Cocktail探针药物法在中药细胞色素P450酶代谢研究中的应用

Cocktail探针药物法在中药细胞色素P450酶代谢研究中的应用

刘高峰甄立棉

(哈尔滨医科大学附属第二医院药学部，黑龙江省高校重点实验室，黑龙江哈尔滨150086)

摘要：细胞色素P450是人体内最重要的药物代谢酶，中药可抑制或诱导某个或某些细胞色素P450亚酶，从而影响合用药物的代谢，导致药物相互作用发生。对于中药的代谢研究，是中药现代化研究的重要方面，并可提高中药使用的有效性和安全性，促进临床合理用药。Cocktail探针药物法能全面、真实地反映药物代谢的过程，其优点在于多个代谢途径的信息可在单个实验过程获得，并将个体间影响降至最低，此法省时、经济。Cocktail探针药物法用于中药的代谢研究还是一个比较新的研究领域，近几年开始有文献报道。本文介绍了Cocktail法在中药细胞色素P450酶代谢研究中的国内外应用进展，以期系统了解并指导该领域的研究。

关键词：细胞色素P450；中药；Cocktail探针药物法；代谢；研究进展

Review on the effects of Traditional Chinese Medicines on cytochrome P450 system by Cocktail

probe drugs

LIU Gao-feng ZHEN Li-mian

(Department of Pharmacy, the Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, Key Laboratory of University in Heilongjiang Province, Harbin 150086, China) [ABSTRACT] Cytochrome P450 are the most important enzymes for drug metabolism. Some Traditional Chinese Medicines (TCM) can reduce or induce one or some cytochrome P450, and therefore affect combined drug metabolism and result in drug interactions.Studies on metabolism of TCM could enhance effectiveness and safety of the drug use, and promote reasonable clinical use for drugs, meanwhile accelerate the modern study process of TCM. Cocktail probe drugs can reflect the process of drug metabolism wholly and actually. It can gain more information of several metabolic pathways in only one experiment. It can also reduce the interindividual variation to the lowest. It can save time and money. Studies development of the effects of TCM on cytochrome P450 System by Cocktail are introduced and summed up in this paper, in order to systematically understand and guide studies in this field.

[KEY WORDS] cytochrome P450（CYP450）；Traditional Chinese Medicine；Cocktail probe drugs；metabolism；study development

1 Cocktail探针药物法的应用特点

细胞色素P450酶系(CYP450)是人体内最重要的药物代谢酶，与药物代谢密切相关的同工酶有CYP1A2,CYP2A6,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1和CYP3A4[1]。药物可显著影响药酶细胞色素P450的活性，使其诱导或抑制，并加速或减缓底物和其他药物代谢，这些构成了药物体内过程和药物相互作用的主要机制[2]。

探针药物法指经CYP450代谢的药物,以其代谢物和原型药的比例或速率衡量酶代谢能力变化的方法。两种及两种以上经不同酶代谢的药物同时给予的方法称为“Cocktail”探针药物法,该方法可用于体内外测定CYP450 酶的活性[3]。“Cocktail”探针药物法可以采用探针药物的清除率或者是探针药物与代谢产物在尿中、血中和唾液中的浓度比值等指标来评价酶的活性，采用液相色谱或者液相色谱质谱串联法等进行测定[3]。Cocktail 法的优点在于多个代谢途径的信息可在单个实验过程获得，并将个体间影响降至最低，此法省时、经济。Cocktail”法摒弃了体外研究中实验模型与体内真实环境差异大、不能较好反应体内代谢全过程等的缺点，能全面、真实地反应药物代谢的过程[4]。

现就国内外Cocktail探针药物法在中药CYP450代谢研究中的应用进行综述,为该领域的研究工作提供参考。

2 用Cocktail法研究中药有效成分对CYP450的影响（见表1）

2.1 倍半萜内脂类

Sara Asimus[5]等研究了有关青蒿素类药物对不同细胞色素P450酶的影响，用咖啡因，香豆素，美芬妥英，美托洛尔，氯唑沙宗和咪唑安定6种探针药物分别考查青蒿素等药物对CYP1A2, CYP2A6，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1和CYP3A的活性的影响。结果显示，二氢青蒿素、蒿甲醚对CYP1A2有抑制作用，青蒿素第1天使CYP1A2活性下降，第5天使CYP1A2活性增加；上述几种青蒿素类药物对CYP2A6的活性均无影响；青蒿素、蒿甲醚使CYP2C19的活性增加；二氢青蒿素对CYP2D6有抑制作用，青蒿素第1天使CYP2D6活性下降，第5天使CYP2D6活性增加；青蒿素对CYP2E1有抑制作用；上述几种青蒿素类药物均对CYP3A有诱导作用。

2.2 生物碱类

Yong-Mei Yao[6]等利用Cocktail法对青藤碱的代谢进行了研究。用6个探针药物（咖啡因CYP1A2、咪达唑仑CYP3A4、氯唑沙宗CYP2E1、S-美芬妥英CYP2C19、美托洛尔CYP2D6、甲苯磺丁脲CYP2C9）进行人体外研究,用5个探针药物（咖啡因CYP1A2、咪达唑仑CYP3A4、氯唑沙宗CYP2E1、S-美芬妥英CYP2C19、美托洛尔CYP2D6）进行人体内研究，发现青藤碱使CYP2C19的活性降低，对其它CYP450酶无显著影响。

2.3 黄酮类

H-H.Sherry Chow [7]等用Cocktail法考查了绿茶儿茶素对CYP450的影响，健康志愿者经过四周的清洗期后，给予4个探针药物—咖啡因CYP1A2、右美沙芬CYP2D6、氯沙坦CYP2C9和丁螺环酮CYP3A4，再进行四周绿茶儿茶素的干预试验，结果发现绿茶儿茶素的干预并没有改变CYP1A2，CYP12D6， CYP12C9的活性，却使CYP3A4活性有稍微的降低。

2.4 皂苷类

刘昌孝院士[4]等使用4种探针药物—氨苯矾、咖啡因、氯哇沙宗和奥美拉唑，评价人参皂苷Re对大鼠肝细胞色素氧化酶P450亚型CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19的诱导或抑制作用。分两组进行:(l)大鼠尾静脉同时注射探针药物氨苯砜（CYP3A4）、咖啡因（CYP1A2）。(2)大鼠尾静脉同时注射探针药物氯唑沙宗（CYP2E1）、奥美拉唑（CYP2C19）。结果表明人参皂苷Re对大鼠肝细胞色素氧化酶P450亚型CYP1A2、CYP3A4有诱导作用，对CYP2E1、CYP2C19无影响。

