人膀胱癌细胞原代培养及体外药物敏感性实验研究_王剑松
膀胱癌是最常见的恶性肿瘤之一，膀胱癌中约５５％～６０％为浅表性膀胱癌，其中５０％～７０％术后出现复发，约２５％～３０％的复发病例伴有恶性程度增高或浸润能力增强。到目前为止已有３０多种药物用于临床，包括细胞毒药物、免疫调节剂和
维生素等，但仅有少数几种药物较为有效［１］。近年来，人们试图摆脱膀胱肿瘤的“菜谱式”治疗，通过药物敏感实验，建立“量体裁衣式”的治疗方法。而其中四氮唑蓝（ｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ，ＭＴＴ
）比色分析法是目前最常用的体外肿瘤药敏试收稿日期：２００８－０１－０７修订日期：２００８－０２－２６
作者简介：王剑松（１９６３～）男，教授，主要从事泌尿外科临床与基础研究。项目研究：云南省科技攻关项目（２００２ＮＧ－１８）子课题。
?
论著?
人膀胱癌细胞原代培养及体外药物敏感性实验研究
王剑松１，卢永伟２，王
超３，詹辉１，袁
龙４
（１．昆明医学院第二附属医院
泌尿外科，云南省泌尿外科研究室，云南
昆明
６５０１０１；２．福建省肿瘤医院；
３．华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科；４．河南省肿瘤医院
外科）
摘要：目的研究不同个体表浅性膀胱癌组织对抗癌药物及其联合应用的敏感性。方法采用肿瘤细胞原代培养技术和
ＭＴＴ比色法测定了５９例膀胱癌组织对灌注抗癌药物及其联合应用的抑制率和敏感性。结果１４例失败，４５例获得成功，
总体可评价率为７６．３％，不同个体对不同抗癌药物的抑制率存在明显差异；除ＭＴＸ对膀胱癌Ｇ１和Ｇ３级平均抑制率差异有统计学意义外，其它抗癌药物对不同个体膀胱癌细胞的平均抑制率与膀胱癌的病理分级、分期均无关；抗癌药物对初发膀胱癌的敏感率和平均抑制率均高于复发膀胱癌；２种不同作用机制的抗癌药物联合应用对不同个体膀胱癌细胞的敏感率和平均抑制率均高于单一药物，二者敏感率和平均抑制率差异有统计学意义。结论应根据药敏结果，选择相对敏感的抗癌药物，
并将作用于不同机制、细胞不同周期的抗癌药物联合，制订个体化膀胱灌注治疗方案，以提高疗效，最大限度减少副反应，
减少肿瘤复发率。
关键词：膀胱肿瘤；癌细胞体外培养；抗癌药物敏感实验中图分类号：Ｒ７３７．１４
文献标识码：Ａ
文章编号：１００６－４１４１（２００８）０３－０２２６－０４
Ｐｒｉｍａｒｙｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆａｎｔｉｔｕｍｏｒｄｒｕｇｓｉｎｖｉｔｒｏ．ＷＡＮＧＪｉａｎ－ｓｏｎｇ，ＬＵＹｏｎｇ－ｗｅｉ，ＷＡＮＧＣｈａｏ，ｅｔａｌ．（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＵｒｏｌｏｇｙ，ＴｈｅＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＫｕｎｍｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＣｏｌ－
ｌｅｇｅ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ６５０１０１，Ｃｈｉｎａ
）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｍｅｔｈｏｄｓｏｆｐｒｉｍａｒｙｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆａｎｔｉｔｕｍｏｒｄｒｕｇｓｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｌｙａｎｄｔｈｅｉｒｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｉｎｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｒａｔｅｓｏｆａｎｔｉｔｕｍｏｒｄｒｕｇｓａｎｄｔｈｅｉｒｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｉｎ５９ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙｍｅａｎｓｏｆｐｒｉｍａｒｙｔｕｍｏｒｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＭＴＴａｓｓａｙ．ＲｅｓｕｌｔｓＯｆ５９ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｓａｍｐｌｅｓ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｅｓｔｓｗｅｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｐｅｒｆｏｒｍｅｄｉｎ４５ｓａｍｐｌｅｓ，ａｎｄｔｈｅｏｔｈｅｒｓｆａｉｌｅｄ，ｔｈｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｒａｔｅｗａｓ７６．３％．ＤｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｒａｔｅｓｏｆａｎｔｉｔｕｍｏｒｄｒｕｇｓｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｅｘｃｅｐｔＭＴＸｉｎｓｔａｇｅｏｆＧ１ａｎｄＧ３．Ｎｏｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｈａｄｂｅｅｎｆｏｕｎｄｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｓｓａｙａｎｄｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｇｒａｄｅａｎｄｓｔａｇｅ．Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｍｅａｎｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｒａｔｅｓｏｆａｎｔｉｔｕｍｏｒｄｒｕｇｓｉｎｔｈｅｐｒｉｍａｒｙｇｒｏｕｐｗｅｒｅｎｏｔａｂｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｒｅｃｕｒｒｅｎｔｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｗｏｔｈｅｒａｐｙａｇｅｎｔｓ，ｗｈｉｃｈｈａｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｅｌｌ－ｃｙｃｌｅｔａｒｇｅｔｓ，ｓｈｏｗｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｍｏｒｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｈｉｇｈｅｒｍｅａｎｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｒａｔｅｓｔｈａｎｓｉｎｇｌｅｏｎｅ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，ｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｒｕｇｓａｎｄｔｈｅｉｒｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｈｏｕｌｄｂｅｄｅｓｉｇｎｅｄａｎｄｓｅｌｅｃｔｅｄｓｏａｓｔｏｉｎｃｒｅａｓｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｅｆｆｅｃｔ，ｄｅｃｒｅａｓｅｓｉｄｅｅｆｆｅｃｔｓｔｏｔｈｅｌｅａｓｔ，ａｎｄｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｔｕｍｏｒｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅ；Ａｎｔｉｔｕｍｏｒｄｒｕｇｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｓｓａｙ
验方法，它是在１９８３年由Ｍｏｓｍａｎｎ首先应用于鼠淋巴瘤细胞系中研究ＩＬ－２等细胞因子对细胞存活和增殖的影响［２］。本研究以人膀胱癌细胞为研究对象，采用ＭＴＴ法检测膀胱癌细胞体外药物敏感性，并比较不同个体膀胱癌细胞对不同抗癌方案的敏感性，以期为临床合理用药提供依据。
