尼罗罗非鱼致病性嗜水气单胞菌的分离鉴定与药敏试验

微生物实验设计-醋酸菌

实验设计：醋酸菌的分离与纯化 ——生物科学2班秦琬莹辛吉瑀张博文一、实验目的 学习醋酸菌的分离纯化、鉴定的原理。 掌握平板表面涂布法、平板划线法的分离技术。 二.实验原理 1.菌种的分离纯化 从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。 2.接种操作方法 涂布平板法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。 平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。 3. 结晶紫 结晶紫是一种碱性染料，也一种极佳的精密酸指示剂，pH 0.5(绿)～2.0(蓝)~弱酸（蓝紫）~中性（紫色）~碱性（赭红色）；所以在醋酸菌分离纯化平板培养基中加入少量的结晶紫溶液，既不会影响醋酸菌的生长，又可根据变色圈的大小很快把产酸高的醋酸菌株分离出来。 二、材料、用品 1.样品：食醋 2.培养基： （1）分离纯化平板培养基 葡萄糖1 g，酵母膏1 g，碳酸钙2 g，琼脂2g，水100mL，121℃灭菌20min，冷却至70℃加入4mL无水乙醇和0.5mL 0.02％结晶紫冰醋酸溶液。 （2）液态发酵培养基 葡萄糖l g，酵母膏1.5 g，磷酸二氢钾0.05 g，硫酸镁0.05 g，水100 mL，pH6.5，灭菌后冷却至60 ℃以下加入无水乙醇3.5mL。 3.器材：接种环、冰箱、试管、培养皿、无菌玻璃涂棒、移液管、恒温培养箱、无菌操作台、高压灭菌锅等。 三、醋酸菌分离纯化流程 样品——醋酸菌发酵液中富集培养——稀释分离——纯化——保藏平板培养基保藏 四、实验步骤方法 1.富集培养 取家用食醋以10％的量接入醋酸菌液态发酵培养基富集培养24h。

嗜水气单胞菌感染,嗜水气单胞菌感染的症状,嗜水气单胞菌感染治疗【专业知识】

本文极具参考价值，如若有用请打赏支持我们！不胜感激！嗜水气单胞菌感染,嗜水气单胞菌感染的症状,嗜水气单胞菌感染治疗【专业知识】 疾病简介 亲水气单胞菌腹泻(aeromonas hydrophilia diarrhea)是由亲水气单胞菌(aeromonas hydrophila，AH)引起的肠道感染性腹泻。气单胞菌属目前共有10个菌种，常见的有亲水气单胞菌、豚鼠气单胞菌(A.caviae，AC)、淡色气单胞菌(A sobria，AS)和易损气单胞菌(A.trota，AT)。其中致病性较强的是亲水气单胞菌。 疾病病因 一、发病原因嗜水气单胞菌属类弧菌科，革兰染色阴性，单鞭毛而有动力，无荚膜，不形成芽孢。本菌对鱼、蛙等冷血动物和小鼠、豚鼠、家兔等温血动物均有致病性。该菌的毒力因子主要是肠毒素，包括类霍乱毒素(CT)和类大肠杆菌耐热毒素(LT)。某些菌株具有侵袭性。 二、发病机制 本菌对蛙及鱼等冷血动物和温血动物均有致病性。可产生黏附因子，对肠上皮细胞具有粘附性，并可产生耐热和不耐热两种肠毒素以及和溶血素，细胞毒等毒力因子。本菌还可产生一些蛋白酶使人致病。动物实验表明，小鼠感染后可引起组织损伤、败血症、内毒素休克及死亡。 症状体征 一、症状急性胃肠炎潜伏期约1～2天，症状多较轻，低热或不发热，腹泻呈水样稀便，有腹痛而无里急后重，个别患者腹泻严重类似霍乱。2岁以下儿童可表现为痢疾样症状。大部分病例经2～5天自愈，重症可持续1～2周。 2.外伤感染因皮肤伤口接触河水、污泥而感染。轻者仅有局部溃疡，重者可发生蜂窝织炎。 3.败血症患者有严重慢性疾病时，本菌可由伤口或肠道侵入血流。嗜水气单胞菌感染败血症可并发感染性心内膜炎、坏死性肌炎、内眼病变和迁徙性脓肿等。 4.其他感染本菌偶可引起术后感染、尿路感染、褥疮感染、胆囊炎、腹膜炎、肺炎、脑膜炎、坏

罗非鱼嗜水气单胞菌病的诊治

罗非鱼嗜水气单胞菌病的诊治 海南潭牛一养殖池塘出现罗非鱼暴发性死亡，发病初期死亡40-60尾/天，高峰期死亡700-800尾/天，通过采样、实验室诊断治疗，取得了较好的效果。 2015年11月中下旬，海南潭牛一养殖池塘出现罗非鱼暴发性死亡，发病初期死亡40-60尾/天，高峰期死亡700-800尾/天，情况严重。水产养殖动物疾病防控技术国家地方联合工程实验室（简称“国家工程实验室”）通过对该地区的罗非鱼进行现场采样，并进行实验室诊断治疗，取得了较好的效果，本文就此病诊疗情况介绍如下，以期对今后罗非鱼嗜水气单胞菌病的防治提供借鉴。 一、发病鱼的临床症状 池塘水温为26-28℃，暴发疾病的鱼规格主要为400-500g，发病初期死亡40-60尾/天，而后逐渐增多，高峰期死亡量达800尾/天以上。患病鱼主要表现为食欲下降，离群独游，反应迟钝，在水面上层漂浮游动。病鱼鳃盖出血、肛门红肿、鳍条、上下颌和腹部充出血。解剖后观察发现，有胃出血、胆囊变大、胆囊壁变薄、肝脏充血或出血或呈现花斑症状，肠道内无食物的症状。发病初期，养殖户认为可能是链球菌病感染所致，就使用了磺胺类抗生素，但死亡量并未减少。后送样至本国家工程实验室进行诊断。 二、实验室诊断 实验室诊断未发现寄生虫，使用通威股份最新研发的无乳链球菌快速诊断试纸条未检测到无乳链球菌。而通过对病原菌分离，采用脑心浸液（BHI）培养基在患病鱼体内分离到一株革兰氏阴性短杆菌，菌体两端钝圆，菌株大小为（0.3-0.6）μm×（1.0-1.5）μm，在28℃条件恒温培养18-24h，形成针尖状、直径约为1mm左右、表面光滑、边缘整齐、圆形半透明的菌落。 通过16SrDNA基因扩增，得到约1500bp的扩增条带，测序后在NCBI上进行BLAST比对，分离菌株与嗜水气单胞菌的同源性最高，序列相似性达到99.5%。将分离到的细菌接种到健康罗非鱼，在36h内实验组出现死亡，且体表有点状出血、鳍条出血、剖解见内脏充血或出血。并从人工接种感染的罗非鱼肝脏组织分离到1株细菌，经16SrDNA基因扩增对比分析该菌株同样为嗜水气单胞菌。因而判断该病为嗜水气单胞菌感染所致。 三、药敏试验与治疗 利用纸片扩散法，对该嗜水气单胞菌株分别进行药敏试验，发现其对强力霉素、恩诺沙星、四环素、氟苯尼考敏感，而对卡那霉素、磺胺嘧啶、链霉素耐药，丁胺卡那、庆大霉素、新霉素、壮观霉素中度敏感。结合发病情况和药用史，按照内服抗生素氟苯尼考（20mg/kg鱼体重），同时内服维生素K3以6mg/kg鱼体重，连续投喂5天；外用泼洒使用聚维酮碘消毒（1-2次）。药物使用4天后，病情得到有效控制，死亡量降至70-80尾，连续使用2天后，死亡量减少到10余尾。

