成功经验的借鉴之方法篇一(老甘转)

《成功经验的借鉴》之方法篇：

兵法一厚积薄发学会重视基础

打好基础是非常重要的，而夯实基础的主要途径就是在保持大脑活力的同时“机械式记忆”，因为只有当东西吃透时，才能保证活学活用。高考兵法，即多多积蓄，慢慢放出。形容只有准备充分才能办好事情。也就是说我们在复习的是要要重视基础知识，只有把基础打牢了，才能从量变到质变，实现质的飞跃。

高分秘籍

高考中，***复习总方针是：重视基础，狠抓细节，消灭偏科。

语文：注重积累，强化运用

积累是输入和输出两个过程的，许多同学只注重输入，忽略了输出。比如厚厚的笔记本上，记录了老师再课堂上将的所有东西，但是考试的时候却不知道怎么运用。因此，***强调两手抓策略：在积累、整理的时候，形式上简明扼要，内容上突出重点，这比盲目追求笔记本厚度的做法效率更高；在表达输出的时候，要有条理地回答问题，力求准确清晰。在积累、整理的时候，形式上简明扼要，内容上突出重点，这比盲目追求笔记本厚度的做法效率更高；在表达输出的时候，要有条理地回答问题，力求准确清晰。

***建议大家多向老师请教，多练习，在摸索总结中找到最佳的答题模式。

数学：“用好错题本”

高考不是数学竞赛，它注重考查基础知识的掌握运用。在这里，***

想重点谈谈错题本的使用方法。跟语文一样，千万别把老师所讲的内容全抄下来，要抓关键点来记录。同时，在抄写老师板书之前，自己要做一遍题目，这样才能对比出哪些步骤，哪些细节、哪些方法是自己容易弄错德，然后在错题本上重点批注。只有这样，在复习的时候，以前做过、记过得题才能对自己起到真正的作用。数学讲的是思维方式，希望大家好好地琢磨琢磨那几个重要的数学思想，尤其是分类讨论、数形结合等等。既能站在这样的总结性高度去寻找题目异同点，又能在重写解题过程中把握每一个细节点。

物理：回归课本

物理学科强调实际运用，但究其原理还是万变不离宗。所以大家要回到课本，仔细复习课本内容，夯实基础。同时，由于物理出题灵活，迁移范围广，复习中要坚持不懈，不断训练自己的思维能力。

在制定目标时不要把分数定死，要长远看待它，一步一步走下去，这次分数高了只能证明这个阶段复习效果明显，下一个阶段物理同样还要复习，不能松懈。你可以一步一步慢慢来，也可以选择一次到达顶峰然后保持巅峰状态。

化学和生物：当做文科来学

将两个科目放在一起，是有原因的。它们被称为理科中的文科，所以大家要下工夫去记忆重点知识。把课本吃透，才能对基础知识了如指掌。

英语：多做题，培养语感

***反对题海战术，但英语语感实在太重要了，而培养的最好方法是多做练习。盲目多做没有用，要在保证质量的基础上增加数量。我也不赞成一次将很多题全部做完，而应该“少吃多餐”，让自己的语感永远鲜活。可以挑零碎的时间完成英语和语文的积累，整块的时间留给理科（尖子生可灵活调整）。最后建议大家把英语看作提升英语运用能力的机会，切忌过分看重分数；在击破每一个知识盲点的同时，你会看到成绩的飞跃。

临场实战：心态制胜

建议大家在模拟考试时就严格遵循高考的作息时间，将一切都程序化。把高考当作模拟考试，按照预定计划一步一步走下去。在最后的决战中才有底气告诉自己：这和平时没什么不同，我只要按部就班就好。

如果考试中出现变化或遇到意想不到的情况，千万别急，你要坚定信心，自己做不出来，别人肯定做不出来。所以遇到难题不碍事，相反，如果题目做得太顺，反而要引起注意，要仔细检查

*** （卓信成） 2010年广东高考理科状元现就读：清华大学建筑学院建筑学专业高考成绩：总分709分（语文137 数学138 英语142 理综292）

转基因玉米的鉴别方法.doc

转基因玉米的鉴别方法 转基因玉米的鉴别方法 判断转基因食品的几个标准： 1、个头。按照传统，西红柿也有一定个头的，比如：像大拇指头那么一点大的小西红柿绝对是转基因。再比如大豆，也叫黄豆，就是做豆腐，豆浆那种豆子，形状应该像动物内脏：腰的样子，有点扁，可现在的大豆，全是圆圆的、大不少、就像豌豆一样的大豆，产量很高，就是转基因。 2、色彩。与传统的不一样的绝对是转基因，比如彩色棉花、彩色辣椒。 3、产量。转基因作物一般在开始几年，其产量要比传统作物高不少。 4、季节。除了大棚蔬菜外，其它的反季节食品容易是转基因的。 5、害虫。凡是害虫喜欢光顾的作物就是没转基因的，凡是害虫害怕，也就是没有害虫，或很少害虫的作物，就是转基因。 甜玉米是转基因玉米吗 甜玉米的不同之处在于，它的胚乳中可不只有淀粉，还有相对含量很高的水溶性多糖，这就赋予了其不同于普通玉米的甜味。究其背后的原因，是在甜玉米控制淀粉合成的一系列基因中，有一个或几个基因发生了自然的突变，处于纯合隐性状态，切断了部分还原性糖向淀粉转化的过程。这点小缺陷反而促成了甜玉米可口的味道。 甜玉米并不是最近才有的新作物，它的真正起源时间虽然无法考究，但有文献记载的最早的甜玉米品种是1779年欧洲殖民者从美洲的易洛魁人那里收集到的Papoon玉米，据此可以肯定甜玉米的出现时间还要更早。要知道，那时候可还压根没有转