表1 Cocktail法研究中药有效成分对CYP450的影响

中药有效成分 Cocktail法中CYP探针药物对CYP各亚型的影响

倍半萜内酯类

青蒿素

二氢青蒿素蒿甲醚

青蒿琥酯

生物碱类

青藤碱

黄酮类化合物绿茶儿茶素

皂苷类

人参皂苷Re 1A2 2A6 2C19 2D6 2E1 3A

咖啡因香豆素美芬妥英美托洛尔氯唑沙宗咪唑安定

1A2 2C9 2C19 2D6 2E1 3A4 (体外)

咖啡因甲苯磺丁脲 S-美芬妥英美托洛尔氯唑沙宗咪达唑仑

1A2 2C192D6 2E13A4 (体内)

咖啡因 S-美芬妥英美托洛尔氯唑沙宗咪达唑仑

1A2 2C9 2D6 3A4

咖啡因氯沙坦右美沙芬丁螺环酮

（1） 1A2 3A4

咖啡因氨苯砜

（2）2C19 2E1

奥美拉唑氯唑沙宗

1A2 2A6 2C19 2D6 2E1 3A

+ 0 + + - +

- 0 0 - 0 +

- 0 + 0 0 +

0 0 0 0 0 +

1A2 2C9 2C19 2D6 2E1 3A4 (体外)

0 0 - 0 0 0

1A2 2C192D6 2E13A4 (体内)

0 - 0 0 0

1A2 2C9 2D6 3A4

0 0 0 -

（1）1A2 3A4

+ +

（2）2C19 2E1

0 0

注：0药物对CYP亚型无影响. + 药物对CYP亚型有诱导作用. - 药物对CYP亚型有抑制作用

3 用Cocktail 法研究中药提取物对CYP450的影响（见表2）

3.1 同一种Cocktail 法对几种中药提取物分别进行代谢研究

Matthias Unger 等[8]用Cocktail 法在体外检测中药提取物对6种主要的CYP450酶的抑制作用。CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4酶的底物经混合，孵化，最终代谢产物用LC/LC/MS 定量。Cocktail 探针药物包括他克林(CYP1A2)、紫杉醇(CYP2C8)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、米帕明(CYP2C19)、右美沙芬(CYP2D6)和咪达唑仑 (CYP3A4)。

钩果草提取物对CYP1A2和2D6的抑制活性相对较低(IC 50>900μg/mL)，对CYP2C8/9/19和3A4

的抑制范围是IC 50100～350μg/mL 。龙牙草提取物的IC 50值在低于100μg/mL 时对CYP1A2/2C9有

较强的抑制活性，100～200μg/mL 时对CYP2C8/19/3A4有较强抑制活性。葡萄柚汁在体外对CYP450的抑制活性相对于体内较弱(IC 50>400μg/mL)。红三叶草提取物IC 50值在100～500μg/mL 时可降低

各种CYP450酶的活性。胡椒属薄荷油在500μg/mL 时会使各种CYP450酶（CYP3A4除外）的活性降低到20%。桉油对CYP450的抑制活性比薄荷油低，IC 50值范围是大于100μg/mL ，对CYP3A4的

抑制活性相对较强。卡法根提取物抑制所有CYP450的活性，IC 50值在20～100μg/mL 时抑制

CYP1A2/2C9/2C19的活性，在100～500μg/mL 时抑制CYP2C8/2D6/3A4的活性。

3.2 姜黄

扈金萍等[9]通过对大鼠进行体外实验来价姜黄提取液对CYP450的影响，Cocktail 探针药物包括咖啡因（CYP1A2）、氨苯砜（CYP3A4）、氯唑沙宗(CYP2E1)，结果显示姜黄提取液对大鼠CYP1A2和CYP2E1有抑制作用，但对大鼠CYP3A4的影响不显著。

3.3 连翘

闫淑莲[10]等用Cocktail 法考查了连翘提取液对CYP450酶的影响，Cocktail 探针药物包括咖啡因、氨苯砜、氯唑沙宗，分别检测CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1的活性。结果显示连翘提取液对大鼠CYP1A2有抑制作用，对大鼠CYP3A4有诱导作用，但对大鼠CYP2E1的影响不显著。

3.4 圣·约翰草（即贯叶连翘）

Zaiqi Wang 等[11]用Cocktail 法检测了圣·约翰草提取物体内对CYP450活性的影响研究，Cocktail 探针药物包括：甲苯磺丁脲（CYP2C9）、咖啡因（CYP1A2）、右美沙芬（CYP2D6）、口服咪达唑仑（肠道壁和肝脏CYP3A ）和静脉注射咪达唑仑（肝CYP3A ）。结果显示，短期内给予圣·约翰草提取物并没有影响CYP450的活性，长期摄入圣·约翰草提取物会对肠道壁CYP3A 有显著的选择性诱导作用，圣· 约翰草提取物不改变CYP2C9、CYP1A2或CYP2D6的活性。

表2 Cocktail 法研究中药提取物对CYP450的影响

中药提取物 Cocktail 法中CYP 探针药物 对CYP 各亚型的影响

钩果草提取物

龙牙草提取物

葡萄柚汁

红三叶草提取物

胡椒属薄荷油

桉油

卡法根提取物

1A2 2C8 2C9 2C19 2D6 3A4 他克林 紫杉醇 甲苯磺丁脲 米帕明 右美沙芬 咪达唑仑 1A2 2C8 2C9 2C19 2D6 3A4 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 姜黄提取液 1A2 2E1 3A4

咖啡因 氯唑沙宗 氨苯砜

1A2 2E1 3A4 - - 0 连翘提取液 1A2 2E1 3A4

咖啡因 氯唑沙宗 氨苯砜

1A2 2E1 3A4 - 0 + 圣·约翰草提取物 2C9 1A2 2D6 3A(肠壁/肝) 3A(肝) 甲苯磺丁脲 咖啡因 右美沙芬 咪达唑仑(口服) 咪达唑仑(静注) 1A2 2D6 2C9 3A

