可溶性糖的测定方法

可溶性糖的测定方法

可溶性糖的测定方法有多种，常用的方法包括显色法、比色法、电化学法和色谱法等等。下面将详细介绍这些方法的原理和步骤。

1. 显色法：

显色法是通过特定的试剂与可溶性糖发生反应，产生有色产物来测定糖含量的方法。常用的试剂有硝酸铜和菲林试剂。

步骤：

1）将待测样品与硝酸铜溶液混合，加热沸腾，反应生成红色沉淀。

2）离心沉淀，取上清液用氨水中和。

3）将中和后的溶液与菲林试剂混合，加热沸腾，产生显色反应。

4）使用分光光度计测定显色溶液的吸光度，根据吸光度与可溶性糖浓度之间的关系，计算样品中可溶性糖的含量。

2. 比色法：

比色法是通过将待测样品与特定试剂反应，产生有色产物，并与标准溶液进行比色，从而计算样品中可溶性糖含量的方法。常用的试剂有邻苯二酚、菲林试剂和磷酸重铈。

步骤：

1）将待测样品与试剂混合，使其发生特定反应生成有色产物。

2）根据反应产物的颜色强度，与标准溶液的颜色强度进行比较，计算样品中可溶性糖的含量。

3. 电化学法：

电化学法是通过利用可溶性糖在电极表面发生氧化还原反应，测定电流、电势或电导率的变化来确定糖浓度的方法。常用的电化学方法有极谱法和电导法。

步骤：

1）将待测样品与电解质溶液混合，形成电解质溶液。

2）将电解质溶液置于电极中，测量电流、电势或电导率的变化。

3）根据电流、电势或电导率的变化，计算样品中可溶性糖的浓度。

4. 色谱法：

色谱法是通过使用色谱柱将样品中的可溶性糖分离，并通过检测分离后的峰面积或浓度来测定糖含量的方法。常用的色谱技术有气相色谱和液相色谱。

步骤：

1）将待测样品溶解，注入色谱柱。

2）通过调节流动相的组成和流速，使样品中的可溶性糖分离。

3）通过检测分离后的峰面积或浓度，计算样品中可溶性糖的含量。

总结：

可溶性糖的测定方法有显色法、比色法、电化学法和色谱法等等。选择合适的测定方法需要根据具体的需求和实验条件来确定。无论采用哪种方法，都需要在严格控制实验条件的前提下进行，以确保结果的准确性和可重复性。