材料与方法
一、实验材料标本取自２００５年４月～２００６年２月接受手术治疗的５９例膀胱癌患者。男性３８例，女性２１例；年龄３５～９２岁，平均６７．７岁；均经手术探查病理确诊为膀胱移行细胞癌。分级：Ｇ
１
２１例，Ｇ２１９例，Ｇ３１９例。分期：Ｔａ期１８例，Ｔ１期４１例。初发４４例，复发１５例。采用的实验药物有：ＣＴＸ－１２（蛇毒膜毒素－１２），ＨＣＰＴ（羟基喜树碱），ＭＴＸ（氨甲蝶呤），ＥＰＩ（表阿霉素）和ＤＤＰ（顺铂）等。抗癌药物试验浓度以生理盐水配成浓度为１ｍｇ／ｍｌ的溶液，－３０℃冻存（不超过３个月），临用前解冻。
二、实验方法采用细胞原代培养方法：肿瘤标本均取自手术切除的新鲜癌组织，进行原代细胞培养，利用肿瘤细胞贴壁比成纤维细胞慢的特点，用短暂培养反复贴壁的方法将二者分开［３］。通过光镜下细胞形态学特点观察及免疫组织化学检验，对培养肿瘤细胞进行生物学鉴定，确定系移行上皮肿瘤。对原代培养细胞进行ＭＴＴ比色法药敏实验操作：参照Ｍｏｓｍａｎｎ［３］的方法略加修改，将上述细胞悬液（５×１０５／ｍｌ）接种于９６孔无菌培养板，每孔１００μｌ（含５×１０４个细胞）。设无药对照孔、空白对照孔和测定孔，每种药物均设３个复
孔，置入３７℃，５％ＣＯ
２
培养箱中培养２４ｈ后，弃去上清液，测定孔内加入不同浓度的各组化疗药物１００μｌ（ＣＴＸ－１２，ＨＣＰＴ，ＭＴＸ，ＥＰＩ，ＤＤＰ，ＣＴＸ１２＋ＨＣＰＴ，ＣＴＸ１２＋ＭＴＸ，ＣＴＸ１２＋ＥＰＩ及ＣＴＸ１２＋ＤＤＰ），空白对照孔加入含１０％小牛血清等量的ＲＰＭＩ－１６４０完
全培养液，３７℃，５％ＣＯ
２
，重新放入培养箱中培养２ｈ后取出，去上清液，每孔加入不含血清的ＲＰＭＩ１６４０液配成的ＭＴＴ液１００μｌ，５％ＣＯ２条件下继续培养４ｈ，去上清，每孔加入ＤＭＳＯ１００μｌ，轻度震荡溶解甲攒（ｆｏｒｍａｚａｎ）结晶１０～１５ｍｉｎ，使紫蓝色甲臜结晶完全溶解，即在酶标仪上测定波长５７０ｎｍ为检测波长，测各孔的ＯＤ值。
根据下列公式计算抑制率：１－（药物组ＯＤ值－空白组ＯＤ值）／（无药对照组ＯＤ值－空白组ＯＤ值）×１００％；肿瘤细胞的存活率＝１－肿瘤细胞的抑制率。
采用１９７８年全国抗癌药物会议制定的抗肿瘤药物通用指标：对膀胱癌细胞的抑制率（ＩＲ）＞７０％为高度敏感，５０％～７０％为中度敏感，３０％～４９％为低度敏感，＜３０％为不敏感或耐药，并选择抑制率最高的化疗药物供临床治疗参考［４］。
统计学处理：选用ＳＰＳＳ１０．０统计软件包进行数据处理，数值以均数±标准差表示，组间比较用配对ｔ检验，其余用单因素方差分析检验，各组结果以α＝０．０５为检验水准。
结果
一、形态学观察１．相差显微镜观察：筛选原代培养细胞，４８～７２ｈ后贴壁生长的细胞数量明显增多，并可见有较长突起的成纤维细胞，当培养至第５～７ｄ时，细胞已大部分融合，长满瓶底。２．组织学观察（Ｇｉｅｍｓａ染色）：肿瘤细胞贴壁生长，呈上皮样，细胞形态和大小有差异。多呈圆形及多角形，细胞核大。核仁清晰，多为２～３个。胞浆内可见颗粒和空泡，细胞失去接触抑制并易脱落。可见有较长突起的成纤维细胞，经过纯化后，有较长突起的成纤维细胞较少或不见。
二、生物学特征检测细胞角蛋白２０（Ｃｙｔｏｋ－ｅｒａｔｉｎ２０，ＣＫ２０）特异地分布于上皮细胞及其来源的肿瘤，而正常膀胱组织无表达［５］。免疫组化检查结果：免疫组化染色肿瘤细胞染色阳性，胞浆呈黄色，胞核呈蓝色。非肿瘤细胞染色阴性。
三、药物敏感性检测１．用ＭＴＴ法对５９例膀胱癌标本进行体外药敏试验，１４例失败，４５例获得成功，总体可评价率为７６．３％。２．抗癌药物对不同个体膀胱癌细胞抑制率的比较，通过对４５例膀胱癌细胞的抗癌药物敏感性实验，发现抗癌药物对不同个体膀胱肿瘤细胞的抑制率差异很大，ＭＴ１２的抑制率为７．４％～８５．７％，ＨＣＰＴ的抑制率为３．７％～８５．７％，ＭＴＸ的抑制率为２．０％～７２．１％，ＥＰＩ的抑制率为２．０％～９４．５％，ＣＤＤＰ的抑制率为０～８９．２％。３．膀胱癌病理分级、分期与抗癌药物抑制率的关系：分别对ＣＴＸ－１２，ＨＣＰＴ，ＭＴＸ，ＥＰＩ，ＤＤＰ，ＣＴＸ１２＋ＨＣＰＴ，ＣＴＸ１２＋ＭＴＸ，ＣＴＸ１２＋ＥＰＩ及ＣＴＸ１２＋ＤＤＰ各单药及两药联合的检测发现在４５例膀胱癌中，除ＭＴＸ对膀胱癌Ｇ１和Ｇ３级平均抑制率差异有统计学意义外（Ｐ＜０．０５），其余抗癌药物对不同个体膀胱癌细胞的平均抑制率与膀胱癌的病理分级、分期均无关（Ｐ均＞０．０５）。４．抗癌药
物对膀胱癌的初发与复发平均抑制率的比较：在３５例初发膀胱癌和１０例复发膀胱癌中，抗癌药物对其敏感率和平均抑制率均不同，抗癌药物对初发膀胱癌的敏感率和平均抑制率均高于复发膀胱癌，且二者平均抑制率差异有统计学意义（Ｐ均＜０．０５）。５．抗癌药物及其联合对膀胱癌平均抑制率的比较：在４５例膀胱癌中，不同作用机制的抗癌药物联合应用对不同个体膀胱癌细胞敏感率和平均抑制率均高于单一药物，二者敏感率和平均抑制率差异有统计学意义（Ｐ均＜０．０５）。
讨论
表浅性膀胱癌术后具有易复发性，膀胱腔内灌注抗癌药物在预防表浅性膀胱癌的复发治疗中占有重要地位。随机研究表明，膀胱内灌注化疗药物可使浅表性膀胱癌近期复发率下降约５％～２０％，远期复发率下降约６％左右［６］。在如何提高膀胱灌注抗癌药物的疗效，更有效地应用已知抗癌药，预测不同个体膀胱肿瘤对药物的敏感性，指导临床治疗，以提高疗效，已引起广泛关注。本实验研究了蛇毒膜毒素－１２、羟基喜树碱、氨甲蝶呤、表阿霉素、顺铂及其联合应用对４５例不同个体膀胱肿瘤细胞的毒性作用，发现抗癌药物对不同个体膀胱肿瘤细胞的抑制率差异很大。ＣＴＸ１２的抑制率为７．４％～８５．７％，ＨＣＰＴ的抑制率为３．７％～８５．７％，ＭＴＸ的抑制率为２．０％～７２．１％，ＥＰＩ的抑制率为２．０％～９４．５％，ＣＤＤＰ的抑制率为０～８９．２％。平均抑制率由高到低依次为ＣＤＤＰ＞ＣＴＸ１２＞ＥＰＩ＞ＨＣＰＴ＞ＭＴＸ。敏感率由高到低依次为ＣＤＤＰ＞ＣＴＸ１２＞ＥＰＩ＞ＨＣＰＴ＞ＭＴＸ。本研究以抑制率大于或等于３０％为敏感药物。本实验表明抗癌药物对不同个体膀胱癌细胞的平均抑制率与膀胱癌的病理分级、分期均无关，表明仅根据这些影响预后的指标来判断肿瘤对抗癌药物的敏感性是不妥的，与一些学者观点一致［７～９］，而与另一些学者观点相反［１０］。但ＭＴＸ对膀胱癌Ｇ１和Ｇ３级平均抑制率差异有统计学意义，这可能与样本量较小有关（Ｇ１为１８例，Ｇ３为１４例）。
膀胱癌具有高复发特性，复发膀胱癌的治疗更加困难。本研究显示：复发膀胱癌的药物敏感性和平均抑制率均较初发者低，其中ＣＴＸ１２的差异显著，对复发膀胱癌的药物敏感性和平均抑制率分别为２０．０％和２４．８％，对初发膀胱癌的药物敏感性和平均抑制率分别为７０．０％和４５．０％。本研究将作用机制不同的抗癌药物ＣＴＸ１２与ＣＤＤＰ，ＥＰＩ，ＨＣＰＴ和ＭＴＸ联合使用观察其对不同个体膀胱癌细胞的抗癌效果，结果表明抗癌药物联合应用对不同个体膀胱癌细胞的敏感率和平均抑制率均高于单一药物。如ＣＴＸ１２对膀胱癌细胞的平均抑制率为４２．０％，敏感率为６６．７％，ＨＣＰＴ对膀胱癌细胞的平均抑制率为３３．５％，敏感率为５５．６％，ＣＴＸ１２与ＨＣＰＴ联合应用对膀胱癌细胞的平均抑制率为６２．６％，敏感率为９３．３％，均高于单独应用ＣＴＸ１２或ＨＣＰＴ。蛇毒膜毒素在体外实验方面、体内实验方面和临床研究方面均显示出较强的抗肿瘤作用［１１］。其抗肿瘤机制主要是与细胞膜磷脂成分相互作用引起细胞膜渗漏而导致肿瘤细胞溶解［１２～１４］。目前抗癌药物联合应用的方案众多，针对不同个体行药敏检测后，选用敏感的作用于不同机制、细胞不同周期的抗癌药物联合进行治疗，效果会更好。本研究为选择有效的抗癌药物联合治疗方案提供一种新的思路。
本研究将肿瘤细胞原代培养技术和ＭＴＴ比色法结合起来对４５例不同个体膀胱癌进行抗癌药物敏感性检测，其优点是肿瘤细胞刚刚离体，生物学性状尚未发生很大变化，能较真实地反映整个肿瘤细胞群体的特性及不同供体的个体差异，在一定程度上能代表体内状态［７～８］。膀胱灌注化疗属于局部化疗，与全身化疗相比较，体内代谢过程对此影响小，肿瘤细胞原代培养＋体外药敏检测的方法能比较真实地模拟体内效用过程，并孵育相应的膀胱灌注保留时间，观察肿瘤细胞的杀伤情况，试图通过尽可能模拟体内过程，降低由于体内外环境的差异造成的药敏实验对临床用药疗效预测的误差。
本研究膀胱癌原代细胞培养成功率为６０．０％，与文献报道４０％～８０％的成功率基本相符［１５～１６］。ＭＴＴ法缺点之一是不能区分癌细胞与非癌细胞，这些非癌细胞均含有可还原ＭＴＴ的脱氢酶，故常常影响实验数据，因此应尽可能除去原代肿瘤细胞悬液中其它非癌细胞的干扰。本研究经多次剔除其他非癌细胞后基本可保证肿瘤细胞纯度９０％以上。本实验无１例因成纤维细胞和血细胞过度生长而使试验失败，从而提高了试验的成功率和准确性。
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?论著?
