度A值为X轴，绘制标准曲线。每次新配制DNS试剂均需要重新绘制标准曲线 ? 3. 酶样测定 吸取10.0mLβ-葡聚糖溶液,37℃平衡20min。 吸取10.0经过适当稀释的酶液，37℃平衡10min。 ?吸取2.00mL经过适当稀释的酶液（已经过37℃平衡），加入到刻度试管中，再加入5mLDNS试剂，电磁振荡3s-5s。然后加入8.0g/lβ-葡聚糖溶液2.0ml，37℃保温30min,沸水浴加热5min。用自来水冷却至室温，加水定容至25mL，电磁振荡3s-5s。以标准空白样(2.1.1)为空白对照，在540min处测定吸光度A 。 B

β-葡聚糖酶是一类分解β-葡聚糖的酶

β－葡聚糖酶是一类分解β－葡聚糖的酶，它主要分解大麦等麦类中以β－1，3和β－1，4混合键连接的β－D－葡聚糖和细菌地衣多糖，也称地衣多糖酶。β－葡聚糖酶主要由植物和微生物产生，在动物饲粮（尤其是含有大麦的饲粮）中添加能有效地解决β－葡聚糖的抗营养作用，降低食糜粘度。 产品规格 型号酶活剂型包装规格 FE303A2000 IU/g粉状20 kg/袋或桶 FE303B4000 IU/g粉状20 kg/袋或桶 FE303C6000 IU/g粉状20 kg/袋或桶 FE303AL2000 IU/ml液体30 kg/桶或200 kg/桶FE303BL4000 IU/ml液体30 kg/桶或200 kg/桶FE303CL6000 IU/ml液体30 kg/桶或200 kg/桶 产品特点 ●采用新型国际专利菌种生产，产品性能优良，使用效果得以保证； ●先进的全自动液体深层发酵技术，领先的后处理加工工艺，保障了产品的 高纯度、高稳定性和良好的均匀度； ●采用基因工程技术改良发酵菌种，使内切酶活性大幅度提高，是普通产品 的2.5～3.5倍； ●有良好的对高温高湿的耐受能力，在饲料制粒条件下，制粒后的酶活可以 保持85％以上，保证了其在颗粒饲料中的使用效果； ●有良好的对动物胃酸、胃蛋白酶、胰蛋白酶和高浓度金属离子的耐受能力， 保证了其在动物生产中的使用效果。 产品功能 ●有效降解植物饲料中的抗营养因子——β－葡聚糖，消除其抗营养作用， 降低食糜粘度，提高饲料养分的消化率和吸收利用率； ●与纤维素酶、木聚糖酶一起作用，有效摧毁植物细胞壁结构，促进植物细 胞内其它营养物质释放，提高原料中营养物质的利用率； ●促进内源酶的分泌，提高消化道中内源酶活性，促进营养物质的消化和吸 收，提高饲料利用率；