基因这一说。 现在的甜玉米品种虽然和几百年前的不完全相同，但它同样不是转基因的产物，而是在自然突变的甜玉米品种的基础之上，通过传统育种技术选育自交系、组配杂交种的办法培育出的新的甜玉米品种。 最近几年，与甜玉米有关的几个基因序列和与其关联的分子标记都已经被找到，育种家还可以依靠分子标记辅助选择技术来加快育种进程。此外，还有利用花药组织培养技术来加快隐性基因的纯合进程的选育方法，也开始受到育种家的重视。 这些育种技术并没有涉及到单个或少数几个结构和功能已知的目的基因的插入，也没有对基因进行修饰、敲除、屏蔽等的改变(这些是我们常说的转基因技术手段)。通过这些方法培育出来的甜玉米都不是转基因玉米。很多人因为甜玉米的甜味不同于普通玉米，就认为甜玉米是转基因技术培育的，这其实是没有想到玉米自己的基因突变也会产生不一样的性状。 分辨转基因食品的方法 专家指出，按我国相关立法，若产品的主要原料中含转基因成分，应当在包装上加以注明，如果消费者不想购买转基因食品，一定要认真阅读食品标签，如买大豆油时，往往会看到小字标注原料是转基因大豆。 但若加工食品中含有转基因产品配料，却没有规定必须注明。如美式快餐店里的薯条，用的大都是转基因马铃薯品种;点心里的油脂，饭店里的烹调油，往往是转基因油。 所以在外就餐、购买加工食品时，遇到转基因食品成分的机会较大。相比之下，买国产果蔬(除番木瓜)、用花生油等来做烹调，几乎没有吃进去转基因成分的可能。多吃中国的杂粮杂豆，如小米、红豆等，也不会遇到转基因成分，而且其营养价值高。

老客户转介绍话术

去征求客户的意见，去取得客户对自己的认同和肯定。比如，我们可以去询问客户对自己的印象：“王总，我想现在您已了解我的工作性质及服务方式，您对我的表现还满意吗？您能否提供一些宝贵意见，以作为改进我服务品质的准绳？” 谦和的话语，很容易为建立心理和谐奠定基础，在这个基础上，可以顺依客户的回答，自然地提出索取转介绍的要求： “您也知道，从事我们管理软件工作，需要有更多的人认识。虽然您暂时不考虑上系统，但是我想您应该不会介意让您身边有需要的朋友管理更轻松，不知您可不可以告诉我三个名字，让我去跟他们谈一下，比如您的同事或同学？” 这里值得说明的是，一旦进入转介绍环节，要及时给客户提供一个范围或名字，毕竟泛泛的思考常常是混乱而又没有秩序的，也不容易找出我们想要的答案，所以圈定范围是索取转介绍成功的一个重要因素。像下面这句话，就更有针对性，就更容易获得资料：“在我们的谈话当中，您曾提到您的朋友张总，您能够多告诉我一些有关他的事吗……” 当索取转介绍动作顺利开始后，我们可能要问：究竟索要多少名单合适呢？这似乎并没有什么限制，只要气氛好，环境好，索取的名单则越多越好。索取转介绍对客户而言是“舍”，对营销员而言是“得”，“舍得”本身就是一对辩证的统一体。当然，在索取转介绍过程中，一个重要的因素在很大程度上影响着我们与客户之间心理和谐的建设，那就是客户产生的顾虑。人际关系本身是一件简单却又复杂的事情，客户介绍名单给我们，他必然会考虑我们和他介绍的这些人接触后对他会产生什么样的影响，所以及时打消客户的顾虑是很重要的，我们可以把自己对被介绍人的处理方式告诉给介绍者 ：“王总，我向您报告，我会先寄一封信给张总，并介绍我自己，然后我会打电话给他，看看能否见个面。我尊重您的朋友就如尊重您一样，如果他不想谈信息化管理，我会转移话题，不会死缠烂打的，您大可放心。” 此外，在获得转介绍名单后，一定要记得向客户致以诚恳的谢意，并表明会将与被介绍者的接触活动及时反馈给他，以示尊重 ：“王总，非常感谢您的信任与推荐，你真是一位富有爱心和乐于助人的人，我会将和您的朋友接触的情况及时报告给您，祝您生活愉快！” 像这样，我们把每一个动作都建立在心理和谐共建的基础上进行，既体现了对客户的尊重，也体现着对工作原理的理解和把握。做到这一点，索取转介绍应该不是什么难事。 索取转介绍的方式 - 六步骤准客户开拓法 1. 取得认同 2. 提供姓名或范围 3. 资格确认 4. 询问是否还有其他人选 5. 准确锁定 6. 重复以上步骤 三步骤促成法：1.描述你进行准客户开拓的过程 2.试探3 总结和强调转介绍 人的重要性拒绝! 我的朋友都对软件不感兴趣 1) “您的朋友都对信息化管理不感兴趣，这我很理解，您在我这里购买系统之前不是也不感兴趣吗？其实只是因为对信息化管理不了解而已，您看现在您不是已经很认同信息化嘛！您放心，如果您的朋友在听了我的介绍后，还是不感兴趣的话，我是不会继续打扰他们的，您看好吗？” 2) “您的心情我理解，我相信没人会对自己不了解的事情感兴趣，让我跟您的朋友分享