急性白血病Ｐ１６基因ｍＲＮＡ表达水平的研究
程丽芳，杨
玲，尹列芬，尚学琴，瞿晓媛
（昆明医学院第二附属医院
血液科，云南
昆明
６５０１０１
）摘要：目的研究Ｐ１６基因ｍＲＮＡ的表达水平与急性白血病发生发展及预后的相关性。方法
采用荧光实时定量逆转
录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测５０例急性白血病患者Ｐ１６基因ｍＲＮＡ表达水平。结果
急性白血病患者Ｐ１６基因
ｍＲＮＡ表达水平明显低于正常人ｍＲＮＡ表达水平（Ｐ＜０．００１
）。其中急性淋巴细胞白血病ｍＲＮＡ表达水平又低于急性髓细胞性白血病（Ｐ＜０．０５）。初诊组、难治复发组、初诊组、完全缓解组与正常对照组ｍＲＮＡ表达水平依次升高（Ｐ＜０．０５）。初诊组中完全缓解组ｍＲＮＡ表达水平高于未完全缓解组（Ｐ＜０．００１）。结论Ｐ１６基因表达缺陷在急性白血病的发生、发展中起
重要作用，且与白血病患者的治疗和预后有一定关系。
关键词：
Ｐ１６基因ｍＲＮＡ；急性白血病；荧光实时定量ＲＴ－ＰＣＲ法
中图分类号：Ｒ７３３．７
文献标识码：Ａ
文章编号：１００６－４１４１（２００８）０３－０２２９－０３
ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰ１６ｇｅｎｅ＇ｓｍＲＮＡｉｎａｃｕｔｅｌｅｕｋｅｍｉａ．ＣＨＥＮＧＬｉ－ｆａｎｇ，ＹＡＮＧＬｉｎｇ，ＹＩＮＬｉｅ－ｆｅｎｇ，ｅｔａｌ．
（ＨｅｍａｔｏｌｏｇｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，ＫｕｎｍｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ６５０１０１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆ
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收稿日期：２００７－１２－０３修订日期：２００８－０１－０７作者简介：程丽芳（１９８０～）女，昆明医学院２００８届硕士研究生。
通讯作者：杨玲，女，昆明医学院第二附属医院，血液科，主任医师，硕士生导师。
第四篇 儿科人群药代动力学研究技术指导原则
附件 儿科人群药代动力学研究技术指导原则 一、概述 临床药代动力学（pharmacokinetic，PK）研究旨在阐明药物在人体内的吸收（Absorption，A）、分布（Distribution，D）、代谢（Metabolism，M）和排泄（Excretion，E）的动态变化规律。药效动力学（pharmacodynamics，PD）研究药物对机体的作用、作用原理及作用规律。人体对药物的处置过程（ADME）和药物在体内作用规律的共同研究，有助于全面认识人体与药物间的相互作用，为临床制定合理的用药方案提供依据。本指导原则重点探讨药代动力学研究的相关问题，也提及部分药效动力学的相关内容。 儿科人群药代动力学研究无论是研究设计还是方法学，都遵循与成年人群的药代动力学研究一致的科学原则，但由于儿科人群在不同的发育阶段各有其特殊性，与成人的药代动力学研究又存在诸多不同之处，需要从伦理和科学性方面给予更多关注。因此，本指导原则在系统地阐述儿科人群药代动力学特点的基础上，以研究设计和方法学为重点，就如何安全、有效并且符合医学伦理地在儿科人群中进行药代动力学研究的关键技术要点进行分析和说明。其重点阐明儿科人群研究的特殊性，为计划在儿科人群中开展药代动力学研究的注册申请人和科研机构提供指导性建议，鼓励和推动针对
我国儿科人群的药物研发。 本指导原则主要适用于小分子化学药物，其他药物如生物制品可以参照其中的适用内容。本原则鼓励注册申请人针对儿科人群药代动力学研究中的技术问题与药品注册监管部门进行沟通交流。 二、儿科人群药代动力学特点 （一）总体考虑 在儿科人群开展药代动力学研究的目的在于通过给予不同年龄阶段儿科人群相应剂量的药物后，了解其体内过程，重点明确全身暴露的水平，从而尽可能地依据现有的研究数据，推导出拟用于该目标人群的用药剂量。 通常情况下，在开展儿科人群药代动力学研究之前，会有一定的成人药代动力学研究数据。因此，在设计儿科人群的药代动力学研究方案时，应充分借鉴成人研究数据，保证在儿科人群开展的研究设计的科学性和合理性。 当药物在儿科人群中拟用于已在成人经过充分研究并获得批准的适应症，其疾病进程在儿科患者与成人相似，且药物全身暴露水平与预期治疗结果具有较好的相关性时，可通过儿科人群药代动力学与成人数据的相似性来外推在儿科人群的预期有效性。因此，在儿科人群进行的PK和安全性研究可为推荐儿科人群拟用剂量提供依据。通过以上外推难以确认儿科人群体内的药物浓度-效应关系与成人的相似性时，尽管儿科患者疾病过程与成人基本一致，仍应该进行儿科患者体内的药代动力学/药效动力学（PK/PD）的相关研究。
药物毒代动力学研究指导原则
附件6 药物毒代动力学研究技术指导原则 一、概述 毒代动力学研究目的是获知受试物在毒性试验中不同剂量水平下的全身暴露程度和持续时间，预测受试物在人体暴露时的潜在风险（注释1）。毒代动力学是非临床毒性试验的重要研究内容之一，其研究重点是解释毒性试验结果和预测人体安全性，而不是简单描述受试物的基本动力学参数特征。 毒代动力学研究在安全性评价中的主要价值体现在： （一）阐述毒性试验中受试物和/或其代谢物的全身暴露及其与毒性反应的剂量和时间关系；评价受试物和/或其代谢物在不同动物种属、性别、年龄、机体状态（如妊娠状态）的毒性反应；评价非临床毒性研究的动物种属选择和用药方案的合理性。 （二）提高动物毒性试验结果对临床安全性评价的预测价值。依据暴露量来评价受试物蓄积引起的靶部位毒性（如肝脏或肾脏毒性），有助于为后续安全性评价提供量化的安全性信息。 （三）综合药效及其暴露量和毒性及其暴露信息来指导人体试验设计，如起始剂量、安全范围评价等，并根据暴露程度来指导临床安全监测。 本指导原则适用于中药、天然药物和化学药物。生物制品的毒代动力学研究可参考本指导原则（注释2）。
二、基本原则 毒代动力学研究需执行《药物非临床研究质量管理规范》（GLP）（注释3）。 毒代动力学试验通常伴随毒性试验进行，常被称为伴随毒代动力学试验。开展研究时可在所有动物或有代表性的亚组或卫星组动物中进行，以获得相应的毒代动力学数据（注释4）。 三、基本内容 （一）暴露量评估 毒代动力学试验的基本目的是评估受试物和/或其代谢物的全身暴露量，常通过适当数量的动物和剂量组来开展研究。伴随毒代动力学研究所用动物数量应保证能获得足够的毒代动力学数据。由于毒性试验中通常采用两种性别动物，暴露测定也应包括两种性别的动物。选择单性别动物时应说明理由（注释5）。 暴露评估应考虑以下因素（注释6）：血浆蛋白质结合、组织摄取、受体性质和代谢特征的种属差异、代谢物的药理活性、免疫原性和毒理学作用。在血浆药物浓度相对较低时，特殊的组织或器官也可能会有较高水平的受试物和/或其代谢物。对于血浆蛋白结合率高的化合物，用游离（未结合）浓度来表示暴露更为合适。 暴露评估中需关注血浆或体液中代谢物浓度的情况有：1）受试物为“前体化合物”且其转化生成的代谢物为主要活性成分；2）受试物可被代谢为一种或多种具有药理或毒理活性代谢物，且代谢物可导致明显的组
化学药物临床药代动力学研究技术指导原则
【H】G C L 1-2 指导原则编号： 化学药物临床药代动力学研究 技术指导原则 二○○五年三月
目 录 一、概述 (1) 二、药代动力学研究生物样品分析方法的建立和确证 (2) （一）常用分析方法 (2) （二）方法学确证 (2) 1、特异性 (3) 2、标准曲线和定量范围 (3) 3、定量下限 (4) 4、精密度与准确度 (4) 5、样品稳定性 (5) 6、提取回收率 (5) 7、微生物学和免疫学分析 (5) 8、方法学质控 (6) （三）分析数据的记录与保存 (6) 1、方法建立与确认的数据 (7) 2、样品分析的数据 (7) 3、其他相关信息 (7) 三、药代动力学研究的具体内容 (7) （一）健康志愿者药代动力学研究 (8) 1、单次给药药代动力学研究 (8) 2、多次给药药代动力学研究 (11) 3、进食对口服药物制剂药代动力学影响的研究 (13) 4、药物代谢产物的药代动力学研究 (14) 5、药物-药物的药代动力学相互作用研究 (14) （二）目标适应症患者的药代动力学研究 (15)
