不同方法测细胞活性的优缺点

MTT MTS CCK-8

原理

活细胞线粒体中的琥珀酸

脱氢酶能使外源性MTT还原为

水不溶性的蓝紫色结晶甲臜

（Formazan）并沉积在细胞

中，而死细胞无此功能。二甲

基亚砜（DMSO）能溶解细胞

中的甲臜，用酶联免疫检测仪

在490nm波长处测定其光吸收

值，可间接反映活细胞数量。

在一定细胞数范围内，MTT结

晶形成的量与细胞数成正比。

MTS是一种新合成的四唑类化

合物，与MTT原理相同，MTS

也是通过被活细胞内线粒体内

的多种脱氢酶还原成橙黄色的

Formazan从而反映细胞活力情

况。

CCK-8在电子载体1-甲

氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二

甲酯（1-Methoxy PMS）的

作用下被细胞线粒体中的脱

氢酶还原为具有高度水溶性

的黄色甲臜产物

（Formazan）。生成的甲臜

物的数量与活细胞的数量成

正比。用酶联免疫检测仪在

450nm波长处测定其光吸收

值，可间接反映活细胞数量

。

优点1、简单、快捷，准确测定细

胞的增值反应，能避免由于人

为操作因素造成的试验误差，

大大地提高了试验结果的准确

性

1、操作简单，比MT T高效，

产生水溶性的Formazan，无需

用DMSO溶解；

2、由于MTS被还原后生成的

甲瓒产物颜色较深，吸光度值

变异范围大，使测定更加敏感

准确，阴/阳性的判断也比较

容易；

3、快速，作用时间2-3小时为

最佳，而MTT需4小时；

4、重复性好，还原产物稳定

1、使用方便，省去了洗涤

细胞，不需要放射性同位素

和有机溶剂；

2、检测快速；

3、灵敏度高，甚至可以测

定较低细胞密度；

4、重复性优于MTT；

5、对细胞毒性小；

6、为1瓶溶液，毋需预制，

即开即用；

7、水溶性，不需换液，尤

其适用于悬浮细胞

缺点1、由于MTT经还原所产生的

甲臜不溶于水，需被溶解后才

能检测，对实验结果的准确性

产生影响；

2、不太适合悬浮细胞活性检

测

1、试剂比较贵1、与MTT相比，CCK-8和

XTT的价格比较贵；

2、CCK-8试剂的颜色为淡

红色，与含酚红的培养基颜

色接近，不注意的话容易产

生漏加或多加

XTT SRB LDH释放法

XTT作为线粒体脱氢酶的作用底物，被活细胞还原成水溶性的橙黄色甲臢产物。当XTT 与电子偶合剂（例如PMS）联合应用时，其所产生的水溶性的甲臢产物的吸光度与活细胞的数量成正比。

磺酰罗丹明

B(Sulforhodamine B，SRB)比色

法，主要用来检测细胞增殖情况

。SRB是一种粉红色阴离子染

料，易溶于水，在酸性条件下可

特异性地与细胞内组成蛋白质的

碱性氨基酸结合；在540 nm波长

下产生吸收峰，吸光值与细胞量

成线性正相关，故可用作细胞数

的定量检测。

乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶

之一。在正常情况下，不能透过细胞膜。当

靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时，细胞

膜通透性改变，LDH可释放至介质中，释放

出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中，

使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶

I(NADH2），后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯

硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化氮唑蓝(INT)或

硝基氯化四氮唑蓝(NBT)形成有色的甲簪类化

合物，在490nm或570nm波长处有一高吸收

峰，利用读取的OD值，经过计算即可得细胞

活性。

1、使用方便，省去了洗涤细胞；

2、检测快速；

3、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；

4、重复性优于MTT 1、SRB染色后不会像MTT法那

样很容易变色，细胞固定染色后

在96孔板中可以放置较长时间，

因而受测定时间的影响较小；

2、用Tris-base溶液溶解的SRB也

可稳定较长时间。因此不同时间

点固定的96孔细胞培养板可在同

一时间测定，测定的吸光值结果

不会受到明显影响；

3、虽然SRB法比其他检测方法

操作步骤繁琐，但是由于时间可

以自己掌握，不受限制

1、与MMT比较，该法简便、灵敏度高，敏

感性、客观性、试剂成本及测定速度都优于

MTT法；

2、常用语NK细胞、CTL细胞活性检测

1、XTT水溶液不稳定，需要低温保存或现配现用1、操作繁琐1、影响因素较多，诸如培养基、pH值、温

度、底物显色时间和加终止剂等，实际操作

不易掌握

AlamarBlue

细胞增殖过程中，细胞体内的环境由氧化环境变化成还原环境，呼吸链中的NADPH/NADP,

FADH/FAD, FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高。alamarBlue的活性成分resazurin（刃天青）是一种无毒、可透膜的蓝色染料，有微弱的荧光性，它作为一种氧化还原指示剂，被细胞内吞后，在细胞质中被以上这些代谢中间体还原，其还原产物resorufin呈现出粉红色并有很强的荧光性，最后可用普通分光光度计或荧光光度计进行检测，吸光度和荧光强度与活性细胞数成正比，因而可作为细胞增殖和细胞毒性定量检测的一个理想的指示器。

1、即用型的单组分试剂，只需加入培养基即可检测细胞的增殖状况；产生的还原产物是水溶性的，与其他常用的细胞增殖检测方法相比，不需要固定、洗涤、提取的步骤；

2、灵活：可通过分光光度计或荧光光度计检测；

3、性价比高：可用于高通量分析；

4、安全：对细胞无毒、无害，不影响细胞代谢、细胞因子分泌、抗体合成等，对人体和环境也无毒无害；

5、高灵敏：最低可检测50个细胞；

6、稳定：适用于对细胞增殖状况的连续观察；

7、经济：无需裂解细胞，细胞可继续培养或用于其他实验

1、注意接种细胞浓度和加入检测试剂后孵育时间。细胞浓度过高或孵育时间过长，会导致继发性还原反应，产生无色和荧光消失；

2、 孵育时，须避光