转基因小鼠的制备

转基因小鼠的制备 【实验目的】 1.了解转基因小鼠制备的原理和方法。 2.学习转基因小鼠制备的流程。 3.掌握对转基因小鼠进行筛选的方法。 【实验原理】 转基因技术的理论基础来源于进化论衍生来的分子生物学。基因片段的来源可以是提取特定生物体基因组中所需要的目的基因，也可以是人工合成指定序列的DNA片段。DNA片段被转入特定生物中，与其本身的基因组进行重组，再从重组体中进行数代的人工选育，从而获得具有稳定表现特定的遗传性状的个体。该技术可以使重组生物增加人们所期望的新性状，培育出新品种。 转基因动物是指染色体基因组中整合有外源基因并能遗传给后代的一类动物。整合到动物染色体基因组的外源基因称为转基因。转基因技术则是指制备转基因动物所需的一套技术，它涉及外源基因的构建、载体和受体的筛选、基因导人技术、供转基因胚胎发育的体外培养系统和宿主动物等许多方面。 1974年，Rudolf Jaenisch通过将SV40病毒的DNA注射到小鼠的囊胚中，创造了第一只携带外源基因的小鼠。后来又有研究人员把Murine leukemia病毒注射到小鼠胚胎得到了能通过生殖系统稳定遗传的小鼠，并且外源基因能在后代中稳定表达。这些能稳定遗传且表达外源基因的小鼠即我们现在一般意义上所说的转基因小鼠。 【实验步骤】 一、显微注射法 1.受精卵的采集 可育雌鼠注射孕马血清与绒毛膜促性腺激素促使超排卵。处理后与可育雄鼠交配，次日从输卵管内收集受精卵备用。 2.目的基因的导入 用显微操作仪将目的基因溶液导入受精卵的细胞核内。 3.受体母鼠的准备 将雄鼠输精管结扎，然后与可育雌鼠交配，刺激雌鼠发生一系列妊娠变化而得到假孕母鼠作为受精卵转基因后的养母。 4.胚胎移植 将已转入目的基因的受精卵从背部植入假孕母鼠的输卵管或子宫内（视胚胎发育的状况而定），使胚胎在养母体内发育成熟。 5.对幼鼠的鉴定 幼鼠发生断乳后自尾部提取DNA，与目的基因探针作分子杂交鉴定外源基因是否整合到幼鼠的染色体上。 二、胚胎干细胞囊胚显微注射法 1.囊胚期受精卵的采集 可育雌鼠注射孕马血清与绒毛膜促性腺激素促使超排卵。处理后与可育雄鼠交配，交配后第四天上午从子宫中冲取受精卵备用。 2.目的基因的导入

(完整版)中国市场上的转基因食品及鉴别方法

中国市场上的转基因食品及鉴别方法 国内市场上的转基因食品清单 一、我国转基因作物有哪些? 1、已批准安全证书的有棉花、水稻、玉米和番木瓜，只有棉花、番木瓜批准商业化种植 “截至目前，我国批准了转基因生产应用安全证书并在有效期内的作物有棉花、水稻、玉米和番木瓜。”中国农科院植保所副研究员谢家建介绍说。 “目前，转基因水稻和转基因玉米尚未完成种子法规定的审批，没有商业化种植。”谢家建表示，“我国已经进行商业化种植的转基因作物只有棉花和番木瓜。” 我国批准进口用作加工原料的转基因作物有大豆、玉米、油菜、棉花和甜菜。这些食品必须获得我国的安全证书。 2、目前市售圣女果、彩椒、小南瓜、小黄瓜都不是转基因食品 网上流传一份转基因食品名单，包括“圣女果、大个儿彩椒、小南瓜、小黄瓜”。对此专家并不认同。 中国农科院生物所研究员王志兴说，小番茄也叫圣女果、樱桃番茄，是自古就有的番茄品种，只是因为个头小、采摘不便、产量低，最早仅作为观赏用，后来发现食

用方便，口味经过改良后逐渐流行。个头小是天生的基因差异，不是转基因的结果。 中国农科院油料所副研究员吴刚说，小南瓜和小黄瓜也不是转基因食品，仅仅是未充分成熟的南瓜和黄瓜。如果继续在田间种植，小南瓜和小黄瓜最终会生长成普通的大南瓜和老黄瓜。 关于大个儿彩椒，吴刚表示，大个儿彩椒含有不同类型的花青素，表现为更丰富的颜色。花青素的变异在植物中很常见，像鲜花同一个品种就有不同颜色，萝卜也有红萝卜、绿萝卜、白萝卜等。“我国曾经批准过抗病毒甜椒的商业化种植，但与常规甜椒相比，转基因甜椒并没有明显优势，因此被市场自然淘汰。” 3、我国市场转基因食品主要是大豆油和木瓜 中国农业大学食品工程与营养科学院院长罗云波介绍，目前中国市场上的转基因食品主要有两种，一种是转基因食用油，就是我们所说的大豆色拉油，来源主要是从美洲，尤其是从美国、阿根廷、巴西等国家进口的大豆所生产出来的食用油。 还有一种就是转基因木瓜，因为木瓜容易得一种农药很难治的病，用基因的技术能够控制，转基因木瓜也是我们能够吃到的转基因食品。除此之外，我国很少能够见得转基因种类的食品。

如何维系老客户及转介绍

如何维系老客户 其实老客户经营也是顾客经营的一部分，这里要单例出来讲，主要是因为老客户对我们来说实在是太重要了，何谓老客户？ 1、在我们手上成交过 2、和我们的关系非常好 3、有转介绍客户给我们 一个公司要想持续发展必须要有老客户，一个业务员要想持续保持保持高业绩，必须要有老客户。一个优秀的业务员做到最后就是做老客户，将来销售业的竞争必然是老客户的竞争。既然老客户如此重要，那要如何才能经营好老客户呢？ 我们可以通过以下的一些法则来对老客户进行专项经营： 1、从良好的售后服务开始。 2、建立好顾客成交档案。 3、把每一个成交的顾客当作宝藏来挖掘。 4、对于老客户仍然要敢于要求。 5、对老客户转介绍的资源一定要成交并表示感谢。 接下来我们对以上的这些法则进行详细的讲解： 方法/步骤1 良好的售后服务 1、不要以为签完合同就完成了交易：由于某些公司不注重售后服务那块， 造成了很多的人一和客户签完单下完定金，就不管事了！曾经一个客户说了一句很值得我们深思的话：“我一刷完卡，以后人就不见了”；这都是意识问题，其实签完合同才是服务的开始，现阶段的快速成交导致我们和