（三）特殊人群药代动力学研究 (15) 1、肝功能损害患者的药代动力学研究 (15) 2、肾功能损害患者的药代动力学研究 (16) 3、老年人药代动力学研究 (17) 4、儿科人群药代动力学研究 (17) 四、结语 (18) 五、参考文献 (19) 六、著者 (20)
化学药物临床药代动力学研究技术指导原则 一、概述 新药的临床药代动力学研究旨在阐明药物在人体内的吸收、分布、代谢和排泄的动态变化规律。对药物上述处置过程的研究，是全面认识人体与药物间相互作用不可或缺的重要组成部分，也是临床制定合理用药方案的依据。 在药物临床试验阶段，新药的临床药代动力学研究主要涉及如下内容： 1、健康志愿者药代动力学研究 包括单次给药的药代动力学研究、多次给药的药代动力学研究、进食对口服药物药代动力学影响的研究、药物代谢产物的药代动力学研究以及药物－药物的药代动力学相互作用研究。 2、目标适应症患者的药代动力学研究 3、特殊人群药代动力学研究 包括肝功能损害患者的药代动力学研究、肾功能损害患者的药代动力学研究、老年患者的药代动力学研究和儿童患者的药代动力学研究。 上述研究内容反映了新药临床药代动力学研究的基本要求。在新药研发实践中，可结合新药临床试验分期分阶段逐步实施，以期阐明临床实践所关注的该药药代动力学的基本特征，为临床合理用药奠定基础。 鉴于不同类型药物的临床药代动力学特征各不相同，故应根据所研究品种的实际情况进行综合分析，确定不同阶段所拟研究的具体内容，合理设计试验方案，采用科学可行的试验技术，实施相关研究，并作出综合性
药代动力学(王广基)word
前言 药物代谢动力学是定量研究药物在生物体吸收、分布、排泄和代谢规律的一门学科。随着细胞生物学和分子生物学的发展，在药物体代谢物及代谢机理研究已经有了长足的发展。通过药物在体代谢产物和代谢机理研究，可以发现生物活性更高、更安全的新药。近年来，国外在创新研制过程中，药物代谢动力学研究在评价新药中与药效学、毒理学研究处于同等重要的地位。药物进入体后，经过吸收入血液，并随血流透过生物膜进入靶组织与受体结合，从而产生药理作用，作用结束后，还须从体消除。通过在实验的基础上，建立数学模型，求算相应的药物代谢动力学参数后，对可以药物在体过程进行预测。因此新药和新制剂均需要进行动物和人体试验，了解其药物代谢动力学过程。药物代谢动力学已成为临床医学的重要组成部分。中国药科大学药物代谢动力学研究中心为本科生、研究生开设《药物代谢动力学》课程教学已有二十多年历史，本书是在原《药物动力学教学讲义》基础，经多年修正、拓展而成的。全书十三章，三十余万字，重点阐述围绕药物代谢动力学理论及其在新药研究中的作用，与其它教材相比，创新之处在于重点阐述现代药物代谢动力学理论及其经典药物代谢动力学在新药及其新制剂研究中的应用以及目前迅 速发展的药物代谢动力学体外研究模型等新容。 本书编著者均是长期在药物代谢动力学教学和研究第一线的教师。因此，本书的实践性与理论性较强，可作为高年级本科生、硕士生教材使用，也可作为从事药物代谢动力学研究及相关科研人员的参考书。编者 药物代谢动力学 主编：王广基 副主编：晓东，柳晓泉 编者（姓氏笔画为序） 王广基、晓东、西敬、劲、柳晓泉
容提要： 药物代谢动力学是定量研究药物在机体吸收、分布、排泄和代谢规律的一门学科。在创新研制过程中，药物代谢动力学研究与药效学、毒理学研究处于同等重要的地位，已成为药物临床前研究和临床研究重要组成部分。本书重点阐述围绕药物代谢动力学理论及其在新药研究中的作用，与其它教材相比，创新之处在于重点阐述现代药物代谢动力学理论及其经典药物代谢动力学在新药及其新制剂研究中的应用以及目前迅速发展的药物代谢动力学体外研究模型等新容。共十三章，分别为概述、药物体转运、药物代谢、经典的房室模型理论、非线性药物代谢动力学、统计矩理论及其应用、生物利用度及其生物等效性评价、临床药物代谢动力学、药物代谢动力学与药效动力学结合模型、生理药物代谢动力学模型及其应用实践、手性药物代谢动力学、新药临床前药物代谢动力学研究和计算机在药物代谢动力学研究中的应用。本书的实践性与理论性较强，可作为高年级本科生、研究生教材使用，也可作为从事药物代谢动力学研究及相关科研人员 的参考书. 1 目录 第一章药物代谢动力学概述 一、什么是药物代谢和动力学 二、药物代谢动力学研究与医学其它学科的关系 第二章药物体转运 第一节概述 第二节药物跨膜转运及其影响因素 一、生物膜 二、药物的跨膜转运方式 第三节药物的吸收 一、药物在胃肠道中吸收 二、药物在其它部位吸收 第四节药物的分布 一、药物的分布及其影响因素 二、血浆蛋白结合率及常用的测定方法
药理毒代动力学及其研究方法
全国药物安全性评价专题负责人第二期高级培训班
中国毒理学会药物毒理与安全性评价专业委员会 中国药学会药物安全性评价专业委员会 中国药理学会药物毒理专业委员会
毒代动力学及 其研究方法
李川
（021-********；chli@https://www.sodocs.net/doc/3c5462922.html,） 中国科学院上海药物研究所 上海药物代谢研究中心
2009年11月·成都
演讲内容
一 新药安评与体内药物暴露 二 影响体内药物暴露的因素 三 毒代动力学的概念 四 毒代动力学的研究方法与实施 五 小结
一 新药安评与体内药物暴露
过去20多年在新药研发领域发生的变化
45% 30%
ADME/PK
15%
0%
Financial
CaImndpirdoavteed
Formulation
Commercial Human AEs
ToAxnicimityal
EfCficliancicyal
Other
Br. J. Clin. Pharmacol. 25: 387 (1988)
Nature Rev./Drug discovery 3: 711 (2004)
化合物资源
新药上市前必须对其 安全性进行仔细评估
药物发现
1 药物先导化合物的发现 2 药物先导化合物的结构优化
药药物物候候选选化化合合物物
非临床安评研究
由于开展临床试验的伦理限制，必须先在
新药开发
1 临床前研究 2 临床试验
动物上进行全面的新药安评，以揭示新药 对动物器官组织的毒副作用，研究其剂量
药药安
质
新
依赖性、体内暴露相关性和可恢复性等， 帮助确定临床试验的初始安全剂量和应观
效代评
量
药
察的潜在毒副作用。
临床试验中的新药安全性考察
新药安全有效评价体系
安全性始终是临床试验关注的重点，影响临床试
验的推进。先从低剂量、小范围人群开展临床试
验，在安全性得以保证后，再增加给药剂量、扩
大人群已验证药物的有效性。
为什么在药物安评中要考虑体内药物暴露？
（确定药物的两个要素：功能和物质）
剂量-暴露
体内药物暴露
（化学形式/浓度）
机体对药物的作用
反映药物“物质” 的一种形式 相对准确
浓度-效应
给药剂量
反映药物“物质” 的一种形式
好用，但不准确
药物对机体的作用
毒副作用
1
中药药代动力学研究进展