样品中可溶性糖的测定

样品中可溶性糖的测定 一、目的通过对样品中可溶性糖的测定，初步掌握利用紫外-可见分光光度计进行定量的测定方法和仪器使用技术。 二、原理可溶性糖的测定方法有很多，本实验采用蒽酮比色法。在强酸条件下，蒽酮与可溶性糖（包括还原性糖和 非还原性糖）作用生成蓝绿色糖醛衍生物，该蓝绿色颜色深浅与含糖量成正比，可在625nm下进行比色测定。 三、仪器用具和试剂 仪器用具：分光光度计、试管、移液管、离心机等。 试剂：蒽酮：100mg蒽酮溶于50ml浓H2S04（化学纯）中，当天配制当天使用。 蔗糖标准液（1mg/ml已配制好）：精确称取0.1000g蔗糖（分析纯），在小烧杯中加水溶解，定容至 100ml，加2-3滴浓H2S04，该溶液可长期保存。 四、测定方法 1．样品处理方法： 将水样放入离心管中，10，000rpm离心2min后，准确吸取1ml作为待测样品，每个样品重复一次。 若是植物样品，则取干粉末样品0.05~0.1g左右, 放入塑料小试管中，加6-8ml蒸馏水，在沸水浴中煮沸20分钟，取出冷却，3500转/分离心10分钟，取上清，重复提取2次，收集上清，用蒸馏水定容至50 ml，作为待测样品，每个样品重复一次。 2．标准曲线的配制：准确吸取1mg/ml的蔗糖标准液5ml，加水定容量50ml，得到浓度为0.1mg/ml蔗糖 同时取待测液1.0ml，加蒽酮4.0ml，在40℃水浴中显色10-15分钟。（注：各管在加入蒽酮试剂时要迅速，加完后用力振荡1-2分钟。） 3.1 Cary分光光度计：打开分光光度计，机器预热5-10分钟： 打开计算机，双击Carywin进入Cary软件包主菜单；双击Concentration图标，进入操作界面，单击Setup进行参数设置: 仪器参数：分析波长：625nm; 狭缝：2.0nm; 丫轴读值：Abs 标准曲线参数：浓度单位：mg/ml；个数：6; 浓度值：将计算所得值填入; 待测样品参数：个数：20（多设，预防不够） 设置完毕，单击OK，退出Setup，当右侧出现红色625nm，则表明仪器已准备好。 4．样品测试：将空白加入参比池和样品池，击Setup下方Zero键，出现提示画面，击OK，测试完成后，可发现左侧吸光值变成0，此步为校准调0。然后击Start键，出现提示加入标样1的画面，因为空白即标样1，因此击OK读数，读数完再击Read键，根据提示，依次测完0-5个标样。标准曲线测试完毕后，仪器会自动显示标准曲线，若标准曲线相关系数>95%，则仪器认可该标准曲线，会弹出窗口，要求测试样品，操作同上，按Read键即可，若标准曲线相关系数<95%，则仪器会显示该标准曲线不合格，可通过Recalculate键删除1-2个标准样品，重新校正标准曲线，或者重新配制标准溶液。 5．测试完成后，退出Carywin, window95，关分光光度计，关计算机，取出比色皿清洗干净。 画出标准曲线，求出待测样品中可溶性糖的含量。水样可溶性糖的含量（%）=c * 100/ (水样体积ml*103) 固体可溶性糖的含量（%）=c*v * 100/ (w*103) C 为查标准曲线得到的糖浓度；V为50(总体积)/1.0（反应体积）；w为质量。 注：【1】离心机在使用时，样品需要对称放置，如果加样一致，可以省去配平，否则需要进行平衡样品，尤其是高速离心时。使用步骤：开启电源，将转速调至3500转/分（已设置好，不需要调整），按离心下启动键，启动离心机，然后按住定时下自动键，当分钟显示为10min时松手，离心机将自动于3500转/分下离心10分钟，离心完成后，按电源键即关机。如果中途想终止离心，按离心下停止键即可。【2】：本比色要求含糖在20-80ppm范围内较适宜。若吸取得2ml待测液比色后不在此范围，则可将样品与溶液体积改变，重新测定。【3】：所有比色试管加蒽酮试剂后，最好同时间摇动，然后同时置水浴中加温10分钟，以免产生误差.

(整理)可溶性糖测定.

引言 可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖等单糖和双糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的植物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。因此，可溶性糖的定量研究对植物的品质育种、储藏、加工特性等具有重要意义。而且可溶性糖广泛存在于植物的根、茎块和种子中，是人体热量的最最主要来源，具有较高的营养价值。本文重点介绍蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱-蒸发光散射法，及连续流动法这几种实验如何定量测定可溶性糖含量。

1 蒽酮比色法 1.1 原理 糖在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物，颜色的深浅与糖含量有关。在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。 1.2 仪器与材料 1.2.1实验仪器 分光光度计，电炉，铝锅，电子天平，20ml刻度试管，刻度吸管5ml 1支、1ml 2支，漏斗。1.2.2实验试剂 （1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。 （2）浓硫酸（比重1.84）。 1.2.3实验材料 植物叶片。 1.3 实验方法 1.3.1标准曲线的制作 取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。 表1 各试管加溶液和水的量 管号 0 1、2 3、4 5、6 7、8 9、10 100μg/ml蔗糖液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 (ml) 水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蔗糖量(μg) 0 20 40 60 80 100 然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。然后以空白为参比，在485nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。 1.3.2可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，或干材料。