醋酸菌的分离鉴定和发酵条件研究

第2章醋酸菌的分离鉴定和发酵条件研究 2.1引言 醋酸菌包括醋酸杆菌属和醋酸单胞菌属[30]，又名醋酸细菌。醋酸菌的细胞一般为杆状、直或者稍弯，也有少部分像椭圆形，由单个、成对或者成链状排列的，大小一般在0.6～0.8×1.0～3.0 μm。醋酸菌没有芽胞是革兰氏阴性菌，它有的细胞是周生鞭毛种类，一般在液面上生长会形成较厚的菌膜。黑色醋酸杆菌等为另一些种类的醋酸菌细胞是端生鞭毛。醋酸菌的分布广泛，在未灭菌的醋、啤酒、黄酒中果酒，以及在果园的土壤中、葡萄或酸败食物表面中都有生长[31]。醋酸菌是酿醋过程中不可缺少的。醋酸菌在发酵过程中，会产生大量的醋酸和其他有机酸，而且还有醇类[32]。 本章节研究醋酸菌的分离鉴定和发酵条件，通过平板分离、革兰氏染色、产醋酸实验，并经生理生化鉴定和查阅伯杰氏手册，做出进一步鉴定。 2.2实验材料与方法 2.2.1材料与仪器 分离样品：取自湖北某果醋厂发酵的醋醅。 试验主要仪器设备型号及产地如表2.2.1.a。 表2.2.1.a主要仪器设备 Tab 2.2.1.a Main instrument equipment 主要仪器型号厂家 生化培养箱 双目生物显微镜 分析天平 手提式不锈钢蒸汽灭菌锅 超净工作台 精密数字式酸度计 PYX-250S-A BME（BA/E3） BS224S DSX-280B SW-CJ-1FD pHS-3C 长沙科技 科力仪器 德国莱卡 北京化丰 上海南鹏 上海科技

试验试剂：葡萄糖、酵母膏、甘油、无水乙醇(95%)、CaCO3、(NH4)2SO4、K2HPO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、FeCl3、乙酸钙、乳酸钙、浓硫酸均为分析纯；琼脂食用级。 2.2.2培养基[33-37] 表2.2.1.ｂ培养基成分表 Tab 2.2.1.ｂMedium composition 名称葡萄 糖 酵母 膏 无水乙醇 (v/v) 琼 脂 CaCO3备注 ⑴基础发酵培养基1%1%3%pH 4. 5 ⑵分离培养1%1%3%2%2%pH自然 ⑶斜面保藏培养基1%1%3%2%1%pH自然 ⑷液体保藏培养基1%1%1%pH自然 ⑸改进后的斜面液体 保藏培养基 1%1%3%2%1%pH自然 ⑹发酵培养基1%1%7%pH 4. 5 ⑺Horyer-Frateur培养 基 3%pH自然 ⑻GYC培养基10%5%2% 2. 5%pH自然 ⑼高糖培养基30%1%2%2%pH自然⑽生酮培养基3%2%甘油3% ⑾产5-酮基葡萄糖酸 盐培养基 3%1%2%2%pH自然 ⑿氧化乙酸培养基1% 1% 2% 乙酸钙1% pH 7.2 ⒀氧化乳酸培养基1% 1% 2% 乳酸钙2% pH7.0-7.2 ⒁乙醇培养基1% 3% 2% pH自然注：培养基⑸在斜面保藏培养基⑵上，30℃培养24 h，加入无菌碳酸钙，灌入并液体培养基到斜面上，至离管口2cm处，密封冷藏；培养基⑺其他成分有(NH4)2SO40.1%，K2HPO40.1%，KH2PO40. 01%，0.025%，FeCl30. 0005%；以上培养基均以121℃灭菌20 min。 2.2.3醋酸菌的分离纯化 2.2. 3.1分离纯化实验 称取醋醅样品5g，液态增殖培养48h后，按照浓度梯度10-6、10-7和10-8，