β-葡聚糖的研究

啤酒生产过程中β-葡聚糖研究与测定 郑翔鹏 福建省燕京惠泉啤酒股份有限公司362100 摘要：研究了啤酒生产过程中β-葡聚糖的变化，发现刚果红显色法用于啤酒生产中半成品、成品的测定具有一定的可行性，同时运用的数学统计方法分析，测定的结果表明了其在整个生产过程的变化以及与相应影响因素的关系，起到指导生产的作用。 关键词：β-葡聚糖；刚果红显色法；啤酒 前言 β-葡聚糖是麦芽中非淀粉质多糖的主要组成部分，其占麦芽干物质的5%~8%，是通过β（1、3）、β（1、4）糖苷键随机排列的线性连接而成的。麦芽中水不溶性的β-葡聚糖主要存在于完整胚乳细胞壁中，热水可溶性β-葡聚糖酶，主要存在于胚乳细胞之间和蛋白质混合在一起。β-葡聚糖在水中溶解时，浓度低时直接与水分子相互作用增加溶液粘度，浓度大时，β-葡聚糖分子自身相互作用缠绕成网状结构，能吸收水分子形成凝胶，使溶液的粘度大大的增加；啤酒中适量的β-葡聚糖对口味的丰满有益，能增进口感的柔和性。 在糖化过程中，麦芽中游离的β-葡聚糖及其的分解产物溶于醪液中，使醪液的粘度上升；在35~50℃时，通过内-β-1、4葡聚糖酶和大麦内-β-葡聚糖酶的作用，高分子的β-葡聚糖逐步分解为β-葡聚糖糊精和低分子物质，醪液的粘度逐之下降；在45~55℃，麦芽浸出物继续溶解，β-葡聚糖继续游离，此时，内-β-1、4葡聚糖酶和大麦内-β-葡聚糖酶的活力逐步减弱，β-葡聚糖分解缓慢，但研究表明，内-β-1、4葡聚糖酶在50~55时仍具有一定的活力，可继续分解β-葡聚糖；在60~70℃时，β-葡聚糖溶解酶使大量的β-葡聚糖从其相结合的蛋白质中分离出来，在这个温度上，温度越高，游离出来的β-葡聚糖含量就越高，在65℃以上内-β-1、4葡聚糖酶的活力逐渐失活；在70℃以上，由于上述各种β-葡聚糖分解酶均已逐渐失活，此时由β-葡聚糖分解酶溶解的β-葡聚糖保持不变。 其中，影响β-葡聚糖分解的因素为：首要的还是大麦的品种与质量，溶解良好的麦芽，其的高分子β-葡聚糖含量远低于溶解不良的，而含的酶量远高于溶解不良的；粉粹条件也有一定影响，一般说细粉溶解出较多的β-葡聚糖；糖化的条件的影响，低温下料和低温糖化，β-葡聚糖的分解较明显，而高温糖化对高分子β-葡聚糖难分解到满意的程度，特别是对溶解不良的麦芽，但是，对麦汁中β-葡聚糖含量起作用的是麦芽质量，糖化方法只能起到调节的作用，当然了，延长低温休止时间，对β-葡聚糖的分解是有利的，PH值的影响不是很明显。研究表明，45℃糖化时只有少数的β-葡聚糖释放到麦汁中去，而在65℃糖化有大量的β-葡聚糖浸出到麦汁中，因此，就糖化温度以及糖化其他物理性质对糖化过程中β-葡聚糖的浸出比β-葡聚糖酶的影响更大，这将表明，麦汁中的β-葡聚糖含量主要取决于制麦过程中胚乳细胞壁所经受酶的水解程度。 对于麦汁、发酵液以及成品酒中β-葡聚糖的检测分析，作者根据多种分析方法研究分析实践，如利用苯酚法等，最终确定刚果红显色法进行分析研究。通过研究表明，该方法具有良好的线性，操作简单、方便，对于实际样品的检测有一定的指导生产的作用。 本文主要基于该检测方法上，研究整个啤酒酿造过程中β-葡聚糖的变化情况，同时根据不同品种的啤酒其β-葡聚糖的差异，表明一定的问题。 1、实验材料与方法 1.1实验材料 标准β-葡聚糖（美国Sigma公司生产） 刚果红（进口分装） 磷酸缓冲溶液（PH=8.0） 分光光度计（hp公司生产） 恒温水浴槽