可溶性糖的测定方法

可溶性糖的测定方法 可溶性糖的测定方法有多种，常用的方法包括显色法、比色法、电化学法和色谱法等等。下面将详细介绍这些方法的原理和步骤。 1. 显色法： 显色法是通过特定的试剂与可溶性糖发生反应，产生有色产物来测定糖含量的方法。常用的试剂有硝酸铜和菲林试剂。 步骤： 1）将待测样品与硝酸铜溶液混合，加热沸腾，反应生成红色沉淀。 2）离心沉淀，取上清液用氨水中和。 3）将中和后的溶液与菲林试剂混合，加热沸腾，产生显色反应。 4）使用分光光度计测定显色溶液的吸光度，根据吸光度与可溶性糖浓度之间的关系，计算样品中可溶性糖的含量。 2. 比色法： 比色法是通过将待测样品与特定试剂反应，产生有色产物，并与标准溶液进行比色，从而计算样品中可溶性糖含量的方法。常用的试剂有邻苯二酚、菲林试剂和磷酸重铈。 步骤： 1）将待测样品与试剂混合，使其发生特定反应生成有色产物。 2）根据反应产物的颜色强度，与标准溶液的颜色强度进行比较，计算样品中可溶性糖的含量。

3. 电化学法： 电化学法是通过利用可溶性糖在电极表面发生氧化还原反应，测定电流、电势或电导率的变化来确定糖浓度的方法。常用的电化学方法有极谱法和电导法。 步骤： 1）将待测样品与电解质溶液混合，形成电解质溶液。 2）将电解质溶液置于电极中，测量电流、电势或电导率的变化。 3）根据电流、电势或电导率的变化，计算样品中可溶性糖的浓度。 4. 色谱法： 色谱法是通过使用色谱柱将样品中的可溶性糖分离，并通过检测分离后的峰面积或浓度来测定糖含量的方法。常用的色谱技术有气相色谱和液相色谱。 步骤： 1）将待测样品溶解，注入色谱柱。 2）通过调节流动相的组成和流速，使样品中的可溶性糖分离。 3）通过检测分离后的峰面积或浓度，计算样品中可溶性糖的含量。 总结： 可溶性糖的测定方法有显色法、比色法、电化学法和色谱法等等。选择合适的测定方法需要根据具体的需求和实验条件来确定。无论采用哪种方法，都需要在严格控制实验条件的前提下进行，以确保结果的准确性和可重复性。

可溶性糖测定

可溶性糖测定 1、费林试剂甲称取硫酸铜（CuSO4·5H2O，分析纯）34.6 g溶于水中，稀释至1000ml，过滤，贮于棕色瓶内。 2、费林试剂乙称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠（KNaC4O6H4·4H2O，分析纯）173g 溶于水中，稀释至1000ml，用石棉垫漏斗抽滤。 3、亚甲基蓝溶液称取1g亚甲基蓝（分析纯）溶于100ml水中。 4、酚酞指示剂称取酚酞（C20H14O4）1g，溶于95%酒精90ml，再加蒸馏水10ml装入滴瓶内。 5、20—30%NaOH 用粗天平称取NaOH20—30g，溶于100ml蒸馏水中 6、葡萄糖标准溶液准确称取2.000g葡萄糖用水溶解后转入1000ml容量瓶中，加入浓HCl（分析纯）0.5ml，加水至1000ml。即为2mg\ml转化糖标准溶液，可保存3—4个月。 7、费林试剂的标定取费林试剂甲、乙各5ml混合液于100ml三角瓶中，置500W电炉上加热，使其在2min左右沸腾，准确煮沸2min，此时不离开电炉，立即加入0.5%亚甲基蓝指示剂6滴，并继续以每4—5s的滴速滴加标准糖液，直至溶液蓝色褪尽为终点。用准确滴定标准糖液的毫升数乘以标准糖液浓度（2mg\ml），即得10ml费林试剂所相当的糖的毫克数。 8、样品预处理取待测枣样品适量，去核，切块，60℃恒温箱烘干，磨碎。称取20g 样品加入160ml水，充分混合为匀浆，双层纱布过滤至烧杯中。 9、还原糖测定用吸管取45ml待测液放入100ml容量瓶中，定溶，摇匀。取费林试剂甲、乙各5ml加入100ml三角瓶中，加蒸馏水5ml，加热至沸，加2—3滴1%亚甲基蓝指示剂，用待测液滴定至蓝色泡沫全部褪去，呈现红色，记录待测液消耗毫升数。 待测液单糖含量（%）=滴定标准糖液的毫升数×4÷待测液滴定的毫升数 10、可溶性总糖测定吸取待测液45ml于100ml容量瓶中，加水20—30ml，再加浓HCl 3ml,在80±2℃水浴加热10min，放入冷水槽中冷却后，加酚酞指示剂2滴，用20—30%NaOH溶液中和，用稀酸和稀碱调节至微红色，用水定溶。 取费林试剂甲、乙各5ml，置100ml三角瓶中，加蒸馏水5ml，加热至沸，加2—3滴1%亚甲基蓝指示剂，用待测液滴定至蓝色泡沫全部褪去，呈红色，记录待测液消耗毫升数。 待测液可溶性总糖含量（%）=滴定标准糖液的毫升数×4÷待测液滴定的毫升数 非还原糖（%，以蔗糖计）=（可溶性总糖-还原糖）×0.95 待测液总糖含量=还原糖+非还原糖