嗜水气单胞菌研究进展

嗜水气单胞菌研究现状 一、流行及感染情况 嗜水气单胞菌属于弧菌科, 气单胞菌属。气单胞菌属根据有无运动力可分为两类; 一类是嗜冷性、非运动性的气单胞菌, 另一类为嗜温性、运动性的气单胞菌。嗜水气单胞菌属第二类, 在气单胞菌属中是最重要的, 它是气单胞菌的模式种。非运动性气单胞菌主要是对鲑鳟鱼等致病的杀鲑气单胞菌及其亚种。嗜水气单胞菌在过去有不同的名称, 主要的名称有点状气单胞菌和斑点气单胞菌嗜水气单胞菌广泛存在于淡水、污水及土壤。有很多资料记载, 嗜水气单胞菌对水产动物、家畜和人均有致病性, 在动物疾病学和食品卫生学研究上都具有重要意义。它能广泛地被分离到, 如在淡海水鱼,淡水虾类, 淡水蟹类中和养殖蛙体内, 也能引起爬行类疾病。有许多报道证明它也能感染人类发病, 最常见的是嗜水气单胞菌引起急性霍乱。同时, 它广泛分布于人类的食物链, 供水系统和土壤中。嗜水气单胞菌既是恒温动物与变温动物的条件致病菌, 又是原发致病菌。但是, AUSTIN 等报道嗜水气单胞菌通常在自然界是条件致病菌, 充当继发病原而不是原发病原。嗜水气单胞菌通常与其它病原菌如温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌和假单胞菌有密切关系, 但由于鱼的品种不同而表现出不同的临床症状。病鱼的临床症状为局部损伤、坏死、水肿、突眼及腹部膨胀, 另外可能产生腹水、贫血及破坏内脏器官, 脾、肾颜色变黑, 肝变白, 胆汁变黄。在鱼、蛙类中由于嗜水气单胞菌感染引起的临床症状不同而给出了许多不同的名称, 如鲈鱼和鲤鱼的“红痛病”; 鲫鱼、白鲢、花鲢的“暴发病”, 这些鱼出现典型的肌肉、内脏的出血性败血症。在虹鳟, 鲶鱼中的嗜水气单胞菌病被称为“坏死病”, 这些鱼的嘴周围鳞片腐蚀, 身体的深部出现坏死及烂鳃。虹鳟鱼由于嗜水气单胞菌的感染而得的病称为“红嘴病”, 病鱼行动迟缓, 通常由于色素的过量产生而体色发黑, 口腔呈粉红或红色发炎, 外表及内部器官均呈现局部出血, 在病鱼的后期阶段, 病鱼呈急速螺旋状运动, 下沉, 腹部朝上直至死亡。“红腿病”蛙的后肢及腹部呈现出血性败血症, 病蛙的心、肝、肾及脾受到破坏, 并出现腹水。 二、血清型 嗜水气单胞菌有4种抗原, 包括耐热的O抗原、不耐热的K 抗原、鞭毛H 抗原和菌毛抗原。Ew ing 等提出共有12种O抗原和9 种H抗原, 每组都能进一步分型。此后, 日本国立康复研究院(NIH )分出了44个O抗原血清型,而Thomas又在此基础上增加了52个血清型, 从而达到了96个O抗原血清型, 且O 3、O 11、O 16、O 17、O 34被认为是主要血清型。Thomas等又在NIH的基础上增加了52个血清型, 并得到O3、O11、O16、O17、O34是主要的血清型, 其中O11、O16、O34是人源分离株常见, 而且毒力很强, O11、O19、O34主要对鱼致病. 国内方面研究, 人源也主要是O11、O16、O34, 而鱼源多为O9和O5。 三、毒力因子 嗜水气单胞菌产生的并得到认可的毒力因子主要包括外毒素、胞外蛋白酶、S蛋白、菌毛、外膜蛋白、脂多糖等. 1 外毒素(exotoxin) 嗜水气单胞菌所产生的外毒素是重要的致病因子之一由于嗜水气单胞菌的基因型的多样性,导致其外毒素的基因差异很大,表现为不同嗜水气单胞菌的外毒素有所差别. 到目前为止已确定的外毒素有气溶素(aerolysin)溶血素(hemolysin)、溶血毒素(hemolytic toxin)和细胞毒性肠毒素(cytolyticenterotoxin)等。虽然外毒素名称各异,但这些毒素都是单一多肽分子,具有相 同的生物学活性:溶血性、肠毒性和细胞毒性,在结构和功能上都极为相似, 所以可以认为外毒素属于同一基因家族. 国际上将外毒素的命名为气溶素(Aer毒素)。在国内,陆承平、涂小林等取嗜水气单胞菌产生的溶血素(hemolytic toxin)肠毒素(enterotoxicity )及细胞毒素(cytotoxicity)三个词的第一字母,命名为HEC毒素。但是, Rose通过比较不同外毒素的氨基酸序

嗜水气单胞菌感受态细胞的制备

嗜水气单胞菌电转化感受态细胞的制备 （1）将嗜水气单胞菌单菌落接种于 5 mL LB 培养基中,在30℃下振荡培养5h。取5mL培养液倒入100 mL LB培养基(用500 mL三角瓶)中,在30 ℃下振荡(300 r/min)培养至OD600为0.9-1.0 (2) 将培养物在冰水中放置15-30分钟,然后倒入500ml的离心瓶中,在4℃下1000g离心15分钟,弃去上清液。用100ml冰水悬浮细胞,1000g离心20分钟 (3)弃上清,用10ml冰冷的10%甘油悬浮细胞,1000g离心20分钟。 (4)重复步骤3一次。 (5)用冰冷的GYT培养基悬浮沉淀,分装的40uL样品可直接用于电转化或保存于-80 ℃,备用 嗜水气单胞菌的电转化 （1）将电转仪参数调至2.5 kv,时间5ms,电容5μF,脉冲阻抗控制在400-1000Ω。 (2)从冰箱中取出感受态细胞,在冰上解冻。在管中加入质粒1-2uL,轻旋以混匀内容物,在冰上放4-5 min。同时把电击杯放置冰上预冷。 (3)将转化混合物转移到电击杯中,吸干杯的外表面,放入电转化仪的样品槽中。 (4)充电到1.25kV,放电,进行脉冲电转化。 (5)取出电击杯,加入1mL LB培养基后,用移液器反复吹打,然后将菌液转移到无菌的离心管中,30℃中振荡培养120min。 (6)取200-800 uL涂布于含有氯霉素的LB平板上。 (7)将平板置于室温直至液体被吸干。30℃倒置培养,转化菌落在12-48h内出现 GYT培养基：10%(v/v)甘油0.125%(m/v)酵母提取物 0.25%(m/v)胰蛋白胨 使用0.22um滤器过滤除菌，分装成2.5ml一份，保存于4℃