顾客并不熟悉，所以和顾客并没有什么感情，要想让成交过的顾客成为你 的老客户，就必须参与售后服务，这是与顾客多接触的机会，我们要把握； 2、积极主动协助顾客解决问题：在售后过程中会遇到各种问题，我们要 很主动的帮助顾客，而不是选择逃避；有很多经纪人一接到顾客的电话就 怕，或者有的干脆不接。要想想这是对顾客最大的伤害。顾客有问题来找 你，是完全信任你，找不到你，你想想他们有多急，他们对我们将是多反 的失望。所以我们应该喜欢顾客找我们，因为这些都是机会，特别是处理 纠纷，每次处理纠纷都可以创造老客户！协助后期经办做好售后服务； 3、保持不断联络，让他记住你，并成为朋友（兴趣、节假日、顾客的生 日、上门拜访、邀请参加公司的各种活动、送公司的各种刊物），这些都 是非常好的方式，当然也有很多特别的方式，这个你们自己去想，反正我 们只有一个目的：让客户永远记住我们，在他们需要基金方面的帮助时，第一个想到的就是我们！最高境界就是：让顾客习惯我们的服务！ 建立好顾客成交档案 建立顾客档案，对我们进行老顾客的跟进非常有用！我们每天都在接触不 同的顾客，难免会忘掉一些顾客；只有做好了档案，才有案可寻，才不会 失去很多机会 1、顾客档案内容：顾客的姓名、性别、爱好、性格、年龄、生日、家庭 情况、职业、收入情况、联系电话。 2、成交档案内容：购买的产品，把这些资料建立好后，定期跟踪，一定 很好用，而且一定非常有效。3 每一位老顾客都是一座宝藏 1、专家统计成交一个老客户的难度是新客户的1/7，这是一个可怕的数 字，想想我们在搞定一个新客户的时候，可以搞定7个老顾客。老顾客可以减少获取信赖的时间，他们可以当我们的销售人员！

转基因玉米59122品系的特异性检测

收稿日期：2010-03-13 基金项目：国家“863”计划项目(2006AA10Z440)；国家自然科学基金项目(30800770)； 国家转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX08012-001) 作者简介：许文涛(1979—)，男，副教授，博士，研究方向为食品安全。E-mail ：cau xwt@y ah https://www.sodocs.net/doc/cf874723.html, *通信作者：黄昆仑(1968—)，男，教授，博士， 研究方向为食品安全。E-mail ：hkl009@https://www.sodocs.net/doc/cf874723.html, 转基因玉米59122品系的特异性检测 许文涛1,2，杨 蓉2，陆 姣1，张 南1,2，罗云波1，何 景1,2，黄昆仑1,2,* (1.中国农业大学食品科学与营养工程学院食品安全实验室，北京 100083； 2.农业部转基因产品检验监督测试中心(北京)，北京 100083) 摘 要：使用反向聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了转基因玉米59122的外源基因与玉米基因组之间的两段侧翼序列，并据其左侧侧翼序列设计了具品系特异性的引物，运用半巢式PCR 技术建立了59122的品系特异性二重PCR 检测方法，扩增片段100b p ，横跨p a t 终止子与转基因玉米侧翼基因之间。以转基因玉米59122、MO N863、MON810、GA21、NK603，转基因大豆Roundup Ready 和转基因油菜GT73等为材料，证明本方法与其他转基因作物具有高特异性。本方法在检测59122时，确定出连接体系中线性DNA 的最佳质量浓度为1ng/μL 左右，检出限达到0.1%，灵敏度为38个单倍体基因组拷贝数。因此可准确、快速、高效地检测转基因玉米及其产品，或作为常规PCR 定性检测后的验证方法。 关键词：转基因作物；品系特异性检测；半巢式聚合酶链式反应；反向聚合酶链式反应；二重聚合酶链式反应 Event-specific Transgenic Detection of Genetically Modified Maize 59122 with Flanking Sequence XU Wen-tao 1,2，YANG Rong 2，LU Jiao 1，ZHANG Nan 1,2，LUO Yun-bo 1，HE Jing 1,2，HUANG Kun-lun 1,2,* 　(1. Food Safety Laboratory, College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University,Beijing 100083, China ；2. Supervision, Inspection and Testing Center of Genetically Modified Organisms (Beijing), Ministry of Agriculture, Beijing 100083, China) Abstract ：We report the cloning of two flanking sequence of the integrated gene construct of genetically modified maize 59122by inverse PCR method and the design of even-specific primers based on the left flanking sequence with the aim of developing of a duplex PCR assay for the event-specific transgenic detection of genetically modified maize 59122 using semi-nested PCR,result ing in an amplification fragment of 100 bp in length stretching from the terminator of the pat gene to the 59122 flanking genes.This assay has been successfully applied to detect genetically modified maizes 59122, MON863, MON810, GA21, NK603,genetically modified Roundup Ready soybeans and genetically modified oilseed rape GT73, with high specificity. The optimum concentration of linear DNA in a connection system for detecting genetically modified maize 59122 by this assay was around 1ng/μL, which exhibited a limit of detection of 0.1% and a sensitivity of 38 copies of haploid genome. Therefore, the developed PCR assay is applicable to detect genetically modified maize and its derivates accurately, fast and efficiently, and can serve to verify routine PCR qualitative detection. Key words ：genetically modified crop ；event-specific transgenic detection ；semi-nested polymerase chain reaction ；inverse polymerase chain reaction ；duplex polymerase chain reaction 中图分类号：Q789；S513 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2011)04-0139-04 随着转基因作物的不断商业化，新型转基因食品的安全性问题逐渐成为公众关注的焦点。为此，各国都加强了管理[1]。除了向公众公布相关信息、增加透明度外，关键问题是建立相应的科学检测方法来分析鉴别转 基因产品。 目前，转基因产品的检测技术[2]很多，分为基于核酸水平的检测技术、基于蛋白水平的检测技术以及其他检测技术。在定性检测中基于蛋白水平的检测[3]不能区

转基因小鼠的方法概述

转基因小鼠的应用及其制 备法 学院：动物科技学院 专业班级： 学生姓名： 学号： 指导老师： 时间：2015年12月17日

老师，这篇文章是在图书馆《分子生物技术——重组DNA的原理与应用》书上整理下来的，没有参考文献，但是，这一万多字都是自己亲手打下来的，图也是自己用软件画的，其中的原理也都 弄懂，愿老师见谅。 转基因小鼠的应用及其制备法