饲料酶活性测定方法

饲用酶活性测定方法

附录A 木聚糖酶活力的测定方法 A1应用范围 本标准规定了用分光光度法测定饲料添加剂中木聚糖酶的活力。 本标准适用于饲料添加剂木聚糖酶产品，最低检出限为10.0U/g。 A2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注册日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注册日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。A3木聚糖酶活力单位定义 在37℃，pH为5.5的条件下，每分钟从浓度为5mg/ml的木聚糖溶液中降解释放1umol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位U。 A4测定原理 木聚糖酶能将木聚糖降解成寡糖和单糖。具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂发生显色反应。反应液颜色的深度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中木聚糖酶的活力成正比。因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液中木聚糖酶的活力。 A5.试剂与溶液 除特殊说明外，所用的试剂均为分析纯，水均为符合GB/T6682中规定的三级水。 A5.1乙酸溶液，c（CH3COOH）为0.1mol/L： 吸取冰乙酸0.60ml。加水溶解，定容至100ml。 A5.2乙酸钠溶液，c（CH3COONa）为0.1mol/L： 称取三水乙酸钠1.36g。加水溶解，定容至100ml。 A5.3氢氧化钠溶液，c(NaOH)为200g/L： 称取氢氧化钠20.0g。加水溶解，定容至100ml。 A5.4乙酸—乙酸钠缓冲溶液，c(CH3COOH—CH3COONa)为0.1mol/L，pH为5.50 称取三水乙酸钠23.14g，加入冰乙酸1.70ml。再加水溶解，定容至2000mL。测定溶液的pH。如果pH偏离5.50，再用乙酸溶液（5.1）或乙酸钠溶液（5.2）调节至5.50。 A5.5木糖储备溶液，c(C5H10O5)为10.0mg/ml： 称取无水木糖1.000g，加缓冲液（5.4）溶解，定容至100ml。 A5.6木聚糖溶液，浓度为5mg/mL 称取木聚糖（Sigma X0672）1.00g，加入氢氧化钠0.32g(或0.5mol/LNaOH溶液16mL)，再加入90mL水（75mL）,加热，磁力搅拌至木聚糖完全溶解。再加入冰乙酸0.5mL，再用乙酸乙酸钠缓冲溶液（5.4）定容至100mL。如果pH偏离5.50，再用乙酸溶液（5.1）或乙酸钠溶液（5.2）调节pH 至5.50，然后再用乙酸乙酸钠缓冲溶液（5.4）定容至100mL。使用前，适当摇匀。4℃避光保存，有效期为12h。 A5.7DNS试剂 称取3,5-二硝基水杨酸3.15g（化学纯），加水500mL，搅拌5s，水浴至45℃。然后逐步加入100mL 氢氧化钠溶液（5.3），同时不断搅拌，直到溶液清澈透明（注意：在加入氢氧化钠过程中，溶液温度不要超过48℃）。再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0g、苯酚2.50g和无水亚硫酸钠2.50g。继续45℃水浴加热，同时补加水300mL，不断搅拌，直到加入的物质完全溶解。停止加热，冷却至室温后，用水定容至1000mL。用烧结玻璃过滤器过滤。取滤液，储存在棕色瓶中，避光保存。室温下存放7

β-葡聚糖酶活性测定(精)

β-葡聚糖酶活性测定 β-葡聚糖是由葡萄糖单体通过β-1，3和β-1，4糖苷键连接而成的D型葡萄糖聚合物，它主要存在于单子叶禾本科谷实中的糊粉层和胚乳细胞壁中。β-葡聚糖酶属于水解酶类，能有效地降解β-葡聚糖分子中的β-1，3和β-1，4糖苷键，使之降解为小分子。由于在饲料中，大麦的β-葡聚糖含量较高，难以被单胃动物消化利用，而且对饲料中各种养分的消化利用具有明显的干扰和抑制作用，成为麦类饲料中的抗营养因子。在饲料中添加β-葡聚糖酶，能有效地消除β-葡聚糖的抗营养作用，促进饲料中各种养分的消化和吸收利用，增进畜禽健康。在啤酒生产中，添加β-葡聚糖酶可以加快麦汁和啤酒的过滤速度、提高麦汁得率、增加可发酵糖的含量。此外，β-葡聚糖酶在造纸工业、日化工业等其它许多方面也有着广泛的应用，对β-葡聚糖酶的研究将越来越受到人们的重视。 β-葡聚糖酶活力的测定方法主要有3种：还原糖测定法（分光光度法）、粘度测定法和底物染色法。其中还原糖测定法简便实用，比较准确，而且结果重复性好，是广泛使用的一种酶活测定方法。其原理是：β-葡聚糖酶能将β-葡聚糖降解成寡糖和单糖，其具有的还原基团在沸水浴条件下可与DNS试剂发生显色反应，显色的深浅与还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中β-葡聚糖酶的活力成正比，因此，可以利用比色测定反应液的吸光度值来计算还原糖的生成量，从而得出β-葡聚糖酶的活力。但在该测定方法的具体操作中存在一些影响酶活力测定结果的因素，本文即对还原糖法测定β-葡聚糖酶活力的几个重要影响因素进行研究，并得出最佳测定条件。 1 材料与方法 1.1 菌株与培养基 1.1.1 发酵产酶菌株 黑曲霉（Aspergillus niger）A47菌株，由本实验室保藏。 1.1.2 固态发酵培养基 麸皮70 g、米糠27 g、NH4NO3 2.95 g、微量元素液0.05 ml、蒸馏水100 ml，pH值5.0，121 ℃灭菌20 min。 微量元素液的组成为：2 mol/l HCl溶液 5 ml、FeSO4 2.5 g、MnSO4·H2O 0.98 g、ZnCl2 0.83 g、CoCl2 1.0 g、蒸馏水100 ml。