醋酸菌

葡萄酒与醋酸菌 梁曼发酵工程2011050783 摘要：葡萄酒是一种成分复杂的胶体溶液，从葡萄汁酿成葡萄酒以后，不管是在酒厂的贮藏阶段，还是装瓶以后，它总是在一刻不停地变化着。由于各种微生物在葡萄酒中的生长繁殖，使得葡萄酒失去了原有的风味，这种现象称为葡萄酒的病害。在酿酒学领域，醋酸菌几乎不受关注，可能是因为醋酸菌是严格好氧菌，因此人们认为该类菌在葡萄酒中不能生存，除了葡萄酒表面能够永久的与空气接触。醋酸菌是葡萄酒酿造中的大敌。凡是有酒花生长之处，就有醋酸菌在一起繁殖；一旦条件具备，会迅速把酒精氧化变成醋酸，使葡萄酒产生醋酸气味，有刺舌感，严重破坏酒质。在发酵过程中，可通过合理措施来防治醋酸菌的污染。 关键词：醋酸菌；醋酸菌污染；防治措施 1葡萄和葡萄酒相关的醋酸菌 1.1醋酸菌的分类 醋酸菌是能够将酒精氧化成醋酸的一类微生物的总称。醋酸菌是多种形态，细胞椭圆到杆状，0.5-0.8×0.9-4.2微米。单个，成对或成链，不形成孢子。革兰氏染色阴性。醋酸菌是专性好氧菌。有的醋酸菌不会运动，也有具极生或周生鞭毛的运动型。 醋酸菌被分为醋杆菌属（Acetobacter）、酸单胞菌属(Acidomonas)、葡糖醋杆菌（Gluconobacter）、葡糖酸醋酸杆菌（Gluconacetobacter）( Ruiz et al., 2000)。其中关于各属醋酸菌间的不同（表1），主要区别是葡糖杆菌不能将乙醇最终氧化生成CO2和H2O，而其他属均可。 1.2与葡萄和葡萄酒相关的醋酸菌 与葡萄和葡萄酒相关的醋酸菌一般有下列几种：氧化葡糖杆菌、纹膜醋杆菌、巴士醋杆菌、Gluconacetobacter liquefaciens（原来一直被认作是液化醋杆菌）、Gluconacetobacter hansenii（以前一直被认作汉生醋杆菌）。 在未损坏葡萄上发现的醋酸菌主要是氧化葡糖杆菌，菌体数量一般为 102-105cells/mL( Du Toit and Lambrechts, 2002)。人们认为氧化葡糖杆菌低耐酒精能力，所以在酒精发酵过程中很快就死了，在酒中分离得到其细胞数量为104cells/mL(Drysdale and Fleet, 1985)。一般在酒精发酵结束后其细胞数目会减少，为0-102cells/mL( Du Toit and Lambrechts, 2002)。 腐烂或感染灰霉菌的葡萄上醋酸菌数量会大幅度增加，细胞数目由每毫升很少到106cells/mL(Barbe et al., 2001)。葡萄刚污染醋酸菌时，醋杆菌属为优势菌。可能是由于受损葡萄污染了的野生酵母产生的酒精的原因，醋杆菌属能够优先利用酒精作为碳源。 当压榨完的葡萄带皮在较低温度下放置几天，冷浸渍用来在酒精发酵开始前浸提更多色素(Ribéreau-Gayon et al., 2000)。在这段时期内，发酵液的微生物学状态会发生变化，尽管会添加SO2来防止危害酵母菌和细菌的生长。在该过程中，发酵液的pH也会影响醋酸菌的数量：较高pH，细菌数量增加，在这种状况下，较少SO2会产生抗菌作用，而是在较低pH下（pH＜3.5）保持最初的浓度(Du Toit and Lambrechts, 2002)。 由于对酒精耐受力和把酒精作为碳源和能源的偏好的不同，多种醋杆菌经常从葡萄酒中分离得来，而葡糖杆菌常从葡萄汁中分离得到。氧化葡糖杆菌是葡萄与葡萄汁的混合液中主要的菌种。汉生醋杆菌和液化醋杆菌最近被重新指定为汉生氧化葡糖杆菌和液

嗜水气单胞菌

嗜水气单胞菌 该菌是弧菌科气单胞菌属，为革兰氏阴性短杆菌，极端单鞭毛，没有芽胞和荚膜，刚从病灶上分离的病原菌常两个相连。在普通琼脂平板培养基上进行培养形成的菌落园形、边缘光滑、中央凸起、肉色、灰白色或略带淡桃红色有光泽，发育良好。 分布 嗜水气单胞菌广泛分布于自然界的各种水体，是多种水生动物的原发性致病菌，为条件致病菌，是典型的人-兽-鱼共患病病原菌。 编辑本段生物学介绍 嗜水气单胞菌在水温14.0～40.5℃范围内都可繁殖，以28.0～30.0℃ 为最适温度。PH值在6～11范围内均可生长；最适PH值为7.27；嗜水气单胞菌可在含盐量0‰～4‰的水生存，最适盐度为0.5‰。 嗜水气单胞菌可以产生毒性很强的外毒素，如：溶血素、组织毒素、坏死毒素、肠毒素和蛋白酶等。从实际病例分析，可推断其主要通过肠道感染，能否感染取决于菌体对鱼肠道组织粘附力的强弱，粘附力的强弱又与菌株和鱼的种类有关，通常具有高粘附力的嗜水气单胞菌株才能产生毒性很强的外毒素。出血病病因的模型可以描述为：嗜水气单胞菌侵入鱼体后，先在肠道内增殖，再经门动脉循环进入肝脏、肾脏及其它组织，引起肝脏、肾脏等器官以及血液病变，继而出现全身症状。 编辑本段引起疾病 目前，在生产中发现由嗜水气单胞菌感染的暴发性出血病较多，因嗜水气单胞菌的自清型很多，况且感染的对象不同，所以症状也各异。如白鲢暴发性出血病、甲鱼败血病、黄鳝出血病、鳗鲡红鳍病等。该菌为条件致病菌，当环境骤变，水质恶化时，常会与其它菌（如温和产气单胞菌、