（西北农林科技大学动物科技学院，凌712100） 摘要随着后基因组时代的到来，转基因动物已成为新兴的最有效的实验模型。从上世纪80年代以来，上百个不同的基因已经转入各种品系的小鼠中。这有助于理解基因调控，肿瘤发展，免疫特异性，发育分子遗传学以及人们感兴趣的其他生物学过程。转基因小鼠也已在探索利用家畜进行人类治疗药物工业化生产的可能性，以及建立各种人类遗传病的转基因生物医学模型中起到重要作用。现就制备转基因小鼠的实验法及应用前景作简单介绍。 关键词医学模型；试验法；应用前景 Methods and Applications of Transgenic Mice (Northwest A&F University,Colledge of Animal Science and Technoledge,Yangling, Shaanxi,712100,China ) Abstact:Following arrival of the post-genomics era,transgenic animals have become the most effective novel experimental model.Since the 1980’s.Hundreds of different genes have been transferred to the various strains of mice.This helps to understand the gene regulation,tumor development,immune specificity,developmental molecular genetics and other biological processes which people are interested in.Transgenic mice have also been exploring the possibility of using domestic animals for the industrial production of drugs for human treatment,and they also play an important role in establishment of a variety of genetically modified biomedical model of human genetic diseases. The article here is an overview of experimental methods and the application prospect of transgenic mice. Key words:biomedical model; experimental methods; application prospect 1990年人类基因组计划正式启动，经过13年的努力，人类基因组序列图绘制成功及人类基因组计划的所有目标全部实现。人们迎来一个崭新的时代——后基因组时代，即在基因组静态的碱基序列逐步清楚之后而最基因组进行动态的生物学功能研究。转基因动物在后基因组时代已成为生命科学研究中新 作者简介：本科，动物科学专业。Email:lw5166@126.；Tel： *通讯作者：E-mail：mailto:zhangjianqin1356@126.

基因敲除小鼠的制作方法

.. 一、常规基因敲除鼠（Conventional Knockout） 常规基因敲除是通过基因打靶，把需要敲除的基因的几个重要的外显子或者功能区域用Neo Cassette 替换掉。这样的小鼠其全身所有的组织和细胞中都不表达该基因产物。此类基因敲除鼠一般用于研究某个基因在对小鼠全身生理病理的影响，而且这个基因没有胚胎致死性。 二、条件性基因敲除小鼠（Conditional Knockout） 条件性基因敲除小鼠是通过基因打靶，把两个loxP 位点放到目的基因一个或几个重要的外显子的两边。该小鼠和表达Cre酶小鼠杂交之前，其目的基因表达完全正常。当和组织特异性表达Cre酶的小鼠进行杂交后，可以在特定的组织或细胞中敲除该基因，而该基因在其他组织或细胞表达正常。 条件性基因敲除鼠适用范围为：（1）该基因有胚胎致死性；（2）用于研究该基因在特定的组织或细胞中的生理病理功能。 三、基因敲入小鼠（Knockin） 基因敲入小鼠是通过基因打靶，把目的基因序列敲入到小鼠的相应基因位点，使用小鼠的表达调控元件指导目的基因表达。 此类基因敲入鼠一般用于药物的筛选，信号通路的研究等。 获得嵌合体及之后品系纯化详细流程： 基因敲除其他方法： 一、ZFN技术制作基因敲除鼠 ZFN能够识别并结合指定的基因序列位点，并高效精确地切断。随后细胞利用天然的DNA 修复过程来实现DNA的插入、删除和修改，这样研究人员就能够随心所欲地进行基因组编辑。这在过去是无法想象的，传统的基因敲除技术依赖细胞内自然发生的同源重组，其效率只有百万分之一，而ZFN的基因敲除效率能达到10%。利用这些技术进行小鼠基因的定点敲除和敲入，可以把时间从一年缩短到几个月。 这项技术中设计特异性的ZFN是最关键的环节，目前研究者采用计算生物学方法设计高特异性的ZFN，但ZFN的脱靶（off target），也就是把不该切的地方切了的问题仍是一个挑战。也正因为这个原因，利用ZFN技术进行小鼠的基因修饰还无法完全取代传统技术。 二、TALEN技术制作基因敲除鼠 TALEN 技术是一种崭新的分子生物学工具。科学家发现，来自一种植物细菌的TAL蛋白的核酸结合域的氨基酸序列与其靶位点的核酸序列有恒定的对应关系。利用TAL的序列模块，可组装成特异结合任意DNA序列的模块化蛋白，从而达到靶向操作内源性基因的目的，它克服了ZFN方法不能识别任意目标基因序列，以及识别序列经常受上下游序列影响等问题，而具有ZFN相等或更好的灵活性，使基因操作变得更加简单方便。然而同样因为脱靶的问题，利用TALEN技术进行小鼠的基因修饰仍然无法取代传统技术。 ;.