中药药代动力学研究进展 摘要：近年来，为了全面阐述中药吸收、分布、代谢、排泄的体内过程，推动中药现代化，研究者们在生物效应法和药物浓度法等经典药代动力学研究方法的基础上提出了一些新方法、新思路，大大推进了中药药代动力学研究的发展。在查阅通过近年来中药药代动力学相关研究的文献，并对其中新方法新思路进行总结，综述了中药药代动力学近年来的研究现况和前沿进展。 关键词：药代动力学，药代标记物，指征药代动力学，方法学 前言:药代动力学是应用动力学原理与数学处理方法，定量地描述药物通过各种途径 （如静脉注射液、静脉滴注、口服给药等）进入体内的吸收、分布、代谢、排泄过程的“量时”变化或“血药浓度经时”变化动态规律的一门科学，已经在生物药剂学、临床药剂学、药物治疗学、分析化学、药理学等学科领域中得到了广泛应用。在中药学研究中，药代动力学被广泛的应用于揭示中药作用机制及设计优化的研究，并衍生出了中药药代动力学这门新兴学科。中药药代动力学基于动力学原理研究中草药活性成分、组分、中药单方和复方体内吸收、分布、代谢和排泄（ADME）的动态变化规律及其体内时量－时效关系，并用数学函数对其加以定量描述。 1.中药药代动力学研究方法 1.1生物效应法 药效的变化取决于体内药量的变化，可以通过测定药效的经时过程来反映体内药量动态变化。生物效应法从整体观点出发研究中药的药代动力学特征，更符合中医药理论。该法包括药理效应法、药物累计法，微生物指标法。 1.1.1药理效应法 药理效应法是一种以药理效应为指标研究药代动力学的方法。该法己越来越广泛地用于中药及其复方，特别是有效成分不明的中草药及其复方的药代动力学研究。肇丽梅[1]采用小鼠热板致痛模型，以镇痛效应为指标，测定黄芩苷及清热合剂的药物动力学参数，结果黄芩苷及清热合剂口服给药后体存药量的表观动力学过程符合一室开放模型，中药复方清热合剂的达峰时间明显慢于单方黄芩苷。李成洪[2]等以血清一氧化氮变化为药理效应指标，研究了中药复方制剂禽病康在免疫抑制雏鸡体内的药代动力学特征。以时间标本存量进行数学模型拟合，符合一级吸收二室模型，禽病康药代动力学结果表明其口服后吸收较快，分布也快，而消除较慢，体内存留时间长，药效维持时间长。宋丽
高中生物 动物细胞培养和核移植技术教案 新人教版选修3
动物细胞培养和核移植技术 备课日期2014年 3 月 4 日课型新授课 教学目标 知识与技能 1\简述动物细胞养的含义。 2\说出动物细胞养的所需条件。 3\简述动物细胞培养的基本程序。 4\简述动物细胞核移植的概念。 过程与方法 情感态度 与价值观 1\通过学习基因工程的概念，使学生认识到科学研究需要的严谨，激 发为祖国而奋斗的精神。 2\通过学习基因操作的工具，使学生树立结构与功能相统一的辩证唯 物主义观念。 教学重点 1\动物细胞培养的过程及条件； 2\用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景 教学难点用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程 教学方法以探究法、谈话法、材料教学法相结合。 教学用具多媒体课件 课时安排1课时 教学内容设计与反思 板书设计:
教学内容设计与反思一、复习导入: 教师活动：投影幻灯片，引导学生思考、分析讨论。 （1）植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养 植物体细胞杂交 （2）植物体细胞杂交的结果是产生了？ （3）植物体细胞杂交过程中涉及的原理是？ 二、讲授新课: （一）动物细胞工程 动物细胞工程常用的技术手段 动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体、动物细胞培养 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 （二）动物细胞培养 1.发展历史: 单20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形 成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问 题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的 脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神 经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验 不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后， 在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物 细胞培养。 2、动物细胞培养的应用和概念： 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关 的组织,将它分散成个细胞,然后,放在适宜的 培养基中,让这些细胞生长和增殖. 3、动物细胞培养过程： 引导学生阅读课文44--46面相关内容。
(完整版)药物非临床药代动力学研究技术指导原则
附件5 药物非临床药代动力学研究技术指导原则 一、概述 非临床药代动力学研究是通过体外和动物体内的研究方法，揭示药物在体内的动态变化规律，获得药物的基本药代动力学参数，阐明药物的吸收、分布、代谢和排泄（Absorption, Distribution, Metabolism, Excretion, 简称ADME）的过程和特征。 非临床药代动力学研究在新药研究开发的评价过程中起着重要 作用。在药物制剂学研究中，非临床药代动力学研究结果是评价药物制剂特性和质量的重要依据。在药效学和毒理学评价中，药代动力学特征可进一步深入阐明药物作用机制，同时也是药效和毒理研究动物选择的依据之一；药物或活性代谢产物浓度数据及其相关药代动力学参数是产生、决定或阐明药效或毒性大小的基础，可提供药物对靶器官效应（药效或毒性）的依据。在临床试验中，非临床药代动力学研究结果能为设计和优化临床试验给药方案提供有关参考信息。 本指导原则是供中药、天然药物和化学药物新药的非临床药代动力学研究的参考。研究者可根据不同药物的特点，参考本指导原则，科学合理地进行试验设计，并对试验结果进行综合评价。 本指导原则的主要内容包括进行药物非临床药代动力学研究的 基本原则、试验设计的总体要求、生物样品的测定方法、研究项目（血
药浓度-时间曲线、吸收、分布、排泄、血浆蛋白结合、生物转化、对药物代谢酶活性及转运体的影响）、数据处理与分析、结果与评价等，并对研究中其他一些需要关注的问题进行了分析。附录中描述了生物样品分析和放射性同位素标记技术的相关方法和要求，供研究者参考。 二、基本原则 进行非临床药代动力学研究，要遵循以下基本原则： （一）试验目的明确； （二）试验设计合理； （三）分析方法可靠； （四）所得参数全面，满足评价要求； （五）对试验结果进行综合分析与评价； （六）具体问题具体分析。 三、试验设计 （一）总体要求 1. 受试物 中药、天然药物：受试物应采用能充分代表临床试验拟用样品和/或上市样品质量和安全性的样品。应采用工艺路线及关键工艺参数确定后的工艺制备，一般应为中试或中试以上规模的样品，否则应有充分的理由。应注明受试物的名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件、有效期及配制方法等，并提供质量检验报告。由于中药的特殊性，建议现用现配，否则应提供数据支持配制后受试物的质量稳定性及均匀性。当给药时间较
生物技术药物的药代动力学研究进展
生物技术药物的药代动力学研究进展 摘要：本文介绍了生物技术药物药代动力学的特点和基本机制，概述了生物技术药物药代动力学的研究方法。 关键词：生物技术药物药代动力学方法学 1．简介 近年来，生物技术药物飞速发展，为了正确评价各种生物制品在人体内的疗效及安全性,必须研究生物因子在动物体内和人体内的吸收、分布、代谢和排泄的规律。而与传统的药物相比生物技术药物具有种族特异性、免疫原性和非预期的多向活性等特点,使得其在体内的药代动力学的研究受到诸多因素的限制。蛋白多肽类药物因其生理活性强、疗效高,而日益受到人们的重视。对于蛋白质类药物来说,最重要的一个特性是,这类药物蛋白质与内源性的蛋白质结构相似,由共同的氨基酸组成,微量的需要被测定的生物因子及蛋白质存在于大量的内源性蛋白质中。蛋白多肽类药物的药动学有其特征，吸收方面来看，一般而言，小分子肽的吸收是由被动扩散或载体转运完成的，脂溶性多肽可通过膜脂扩散,高度亲脂性的药物则能通过淋巴系统被吸收;水溶性分子则可通过水合孔和/或细胞间隙扩散,通过内吞或胞饮过程摄取入细胞，还有一些细胞转运肽(cell penetrating peptide)可通过非耗能途径穿过真核细胞的质膜,这些多肽已被成功地用于在细胞内转运比自身的相对分子质量大许多倍的大分子物质。由于大多数蛋白多肽类药物具有相对分子质量大和水溶性的特点,若无主动的转运或消除机制,它们大多保留在细胞间隙。