弧菌等）混合感染使病情加重。由嗜水气单胞菌感染的疾病一般病势较猛，多为恶性传染病，死亡率很高。 编辑本段筛选治疗试验 筛选治疗嗜水气单胞菌药物的试验，都是用先从病体标本的肝、肾、脾等内脏分离出嗜水气单胞菌作为试验菌株，通过供试药物的抑菌试验，筛选出敏感药物，再经临床应用检验，对选定药物的疗效和实用性进行综合评价。目前已证实，高敏感类的药物有：庆大霉素、卡那霉素、氟哌酸、妥布霉素、菌毒清、大黄和五倍子等；中敏感类有：呋喃唑酮、呋喃那斯、氯霉素、复方新诺明、黄苓、连翘、黄柏、二氯、三氯和二氧化氯等。 编辑本段药物治疗 在选择治疗药物时，可以参照以上的药物筛选结果，因嗜水气单胞菌的变异菌株较多，所以要特别注意疗效，一般施药后病情有明显好转，死鱼大量减少，说明使用该药物有效。否则应及时换药。如选用口服药时，应注意所选药物肠道的吸收情况，如庆大霉素、卡那霉素在肠道中吸收很差，可用于注射但不易用于口服治疗。其次是用药量要准确，施药量要达到最低杀菌浓度，各种药物的性质不同，用量也不同，如大黄常用量为饲料量的千分之十二，痢特灵为千分之二至三，服用磺胺药第一次用量要加倍等。此外施药方法要科学，中草药可使用煎剂，也可使用散剂，但必须以利于吸收；全池泼洒要选晴天上午，泼洒要均匀，怕光的药物全池泼洒时，要在下午傍晚进行。

醋酸菌分离及鉴定

醋酸菌分离及鉴定 一、培养基 1、分离培养基（溴甲酚紫显色平板）:葡萄糖1%、酵母膏1%、无 水乙醇3%（体积分数）、0.04%溴甲酚紫5%（体积分数）、琼 脂1.8%、水100 mL，0.1 Mpa 灭菌20 min，无水乙醇在灭菌 后培养基温度降到75 ℃左右时加入。 2 、保藏培养基: 葡萄糖1%、酵母膏0.5%、琼脂2%、丙三醇2.5% （体积分数）、水100 mL，121℃灭菌20 min 备用。 3、液体培养基:葡萄糖1%、酵母膏0.5%、丙三醇2.5%（体积分 数）、水100 mL，调节pH 至6.30，121 ℃灭菌20 min 备用。 二、醋酸菌分离纯化流程 样品→醋酸菌发酵液中富集培养→稀释分离→纯化→斜面试管 保藏→产醋酸定性测试。 三、步骤 1 、菌株分离 取1g 醋醅样品置入无菌试管，装入9 mL 无菌水，振荡均匀后得到10-1 的稀释液，之后10 倍梯度稀释直到10-6 稀释度。取 10-2至10-6 稀释度的样品稀释液分别涂布溴甲酚紫显色平板，每个稀释度涂布2 个平板，每个平板涂布0.2 mL 的样品稀释液，涂布完成后30 ℃倒置培养48 h左右。选取菌落数在30~50 个左右的平板，挑取该平板上的所有单菌落转入斜面保藏培养基中， 30 ℃培养24 h 左右后保存于4 ℃冰箱。

2 、菌株纯化将试管斜面中的菌株平板划线分离后再转接试管斜面， 4℃冰箱保存。 3、菌株归类以上述各菌株划线分离的平板为基准，将形成菌落极 其相似的菌株归为一大类。 4 、菌悬液的制备用接种环挑取新鲜培养的斜面菌株半环，溶于 装有200 μL 无菌超纯水的Eppendorf 管中，于试管振荡器上 混匀后得到菌悬液。 四、鉴定 1、菌株形态特征:镜下细胞呈短杆状,革兰阴性,无芽胞,单个或成 对、成链排列,个体大小为（0.5～0. 7)μm ×(1. 0～1. 5)μm。 2、培养特征:在葡萄糖、酵母膏、乙醇、CaCO3平板培养基上生 长旺盛,菌落圆形、油脂状,表面光滑、凸起,边缘整齐,培养2 d能 产酸,使CaCO3 溶解形成透明圈,继续培养将乙酸氧化分解产生 CO2 和水,菌落周围出现白色透明圈。在斜面培养基上生长良好, 培养2 d后呈油脂状,并产酸。在10% ( v / v)乙醇的培养基上、 Hoyer2Frateur培养液中、30%葡萄糖培养基上均不生长。 五、测试 1、产酸量的测定方法取1 mL 发酵液, 加入10 mL 蒸馏水, 3 滴～ 5 滴0.02 %酚酞酒精溶液, 用标定的0.1 mol/L NaOH 溶液滴定 至浅粉色。由所耗的NaOH 溶液的量来计算样品中的含酸量(以 醋酸计)。 产酸量( %) =( V- V0) ×CNaOH×0.06×100 %

嗜水气单胞菌

嗜水气单胞菌感染 ·疾病概述 ·症状体征 ·诊断检查 ·治疗方案 ·预防及预后 ·保健小贴士 疾病别名： 亲水气单胞菌腹泻,Proteus melanovogenes infection 疾病代码： ICD:A48.8 人体部位： 就诊科室： 感染科 相关系统： 消化系统、其他系统 相关疾病： 伤寒 相关药品： 庆大霉素妥布霉素磺胺甲噁唑/甲氧苄啶诺氟沙星 嗜水气单胞菌感染概述（嗜水气单胞菌感染是什么病？）： 有奖编辑回目录 亲水气单胞菌腹泻(aeromonas hydrophilia diarrhea)是由亲水气单胞菌(aeromonas hydrophila，AH)引起的肠道感染性腹泻。进食被本菌污染的饮料或食物、或皮肤伤口接触被本菌污染的水、或被鱼刺伤或咬伤均可受染。夏季饮用未消毒水可能造成嗜水气单胞菌胃肠炎爆发流行。免疫功能低下者如肠道带菌容易发生内源性血液、腹腔、胆道、伤口或尿道口感染。 嗜水气单胞菌感染症状体征（嗜水气单胞菌感染症状是什么？）： 1.急性胃肠炎潜伏期约1～2 天，症状多较轻，低热或不发热，腹泻呈水样稀便，有腹痛而无里急后重，个别患者腹泻严重类似霍乱。2 岁以下儿童可表现为痢疾样症状。大部分病例经2～5 天自愈，重症可持续1～2 周。 2.外伤感染因皮肤伤口接触河水、污泥而感染。轻者仅有局部溃疡，重者可发生蜂窝织炎。 3.败血症患者有严重慢性疾病时，本菌可由伤口或肠道侵入血流。嗜水气单胞菌感染败血症可并发感染性心内膜炎、坏死性肌炎、内眼病变和迁徙性脓肿等。 4.其他感染本菌偶可引起术后感染、尿路感染、褥疮感染、胆囊炎、腹膜炎、肺炎、脑膜炎、坏死性肌炎和骨髓炎等。 嗜水气单胞菌感染诊断检查（确诊嗜水气单胞菌感染需要做什么检查？）： 诊断：根据腹痛、腹泻、低热等，参考流行病学资料，结合粪便培养亲水气单胞菌阳性，可作出诊断。其他类型感染根据临床表现及血或分泌物等培养阳性作出诊断。 实验室检查：大便常规镜检可见少量白细胞和红细胞，少数可白细胞满视野，大便培养亲水气单胞菌阳性。