转基因食品快速检测试纸的检测原理

转基因食品快速检测试纸的检测原理 一、转基因食品快速检测试纸简介概述： 托普云农转基因食品快速检测试纸用于快速检测种子或植物叶片等样品中的转基BtCry1Ab/1Ac，灵敏度为1%，整个检测过程只需要10-15分钟，适用于各类企业及检测机构。 大多数转基因植物有可能在耕种、收割、运输、储存与加工过程同时混入食品，不管是要对转基因食品贴示标签，亦或是对转基因与非转基因原料分别进行输送，转基因食品的原料和食品检测都是必不可少的；还有，要区别开来转基因和非转基因食品，对转基因食品进行进行标识，而食品中转基因含量的多少加以限制，更加需要有效准确的基因检测设备与良好的检测技术。 跟随着每个国家转基因标识制度纷纷相继建立和老百姓对转基因产品高度关注度的提高，老百姓对转基因技术的认知度与准确性相继提出了更加严格性的要求，而因此各个转基因检测技术与转基因检测设备更成为了大家研究的热点和探讨的话题，最近十几年来国外的科学研究一直处于前沿，为了促进我国转基因作物相关科技技术研发、推广发展，托普云农也致力于让老百姓对转基因检测技术的现状以及未来发展趋势有较为清晰和全面的认知了解！ 托普云农专业检测团队采用PCR技术，从分子水平检测农产品、加工原料、成品中的转基因成分，为食品生产加工和流通企业、检测机构、研究院所提供全面快速、简便经济的专业基因检测服务。为您食品的安全保驾护航！ 二、转基因食品快速检测试纸仅需30秒转基因现真身 在实验室里，托普云农工作人员演示转基因快速检测的过程。桌上的两个纸袋中，分别装有转基因和非转基因稻谷。工作人员各取数粒研磨成粉，分别装入两只试管，滴入缓冲液静置，待固体物质沉底后，取出2张转基因检测试纸分别蘸取上面的清液。30秒后，试纸呈现出不同的标记。 其中1张上、下两条检测线均呈现紫红色，为转基因样本，另外一张仅下检测线呈现紫红色，为非转基因。“试纸样式、检测原理、使用方法与早孕试纸类似。”试纸应用双抗体夹心免疫层析原理，如果样本中存在转基因抗原，与试纸上的转基因抗体结合就会使上、下检测线同时显色。 三、转基因食品快速检测试纸快速检测意义不凡 农业部印发《2015年农业转基因生物安全监管工作方案》，其中提到对水稻、玉米等进行重点监管，建议利用试纸条等快速检测方法，降低成本，扩大监测范

分辨转基因玉米的方法

分辨转基因玉米的方法 可能我们生活中有很多种转基因食品，多食用一些转基因食品可以有效地帮助我们补充体内的各种营养需求，可能很多人对于转基因玉米与非转基因玉米的区别方法还不是很了解，通常转基因玉米通常比非转基因玉米更大，简述一下分辨转基因玉米的方法吧。 转基因大米透明、有光泽，又长又亮，均匀好看，淘米水很清，容易与东北“长粒香”混淆，买的时候一定看清原产地;非转基因大米呈白色，不很齐整，淘米水浑浊。 转基因玉米，颗粒大，有光泽，甜脆，饱满，无虫眼，大小均匀，体形优美，头颗粒尾差不多;非转基因玉米相反。 这是指没有经过加工的粮食，如果是加工过的食品就只能碰运气了。转基因大豆、玉米、大米生产最多、分布最广，因此购买任何大豆、玉米和大米制品都要慎重，哪怕是超市卖的玉米窝头和豆腐，都要敬而远之。用转基因饲料和激素喂养的转基因禽畜，基本都是有腿的毒品了，像那些国际知名的快餐店，基本都是用的这类，尽量少吃或者不吃。坚决不买色拉油、玉米油、豆

油、菜籽油，即使是表明的非转基因大豆油，也不要相信，因为几乎所有超市都大量上市非转基因大豆油，但是这些非转基因大豆是魔法变出来的?目前花生油绝对可靠。 转基因固然可怕，但是还有另外一个很大的致命威胁被人们忽略了，那就是化肥农药，化肥农药的原材料基本上都是剧毒重金属之类，成品之中会有大量的剧毒物残留，之后会随着使用进入土地，进入农作物，进入我们的餐桌。现代的很多疾病其实都是这种剧毒残留物导致的，我们一直在慢性中毒! 以上介绍的分辨转基因玉米的方法可以帮助我们进行很好的分辨，大家都可以尝试一下，多吃一些转基因玉米对于我们自身的身体会产生很多的好处，可以有效地帮助我们提高自身的免疫力和抵抗力，降低出现疾病的几率。

转基因小鼠肿瘤模型的研究进展_百替生物

转基因小鼠肿瘤模型的研究进展 沈富毅，潘隽玮，郁嘉伦，余昂，侯晓骏 [摘要]动物模型在肿瘤病因的揭示，发病机理的探索以及治疗措施的评估中有着不可替代的重要作用。继常规转基因方法之后，可诱导表达转基因、基因打靶、条件性基因打靶以及基因捕获等技术的出现及其在肿瘤模型建立中的应用为我们提供了大量能较好模拟人体相应肿瘤的动物模型，极大地深化了我们对肿瘤生物学行为的认识，并有助于人们找到攻克肿瘤的办法。 [关键词]肿瘤，小鼠模型，转基因 肿瘤是一类严重危害人类健康及生命的重大疾病，动物模型在肿瘤病因、发病机理的揭示以及治疗措施的评价中发挥着不可替代的作用。肿瘤动物模型最早源自小鼠自发突变系或经致癌剂诱变而得，对它们的研究使我们对环境致癌物及其代谢活动机理有了一定的认识；但自发突变频率在自然状态下通常很低，而诱发模型也因其不可精确控制性而限制了它们的应用。在过去的二十多年里，随着人们对癌基因激活或抑癌基因失活在肿瘤发生发展中作用的认识日益深入，以及近年发展起来的小鼠生殖系引入可诱导或精细调控突变技术的应用，小鼠肿瘤模型的建立工作取得了突破性进展，本文就此作一简要综述。 1.常规转基因（transgenic） 上世纪80年代初发展起来的原核显微注射技术，使我们可以将外源DNA直接导入小鼠生殖系以构建转基因动物模型。目的基因在合适启动子驱动下表达，可赋予转基因动物新的表型，通过其表型分析可识别研究基因的功能。转基因动物技术在肿瘤研究中的主要作用就是建立转基因的肿瘤动物模型，该研究始于1974年，Jaenisch等1用显微注射法将多瘤病毒SV40的DNA导入到小鼠的囊胚（blastocyst）中，在子代小鼠的肝、肾组织中检测到了SV40的DNA。这一结果证明，将外源基因导入胚胎细胞中并实现整合是可能的。以后相继有人用同样的方法实现了外源基因向小鼠受精卵的转移，并能遗传给后代。在基因转移的方法上相继出现了逆转录病毒载体法、电脉冲法等。1985年，Adams2等用转基因方法首次构建了B淋巴瘤myc癌基因易位的小鼠模型，此后10年，陆续发展了针对各种类型恶性肿瘤的转基因小鼠研究。如今这项技术运用较为成熟的是，利用免疫球蛋白启动子调控的c-myc基因在转基因小鼠中的表达，导致早期淋巴瘤的发生3。在LTR/c-myc转基因小鼠模型中，利用哺乳类动物肿瘤病毒长末端重复序列（LTR）驱动c-myc广谱的表达，可造成多种组织形成肿瘤，如睾丸、乳腺和淋巴系。1984年Stewart把小鼠乳腺癌病毒（MMTV）的增强子与myc基因或ras基因连接,形成的MMTV-myc转基因小鼠和MMTV/V-Ha-Ras转基因小鼠都有高的乳腺癌发生率4。近年来，这项技术更多的运用于肿瘤发生机制的探索上。Li等5构建了乳腺癌WAP-Tag转基因小鼠模型，该模型由小鼠乳清酸蛋白WAP启动子和SV40大T抗原构建而成，可用于乳腺癌变过程中细胞的增殖与凋亡、DNA突变及修复机制等方面的研究。在慢性粒细胞性白血病(CML)的研究中，Heisterkamp等6构建的bcr-abl和crkl双转基因小鼠发病潜伏期及存活期均大大缩短，直接证明了crkl参与