可溶性糖测定方法

可溶性糖测定方法 可溶性糖测定方法是一种常用的分析方法，用于测定食品、饮料、果汁等中的可溶性糖含量。可溶性糖是指在水中能够溶解的糖类化合物，如葡萄糖、果糖、蔗糖等。测定可溶性糖含量可以帮助我们了解食品的甜味程度，还可以用于质量控制和产品开发等方面。 目前常用的可溶性糖测定方法主要包括比色法、光度法和高效液相色谱法等。下面我将分别介绍这些方法的原理和步骤。 首先是比色法。这种方法基于可溶性糖分子与特定试剂的反应，生成具有一定颜色的复合物。比色法最常用的试剂是菲龙试剂、安利试剂和硝酸铜试剂等。测定步骤一般包括样品的准备、试剂的配制和比色测定。样品的准备通常是将食品或饮料样品经过适当处理后，将溶液通过滤纸滤除杂质。试剂的配制则是根据给定的比例将试剂与溶剂混合。比色测定时，则是将样品溶液和试剂溶液混合，并在一定时间内测量其吸光度。根据比色复合物的吸光度与可溶性糖含量的关系，即可计算出样品中可溶性糖的含量。 其次是光度法。这种方法是利用可溶性糖溶液对特定波长的光的吸收特性进行测定的。光度法需要使用专用的光度计或分光光度计进行测量。测定步骤与比色法类似，首先是样品的准备和试剂的配制，然后将试剂与样品溶液混合，并将混合溶液转移到光度计中进行测量。光度计会根据样品溶液对光的吸收情况，输出吸光度值。根据吸光度与可溶性糖浓度的相关关系，可以计算出样品中可溶性糖的

含量。 最后是高效液相色谱法。这种方法需要使用高效液相色谱仪进行分析。高效液相色谱法是通过样品中可溶性糖与色谱柱中的填料分离，进而进行测定的。测定步骤包括样品的制备和高效液相色谱仪的设置。样品的制备一般涉及样品的提取和净化等过程。提取过程通常使用有机溶剂将可溶性糖从样品中提取出来，净化过程则是通过固相萃取等手段去除杂质。高效液相色谱仪的设置则是根据样品特性，选择合适的色谱柱，并设置适当的流动相条件和检测波长。测定时，样品溶液会经过自动进样器注入色谱柱，可溶性糖在柱中与填料相互作用而分离，然后通过检测器检测吸收峰面积或浓度，最终计算出样品中可溶性糖的含量。 综上所述，可溶性糖测定方法有很多种，其中比色法、光度法和高效液相色谱法是较为常用的几种方法。根据实际需要和设备条件，可以选择合适的方法进行测定。这些方法的共同点是都需要样品的准备和试剂的配制，对测定条件进行控制，最后根据测定结果计算可溶性糖的含量。通过这些方法的应用，我们可以准确测定食品、饮料等样品中的可溶性糖含量，为产品的质量控制和研发提供重要依据。