0 0 0 +（长期）

注：0药物对CYP 亚型无影响. + 药物对CYP 亚型有诱导作用. - 药物对CYP 亚型有抑制作用

4 讨论

目前欧美各国己经把CYP450及其同功酶的测定用于新药的筛选及代谢研究，并把它列为新药申报必须进行的一项试验。我国在该领域的研究还处于探索阶段，但该研究的重要性和意义已逐渐被认识，在我国《新药审批办法》和《药品注册管理办法》中，已经要求新药研发必须进行药物代谢酶的研究。另外，国家在《化学药物非临床药代动力学研究指导原则》中指出，对于创新药物,应观察药物对药物代谢酶,特别是细胞色素P450 同工酶的诱导或抑制作用。因此,简便快速的“鸡尾酒法”将成为一个创新药物临床前药物代谢研究重要的和常用的手段。

Cocktail探针药物法在国外应用的较多，主要用于西药的研究。用Cocktail法研究中药的代谢，国内外报道均比较少，是一个比较新的研究领域，目前的报道尚仅限于中药单一有效成分或单一中药提取物，对于复方中药的研究尚属于空白。由于Cocktail法在研究药物代谢方面的优势，若广泛用于中药的代谢研究，必将促进中药基础理论的研究和中药的现代化研究，同时，对于中药在临床上的合理应用，提高联合用药的安全性和有效性具有重要的实际意义。

参考文献

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on human cytochrome P450 activity[J].Clin Pharmacol Ther,2001,70(4):317-326.

荧光分析法基本概念

紫外可见吸收光谱一紫外吸收光谱分析 基于物质对200-800nm光谱区辐射的吸收特性而建立起来的分析测定方法称为紫外-可见吸收光谱法或紫外-可见分光光度法。它属于分子吸收光谱，是由于分子内电子跃迁而产生的光谱。 紫外光谱的产生 物质分子的能量具有量子化的特征(即物质分子的能量具有不连续的特征) 。一个分子有一系列能级，其中包括许多电子能级，分子振动能级以及分子转动能级。分子吸收特定的波长的光而产生吸收光谱 分子的紫外吸收光谱是由于分子中价电子的跃迁而产生的，从化学键的性质上考虑，与电子光谱有关的主要是三种电子： (1)形成单键的c电子；(2)形成双键的n电子；(3) 分子中非键电子即n电子。 化合物不同，所含的价电子类型不同，所产生的电子跃迁类型不同，根据分子轨道理论，分子中这三种电子能级的高低次序大致是： (c)v(n)v( n) v(n * )v( c * ) c，冗是成键轨道，n是非键轨道， c* , n *是反键轨道 由于电子能级间跃迁的同时总伴随有振动和转动能级间的跃迁。即电子光谱中总包含 有振动能级和转动能级间跃迁产生的若干谱线而呈现宽谱带。

紫外光谱的表示方法

紫外光谱图是由横坐标、纵坐标和吸收曲线组成的 横坐标表示吸收光的波长，用nm （纳米）为单位。 纵坐标表示吸收光的吸收强度，可以用 A （吸光度）、T （透射比或透光率或透过率）、 1-T （吸收率）、?（吸收系数）中的任何一个来表示。 吸收曲线表示化合物的紫外吸收情况。曲线最大吸收峰的横坐标为该吸收峰的位置, 纵坐标为它的吸收强度。 250 A /nm 翠腔的紫外光谨图 四、紫外光 谱中常用的几个术语 1. 发色基团和助色基团 发色基团：是能导致化合物在紫外及可见光区产 生吸收的基团，不论是否显示颜色 都称为发色基团。一般不饱和的基团都是发色基团（ C=C C=O N=N 、三键、苯环等） 200 300

分子荧光光谱法实验报告

分子荧光光谱法实验报告 一、实验目的 1.掌握荧光光度计的基本原理及使用。 2.了解荧光分光光度计的构造和各组成部分的作用。 3.掌握分子荧光光度计分析物质的特征荧光光谱：激发光谱、发射光谱的测定方法。 4.了解影响荧光产生的几个主要因素。 5.学会运用分子荧光光谱法对物质进行定性和定量分析。 二、实验原理 原子外层电子吸收光子后，由基态跃迁到激发态，再回到较低能级或者基态时，发射出一定波长的辐射，称为原子荧光。对于分子的能级激发态称为分子荧光，平时所说的荧光指分子荧光。 具有不饱和基团的基态分子经光照射后，价电子跃迁产生荧光，是当电子从第一激发单重态S1的最低振动能级回到基态S0各振动能级所产生的光辐射。 (1)激发光谱 是指发光的某一谱线或谱带的强度随激发光波长(或频率)变化的曲线。横坐标为激发光波长，纵坐标为发光相对强度。 激发光谱反映不同波长的光激发材料产生发光的效果。即表示发光的某一谱线或谱带可以被什么波长的光激发、激发的本领是高还是低；也表示用不同波长的光激发材料时，使材料发出某一波长光的效

率。荧光为光致发光，合适的激发光波长需根据激发光谱确定——激发光谱是在固定荧光波长下，测量荧光体的荧光强度随激发波长变化的光谱。获得方法：先把第二单色器的波长固定，使测定的λem不变，改变第一单色器波长，让不同波长的光照在荧光物质上，测定它的荧光强度，以I为纵坐标，λex为横坐标所得图谱即荧光物质的激发光谱，从曲线上找出λex，，实际上选波长较长的高波长峰。 (2)发射光谱 是指发光的能量按波长或频率的分布。通常实验测量的是发光的相对能量。发射光谱中，横坐标为波长，纵坐标为发光相对强度。 发射光谱常分为带谱和线谱，有时也会出现既有带谱、又有线谱的情况。发射光谱的获得方法：先把第一单色器的波长固定，使激发的λex不变，改变第二单色器波长，让不同波长的光扫描，测定它的发光强度，以I为纵坐标，λem为横坐标得图谱即荧光物质的发射光谱;从曲线上找出最大的λem。 (3)荧光强度与荧光物质浓度的关系 用强度为I0的入射光，照射到液池内的荧光物质时，产生荧光，荧光强度If用仪器测得，在荧光浓度很稀(A 三、实验试剂和仪器试剂：罗丹明B乙醇溶液；1-萘酚乙醇溶液；3,3’-Diethyloxadicarbocyanine iodide：标准溶液，10μg/ml, 20μg/ml,30μg/ml,40μg/ml和未知浓度；蒸馏水；乙 醇。 仪器：Fluoromax-4荧光分光光度计；1cm比色皿；