嗜水气单胞菌

嗜水气单胞菌 嗜水气单胞菌 该菌是弧菌科气单胞菌属，为革兰氏阴性短杆菌，极端单鞭毛，没有芽胞和荚膜，刚从病灶上分离的病原菌常两个相连。在普通琼脂平板培养基上进行培养形成的菌落园形、边缘光滑、中央凸起、肉色、灰白色或略带淡桃红色有光泽，发育良好。 分布 嗜水气单胞菌广泛分布于自然界的各种水体，是多种水生动物的原发性致病菌，为条件致病菌，是典型的人-兽-鱼共患病病原菌。编辑本段生物学介绍嗜水气单胞菌在水温14.0,40.5?范围内都可繁殖，以28.0,30.0? 为最适温度。PH值在6,11范围内均可生长;最适PH值为7.27;嗜水气单胞菌可在含盐量0‰,4‰的水生存，最适盐度为0.5‰。 嗜水气单胞菌可以产生毒性很强的外毒素，如:溶血素、组织毒素、坏死毒素、肠毒素和蛋白酶等。从实际病例分析，可推断其主要通过肠道感染，能否感染取决于菌体对鱼肠道组织粘附力的强弱，粘附力的强弱又与菌株和鱼的种类有关，通常具有高粘附力的嗜水气单胞菌株才能产生毒性很强的外毒素。出血病病因的模型可以描述为:嗜水气单胞菌侵入鱼体后，先在肠道内增殖，再经门动脉循环进入肝脏、肾脏及其它组织，引起肝脏、肾脏等器官以及血液病变，继而出现全身症状。编辑本段引起疾病 目前，在生产中发现由嗜水气单胞菌感染的暴发性出血病较多，因嗜水气单胞菌的自清型很多，况且感染的对象不同，所以症状也各异。如白鲢暴发性出血病、

甲鱼败血病、黄鳝出血病、鳗鲡红鳍病等。该菌为条件致病菌，当环境骤变，水质恶化时，常会与其它菌(如温和产气单胞菌、 弧菌等)混合感染使病情加重。由嗜水气单胞菌感染的疾病一般病势较猛，多为恶性传染病，死亡率很高。 编辑本段筛选治疗试验 筛选治疗嗜水气单胞菌药物的试验，都是用先从病体标本的肝、肾、脾等内脏分离出嗜水气单胞菌作为试验菌株，通过供试药物的抑菌试验，筛选出敏感药物，再经临床应用检验，对选定药物的疗效和实用性进行综合评价。目前已证实，高敏感类的药物有:庆大霉素、卡那霉素、氟哌酸、妥布霉素、菌毒清、大黄和五倍子等;中敏感类有:呋喃唑酮、呋喃那斯、氯霉素、复方新诺明、黄苓、连翘、黄柏、二氯、三氯和二氧化氯等。编辑本段药物治疗 在选择治疗药物时，可以参照以上的药物筛选结果，因嗜水气单胞菌的变异菌株较多，所以要特别注意疗效，一般施药后病情有明显好转，死鱼大量减少，说明使用该药物有效。否则应及时换药。如选用口服药时，应注意所选药物肠道的吸收情况，如庆大霉素、卡那霉素在肠道中吸收很差，可用于注射但不易用于口服治疗。其次是用药量要准确，施药量要达到最低杀菌浓度，各种药物的性质不同，用量也不同，如大黄常用量为饲料量的千分之十二，痢特灵为千分之二至三，服用磺胺药第一次用量要加倍等。此外施药方法要科学，中草药可使用煎剂，也可使用散剂，但必须以利于吸收;全池泼洒要选晴天上午，泼洒要均匀，怕光的药物全池泼洒时，要在下午傍晚进行。

鱼类感染嗜水气单胞菌后的病理特征及其防控措施

第29卷第3期湖南文理学院学报(自然科学版) V ol. 29 No. 3 2017年9月 Journal of Hunan University of Arts and Science(Science and Technology) Sep. 2017 doi: 10.3969/j.issn.1672–6146.2017.03.008 鱼类感染嗜水气单胞菌后的病理特征及其防控措施 唐英, 夏虎, 陆风辉, 姜吉刚, 罗玉双, 杨品红 (湖南文理学院水产高效健康生产湖南省协同创新中心, 湖南常德, 415000; 湖南文理学院环洞庭湖水产健 康养殖及加工湖南省重点实验室, 湖南常德, 415000; 湖南文理学院动物学湖南省高校重点实验室, 湖南 常德, 415000) 摘要: 嗜水气单胞菌为水产养殖中一种常见的致病菌, 能引发养殖鱼类暴发细菌性败血症而造成大量死亡, 给水产行业带来巨大的经济损失。结合国内外的研究进展, 阐述了鱼类在感染嗜水气单胞菌后的病理特征、内部组织损伤及在水产养殖中对嗜水气单胞菌的防控措施, 以期为鱼类的健康生态养殖提供指导。 关键词: 嗜水气单胞菌; 病理特征; 鱼类免疫 中图分类号:S 968.1文献标志码: A 文章编号:1672–6146(2017)03–0033–06 The effect of Aeromonas hydrophila on fish pathogenicity and prevention and control measures Tang Ying, Xia Hu, Lu Fenghui, Jiang Jigang, Luo Yushuang, Yang Pinhong (Collaborative Innovation Center for Efficient and Health Production of Fisheries in Hunan Province, Hunan University of Arts and Science, Changde 415000, China; Key Laboratory of Health Aquaculture and Product Processing in Dongting Lake Area of Hunan Province, Hunan University of Arts and Science, Changde 415000, China; Zoology Key Laboratory of Hunan Higher Education, Hunan University of Arts and Science, Changde 415000, China) Abstract: Aeromonas hydrophila is a common pathogenic bacteria in aquaculture which can give rise to bacterial septicemia, and it can make mass fish dieoffs and bring huge economic losses to the aquaculture industry. Based on the research progress both at home and abroad, the fish pathological feature and internal tissue damage after infected Aeromonas hydrophila, and the prevention and control measures of Aeromonas hydrophila in aquaculture are expounded. Key words: Aeromonas hydrophila; pathological feature; fish immunology 随着近些年水产养殖业的迅猛发展, 在高密度集约化养殖模式大面积推广的同时, 鱼类疾病频频暴发, 严重威胁了水产养殖业。嗜水气单胞菌引发的细菌性败血症是危害淡水鱼类地区最广、水域类别最多、危害养殖鱼类种类最多、流行季节最长及造成经济损失最大的一种鱼病。除了鱼类之外, 也严重威胁着其他水产养殖品种, 如虾、蟹、鳖等的养殖。感染嗜水气单胞菌的养殖鱼类常常因防治措施不到位或未及时发现, 从而导致大量死亡, 造成巨大的经济损失。 1 嗜水气单胞菌简介 嗜水气单胞菌是一种模式菌, 属弧菌科气单胞菌属, 有嗜温有解氨亚种、嗜水亚种和不产气亚种, 通信作者: 夏虎, xiahu@https://www.sodocs.net/doc/de5799935.html,。收稿日期: 2017–05–19 基金项目: 团头鲂免疫球蛋白基因的克隆与免疫机能的研究(15BSQD11)。