可溶性总糖的测定原理和方法

可溶性总糖的测定原理和方法 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理 强酸可使糖类脱水成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糖醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大吸收。在10－100μg范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在３0μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 １、仪器 分光光度计；电子天平；三角瓶；大管；试管架；漏斗；容量瓶；试管；水浴锅 ２、试剂 葡萄糖标准液；浓硫酸； 蒽酮试剂：0.2g蒽酮溶于100mL浓硫酸中当日配制使用。 ３、材料 小麦 四、操作步骤 １、葡萄糖标准曲线的制作 取７支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0ml，加完后一起浸于沸水浴中，准确煮沸10分钟取出，用流水冷却，室温放置10分钟，在620nm波长下比色。以标准葡萄糖含量作横坐标，以吸光值作纵坐标作标准曲线。 ２、植物样品中可溶性糖的提取 将小麦剪碎至２mm以下，准确称取１克，放入50三角瓶中，加沸水25ml，在水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集在50ml容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液２ml置另一50ml容量瓶中，以蒸馏水稀释定容不，摇匀测定。 ３、测定 吸取１ml已稀释的提取液于大试管中，加入4.0ml蒽酮试剂，以一操作同标准曲线制作。比色波长620nm，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（μg）。 查表所得糖含量×稀释倍数 五、结果处理 植物样品含糖量（％）＝查表所得糖含量（μg）×稀释倍数／样品重（g）×106×100

蒽酮法测定可溶性糖方法[仅供参考]

蒽酮法测定可溶性糖方法 （一) 实验原理 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。 （二）材料、仪器设备及设计 1 材料 12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。 2 仪器设备 分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。 3 试剂 （1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。 （2）100 ug/L蔗糖溶液： 1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml 浓硫酸，定容至刻度线。 100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。 （3）浓硫酸（比重1.84） （三）实验步骤 1．标准曲线的制作： 按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。 管号 试剂 0 1，2 3,4 5,6 7,8 9,10 100μg.1-1蔗糖 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 /ml 水/ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 蔗糖量/μg 0 20 40 60 80 100

可溶性糖的测定

实验1 可溶性糖的测定 一、实验目的 1．学习蒽酮比色定糖法的原理和方法。 2．学习721型分光光度计的原理和操作方法。 二、实验原理 总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。 蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。 其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮（C14H10O）缩合成蓝色化合物。溶液含糖量在150μg /ml以内，与蒽酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。 蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接作用，样品不必经过水解。 三、实验器材 1．试管（或具塞试管）2. 吸量管及试管架（1 ml、10 ml）3．沸水浴 4. 冰浴5．721型分光光度计 6．蒽酮试剂 称取100 mg蒽酮溶于100 ml 98%硫酸溶液（A.R）中，用时配制。 7．葡萄糖标准溶液（100 μg/ml）200 ml 精确称取100 mg干燥葡萄糖，用蒸馏水定容至1000 ml。 8．样品溶液200 ml 可自选待测物制成样品溶液。 举例：称取500 g市售白薯（或淀粉），洗净切碎后用多功能食品加工机磨成浆，4层纱布压滤、弃滤液溜渣，将渣放于烘箱内80～85℃烘干后，再用植物粉碎机（微型）研细，过筛，取100目筛下物为待测样品。 取样品在烘箱内105℃烘干，恒重后，精确称取1～5 g，置于锥形瓶中，加入80 ml沸蒸馏水，放入沸水浴。不时摇动，提取0.5 h。取出立即过滤，残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤，合并滤液。冷却至室温，用蒸馏水定容至100 ml。 9．白薯。 四、实验步骤： 每管加入葡萄糖标准液和水后立即混匀，迅速置于冰浴中，待各管都加入蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7 min，立即取出置冰浴中迅速冷却。待各管溶液达室温后，用1 cm厚度的比色皿，以第一管为空白，迅速测其余各管的光吸收值。然后以第2～7管溶液含糖量μg为横坐标，吸光度（OD620）为纵坐标，画出含糖量与OD620值的相关标准曲 1要在冰浴条件下加入蒽酮，以防止发热，影响颜色反应。生成的颜色较稳定，在4 h内无明显变化。