荧光分析法练习题82675

第十二章荧光分析法（药学） 一、A型题 1.若需测定生物试样中的微量氨基酸应选用下述哪种分析方法（）。 A、荧光光度法 B、磷光光度法 C、化学发光法 D、X荧光光谱法 E、原子荧光光谱法 答案：A 2.分子荧光分析比紫外-可见分光光度法选择性高的原因是（）。 A、分子荧光光谱为线状光谱，而分子吸收光谱为带状光谱 B、能发射荧光的物质比较少 C、荧光波长比相应的吸收波长稍长 D、荧光光度计有两个单色器，可以更好地消除组分间的相互干扰 E、分子荧光分析线性范围更宽 答案：B 3荧光量子效率是指（）。 A、荧光强度与吸收光强度之比 B、发射荧光的量子数与吸收激发光的量子数之比 C、发射荧光的分子数与物质的总分子数之比 D、激发态的分子数与基态的分子数之比 E、物质的总分子数与吸收激发光的分子数之比 答案：B 4.激发光波长和强度固定后，荧光强度与荧光波长的关系曲线称为（）。 A、吸收光谱 B、激发光谱

C、荧光光谱 D、工作曲线 E、标准工作曲线 答案：C 5.荧光波长固定后，荧光强度与激发光波长的关系曲线称为（）。 A、吸收光谱 B、激发光谱 C、荧光光谱 D、工作曲线 E、标准工作曲线 答案：B 6.一种物质能否发出荧光主要取决于（）。 A、分子结构 B、激发光的波长 C、温度 D、溶剂的极性 E、激发光的强度 答案：A 7.下列结构中荧光效率最高的物质是（）。 A、苯酚 B、苯 C、硝基苯 D、苯甲酸 E、碘苯 答案：A

8.下列因素会导致荧光效率下降的有（）。 A、激发光强度下降 B、溶剂极性变小 C、温度下降 D、溶剂中含有卤素离子 E、激发光强度增大 答案：D 9.为使荧光强度和荧光物质溶液的浓度成正比，必须使（）。 A、激发光足够强 B、吸光系数足够大 C、试液浓度足够稀 D、仪器灵敏度足够高 E、仪器选择性足够好 答案：C 10.在测定物质的荧光强度时，荧光标准溶液的作用是（）。 A、用做调整仪器的零点 B、用做参比溶液 C、用做定量标准 D、用做荧光测定的标度 E、以上都不是 答案：D 11.荧光分光光度计与分光光度计的主要区别在于（）。 A、光源 B、光路 C、单色器 D、检测器

第十一章荧光分析法复习过程

第十一章 荧光分析法 、选择题 1．荧光分析法是通过测定 ( ) 而达到对物质的定性或定量分析。 A 、激发光 D 、散射光 2．下面 ( )分析方法不属于分子发射光谱法。 3．荧光发射光谱含有 ( )个发射带。 A 、 1 B 、 2 C 、 3 4．下列关于荧光光谱的叙述错误的是( ) A 、 荧光光谱的形状与激发光的波长无关 B 、 荧光光谱与激发光谱一般是对称镜像 C 、 荧光光谱属于分子的受激发射光谱 D 、 荧光激发射光谱与紫外吸收光谱重合 5．下列叙述错误的是( ) A 、 荧光光谱的最长波长和激发光谱的最长波长相对应 B 、 荧光光谱的最短波长和激发光谱的最长波长相对应 C 、 荧光光谱的形状与激发光波长无关 D 、 荧光波长大于激发光波长 6．激发态分子经过振动弛豫回到第一电子激发态的最低振动能级后，经系间窜越转移至激 发三重态， 再经振动弛豫降至三重态的最低振动能级， 然后发出光辐射跃迁至基态的各个振 动能级，这种光辐射称为 ( )。 A 、分子荧光 B 、分子磷光 C 、瑞利散射光 D 、拉曼散射光 7．关于振动弛豫，下列叙述中错误的是 ( )。 A 、振动弛豫只能在同一电子能级内进行 B 、振动弛豫属于无辐射跃迁 C 、通过振动弛豫可使处于不同电子激发态的分子均返回到第一电子激发态的最低振动 能级 D 、振动弛豫是产生 Stokes 位移的原因之一 8．荧光寿命指的是 ( )。 A 、 从激发光开始照射到发射荧光的时间 B 、 受激分子从第一电子激发态的最低振动能级返回到基态所需的时间 C 、 从除去激发光光源至分子的荧光熄灭所需的时间 D 、 除去激发光源后，分子的荧光强度降低到激发时最大荧光强度的 1/e 所需的时间 9．关于荧光效率，下面叙述不正确的是( ) A 、 具有长共轭的 n~ ；跃迁的物质具有较大的荧光效率 B 、 分子的刚性和共平面性越大，荧光效率越大 C 、 顺式异构体的荧光效率大于反式异构体 学习资料 D 、共轭体系上的取代基不同，对荧光效率的影响不同 10．采用下列 ( )措施可使物质的荧光效率提高。 学习资料 B 、磷光 C 、发射光 A 、紫外一可见分光光度法 C 、磷光分析法 B 、荧光分析法 D 、化学发光分析法 D 、不一定

分子荧光分析法基本原理

分子荧光分析法基本原理 一. 分子荧光的发生过程 （一）分子的激发态——单线激发态和三线激发态 大多数分子含有偶数电子，在基态时，这些电子成对地存在于各个原子或分子轨道中，成对自旋，方向相反，电子净自旋等于零：S=?+(-?)=0，其多重性M=2S+1=1 (M 为磁量子数)，因此，分子是抗（反）磁性的，其能级不受外界磁场影响而分裂，称“单线态”； 图1 单线基态（A）、单线激发态（B）和三线激发态（C） 当基态分子的一个成对电子吸收光辐射后，被激发跃迁到能量较高的轨道上，通常它的自旋方向不改变，即 ?S=0，则激发态仍是单线态，即“单线(重)激发态”； 如果电子在跃迁过程中，还伴随着自旋方向的改变，这时便具有两个自旋不配对的电子，电子净自旋不等于零，而等于1： S=1/2+1/2=1 其多重性： M=2S+1=3 即分子在磁场中受到影响而产生能级分裂，这种受激态称为“三线(重)激发态”； “三线激发态” 比“单线激发态” 能量稍低。但由于电子自旋方向的改变在光谱学上一般是禁阻的，即跃迁几率非常小，只相当于单线态→单线态过程的 10-6~10-7。 （二）分子去活化过程及荧光的发生： （一个分子的外层电子能级包括S0（基态）和各激发态S1，S2，…..，T1…..，每个电子能级又包括一系列能量非常接近的振动能级） 处于激发态的分子不稳定，在较短的时间内可通过不同途径释放多余的能量（辐射或非辐射跃迁）回到激态，这个过程称为“去活化过程”，这些途径为： 1. 振动弛豫：在溶液中，处于激发态的溶质分子与溶剂分子间发生碰撞，把一部分能量以热的形式迅速传递给溶剂分子（环境），在10-11~10-13 秒时间回到同一电子激发态的最低振动能级，这一过程称为振动弛豫。