纤维素酶活力测定方法_张瑞萍

测试与标准 纤维素酶活力测定方法 张瑞萍 南通工学院(226007) 摘　要　用DN S 为显色剂,分别以滤纸和CM C 为底物,以滤纸糖酶活性(FP A )和羧甲基纤维素酶活性(CM C a se )表征纤维素酶活力。确定酶活测定用波长为530nm,参比溶液应为失活酶、底物和DN S 等共热的反应物;比较了两种底物的酶活力测定方法。结果表明,CM C a se 比FP A 高,说明酶对水溶性底物有较高的活力,也表明吸附对酶的活性部位与纤维素分子链段的结合及催化均有很大影响;对于不同牌号的纤维素酶,织物的酶减量率与CM C 酶活力关系密切。 叙　词:　测试　纤维素酶　活度中图分类号:　TS197 纤维素酶是多组分复合物,各组分的底物专一性不同。纤维素酶作用的底物比较复杂,反应产物不同,致使纤维素酶活力测定方法很多,各国的方法亦不统一。我们选择滤纸、CM C 为底物,原理系利用纤维素酶催化水解纤维素,产生纤维多糖、二糖及葡萄糖等还原糖,与显色剂反应,求出还原糖的浓度,间接求出酶的活力。由不同底物测得的酶活力分别称作FPA (滤纸糖酶活力)和CM C ase (羧甲基纤维素酶酶活力)。本文分析确定酶活力测定的主要条件,比较两种底物的酶活力测定方法的结果,探讨纤维素酶活力与织物减量率的关系,为酶在生产中的利用提供依据。 1　实验方法 1.1　化学药品、材料 纤维素酶(工业品),DNS 试剂(自配),冰醋酸,醋酸钠,葡萄糖(均为分析纯),滤纸(定性),羧甲基纤维素酶CM C (试剂级),纯棉针织物半制品(南通针织厂)。 1.2　FPA 滤纸酶活力和CMC 酶活力的测定 取适当稀释的酶液,分别以滤纸或1%的CM C 溶液为底物,于50℃恒温水解反应1h ;然后加入显色剂DNS,沸水浴中煮沸5min;再加入蒸馏水,于530nm 测定吸光度OD 值。 酶活可定义为:每毫升酶液1min 产生1mg 葡萄糖为一个单位( )。 1.3　针织物酶减量率的测定 将酶处理前后的试样在烘箱中105℃烘至恒重。减量率= 处理前织物干重-处理后织物干重 处理前织物干重 ×100% 2　结果与讨论 2.1　显色剂的选择 选用DNS ,在碱性条件下与还原糖反应,生成有色化合物,用分光光度计比色,确定低分子糖含量。 碱性条件下DNS 与还原糖共热反应如下: O 2N OH O 2N CO OH +还原糖 　H 2N OH CO OH O 2N DN S(黄色) 3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色) 生成的棕红色氨基化合物系比色法测定基础。2.2　最大吸收波长的确定 选取490～580nm 波长对显色液进行比色。由图1可知,不同浓度的葡萄糖溶液在490～500nm 处有最大吸收,DNS 在此波长下也有较明显的吸收。为了排除DNS 的干扰,选择在波长 530nm 处进行测定,此波长下的葡萄糖吸收虽有所降低,然而符合“吸收最大、干扰最小”的原则。 图1　D NS 与葡萄糖的吸收曲线 2.3　底物及酶本身含糖量的影响 在实验过程中发现,底物特别是滤纸,也含有一定的还原糖,在碱性的DNS 试剂中也会发色。而且,试验所用的纤维素酶是一种工业级的复合酶,品种不同,其本身含糖量也不同。为了排除这类还原糖的干扰,参比溶液取失活后的酶、底物、DNS 等共热的反应物。2.4　葡萄糖标准曲线 用不同浓度的葡萄糖溶液作为标准溶液,与DNS 共热反应显色后,测出其吸光度OD 值(见图2)。标准曲线的线性相关系数R 2为0.9991(见图2),线性相当好,可以用于酶活力的测定。 38 印　染(2002No .8) www .cdfn .com .cn