蛋白多肽类药物的主要代谢途径是体内广泛存在的蛋白多肽酶使其失活。不同的给药途径、给药方案、体内蛋白结合、种属特异性、内源性物质等对蛋白多肽类药物的体内药物动力学有至关重要的影响。 因此, 设计合适的实验方案、选择正确的药代动力学研究方法和可靠的测定方法至关重要。 2．药代动力学的研究方法 2．1 同位素示踪法 同位素示踪法是通过目标蛋白质多肽上标记同位素,从而鉴别目标蛋白质和内源性多肽的方法。所使用的同位素有Ｈ3、Ｃ14、Ｓ32、Ｉ125等,Ｉ125其因比放射性高、半衰期适宜、标记制备简单而最为常用。标记方法有两种,一是内标法,即把含有同位素的氨基酸加入生长细胞或合成体系,该法对生物活性的影响可能较小,但由于制备复杂而限制了其广泛应用;二是外标法,常用的化学方法如氯胺Ｔ或Lodogen法将Ｉ125连接于大分子上,其标记的样品比放射性高，制备容易半衰期短，成为现在最常用的生物技术药物标记物。姚文兵等运用同位素示踪法Ｉ125标记来研究聚已二醇修饰干扰素а2ｂ的药代动力学,赵宁等用碘标法研究重组人肿瘤坏死因子在小鼠体内药代动力学和组织分布,都证明了同位素示踪法的灵敏度高,省时省力的特点,特别是对研究基因工程产品在动物体内的组织分布具有与其它方法相比有不可比的优越性。关于标记位点的选择,理论上任何部位均可被标记,但需考虑是否存在标记氨基酸被机体再利用合成新的蛋白质而影响检测结果的问题。当然,如果生物技术药物含有非天然氨基酸(如Ｄ氨基酸),标记位点的选择就不必再担心这样的问题了。
化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则
指导原则编号： 【H】G P T 5-1 化学药物非临床药代动力学研究 技术指导原则 二○○五年三月
目 录 一、概述 (1) 二、基本原则 (2) 三、试验设计 (2) （一）总体要求 (2) （二）生物样本的药物测定方法 (3) （三）研究项目 (4) 四、数据处理与分析 (9) 五、结果与评价 (9) 六、常见问题与处理思路 (10) 七、参考文献 (13) 八、附录（生物样品的分析方法） (15) 九、著者 (21)
化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则 一、概述 非临床药代动力学研究是通过动物体内、外和人体外的研究方法，揭示药物在体内的动态变化规律，获得药物的基本药代动力学参数，阐明药物的吸收、分布、代谢和排泄的过程和特点。 非临床药代动力学研究在新药研究开发的评价过程中起着重要作用。在药效学和毒理学评价中，药物或活性代谢物浓度数据及其相关药代动力学参数是产生、决定或阐明药效或毒性大小的基础，可提供药物对靶器官效应（药效或毒性）的依据；在药物制剂学研究中，非临床药代动力学研究结果是评价药物制剂特性和质量的重要依据；在临床研究中，非临床药代动力学研究结果能为设计和优化临床研究给药方案提供有关参考信息。 本指导原则是供药物研究开发机构进行化学药品新药的非临床药代动力学研究的参考，而不是新药申报的条框要求。研究者可根据不同药物的特点，参考本指导原则，科学合理地进行试验设计，并对试验结果进行综合评价。 本指导原则的主要内容包括进行非临床药代动力学研究的基本原则、试验设计的总体要求、生物样品的药物分析方法、研究项目（血药浓度-时间曲线、吸收、分布、排泄、血浆蛋白结合、生物转化、对药物代谢酶活性的影响）、数据处理与分析、结果与评价等，并对研究中的一些常见问题及处理思路进行了分析。
2015 动物细胞培养技术实验报告
一、实验目的 1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。 2、学习并掌握细胞传代培养的方法。 3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。 二、实验原理 细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。 动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。 动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。 原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。 传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。 高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。 三、细胞培养相关设施及材料 1、细胞培养室 无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。 孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。 制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。 储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。 清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。 2、细胞培养常用基本设施： 荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。 细胞培养常用器皿：培养瓶、培养板、培养皿，玻璃瓶、吸管，离心管、冻存管，注射器，烧杯、量筒等。 3、细胞培养用品的清洗、消毒 新玻璃器皿要用5%稀盐酸浸泡，以中和其表面碱性物质：刷洗： 硫酸清洁液浸泡：浓硫酸+重铬酸钾+蒸馏水； 冲洗：流水冲洗15-20次，蒸馏水冲洗3次，三蒸水漂洗1-3次。 所有需灭菌的器械、物品灭菌前均需包装，防止灭菌后污染。使用时放入超净工
纳米药物的药代动力学研究进展
第１６卷第７期中国现代医学杂志 Ｖｏｌ．１６Ｎｏ．７２００６年４月 ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｄｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅ Ａｐｒ．２００６ 收稿日期：２００６－０１－２０ 本文就国内近年来纳米药物药动学研究的动向及成果加以概述。 １纳米药物药代动力学的研究方法 纳米药代动力学的研究方法与化学药品的药代 动力学研究没有本质区别，其方法分为血药浓度法和生物效应法。１．１血药浓度法 血药浓度法是药动学研究的经典方法，主要研究纳米药物中有效成分明确者，也是计算药代动力学最常用最准确的一种方法。常采用分光光度法、原子吸收光谱法、薄层层析法、薄层扫描法、高效液相色谱法、气相色谱法、放射性同位素法和放射性免疫法等方法进行测定。如张阳德等［１］利用荧光分光光度法建立了半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在大鼠体的研究。刘炜等［２］建立高效液相色谱法测定小鼠血浆中丝裂霉素Ｃ聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米球浓度的方法。 １．２ 生物效应法 纳米中药复方成分复杂，干扰因素多，难以用常 规的血药浓度的方法测定其药代参数。８０年代产生 了以药效为指标进行药代动力学研究的的理论和方法。 １．２．１药理效应法药理效应法是以药物的效应强度，包括量效关系，时效关系为基础的研究药代动力学的方法。目前，该法已越来越广泛地用于纳米中药及其复方，尤其是有效成分不明的中草药药代动力学研究。薛焰等［３］用药理效应法测定药动学，比较了超细粉马钱子和普通粉马钱子的药动学参数。１．２．２微生物指标法其原理主要是含有试验菌株的琼脂平板中抗菌药扩散产生的抑菌圈直径大小与抗菌药浓度的对数呈线性关系。选择适宜的敏感菌株测定体液中抗菌中草药的浓度，然后按照药代动力学原理确定房室模型，并计算其药代动力学参数。