转基因食品的检测方法材料

生命科学前沿讲座论文 转基因食品的检测方法 姓名：陈继款 系别：生命科学学院 专业：生物信息学 年级：2008级 学号：080567011 指导老师：薛李春 总成绩： 2010年07月02日

转基因食品的检测方法 自1983年世界第一例转基因作物问世以来，目前全球转基因农作物种植面积已达到5 000万hm2以上，大量的转基因农产品被直接或间接的制成人类的食品，呈迅猛发展的趋势。但是转基因作物作为一种新物种，其对人体健康、生态平衡是否具有危害还未确定。许多国家以立法或其他形式要求对转基因产品进行标记。我国于2001年5月23日颁布《农业转基因生物安全管理条例》，2002年3月20日开始实行的《农业转基因生物标识管理办法》规定，国家对农业转基因生物实行检验检疫和标识制度。世界各国均对转基因食品及其加工产品出具是否为转基因产品的认定报告。因此转基因产品的检测就显得尤为重要。转基因食品的检测主要从两个方面人手，一是核酸水平，即检测遗传物质中是否含有插入的外源基因；二是蛋白质水平，即通过插入外源基因表达的蛋白质产物或其功能进行检测，或者是检测插入外源基因对载体基因表达的影响，主要检测外源基因对插入位点附近基因影响及对其代谢产物的影响，由于该类型检测成本高，所需时间长，且被认为重要性较低，目前该类检测实际工作中较少涉及。本文分别对核酸和蛋白质两种水平上的检测方法进行综述。 1核酸水平 主要检测报告基因、启动子和终止子，是当前转基因产品检测的重要手段。椰菜花叶病毒(CaMV)35s启动子、胭脂碱合酶NOS终止子等10多种基因和基因片段广泛存在于转基因植物中，这就为检测转基因食品提供了便利。核酸水平的检测可以分为定性和定量两种。 1．1定性检测 1．1．1聚合酶链式反应(PCR) 1996年德国伯恩斯坦大学的Meyer Rolf等论证了PCR检测转基因食品的可能性。利用该方法在鉴定转基因抗除草剂大豆RoundUp ReadyTM Soybean(RRS)和转基因抗虫玉米系列标准品Btl76 Maxi maizer的实验中，可以检测到仅为0．5％转基因成分。Matsuoka等通过对7种转基因玉米转入的外源基因的序列分析，设计了14对检测该7种转基因玉米启动子、终止子和结构基因的引物，分别对转基因玉米、非转基因玉米、转基因大豆、非转基因大豆进行了PCR扩增检测，同时为检测所设计引物的特异性，还对其他作物如水稻、大麦、小麦等进行了PCR扩增，检验结果表明该方法能够快速有效地检测转基因玉米品种。每一次实验均需要设有阴性及阳性对照以确保实验结果可靠性。在样品采集及处理过程中也需要注意防止污染。 1．1．2多重PCR 多重PCR是常规PCR方法的改进，它是在同一个反应中同时扩增两个或多个目标基因序列。这种方法具有更大的可靠性和适应性，并且能降低检测成本。多重PCR可以同时针对几个靶位点进行PCR技术检测。V．T．Forte等利用其设计的多重PCR方法对转基因大豆和Bt玉米样品进行实际检测，结果表明该方法能够准确的检测食品中是否含有转基因成分，其检测结果可以精确到2％～0．1％的范围。Permingeat等仅用两

[转基因玉米的鉴别]转基因玉米的鉴别方法

[转基因玉米的鉴别]转基因玉米的鉴别方法 不知道大家对转基因食品有没有了解呢?今天，小编我向大家介绍介绍转基因玉米，认识转基因玉米对人体的危害，以及让大家懂得如何区分和辨别转基因玉米! 转基因玉米的鉴别如下： 判断转基因食品的几个标准： 1.个头。按照传统，西红柿也有一定个头的，比如：像大拇指头那么一点大的小西红柿绝对是转基因。再比如大豆，也叫黄豆，就是做豆腐，豆浆那种豆子，形状应该像动物内脏：腰的样子，有点扁，可现在的大豆，全是圆圆的、大不少、就像豌豆一样的大豆，产量很高，就是转基因。 2.色彩。与传统的不一样的绝对是转基因，比如彩色棉花、彩色辣椒。 3.产量。转基因作物一般在开始几年，其产量要比传统作物高不少。 4.季节。除了大棚蔬菜外，其它的反季节食品容易是转基因的。 5.害虫。凡是害虫喜欢光顾的作物就是没转基因的，凡是害虫害怕，也就是没有害虫，或很少害虫的作物，就是转基因。 现在的甜玉米品种虽然和几百年前的不完全相同，但它同样不是转基因的产物，而是在自然突变的甜玉米品种的基础之上，通过传统育种技术选育自交系、组配杂交种的办法培育出的新的甜玉米品种。 最近几年，与甜玉米有关的几个基因序列和与其关联的分子标记都已经被找到，育种家还可以依靠分子标记辅助选择技术来加快育种进程。此外，还有利用花药组织培养技术来加快隐性基因的纯合进程的选育方法，也开始受到育种家的重视。