可溶性糖测定

可溶性糖测定 作物可溶性糖的测定(蒽酮比色法) 测定意义 可溶性糖主要是单糖，即葡萄糖和果糖(也称还原糖)和双糖即蔗糖(也称非还原糖)组成，它是植物体内一种重要的碳水化合物，在一般植物及植物产品中，测定其含量多少，不仅能反映作物的生长状况，而且还能反映其品质。因此在植物分析中进行可溶性糖的测定颇为重要。 测定原理 糖类遇硫酸即脱水成为羟醛类： H H HOC COH CH—CH 脱水 H2C CH—CH HC C—CHO + 3H2O O OH OH 然后，蒽酮与糖醛脱水、缩合，形成糖醛衍生物，呈蓝色，蓝色的深浅，可做为定量的标准。 H H O C —C O + HC C—CHO O CH— CH2OH O 试剂配制 (1)准确称取1.000g葡萄糖溶于1升容量瓶中，此清液为1000mg/L，从此液中吸取0、1、2、4、6、8、10毫升注入100毫升容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，此溶液即0、10、20、40、60、80、100mg/L糖溶液，分别吸取系列标准糖液各2ml分别注入7个比色管中，按照试样测定的方法进行处理并比色，以横坐标表示不同的糖浓度，纵坐标表示光度计的相应光密度。绘出葡萄糖的标准曲线。 (2)蒽酮溶液 称取0 1克蒽酮溶于100毫升72%的硫酸中，(每100毫升0 1%蒽酮溶液硫酸含量为比重1 84的浓硫酸74毫升)此试剂需新鲜配制，若在100毫升蒽酮试剂中加1克硫脲，则可以延长保存时间至一个月。 测定步骤 1提取：精确称取经磨细的干样品100毫克，置于一个15毫升的离心管中，加入10毫升80%酒精，在管口上盖一个塞子，保持在80～85℃热水浴内，30分钟，取出离心，把上层清液轻轻移至一个50毫升烧杯中，照此法对残渣重复提取2次，以使可溶性糖提取完全。 把上述酒精提取液置于80～85℃水浴上，使酒精蒸发，直到剩下3毫升液体为止。而后用蒸馏水定容至25毫升。作为可溶性糖的提取液。 2 测定：吸取5毫升的糖提取液至一个25毫升容量瓶中，用蒸馏水定容，取2毫升此稀释的糖提取液至一个具有塞的比色管中，然后，沿管壁缓缓注入蒽酮试剂10毫升，加

常用样品分析方法--可溶性糖、淀粉、酚类和叶绿素含量的测定

常用样品分析方法——可溶性糖、淀粉、酚类和叶绿素含量测定 一、可溶性糖和淀粉含量的测定方法 可溶性糖和淀粉含量的测定方法为硫酸---蒽酮比色法。 测定原理为：淀粉是由葡萄糖残基组成的一类多糖物质，在酸性条件下加热可使其水解成单糖葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，单糖葡萄糖可以脱水生成糠醛或羟甲基糠醛类化合物，然后利用蒽酮试剂与糠醛化合物反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，即可比色进行定量测定。 测定步骤如下: 1. 标准曲线的制作 1.1 100ug/ml葡萄糖标准液的配制 将分析纯葡萄糖在80℃下烘干，用0.0001g分析天平精确称取1g葡萄糖，转入50ml烧杯中，然后加入少量蒸馏水搅拌溶解，接着将溶解液转入100ml容量瓶，然后再往烧杯中加入少量蒸馏水润洗，最后将润洗液转入上述100ml容量瓶，重复上述润洗操作三次(注意溶解液和三次润洗液的体积总和控制在80ml 以内，以免超过容量瓶量程)，然后定容至容量瓶刻度线，塞上塞子，上下颠倒5次以，得到10mg/ml的葡萄糖溶液｡用移液枪吸取1ml葡萄糖标准液转入100ml 容量瓶，定容至刻度线，所得溶液即为100ug/ml的葡萄糖标准溶液。 1.2蒽酮乙酸乙酯试剂的配制 用0.0001g分析天平精确称取分析纯蒽酮1g溶于50ml乙酸乙酯试剂中，贮藏于棕色瓶中，置于黑暗中保存｡