醋酸菌菌种分离筛选方法

醋酸菌菌种分离筛选方法 醋酸菌的细胞为椭圆至杆状，单个成双或成链，鞭毛周生或端生，运动或不运动，革兰氏阴性菌，好氧菌，一般在乙醇或其他可氧化物的酵母煮液或酵母消化液培养基生长旺盛。 醋酸的钠盐和钙盐与三氯化铁共热，生成红褐色沉淀，原液变成无色。 可进行分离菌鉴别。 1.培养基： 1.1米曲汁乙醇碳酸钙培养基：米曲汁（10-12BX）1000mlCaCO 310-15g95℅乙醇30-40ml（灭菌后加入）PH自然 1.2葡萄糖碳酸钙培养基：葡萄糖15g/L酵母膏10g/L CaCO 315g/LPH 6.8 1.3乙醇30mL/L酵母膏10g/L葡萄糖10g/L CaCO 310-15g/L（常规筛选培养基）PH 6.8-7.0注：常规培养基中的碳酸钙易沉淀，平板不易观察到透明圈，选择米曲汁乙醇碳酸钙培养基为好。 1.4醋酸菌保存培养基：酵母膏15g/L葡萄糖10g/L CaCO 315-20g/L琼脂15-20 g/L 3-4滴乙醇/试管。 1.5液体种子和发酵培养基：乙醇30-35mL/L膏酵母10g/葡萄糖10g/L KH 2PO 40.5g/L MgSO 40.5g/L PH 6.5-6.8 2.菌种筛选：

2.1集菌：1-2g（5ml）样品，在无菌下加入30-50ml/250ml米曲汁乙醇液体培养基（0.5ml 0.02℅结晶紫醋酸溶液/100ml培养液）中， 130-33℃震荡培养24-48h，集菌液PH明显下降，有醋味，镜检细胞革兰氏染色阴性。形态与醋酸菌相符即可分离。 2.2混菌法分离：（分离及初筛） 适度稀释10-5、10-6、10-7取1.0ml菌液置于无菌平板或涂布中，每个梯度平行两次，米曲汁乙醇碳酸钙培养基倒平板，30℃24-48h，观察有小菌落出现，菌落周围形成透明圈，圈的大小因菌而异。挑透明圈出现早且菌落丰厚，边缘整齐，生长旺盛不同的菌落转接于曲汁乙醇碳酸钙斜面，30-33℃24-48h。根据菌落周围溶解透明圈大小初步筛选出产酸高的菌种。 2.3性能测定：（复筛） 不同菌落接种于液体曲汁乙醇培养基（30-50ml/250ml）中，30℃震荡培养24-48h。2.3.1镜检：染色镜检细胞整齐，椭圆或短杆状，革兰氏阴性菌。 2.3.2性能测定： 醋酸定性分析：取发酵液（离心去菌体）5.0ml于洁净试管中，用10℅氢氧化钠中和PH至7.0，加入1℅三氯化铁溶液2-3滴，摇匀，观察溶液是否变黄褐色，加热共沸，形成红褐色沉淀，原液变无色者为产醋酸细菌。 生酸量测定：1.0ml发酵液于150ml三角瓶中，加中性蒸馏水10-20ml，酚酞指示剂2滴，用0.1mol/l氢氧化钠滴定至微红色。 醋酸量（g/100mL）=氢氧化钠摩尔浓度.Vx60.06x10-3/样品毫升数x100 2同时，进行单因素试验，分别考察醋酸速度，耐高温，耐酒精度，耐低酸度等主要生产性能，选择优势菌株。 3

优势醋酸菌的分离筛选

优势醋酸菌的分离筛选 焦文娟王花秀李鲜鲜彭浩然焦晓阳 周口师院07生物工程（2）班 摘要:利用液醋分离筛选出2株较优醋酸菌,同时对这2株醋酸菌的 产酸速度、耐酒度、耐温度、耐食盐能力、酒精转化率等性能及果汁发酵产生果醋进行了研究。结果表明: 2株醋酸菌产酸速度均较快, 最适发酵温度均为30℃左右;酒精转化率醋酸菌28号为89.0% ,醋酸 菌36号为92.8% ,醋酸菌36号要比醋酸菌28号更耐高浓度酒精;用醋 酸菌36号纯种进行果汁发酵产生果醋,其总酸为42.7g/ L 。 关键词醋酸菌;果醋;耐酸度;耐温度 （-）研究的意义及现在的进展： 果醋作为一种酸性发酵健身饮料,含有丰富的维生素、无机盐、氨基酸和有机酸类,且风味独特,因而深受广大消费者欢迎。在果醋生产中,醋酸菌的性能对产品质量、发酵效率有很大影响。所以,选育产酸快、耐酒度、耐高温、耐食盐、酒精转化率高、适合果醋生产的醋酸菌是一项十分重要的工作。此外，因醋酸菌的活动将乙醇氧化为乙酸，即醋酸，可用于食品酿造中。食醋的酿造大体上可分为表面发酵法和深层发酵法仁忍。这两种发酵方法主要都是依靠醋酸菌的活动将乙醇氧化为乙酸即醋酸。国外对醋酸菌优质菌株的选育和醋酸发酵机理的 研究非常重视, 做了大量工作。国内对醋酸菌优良菌种的应用也日益重视起来, 并积累了不少有关醋酸菌分类鉴定及性能研究的资料。目前我国应用于液体醋生产的醋酸菌有工恶臭醋酸杆菌混浊变种普遍