2019年山东省潍坊市高考生物二模试卷(解析版)

2019年山东省潍坊市高考生物二模试卷 一、单选题（本大题共6小题，共36.0分） 1.下列关于细胞结构及功能的叙述，正确的是（） A. 原核细胞的核仁可参与核糖体的形成 B. 纤维素组成的细胞骨架可维持细胞形态 C. 线粒体与细胞能量代谢密切相关，可完成有氧呼吸全过程 D. 细胞膜与高尔基体产生的囊泡融合进行成分的更新 2.对哺乳动物性腺某一细胞的一对同源染色体上未经复制的DNA进行放射性同位素标记，然后在普通培 养基上经分裂后产生4个子细胞。下列叙述正确的是（） A. 若4个子细胞带有放射性，则一定进行减数分裂 B. 若1个子细胞不带有放射性，则一定进行有丝分裂 C. 若进行有丝分裂，则中期带有放射性的同源染色体分别排列在赤道板两侧 D. 若进行减数分裂，则第一次分裂后期移向细胞一极的一个染色体组中有两条染色体带有放射性 3.细胞中的酶与代谢密切相关。某同学进行了如下操作：在一只U型管底部中央放置了不允许二糖通过 的半透膜（对单糖的通透性未知）；将U形管左侧和右侧分别倒入等量的质量分数相等的蔗糖溶液和麦芽糖溶液；在U形管的两侧同时滴入等量的麦芽糖酶溶液；观察右侧液面的变化情况。下列叙述错误的是（） A. 液面的变化情况取决于半透膜的通透性 B. 液面可能会一直升高至一定高度后停止 C. 液面可能先下降后再上升至一定高度停止 D. 该实验可用来验证酶的专一性 4.下列关于植物激素调节的叙述，错误的是（） A. 生长素均通过极性运输作用于靶细胞、靶器官 B. 光照、温度等环境因子可引起植物激素的合成，进而调节基因组的表达 C. 植物的生长发育过程依赖多种激素相互作用共同调节 D. 植物激素不直接参与细胞内的代谢活动 5.基因转录出的初始RNA，要经过加工才能与核糖体结合发挥作用：初始RNA经不同方式的剪切可被 加工成翻译不同蛋白质的mRNA；某些初始RNA的剪切过程需要非蛋白质类的酶参与。而且大多数真核细胞mRNA只在个体发育的某一阶段合成，发挥完作用后以不同的速度被降解。下列相关叙述错误的是（） A. 一个基因可参与生物体多个性状的控制 B. 催化某些初始RNA剪切过程的酶是通过转录过程合成的 C. 初始RNA的剪切、加工在是核糖体内完成的 D. mRNA的合成与降解是细胞分化的基础，可促进个体发育 6.下列有关生物变异和进化的叙述，错误的是（） A. 基因型为Aa的个体自交后代出现性状分离与基因重组无关 B. 原核生物的可遗传变异只能来源于基因突变 C. 自然选择使种群的基因频率发生定向改变 D. 三倍体无子西瓜的培育过程说明，二倍体西瓜和四倍体西瓜存在生殖隔离 二、探究题（本大题共6小题，共59.0分） 7.某科技小组的同学，欲测算农田中某种农作物在晴朗的白天6～9时有机物的制造量，进行了如下操作： 在农田中随机选取多个样方；用透明玻璃罩罩住样方内所有植株形成密闭气室，并与二氧化碳传感器相连；在该时间段内连续采集数据；然后将各样方的玻璃罩用黑布罩住，继续采集数据三小时。请回答下列问题： （1）6?9时，影响光合作用强度的环境因素主要是______，此时间段内测得罩内CO2浓度先升高后下降，CO2浓度升高的原因是______。 （2）6?9时，罩内CO2浓度最高时，叶肉细胞内光合作用强度______ （填“大于”或“小于”或“等于”）呼吸作用强度，原因是______。 （3）若该小组测得6?9时各罩内CO2平均减少量为a，黑暗处理3小时各罩内CO2平均增加量为b，则______表示6?9时样方内该农作物固定CO2的总量，进而可推算有机物的制造量。有同学分析后认为该结果与实际会有较大误差。请你从影响植物生理作用的主要非生物因素角度分析，造成误差的原因主要是______。 8.人体体温的相对恒定对于维持机体正常的生命活动至关重要。临床常见的发烧也称发热，原因是致热 原直接作用于体温调节中枢造成机体功能紊乱，或各种原因引起的产热过多、散热减少，导致体温升高超过正常范围的情形。请根据所学知识回答问题： （1）极地工作人员与高温车间工作人员相比，体温仍能维持稳定，主要是在体温调节中枢的协调下，______细胞氧化放能、产热增多的结果，同时体内______ （填激素名称）的含量会明显升高。 （2）发热的原因有多种，如感染性细菌侵入人体后直接被吞噬细胞吞噬灭活的______免疫过程；结核杆菌、麻风杆菌等胞内寄生菌和病毒侵入细胞后的______免疫过程等均能引发人体不同程度的病理性发热。 （3）若人体患系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等______病，及HIV病毒攻击T细胞均能引起发热现象。对后者的治疗往往需要临床注射从小牛胸腺中提取的胸腺素，请分析胸腺素的作用是______。 （4）正常人一定程度的病理性发热对机体是______ （填“有利”或“不利”）的。发热严重者会出现四肢酸痛、头晕、抽搐等症状，这是由于体温过高影响了______使机体代谢活动发生紊乱所致。 9.在我国长江三角洲、珠江三角洲一带的水乡，能见到一种基于“桑基鱼塘”的生态农业模式，如下图所 示。请回答相关问题： （1）该生态农业模式通过把多个生产系统优化组合，有机整合成为一个新的高效生态系统，这与单个生态系统（如鱼塘生态系统）相比，优点是______。据图分析，该生态系统中可做为第二营养级的生物有______。 （2）输入鱼塘生态系统的能量来自______；图中塘泥可以为桑树和甘蔗生长提供营养物质的原因是______。 （3）该生态系统受到少量未经处理的生活、农业和工业生产废水（含有化肥、农药、普通洗衣粉、石油、高含硫煤碳）污染时，能通过______等方式消除污染，污染严重时可使该鱼塘发生“水华”现象，上述废水中能促使“水华”现象发生的物质是______。 10.某小组利用某种雌雄异株（XY型性别决定）的高等植物进行杂交实验，杂交涉及的性状分别是：花色 （红、粉红、白）、叶型（宽叶、窄叶）、籽粒颜色（有色、无色）、籽粒发育（饱满、不饱满）。 实验结果如下表：