植物聚多糖葡甘聚糖的性质与应用

植物聚多糖魔芋葡甘聚糖的性质与应用1 摘要：本文全面介绍了魔芋的主要成分——葡甘聚糖（Konjac Glucomannan 简称KGM ）的结构、提纯方法、物理化学性质和其在医药卫生领域的保健功能及药用价值；综述了近年国内外的研究开发现状和其在食品、化工、纺织、医药、石油钻探等领域的应用，从而展示了KGM 这一丰富的可再生资源的学术研究价值以及在医药、化工、纺织等领域中的广阔的应用前景。 关键词： 魔芋；葡甘聚糖；聚多糖 1.葡甘聚糖的来源和化学结构 魔芋的主要成份是葡萄糖甘露聚糖，简称葡甘聚糖，在干魔芋块茎中含量高达55～80％ [1, 2]。它是由D-葡萄糖(G)和D –甘露糖(M)按1:1.6或1:1.69的摩尔比通过β-1，4-吡喃糖苷键结 合而成的复合多糖。在其主链上甘露糖的C3位置上往往存在着通过β-1，3糖苷键结合的支链结构，除葡萄糖和甘露糖残基外，还有少量乙酰基存在 [3, 4]。 KGM 的结构如图1所示。 图1 KGM 的大分子结构 Figure 1 The Macromolecular Structure of KGM 由于KGM 的性质受其提取工艺和纯度的影响较大，因此KGM 的分离和提纯方法的研究一直备受关注，文献中多有报道[5-7]。其中常用的是乙醇沉淀法、铜盐法和真空冷冻干燥法。铜盐法以及早期的乙醇沉淀法在提纯KGM 的过程中由于进行了高温处理，使KGM 失去水溶性而只能溶解在20%NaOH 溶液中。真空冷冻干燥法由于保持了物质的结构与形态，未受到高温的影响而保持了良好的水溶性。目前，真空冷冻干燥法是一种比较好的采用较多的方法。近年来，生物催化剂酶亦被用于KGM 的提纯[8, 9]。这种方法利用淀粉酶和蛋白酶将魔芋精粉中所含的淀粉和蛋白质分解除去，然后再用乙醇将KGM 从反应体系中提取出来，从而得到高纯度的、水溶性良好的葡甘聚糖。相对于一般的化学方法，利用酶提纯的方法得到的葡甘聚糖的纯度要高的多。 2 魔芋葡甘聚糖的物理性质及其应用 2.1 魔芋葡甘聚糖的亲水性及其应用 葡甘聚糖是一种高分子量的水溶性非离子天然聚合物，其平均分子量因产地、品种、加工方法以及原料储存时间的不同而不同 [10]，一般可达到106数量级。KGM 溶于水，不溶于甲 M M M M O C -O