1.3标准曲线制作 编号0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 100ug/ml葡萄糖溶液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 稀释液葡萄糖浓度（ug/ml）0 10 20 30 40 50 60 注:1 2为一个重复，以此类推｡ 取13支20ml试管并分别编号为0-12，按照上表加好相应体积的葡萄糖溶液与蒸馏水并混匀后，再依次向每支试管中分别加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，加入浓硫酸时要缓慢以免反应过快液体飞溅，然后小心震荡，将试管放入沸水浴(100℃)1min，取出后自然冷却至室温，以编号为0的试管为空白对照，于620nm波长处测定吸光值，然后以葡萄糖浓度为横坐标，吸光值（OD 值）为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线，并拟合出方程（R2=0.99）。本研究所有指标测量所用分光光度计均为岛津UV2600（SHIMADZU UV2600）。 2. 样品可溶性糖及淀粉含量测定 a．可溶性糖的提取：用0.0001g分析天平准确称取20mg干燥待测样品粉末于10ml离心管中，加入80%乙醇5ml，然后于80℃水浴锅中提取30min 后取出，冷却至室温后放入离心机中（2000r，10min），然后吸取上清液至另一干净的10ml离心管中，并加蒸馏水容至10ml，此溶液即为可溶性糖提取液。

可溶性糖测量方法

实验 12 植物组织中可溶性糖含量的测定 在作物的碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为 NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖 一、原理 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。 该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。 糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 任何植物鲜样或干样。

可溶性糖测定方法

可溶性糖测定方法 可溶性糖测定是食品分析中常用的方法之一，用于测定食品中可溶性糖的含量。可溶性糖是指在食品中可溶于水并能发挥甜味的一类糖类化合物，如蔗糖、葡萄糖、果糖等。 常用的可溶性糖测定方法主要有高效液相色谱法、酶法和红外光谱法等。 高效液相色谱法是一种快速、准确的测定可溶性糖的方法。该方法利用高效液相色谱仪对样品中的糖进行分离和检测。首先，将食品样品加热转化为液体状态，然后将样品注入高效液相色谱仪进行分离。分离完成后，通过检测器检测出糖的吸收峰，根据峰的面积计算出样品中可溶性糖的含量。 酶法是一种常用的测定可溶性糖含量的方法。该方法利用特定的酶催化反应将可溶性糖转化为可以检测的产物。常用的酶包括葡萄糖氧化酶、蔗糖酶和果糖酶等。首先，将食品样品与适当的缓冲液混合，加入酶催化剂后进行反应。反应完成后，通过比色法或荧光法等检测方法测定反应产物的含量，从而得出样品中可溶性糖的含量。 红外光谱法是一种非破坏性的测定可溶性糖含量的方法。该方法利用红外光的特征吸收峰来鉴定和定量可溶性糖的含量。首先，将食品样品制备成薄片或粉末，并放置在红外光谱仪中进行测定。红外光谱仪会发射红外光，样品对红外光的吸收谱进行测定。通过与标准样品的比较，可以计算出样品中可溶性糖的含量。