荧光分析法实验报告

荧光分光光度法 一、 实验目的 1、学习荧光分光光度法的基本原理； 2、学习荧光光谱仪的结构和操作方法； 3、学习激发光谱、发射光谱曲线的绘制方法。 二、 实验原理 荧光分光光度法（fluorescence spectroscopy, FS ）通常又叫荧光分析法，具有灵敏度高、选择性强、所需样品量少等特点，已成为一种重要的痕量分析技术。荧光（fluorescence ）是分子吸收了较短波长的光（通常是紫外光和可见光），在很短的时间内发射出比照射光波长较长的光。由此可见，荧光是一种光致发光。 任何荧光物质都有两个特征光谱，即激发光谱（excitation spectrum ）和发射光谱（emission spectrum ）或称荧光光谱（fluorescence spectrum ）。激发光谱表示不同激发波长的辐射引起物质发射某一波长荧光的相对效率。绘制激发光谱时，将发射单色器固定在某一波长，通过激发单色器扫描，以不同波长的入射光激发荧光物质，记录荧光强度对激发波长的关系曲线，即为激发光谱，其形状与吸收光谱极为相似。荧光光谱表示在所发射的荧光中各种波长的相对强度。绘制荧光光谱时，使激发光的波长和强度保持不变，通过发射单色器扫描以检测各种波长下相应的荧光强度，记录荧光强度对发射波长的关系曲线，即为荧光光谱。激发光谱和荧光光谱可用于鉴别荧光物质，而且是选择测定波长的依据。 荧光强度（F ）是表征荧光发射的相对强弱的物理量。对于某一荧光物质的稀溶液，在一定波长和一定强度的入射光照射下，当液层的厚度不变时，所发生的荧光强度和该溶液的浓度成正比，即 该式即荧光分光光度法定量分析的依据。使用时要注意该关系式只适用于稀溶液。 三、 仪器与试剂 F-4500荧光光谱仪；比色管（10mL ）；牛血清白蛋白（BSA ） 四、 实验内容 1、 开机准备：接通电源，启动电脑。打开光谱仪主机电源，预热15分钟。 2、 运行FL solution 软件，设定检测方法和测量参数： EX （激发波长）：280nm EM （发射波长）：340nm EX 扫描范围：210nm ～330nm EM 扫描范围：290nm ～450nm EX 缝宽：2.5nm ，EM 缝宽：2.5nm 扫描速度：240nm/min PMT 电压：700V 3、 激发光谱和发射光谱的绘制： 先固定激发波长为280nm ，在290～450nm 测定荧光强度，获得溶液的发射光谱，在343nm 附近为最大发射波长λem ；再固定发射波长为λem ，测定激发波长为200nm ～λem 时的荧光强度，获得溶液的激发光谱，在280nm 附近为最大激发波长λex 。 4、 退出FL solution 软件，关闭光谱仪主机电源，关闭计算机。 Kc F

药物分析实验报告

实验四苯甲酸钠的含量测定 一、目的 掌握双相滴定法测定苯甲酸钠含量的原理和操作 二、操作 取本品1.5g，精密称定，置分液漏斗中，加水约25mL，乙醚50mL和甲基橙指示液2滴，用盐酸滴定液(0.5mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5mL洗涤，洗涤液并入锥形瓶中，加乙醚20mL，继续用盐酸滴定液(0.5mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，即得，每1mL的盐酸滴定液(0.5mol/L)相当于72.06mg的C7H5O2Na。 本品按干燥品计算，含C7H5O2Na不得少于99.0％ 三、说明 1.苯甲酸钠为有机酸的碱金属盐，显碱性，可用盐酸标准液滴定。 COO Na +H C l COOH +N aC l 在水溶液中滴定时，由于碱性较弱(Pk b=9.80)突跃不明显，故加入和水不相溶混的溶剂乙醚提除反应生成物苯甲酸，使反应定量完成，同时也避免了苯甲酸在瓶中析出影响终点的观察。 2.滴定时应充分振摇，使生成的苯甲酸转入乙醚层。 3.在振摇和分取水层时，应避免样品的损失，滴定前，使用乙醚检查分液漏斗是否严密。 四、思考题 1.乙醚为什么要分两次加入?第一次滴定至水层显持续橙红色时，是否已达终点?为什么? 2.分取水层后乙醚层用5mL水洗涤的目的是什么? 实验五阿司匹林片的分析 一、目的 1.掌握片剂分析的特点及赋形剂的干扰和排除方法。 2.掌握阿司匹林片鉴别、检查、含量测定的原理及方法。 二、操作 [鉴别] 1.取本品的细粉适量(约相当于阿司匹林0.1g)，加水10mL煮沸，放冷，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。 2.取本品的细粉(约相当于阿司匹林0.5g)，加碳酸钠试液10mL，振摇后，放置5分钟，滤过，滤液煮沸2分钟，放冷，加过量的稀硫酸，即析出白色沉淀，并发生醋酸的臭气。 [检查] 游离水杨酸 取本品的细粉适量(约相当于阿司匹林0.1g)，加无水氯仿3mL，不断搅拌2分钟，用无水氯仿湿润的滤纸滤过，滤渣用无水氯仿洗涤2次，每次1mL，合并滤液和洗液，在室温下通风挥发至干；残渣用无水乙醇4mL溶解后，移至100mL量瓶中，用少量5％乙醇洗涤容器、洗液并入量瓶中，加5％乙醇稀释至刻度，摇匀，分取50mL，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液[取盐酸液(1mol/L)1mL，加硫酸铁铵指示液2mL后，再加水适量使成100mL] 1mL，摇匀；30秒钟内如显色，和对照液(精密称取水杨酸0.1g，置1000mL量瓶中，加冰醋酸1mL，

