CTAB提取DNA解答

【求助】CTAB法提取植物基因组DNA

总失败！！！

每次提的DNA都有降解，我已经保证研磨和转入BUFFER之前是有液氮保存的，并且抽提和洗涤的过程动作很轻柔，但还是降解了，为什么啊？

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我认为最大的可能还是你在研磨的过程中产生了问题，因为在后面的实验操作过程只要按照protocol进行降解的可能性比较小。

我的经验是：在加入液氮后先将组织预先打碎成较小的片断，在液氮还没挥发完全时快速研磨，后马上在加入液氮，重复研磨过程，而且一点要变磨边敲研钵，防止样品粘在研钵后没有被液氮冻住。最后盛样品的管也要用液氮预冷一下，防止样品粘在管壁上。而且收集的时候要尽量快！！希望对你有用。

要用冰冻材料提出高质量的基因组DNA，应确保以下几点：

1.确保采样后立即投入液氮中保存.

2.在磨样时一定要一直使材料处于低温状态。研磨前先将液氮倒入研钵，研钵彻底冷却后，再放入材料，研磨过程中，一定不要让液氮挥发净使材料回温！否则会DNA降解得很厉害。装管的时候，材料一定要有液氮的保护才行！否则研磨时的液氮保护DNA不都前功尽弃了？可以这样做：将几个离心管放入一个容器，向容器中加液氮，将其冷冻一下，使之处于低温状态，将液氮还为挥发干净的材料放入管内，不要急着盖盖子，因为液氮不挥发干净就盖上会再次弹开。将离心管放入盛有液氮的容器，等管内的液氮挥发干净盖上盖子即可。

另外，如果是在离心管上编号，最好在冷冻前写好，否则离心管冷冻后材料会受影响不说，也很难写上。

提取DNA时加液氮的目的主要是防止DNA的降解，所以必须一直提醒自己，减少材料回温的机会，液氮保护必须自始至终。

3.在用CTAB法提取时，刚投入水浴时可以稍快速的晃动，之后的晃动一定要轻柔！

4.加酚/氯仿/异戊醇静置30min后，离心温度不可过低。尽量保持在15度以上。

5.将DNA加入异丙醇析出时用的枪头一定要剪过的。这点很重要。过尖的枪头会把DNA 链弄断。

6.加入异丙醇后出现的DNA絮状物尽量要挑出，尽量不要离心，因为离心后虽然产量会增大，但是不完整的DNA也增多了。

另外，看楼主的电泳图条带比较弱，看来不只是降解，提取量也比较少。这里对于增加提取量想说明一点，在研磨样品时，研得细和研得很细，提出的DNA量可以相差几倍！所以，在液氮保护的很好的情况下多研磨几次，要比在后面的过程中离心以增加产量要划得来！