以上是常用的可溶性糖测定方法，每种方法都有其特点和适用范围。在实际应用中，选择合适的方法需要综合考虑样品的性质、仪器设备的可用性和实验室的经验等因素。此外，需要注意的是，不同方法可能会测得不同的结果，因此在比较不同样品或不同研究结果时需要谨慎处理。另外，还需要注意样品的制备方法和储存条件等因素对测定结果的影响，以保证测定结果的准确性和可靠性。 总之，可溶性糖测定是食品分析中重要的一环，不同的测定方法可以提供不同角度对可溶性糖含量进行测定。无论是高效液相色谱法、酶法还是红外光谱法，都可以根据实际需要选择合适的测定方法，以获得准确可靠的结果。

实验二十一 可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)

实验二十一可溶性总糖的测定（蒽酮比色法） 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理 强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在 30ug 左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 1 .仪器 （ 1) 分光光度计 (2 ）电子顶载天平 (3 ）三角瓶： 50m1 X 1 （ 4 ）大试管： 9 支 （ 5) 试管架，试管夹 （ 6 ）漏斗，漏斗架 （ 7 ）容量瓶： 50rnl X 2 （ 8 ）刻度吸管： 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1 （ 9 ）水浴锅 2 .试剂 （ 1) 葡萄糖标准液： l00ug/ml (2 ）浓硫酸 (3) 蒽酮试剂 :0.2g 蒽酮溶于 100 ml 浓 H2SO4 中当日配制使用。 3 .材料 小麦分蘖节。

四、操作步骤 1 .葡萄糖标准曲线的制作 取 7 支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ ml ） 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ ml ） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（ ug ）0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸 l0min 取出，用流水冷却，室温放置 10min ，在 620 nm 波长下比色。以标准葡萄糖含量（ ug) 作横坐标，以吸光值作纵坐标，作出标准曲线。 2 .植物样品中可溶性糖的提取 将小麦分蘖节剪碎至 2mm 以下，准确称取 Ig, 放入 50m1 三角瓶中，加沸水 25m1 ，在水浴中加盖煮沸10min ，冷却后过滤，滤液收集在 50m1 容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液 2m1 ，置另一 50m1 容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀测定。 3 .测定 吸取 lml 已稀释的提取液于大试管中，加入 4.Oml 蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。比色波长 620nm ，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ ug ）。 查表所得糖含量（ ug ）×稀释倍数 五、结果处理 六、注意事项 1 .该显色反应非常灵敏，溶液中切勿混入纸屑及尘埃。 2 . H 2 SO 4 要用高纯度的。 3. 不同糖类与蒽酮的显色有差异，稳定性也不同。加热、比色时间应严格掌握。 七、思考题 1 .用水提取的糖类有哪些？

可溶性糖含量的测定

可溶性糖含量的测定 实验九植物组织中可溶性糖含量的测定 2005级生物科学(1)班赵银锁(40508010) 一(实验目的 学习可溶性糖测定的蒽酮比色法 二(实验原理 植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。三(实验用品 721型分光光度计分析天平研钵恒温水浴锅烧杯刻度试管大试管活性炭移液管漏斗酒精(80%) 葡萄糖标准溶液:称取已在80?烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每 mL含糖为200μg的标准溶液。 蒽酮试剂:称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL 浓硫酸(比重1.84)稀释成1000mL而成。 四(实验步骤 1.可溶性糖的提取 称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80?水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上

清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭，80?水浴脱色30min,定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。 2.显色及比色 吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量(或经直线回归公式计算)，然后再行计算样品中含糖百分数。 3.绘制标准曲线 1 取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、 10、20、40、60、80μg。按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625,糖浓度曲线，或 进行直线回归求得直线方程。 试剂(ml) 管号 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液 0 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 80%酒精 1.0 0.95 0.9 0.8 0.7 0.6 蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5 葡萄糖浓度(ul/ml) 0 10 20 40 60 80 4.计算样品中含糖量, 设V为植物样品稀释后的体积(m L);C为提取液的含糖量(μg/ m L);W为植物组织鲜重 (g)。 则得计算式如:可溶性糖含量,,( C×V)/(W×106) ×100%