医院实时无标记细胞多功能分析仪等购置招投标书范本

采购需求 一、采购标的需实现的功能或者目标，以及为落实政府采购政策需满足的要求： （一）采购标的需实现的功能或者目标 本次招标采购是为首都医科大学附属北京世纪坛医院配置基本设备，投标人应根据招标文件所提出的设备技术规格和服务要求，综合考虑设备的适用性，选择需要最佳性能价格比的设备前来投标。投标人应以技术先进的设备、优良的服务和优惠的价格，充分显示自己的竞争实力。 （二）为落实政府采购政策需满足的要求 1.促进中小企业发展政策：根据《政府采购促进中小企业发展暂行办法》规定，本项目投 标人为小型或微型企业且所投产品为小型或微型企业生产的，投标人和产品制造商应出具招标文件要求的《中小企业声明函》给予证明，否则评标时不予认可。投标人和产品制造商应对提交的中小企业声明函的真实性负责，提交的中小企业声明函不真实的，应承担相应的法律责任。 2.监狱企业扶持政策：投标人如为监狱企业将视同为小型或微型企业，且所投产品为小型 或微型企业生产的，应提供由省级以上监狱管理局、戒毒管理局（含新疆生产建设兵团）出具的属于监狱企业的证明文件。投标人应对提交的属于监狱企业的证明文件的真实性负责，提交的监狱企业的证明文件不真实的，应承担相应的法律责任。 3.促进残疾人就业政府采购政策：根据《三部门联合发布关于促进残疾人就业政府采购政 策的通知》（财库〔〕号）规定，符合条件的残疾人福利性单位在参加本项目政府采购活动时，投标人应出具招标文件要求的《残疾人福利性单位声明函》，并对声明的真实性承担法律责任。中标、成交供应商为残疾人福利性单位的，采购代理机构将随中标结果同时公告其《残疾人福利性单位声明函》，接受社会监督。残疾人福利性单位视同小型、微型企业。不重复享受政策。 4.鼓励节能政策：投标人所投产品如属于财政部、国家发展改革委发布的最新一期的《节 能产品政府采购清单》中的产品，投标人需提供证明材料。《节能产品政府采购清单》可以在中国政府采购网（http：//https://www.sodocs.net/doc/b210367367.html,/）上查阅下载。

荧光定量实验报告(作业)

RT-qPCR比较不同样本中miR-21的相对表达差异 一、实验目的 1、掌握实时荧光定量PCR的实验原理。 2、掌握实时荧光定量PCR相对定量的分析方法。 二、实验原理 实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。荧光定量PCR 最常用的方法是DNA 结合染料SYBR Green Ⅰ的非特异性方法和Taqman 水解探针的特异性方法。本实验中采用非特异性SYBR Green I 染料法，SYBR Green I 是一种结合于所有ds DNA 双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料，在游离状态下会发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA 结合后，荧光大大增强。因此，SYBR Green I 的荧光信号强度与双链DNA 的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR 体系存在的双链DNA 数量。 三、实验仪器、材料和试剂 实验仪器：PCR仪、荧光定量PCR仪 实验材料：MCF7细胞 实验试剂：逆转录试剂盒、SYBR GREEN试剂盒 四、实验步骤 4.1 MCF7细胞RNA提取（RNAiso Plus） 1)将生长至80%的MCF细胞消化为单细胞悬液，准备提取RNA； 2)9000g,2min离心，弃掉培养基，加1 ml RNAiso Plus用移液枪反复吹吸直至裂

解液中无明显沉淀，室温（15-30℃）静置5分钟； 3)加入氯仿（RNAiso Plus的1/5体积量），盖紧离心管盖，混合至溶液乳化呈 乳白色，室温静置5min； 4)12,000 g 4℃离心15分钟。从离心机中小心取出离心管，此时匀浆液分为三 层，即：无色的上清液（含RNA）、中间的白色蛋白层（大部分为DNA）及带有颜色的下层有机相。 5)吸取上清液转移至另一新的离心管中（切勿吸出白色中间层）。 6)向上清中加入0.5-1倍RNAiso Plus体积的异丙醇，上下颠倒离心管充分混匀 后，室温下静置10分钟。 7)12,000g 4℃离心10分钟。一般在离心后，试管底部会出现RNA沉淀。 8)弃上清，加入1ml DEPC水配制的75%乙醇，充分洗涤管盖和管壁，并轻弹 管底，让沉淀浮起来，并静置3-5 min； 9)打开离心管盖，室温干燥沉淀几分钟。沉淀干燥后，加入适量(可以根据沉淀 的多少确定）的RNase-free 水溶解沉淀。测浓度，记录A260/280。 4.2 1%琼脂糖凝胶电泳（取少部分进行跑电泳，留足够的量做反转录） 4.3 反转录 试剂体积（10μl） RNA500 ng Gene specific primers(2μM）RT primer1μl 5×ReverseTranscriptase M-MLV 2μl Buffer dNTP (10mM)0.5μl

荧光分析法基本概念

紫外可见吸收光谱 一紫外吸收光谱分析 基于物质对200-800nm光谱区辐射的吸收特性而建立起来的分析测定方法称为紫外-可见吸收光谱法或紫外-可见分光光度法。它属于分子吸收光谱,就是由于分子内电子跃迁而产生的光谱。 二紫外光谱的产生 物质分子的能量具有量子化的特征(即物质分子的能量具有不连续的特征)。一个分子有一系列能级,其中包括许多电子能级,分子振动能级以及分子转动能级。分子吸收特定的波长的光而产生吸收光谱分子的紫外吸收光谱就是由于分子中价电子的跃迁而产生的,从化学键的性质上考虑,与电子光谱有关的主要就是三种电子: (1)形成单键的σ电子;(2)形成双键的π电子;(3) 分子中非键电子即n电子。 化合物不同,所含的价电子类型不同,所产生的电子跃迁类型不同,根据分子轨道理论,分子中这三种电子能级的高低次序大致就是: (σ)＜(π)＜(n)＜(π*)＜( σ* ) σ,π就是成键轨道,n 就是非键轨道,σ* ,π* 就是反键轨道 由于电子能级间跃迁的同时总伴随有振动与转动能级间的跃迁。即电子光谱中总包含有振动能级与转动能级间跃迁产生的若干谱线而呈现宽谱带。 二紫外光谱的表示方法 紫外光谱图就是由横坐标、纵坐标与吸收曲线组成的。 横坐标表示吸收光的波长,用nm(纳米)为单位。

纵坐标表示吸收光的吸收强度,可以用A(吸光度)、T(透射比或透光率或透过率)、1-T(吸收率)、 (吸收系数) 中的任何一个来表示。 吸收曲线表示化合物的紫外吸收情况。曲线最大吸收峰的横坐标为该吸收峰的位置,纵坐标为它的吸收强度。 四、紫外光谱中常用的几个术语