β-葡聚糖酶

植物β－1，3－葡聚糖酶的研究进展 β-1,3-葡聚糖酶参与了植物的多种生长发育过程，包括细胞分裂、小孢子发生、花粉萌发、育性、韧皮部胼胝质去除、受精、种子萌芽及植物生长调控等过程。20世纪70年代以前，对β-1,3-葡聚糖酶的研究主要集中于它对植物本身不同发育阶段的作用，随着分子生物学技术在植物抗病基因工程中的逐步应用，β-1,3-葡聚糖酶基因的抗病研究取得了快速发展。目前，β-1,3-葡聚糖酶基因在植物抗病基因工程研究中已被认为是最具吸引力的基因之一。 1 β-1,3-葡聚糖酶基本生物学特性和分类 已知的β-1,3-葡聚糖酶均属于糖基水解酶第十七家族，其成员具有共同的氨基酸序列结构：(LIVM)一x一(LIVM-FVW)3一(STAG)-E-(ST)-G- W-P-(Srr)-X-G．(Lan等，1998)，β-1,3-葡聚糖酶分为外切酶和内切酶，目前主要研究的是内切酶。它的分子量为32-37kD，等电点从酸性到碱性。它的作用底物为以β-1,3-苷键连接起来的多聚糖，以随机作用方式将多聚糖分解成为糊精或寡聚糖。各种类型的β -1,3-葡聚糖酶已从多种植物中分离出来。根据其等电点、定位、mRNA表达模式及序列的同源性等特点可将其分为四种不同类型。I类葡聚糖酶为碱性，主要存在于液泡中，体外具较强抑菌活性。碱性β-1,3-葡聚糖酶通常具有1个液泡定位的羧基末端多肽(carboxyl terminal polypetide，CTPP)结构，CTPP中往往含有糖基化位点即CTPP切除信号氨基酸结构， CTPP的缺乏使得β-l,3-葡聚糖酶分泌到胞外，因此，CTPP存在与否成为β-1,3-葡聚糖酶分类的重要依据。现已分离出三种编码I类葡聚糖酶的cDNA，它的前体蛋白含有N一端信号肽及C一端液泡导向肽序列。在根及老叶中组成型表达．占可溶性蛋白的5％-10％，且主要分布在叶的表皮细胞层中。受病源菌、乙烯、水杨酸、伤口、UV等因素诱导，但被auxin ／cytokine所抑制，并受发育的调节。Ⅱ类葡聚糖酶具有较低等电点，被称为酸性葡聚糖酶。主要分布在细胞间隙，在体外无抑菌活性，它的氨基酸序列中不具有C一端延伸序列。与I类酶有55％同源性，但Ⅱ类酶与I类酶在血清学上具有相似性。它主要包括PR2(又称PR-36)。PR-N，PR-O(又称PR-37)，能被病原菌诱导，I类葡聚糖酶与Ⅱ类葡聚糖酶相比．只有54％~59％的同源性。Ⅲ类酶属于分布在胞外的诱导物释放型β-1,3-葡聚糖酶(PR-Q’)，分子量为35KD(又称PR-35)。PR-Q’由烟草花叶病毒(TMV)诱导表达，其诱导速度慢于或相同于Ⅱ类葡聚糖酶，持续时间也较短嘲。Ⅳ类葡聚糖酶为酸性胞外非诱导型β-1,3-葡聚糖酶(PR-O’)，分子量为25KD,是一种二聚体，不能被病原物诱导㈣。与Ⅱ类、Ⅲ类酶相似性较小，且与前三种酶均不能发生抗血清交叉反应。 2 β-1,3-葡聚糖酶抗病机制研究 植物受病原物侵染时常产生一些PR蛋白进行抵御，β-1,3-葡聚糖酶即是其中之一。PR类蛋白是由植物寄主基因编码的、在病理或相关条件下诱导产生的蛋白质,PR类蛋白与植物系统获得性抗性fSystemic acquired resistence,SARl和系统诱导性抗性fInduced Systemic Resistance ISRl的建立密切相关。根据蛋白质之间氨基酸序列的相似程度，目前已经发现的PR蛋白可分为十一类，β-1,3-葡聚糖酶属于PR2类，在植物的抗病过程中扮演着重要角色。β-1,3-葡聚糖是真菌细胞壁的重要结构成分。许多真菌的菌丝尖端β-1,3-葡聚糖暴露在表面，能够直接受到β-1,3-葡聚糖酶的攻击。体外抑菌实验表明，β-1,3-葡聚糖酶对菌丝生长具有抑制作用。不过，只有液泡定位的碱性葡聚糖酶能够降解菌丝壁，从而抑制生长，而胞间定位的类型则没有抑菌活性。当然，真菌也合成一些葡聚糖酶抑制蛋白fGlucanase Inhibitor Protein RIPl，RIP特异性地抑制寄主内源葡聚糖酶的活性旧，这反映了植物与微生物共进