应用于酿醋生产。最适培养温度28到30度。最适pH值3.5到6.0耐乙醇能力小于0.08, 最高产酸量70到90g/l。能进一步将醋酸氧化为二氧化碳和水过氧化反应。沪酿1.01:罗旺醋酸杆菌,是上海醋厂从丹东速酿醋中分离到的一株优良醋酸菌, 也是我国酿醋行业普遍使用的菌种。沪酿1.079:是1984年从上海醋厂老法发酵醋酷中分离到的一个新菌株。在0.1乙醇时产酸达到63.6g/l, 而且耐乙醇能力达到0.17乙醇时仍能产酸。 （二）材料与方法 1 实验材料 液醋:由大连调味食品厂提供;浓缩苹果汁:由大连真爱果汁公司提供。葡萄酒酵母:由大连轻工业学院微生物教研室提供。 2 实验方法 培养基的制作、酸度测定、醋酸定性试验. 一基础培养基 1%酵母膏,1%葡萄糖。pH 4.5,50000Pa 灭菌30min。使用前加入0.03无水乙醇。 二产酸试验培养基 1’基础培养基临用前加入0.07无水乙醇, 分 装于500ml三角瓶, 每瓶50ml;2’酵母膏1%,pH4.5 使用前按需要量加入无水乙醇, 分装于500ml三角瓶, 每瓶70ml。以上培养基用冰乙酸调pH值。 三分离和斜面保藏培养基 100ml基础培养基中加入2%琼脂, 灭菌 后加入5%无菌碳酸钙和0.03无水乙醇, 为分离培养基。分装试管,灭菌后摆成斜面即为保藏培养

病原菌的分离鉴定及其疫苗的制备

一、实验目的 熟悉水产细菌性病原的分离、培养、纯化与鉴定的基本方法，了解所分离细菌性病原的形态特征及培养特点，了解细菌性灭活疫苗制备的基本过程。 二、实验材料 患白内障病虎纹蛙（或其他患细菌性疾病的水产动物）、健康虎纹蛙、脑膜炎败血黄杆菌（虎纹蛙白内障病的病原） 三、实验药品、用具 2216E 琼脂平板、 2216E 琼脂斜面、福尔马林、无菌蒸馏水、生理盐水、磷酸缓冲液、接种环、解剖刀、剪刀、镊子、滴管、纱布、白瓷盘、酒精棉球、灭菌试管、 96 孔板、注射器、酒精灯、离心机（包括离心管）、水族箱、记号笔 四、实验操作程序 （一）病原菌的分离与鉴定 1 ．培养基的制备 （ 1 ）普通肉汤培养基： 按以下剂量称取各种试剂（先称取盐类再称蛋白胨及牛肉膏），置于铝锅或搪瓷缸中。 牛肉膏 5g 磷酸氢二钾 1g 蛋白胨 10g 蒸馏水 1000ml 氯化钠 5g pH 7 . 4 ～ 7 . 6 初配好的培养基呈酸性故要用 NaOH 调整。将 pH 测定后的肉汤培养基用滤纸过滤，将过滤好的肉汤分装试管、盐水瓶、三角烧瓶等容器，待灭菌。 （ 2 ）普通营养琼脂培养基 普通肉汤 1000ml

琼脂 20g 琼脂是由海藻中提取得一种多糖类物质，对病原性细菌无营养作用，但在水中加温可融化，冷却后可凝固。在液体培养基中加入琼脂 1 . 5 ～ 2 ％即可固定培养基，如加入 0 . 3 ～ 0 . 5 ％则成半固体培养基。 将称好的琼脂加到普容肉汤中，加热煮沸，待琼脂完全融化后，将 pH 调至 7 . 4 ～ 7 . 6 。琼脂融化过程中需不断搅拌，并控制火力，不使培养基溢出或烧焦，并注意补充蒸发掉的水份。 加热溶解好的培养基可用滤纸进行过滤，固体培养基要用 4 层纱布趁热过滤（切勿使培养基凝固在纱布上），之后按实验要求，将配制好的培养基分装入试管或三角瓶中，包扎好待灭菌，将培养基置于高压蒸汽锅内，121 ℃ 灭菌 15 ～ 30min ，趁热将试管口一端搁在玻棒上，使之有一定斜度，凝固后即成普通琼脂斜面，也可直立，凝固后即成高层琼脂。 盐水瓶中的普通琼脂以手掌感触，若将瓶紧握手中觉得烫手，但仍能握持者，此即为倾倒平皿的合适温度（ 50 ～60 ℃ ），每只灭菌培养皿倒入约 15 ～ 20ml ，将皿盖盖上，并将培养皿于桌面上轻轻回转，使培养基平铺于皿底，即成普通琼脂平板。 培养基中的某种成分，如血清、糖类、尿素、氨基酸等在高温下易于分解、变性，故应过滤除菌，再按规定的量加入培养基中。 2 ．病原菌的分离与培养 分离病原菌的材料要求是具有典型患病症状的活的或刚死不久的患病生物，病原菌的分离方法如下。 体表分离：先将病灶部位表面用 70% 酒精酒精棉球擦拭消毒或取病灶部分小片或用经酒精灯灼烧的解剖刀烫烧消毒，再用接种环刮取病灶深部组织或直接挑取部分深部患病组织，接种于普通肉汤培养基增菌或直接在普通琼脂平板上划线分离。 内部组织器官：用 70 ％酒精浸过的纱布覆盖体表或用酒精棉球擦拭，进行体表消毒，无菌打开病鱼的腹腔，以肝、肠、心脏等脏器为材料，先将拟分离病原的部位表面用 70% 酒精棉球擦拭或用经火焰上灼烧