如陈鹏，毛天球等［４］以抑菌效应为指标，测定纳米羟基磷灰石复合胶原材料药动学参数。 文章编号：１００５－８９８２（２００６）０７－１０２８－０４ ?综述? 纳米药物的药代动力学研究进展 张阳德１，赵志坚１，张浩伟２，张彦琼３ （１．中国卫生部肝胆肠外科研究中心，湖南长沙４１０００８；２．美国加州医疗中心， 加利弗尼亚州文图拉ＣＡ９３００３；３．中南大学生物医学工程研究院，湖南长沙４１０００８） 摘要：纳米药物载体在近年研究已取得飞跃的发展。该文从药物代谢动力学的角度综述了纳米药物的吸收、分布和转化的研究进展。 关键词：纳米药物；药代动力学中图分类号：Ｒ３１８文献标识码：Ａ Ｎｅｗｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｏｆｎａｎｏ－ｄｒｕｇ ＺＨＡＮＧＹａｎｇ－ｄｅ１，ＺＨＡＯＺｈｉ－ｊｉａｎ１，ＺＨＡＮＧＨａｏ－ｗｅｉ２，ＺＨＡＮＧＹａｎ－ｑｉｏｎｇ３ （１．ＮａｔｉｏｎａｌＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ＆ＥｎｔｅｒｉｃＳｕｒｇｅｒｙＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｈｕｎａｎ４１０００８，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ；２．ＭｅｄｉｃａｌＣｅｎｔｅｒｏｆＣａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＣａｌｉｆｏｒｎｉａＣＡ９３００３，ＵＳＡ；３．Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌａｎｄ ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｈｕｎａｎ４１０００８，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｎａｎｏ－ｄｒｕｇ－ｌｏａｄｅｄｃａｒｒｉｅｒｈａｓｍａｄｅｆａｓｔｐｒｏｇｒｅｓｓａｓｐｏｔｅｎｔｉａｌｄｒｕｇｄｅｌｉｖｅｒｙｓｙｓｔｅｍｓ．Ｆｒｏｍｔｈｅｐｏｉｎｔｏｆｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ，ｔｈｉｓｐａｐｅｒｒｅｖｉｅｗｓｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔａｔｅｏｆｔｈｅａｂｓｏｒｐａｔｉｏｎ，ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｉｎｖｅｒｔｉｏｎｏｆｎａｎｏ－ｄｒｕｇｓ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｎａｎｏ－ｄｒｕｇ；ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ
动物细胞培养技术 思考题
《动物细胞培养技术》复习思考题 1.动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？如果 器皿中有杂质，会对细胞培养产生什么样的影响？ 答：①离体细胞对各种毒物都很敏感，若所用器材清洗效果未达到要求，各种毒物会损坏细胞影响实验。②器皿使用高压灭菌锅，121.3℃，20~30分钟，在取拿的时候用经过高压灭菌后的镊子取拿，避免造成污染。③ 2.叙述超净工作台的工作原理？ 答：超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程，在这个过程中风机起到了心脏的作用。鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化，净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。 3.正压过滤器为何会除菌？ 答：正压式过滤器没有内置灭菌灯，正压式过滤器利用的是两层0.22um孔的过滤膜，这层膜可以将细菌阻挡在膜上，过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过程 4.各种细胞培养用液的配制需要很精确吗？如果不精确，会导致什么后果？请举例说明。 你认为精确配制各种溶液？ 答： 5.配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化？ 答：配制后的液体应呈桃红色，PH值为7.4左右。苯酚红的变色域：1.2（橙）~3.0（黄），6.5（棕色）~8.0（紫色），若为黄色，则液体呈酸性，不利于细胞的生存。 6.用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制 答：Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。因此，用于分离细胞的消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。 7.L-谷氨酰胺在营养液中有何作用？ 答： L－谷氨酰胺是细胞的能量来源；是一种必须氨基酸，是使物体合成核酸、蛋白质、嘌呤、嘧啶的重要前体，也是蛋白质合成分解的调节物；是细胞内氨的清除剂，氨对一些细胞有毒性。 8.HEPES溶液的作用机理？ 答：它是一种氢离子缓冲剂。主要作用是防止培养基pH迅速变动 9.平衡盐溶液的组成与基本作用？小牛血清在细胞培养中有哪些作用？ 答：①平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH 稳定及提供简单的营养.主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。②作用：a提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物，以及某些低分子营养物质；b提供结合蛋白，识别维生素、脂类、金属离子，并与有毒金属和热源物质结合，起解毒作用；c是细胞贴壁、铺展生长所需因子的来源；d起酸碱度缓冲液作用； e提供蛋白酶抑制剂，细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受损伤。 10.营养液制备后为什么要小剂量分装？ 答：避免营养液被污染后，全部的营养液都被污染。 营养液一次用完过后，下一次的实验就不能用，会引起污染，影响实验，若冷冻营养液，则营养液的营养成分会有所损失，影响细胞的生长 11.10万U/mL单位青霉素、链霉素的配制方法？ 答：用注射器吸10毫升双蒸水溶解100万单位的链霉素，弃去2ml，用剩余的8ml链霉素溶解80万单位的青霉素，配制成每毫升青霉素、链霉素各10万单位的母液。
2019专本专临床药代动力学B和答案
专业：药学（专升本,专）适用年级：2017级科目：药物代动力学满分：100分 总页数：4页出题日期：2019-5-8 一、概念解释（每概念2分，共10概念，共20分） 1. 血脑屏障 2. 肝药酶抑制剂 3. 肝肠循环 4. 零级动力学消除 5. 生物利用度 6. 血浆半衰期 7. 稳态血药浓度 8. 易化扩散 9. 体过程 10. 药物的排泄
二、问答题（共2题，每题4-6分，共10分） 1、Caco-2细胞作为体外吸收模型的优点？（4分） 2、举例说明药代动力学在药剂学中的应用。（6分） 三、选择题（共60题，每题1分，共60分） 1．大多数脂溶性药物跨膜转运是通过 A．易化扩散 B．简单扩散 C．膜孔滤过 D．主动转运 E．胞饮2．被动转运的特点是 A．从高浓度侧向低浓度侧转运 B．从低浓度侧向高浓度侧转运 C．需消耗能量 D．有竞争性抑制现象 E．有饱和限速现象 3．下列关于主动转运的叙述中，错误的是 A．从低浓度侧向高浓度侧转运 B．需特异性载体 C．不消耗能量 D．有竞争性抑制现象 E．有饱和限速现象 4．某弱酸药物的pka=3.4，在pH=7.4的血浆中其解离度为 A．90% B．99% C．99.9% D．99.99% E．10% 5.以下何种情况药物易通过简单扩散转运 A．解离型药物在酸性环境中 B. 解离型药物在碱性环境中 C. 弱碱性药物在酸性环境中 D. 弱酸性药物在碱性环境中 E. 弱酸性药物在酸性环境中 6．下列关于药物解离度的叙述中，错误的是（ C ） A．弱酸性药物在酸性环境中解离度小，易吸收 B．弱碱性药物在碱性环境中解离度小，易吸收 C．弱酸性药物在酸性环境中解离度大，难吸收 D．弱酸性药物在碱性环境中解离度大，难吸收 E．弱碱性药物在酸性环境中解离度大，难吸收 7. 下列关于易化扩散的叙述中错误的是（ B ）