这些育种技术并没有涉及到单个或少数几个结构和功能已知的目的基因的插入，也没有对基因进行修饰、敲除、屏蔽等的改变(这些是我们常说的转基因技术手段)。通过这些方法培育出来的甜玉米都不是转基因玉米。很多人因为甜玉米的甜味不同于普通玉米，就认为甜玉米是转基因技术培育的，这其实是没有想到玉米自己的基因突变也会产生不一样的性状。 转基因玉米的危害： 1.害虫无法被灭杀：转基因食品本身就存在害虫的基因，这些害虫会产生具有更高的防御性，不利于农药的灭杀。 2.影响发育：根据喂养小白鼠转基因食品的实验证明，转基因食品对小白鼠的繁殖和生长发育都带来了严重的影响。 3.营养问题：转基因食品通常存在很多营养问题，科学家们还认为，外来基因会以一种人类还不了解的方式去破坏食物中的营养成分。 感谢您的阅读！

转基因食品法律法规教学文案

转基因食品法律法规

国务院颁布的《农业转基因生物安全管理条例》及其三个配套的管理办法，即《农业转基因生物安全评价管理办法》、《农业转基因生物进口安全管理办法》和《农业转基因生物标识管理办法》。这些法规已明确规定，发放安全证书需要进行环境安全与食用安全检测，并对含有转基因成分的产品进行强制性标识。《农业转基因生物标识管理办法》规定:列入农业转基因生物标识目录的农业转基因生物，必须进行标识。该办法第六条规定了标识的标注方法：转基因动植物（含种子、种畜禽、水产苗种）和微生物，转基因动植物、微生物产品，含有转基因动植物、微生物或者其产品成份的种子、种畜禽、水产苗种、农药、兽药、肥料和添加剂等产品，直接标注转基因某某0；转基因农产品的直接加工品，标注为转基因某某，加工品（制成品）或者加工原料为转基因某某0；用农业转基因生物或用含有农业转基因生物成份的产品加工制成的产品，但最终销售产品中已不再含有或检测不出转基因成份的产品，标注为本产品为转基因某某加工制成，但本产品中已不再含有转基因成份或者标注本产品加工原料中有转基因某某，但本产品中已不再含有转基因成份。 （二）我国转基因食品安全法律规制的缺陷

纵观我国食品安全的现状，从2008年的“毒奶粉”事件，到今年的“地沟油”事件和“龙虾门”事件，食品安全问题始终十分突出。下面对我国食品安全法律规制的缺陷进行分析： 1、现有立法层次不高。国际上以美国、日本等为代表的很多国家都是针对转基因食品安全进行专门立法，而我国对于转基因生物技术颁布的多是行政法规和部门规章。这些法规大多从本部门的职责角度出发，对转基因技术及其产品进行管理，具有临时性和应急性，难以从整个生物安全角度出发，对转基因生物技术及其产品安全的监督管理作出全面系统规定。 制定专门的转基因食品安全法 我国的转基因食品安全立法与国外（如美国、欧盟、日本）的差距主要表现在我国缺乏转基因食品安全的专门立法。虽然有关转基因食品安全的有关规定可散见于《农业转基因生物安全管理条例》等，但适用于转基因食品安全的一些特殊规定，如转基因食品的检测标准，就与转基因生物安全有所不同。而且这种分散的部门法规在执行中也存在很大的阻力。笔者建议由我国立法机关制定专门的转基因食品安全法，将现行的《转基因食品卫生管理办法》从转基因食品安全角度进行修改和完善，成为对转基因食品安全的有关问题，作出专门规定的转基因食品安全法。在制定专门的转基因食品安全法时要注意借鉴国外的立法模式，建立完善的转基因食品安全评价、监控及标识制度，以有效保证转基因食品的安全。

23种经典客户转介绍秘诀

《23种转介绍秘诀》 秘诀1、意外惊喜 我有一个开店的学员，画了一些老顾客的漫画并且悬挂在墙上，最主要的是，顾客一点也不知情。直到他们看到自己非常好看的漫画，你可以想象，他们看到后会有多么惊喜。 那么，这些老顾客主动进行口碑传播，免费转介绍，就是自然而然的事情了。因为他们看到后，就已经迫不及待的要把这件趣事分享给他的朋友们、并且带到这家店来看一看了。 秘诀2、礼券模式 接下来，是一个非常了不起的营销秘诀，可以迅速暴增你的利润、提升销售额，并且还能让顾客心甘情愿、主动介绍朋友来你这里消费。 现在，我要把这个营销秘诀，免费分享给你，它就是“礼券”！ 首先，为你的产品或服务，创造出“礼券”。顾客不仅可以用钱买产品，更可以用“钱”买“礼券”。做法就是创造礼券，并且向你的顾客出售。比如，做一张面值500

元的券，可兑换原价500元的产品。而你除了卖产品，还可以卖券。 举个例子，卖大闸蟹的顾客，他们购买除了自己吃，更多的是以送礼为主。为了保证送礼的方便，以及产品的新鲜，就创造出卖券预售的营销模式，让顾客直接赠送“礼券”送礼，收礼人可直接凭券前来兑换产品。 “卖券”模式，核心的地方，就是转介绍的功能。收到“礼券”的顾客，大部分都是新顾客，并且，是主动前来购买消费的。 此方法，可适用于餐饮、食品、零售、烘焙····等多个行业，效果显著。 秘诀3、举办聚会 这可能是最欢乐的转介绍秘诀。 如何操作呢？就是为你的老顾客们，举办一个聚会，并且让他们带上他们的朋友。 比如，对于培训机构，可以举办一个生日会，或者演奏会（如少儿钢琴培训），对我们的学员说，可以带他们的朋友一起来参加聚会。为了更加有效果，你最好制作出聚会的入场券——凭此券方可入场。然后给每一个参加聚会的