动物细胞培养及应用发展史
细胞培养技术
细胞培养发展史及其应用 （一）前言 20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harriso n)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。 所谓动物细胞培养(亦称组织培养)既有别于植物细胞培养，又与微生物的培养完全不同。所谓动物细胞培养是指离散的动物活细胞在体外人工条件下的生长、增殖过程，在此过程中细胞不再形成组织。 由于动物细胞培养是在人工条件下进行的，便于调控和观察，因而成为现今研究动物的物质代谢过程、染色体的形态变化、以及遗传物质的表达调控等高难领域的既便利而又有效的新方法。同时，随着现代生物化学、分子生物学、分子遗传学、以及现代医学的发展，细胞培养也在许多应用领域充分展示了其巨大的发展潜力，并已为世人所关注。尽管如此，动物细胞培养仍是一门年轻的新学科，在发展之初被混淆于动物组织培养之中。 （二）细胞培养技术及其历史 细胞培养的历史最早可追溯到19 世纪末，据可考证的资料记载W ilhelm Roux是第一个进行动物组织培养实验的人。 1885年Wilhelm Roux 将鸡胚髓板放置于温热盐水中使之维持存活了数天，是有记录的第一个体外移植成功的例子。 1887年Arnold把恺木的木髓碎片接种到蛙的身上。当白细胞侵入这些木髓碎片后，他把这些白细胞收集在盛将盐水的小碟中，接下来观察到这些白细胞在运动，并存活了一个短的时间。
中药药代动力学研究意义及现状
论文关键词:中药;药代动力学;中医药现代化 论文摘要:从中药复方的特点和研究现状入手,对有效成分明确和不明确的中药及其复方制剂在药动学上的应用进行了论述和比较,指出了各种研究方法存在的不足;强调应进一步加强对中药复方药理学和药物动力学的研究,用科学的语言阐明中药复方的作用过程和机理;此举将对中医药实现现代化,走向国际市场产生重要影响。 1中药药代动力学研究意义 中药及其复方的药物动力学研究,是近十多年兴起的中药药理学分支,主要是研究药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄,用数学模型来定量描述药物在体内的动态过程。它对中药药理学及中医临床医学的发展有着重要的意义。中药药动力学研究是阐明中药作用机理必不可少的环节。药代动力学参数可以为毒性试验设计和毒理效应分析提供依据。受多种因素的影响,毒性试验观察到的毒性反映往往不与剂量相关而与血药浓度相关,如果高浓度的药物剂型不利于药物吸收,进入体内的药量与剂量不成正比,就有可能造成毒性剂量评估上的偏差。众所周知,进行中药及其复方制剂的药代动力学研究会有不小的困难,因此,更需要广大的医药学工作者集中力量,找出中药作用中有代表性,有规律性的机理或具有可行性、可操作性的系统研究方法学,使中药药代动力学的研究更科学、更系统,更能满足现代临床治疗的要求。 2中药复方的自身特点及中医对药代动力学的认识 中药复方是中医防治疾病的主要手段。中医理论的特色之一就在于强调“人”的整体观,发挥药物的整体调节作用,并用辩证施治的思维方法来处方用药。现代药理学研究已初步证明复方药效的发挥并非是简单的单味药相加或毒性的相减,而是方中药物之间所发生的协同、制药或改性等作用,使复方达到预期的治疗目的。目前,国内对复方的研究中,有相当一部分在药理效应及临床疗效的观察阶段,虽然也引用了一些西药药理学手段,但仅表现在对几个特异性指标的观测上,且重复研究居多,所研究的中药复方组成不稳定,药效重现性差,难以全面而准确地反映出复方药物的作用机制,这使得国内复方制剂稳定性差,质量标准不高,较难与国际医药市场接轨。中药成分十分复杂,即使是单味药物,其所含的有效成分也达数种之多;而且在多数情况下又是以复方制剂给药。许多中药到目前为止其有效成分和作用机制还不是很清楚,加之中药中的一些有效成分含量很少,并且还有不少结构相似的类似物。来源产地不同,不同季节采收,不同方式加工等特点,使得常规的化学分析以及数据的解析产生困难,实验结果不易重复,给药代动力学的研究带来了许多困难。 3中药药代动力学研究的现状 中药的药物代谢动力学的研究与西药相比有很多不同的地方,因此决定了其研究方法也存在一定的差异。一般按有效成分明确的中药及其制剂的药物代谢动力学研究和有效成分不明的中药及其制剂的药物代谢动力学研究两种情况来进行评述。 3.1有效成分明确的中药及其制剂的药代动力学现状 有效成分明确的中药及其制剂的药代动力学研究方法与西药类似。随着对中药中有效成分的研究方法和检测技术的改进和完善,目前许多中药特别是单味中草药的有效成分已相当明确,据统计在九十年代前就已对120多种中药的有效成分进行过研究[1]。并已对相当一部分进行了体内外代谢的研究,且得出了明确的代谢产物,并对其体外药代动力学参数进行了研究。如毕惠嫦[2]研究了丹参酮Ⅱ_A在大鼠肝微粒体酶中的代谢动力学,指出了参与丹参酮Ⅱ_A体内代谢的肝微粒体酶。艾路等[3]对复方中药中乌头生物碱在人体内的代谢产物进行了研究,采用液相色谱-电喷雾离子阱多级质谱(LC-ESI-MSn)法检测出5种乌头生物碱代谢产物。陈勇[4]等对葫芦巴碱在大鼠体内的代谢产物进行了推测,从大鼠尿中检测出原药及其三种代谢产物。 3.2中药复方及其制剂的药代动力学研究现状 到目前为止还有许多中药及其复方制剂或因化学结构不明,或由于是混合物而非单体,无
(完整版)眼部药物代谢动力学的研究
眼部药物代谢动力学的研究 摘要：药代动力学研究在药品研发及评价过程中具有重要作用。本文对眼用制剂的药代动力学研究的进行了探讨。本文介绍了眼的药物代谢途径及其特点，眼部药代动力学样本采集以及常见的分析方法。通过药代动力学的研究可以了解药物在体内的代谢特征，指导临床用药的给药剂量、间隔、途径等，保证药物疗效，减少毒副作用。 关键词：眼；药代动力学；分析方法 对药品研发人员、技术审评人员以及临床医师来说, 人体药代动力学研究所提供的信息是非常重要的, 有时甚至是其他研究所无法替代的。通过眼部药代动力学的研究，学者们可以获得药物在眼部代谢的浓度一时间曲线，了解药物在眼内的代谢特征，对于药物剂型设计、给药方案、治疗监测等起着重要的作用。但是眼具有特殊屏障作用, 眼用制剂的药代动力学过程不同于系统给药的过程, 那么其药代动力学的特点及一般过程如何? 其意义何在? 常用的分析方法用哪些？另外，现有眼科局部给药的突破点在于,如何通过改进药物剂型和给药方式保证病人良好的依从性和药物应用的便捷性, 安全性。因此,对眼局部的药物代谢动力学加以了解和考察,能够更好的针对不同的疾病选择不同的给药方式和药物剂型, 对于临床诊治及用药安全具有重要的指导意义。同时，眼部给药系统研究的兴起也要求有方便、准确、安全、有效的检测方法来进行说明和验证。 1 眼的药物代谢途径及其特点 1.1 药物在眼球表面的流失 在眼局部应用滴眼剂时, 由于泪液在眼表的涂布,流动和循环使药物在接触眼表时即发生了流失。泪液在眼表的更新速度仅为1μl/min,相对多量的滴眼剂可在数分钟之内随着泪液的循环快速流入鼻泪管发生排泄[1]。由此可见,滴眼剂药物的全身吸收不仅在结膜囊的局部毛细血管中进行,同时也存在于滴眼剂流入鼻腔从而进入全身的情况。因此, 大多数以局部滴眼剂方式给药的小分子量药物在数分钟内即会进入全身循环,从而导致其在眼表的生物利用度仅在5%甚至更少。全身循环中的吸收降低了药物在眼表的有效浓集, 因此,通过应用固体药物