1、发色基团与助色基团 发色基团:就是能导致化合物在紫外及可见光区产生吸收的基团,不论就是否显示颜色都称为发色基团。一般不饱与的基团都就是发色基团(C=C、C=O、N=N 、三键、苯环等) 助色基团:指那些本身不会使化合物分子产生颜色或者在紫外及可见光区不产生吸收的一些基团,但这些基团与发色基团相连时却能使发色基团的吸收带波长移向长波,同时使吸收强度增加。助色基团通常就是由含有孤对电子的元素所组成(-NH2, -NR2, -OH , -OR , -Cl等),这些基团借助P-π共轭使发色基团增加共轭程度,从而使电子跃迁的能量下降。 2.红移、蓝移、增色效应与减色效应 由于有机化合物分子中引入了助色基团或其她发色基团而产生结构的改变、或者由于溶剂的影响使其紫外吸收带的最大吸收波长向长波方向移动的现象称为红移。与此相反,如果吸收带的最大吸收波长向短波方向移动,则称为蓝移。 由于化合物分子结构中引入取代基或受溶剂的影响,使吸收带的强度即摩尔吸光系数增大或减少的现象称为增色效应或减色效应、分子荧光分析法 一、荧光的产生 物质分子的能级包括一系列电子能级、振动能级与转动能级。分子吸收能量后,从基态最低振动能级跃迁到第一电子激发态或更高电子激发态的不同振动能级(这一过程速度很快,大约10-15s),成为激发单重

荧光分析法实验(有思考题答案)

实验二.氨基酸的荧光激发、发射及同步荧光光谱的测量五．数据处理 1．用实验获得的数据绘制两种氨基酸的激发、发射、同步光谱图（如图3、4）。2．从激发和发射光谱中找出最大激发波长和最大发射波长值，以及它们相对应的峰高。在它们的同步荧光光谱中也确定最大波长和对应的峰高。 苯丙氨酸的荧光光谱图 苯丙氨酸扫描激发波长在214nm和285m两处出现最高峰，本实验选择214nm为最大激发波长。此外，激发波长曲线在280－300nm处出现了一个十分完美的峰，此峰为倍频峰，非激发波长峰,我们通过同步扫描荧光光谱技术可以验证，如图，我们通过同步扫描荧光光谱技术获得的激发波长也在215nm，与之前基本吻合。 色氨酸的荧光光谱图

色氨酸扫描激发波长在217nm处有一个最大峰，所以激发波长为217，发射波长为361。发射波长曲线在450－460nm处出现了一个十分完美的峰（在这张图上没显示出来），此峰为倍频峰，非激发波长峰,我们通过同步扫描荧光光谱技术可以验证。 六．讨论与思考 1．对待测溶液进行预扫描的有何作用？ 从预扫描得到激发和发射波长的初步结果，根据我们得到的初步结果对仪器进行设置，然后对两种氨基酸溶液测量它们的荧光激发、发射和同步荧光光谱。 2．观察激发波长的整数倍处荧光发射光谱在有何特点？该波长是否适合于进行定量分析？ 激发波长的整数倍处荧光发射光谱会出现以很强的峰，是倍频峰。不适合定量分析。 3．同步荧光技术有哪些优点？比较激发、发射和同步荧光光谱中的峰值及对应波长，比较他们的不同，并解释原因。 同步荧光法能简化光谱，减少光谱重叠和散射的影响，提高对荧光性质相近化合物同时测定的选择性和灵敏度。同步荧光法相对于激发光谱和发射光谱， 得到的峰比较窄，更明显。同步荧光光谱不是荧光物质的激发光谱和发射光谱

(完整版)荧光分析法习题参考答案

荧光分析法 思考题和习题 1．如何区别荧光、磷光、瑞利光和拉曼光？如何减少散射光对荧光测定的干扰？ 荧光：是某些物质吸收一定的紫外光或可见光后，基态分子跃迁到激发单线态的各个不同能级，然后经过振动弛豫回到第一激发态的最低振动能级，在发射光子后，分子跃迁回基态的各个不同振动能级。这时分子发射的光称为荧光。荧光的波长比原来照射的紫外光的波长更长。 磷光：是有些物质的激发分子通过振动弛豫下降到第一激发态的最低振动能层后，经过体系间跨越至激发三重态的高振动能层上，再通过振动弛豫降至三重态的最低振动能层，然后发出光辐射跃迁至基态的各个振动能层．这种光辐射称为磷光。磷光的波长比荧光更长。 瑞利光：光子和物质分子发生弹性碰撞时．不发生能量的交换，仅是光子运动的方向发生改变，这种散射光叫做瑞利光，其波长和入射光相同。 拉曼光：光子和物质分子发生非弹性碰撞时，在光子运动方向发生改变的同时，光子与物质分子发生能量交换，使光于能量发生改变。当光子将部分能量转给物质分子时，光子能量减少，波长比入射光更长；当光子从物质分子得到能量时，光子能量增加，波氏比入射光为短。这两种光均称为拉曼光。 为了消除瑞利光散射的影响，荧光的测量通常在与激发光成直角的方向上进行，并通过调节荧光计的狭缝宽度来消除 为消除拉曼光的影响可选择适当的溶剂和选用合适的激发光波长 2．何谓荧光效率？具有哪些分子结构的物质有较高的荧光效率？ 荧光效率又称荧光量子效率，是物质发射荧光的量子数和所吸收的激发光量子数的比值称，用Ψf表示。 以下分子结构的物质有较高的荧光效率： (1)长共轭结构：如含有芳香环或杂环的物质。 (2)分子的刚性和共平面性：分子的刚性和共平面性越大，荧光效率就越大，并且荧光波长产生长移。 (3)取代基：能增加分子的π电子共轭程度的取代基，常使荧光效率提高，荧光长移，如-NH2、-OH、-OCH3、-CN等。 3．哪些因素会影响荧光波长和强度？ (1)温度：物质的荧光随温度降低而增强。 (2)溶剂：一般情况下，荧光波长随着溶剂极性的增大而长移，荧光强度也有增强。溶剂如能与溶质分子形成稳定氢键，荧光强度减弱。 (3)pH：荧光物质本身是弱酸或弱碱时，溶液的pH对该荧光物质的荧光强度有较大影响。 (4)荧光熄灭剂：荧光熄灭是指荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子的相互作用引起荧光强度降低或荧光强度与浓度不呈线性关系的现象。 (5)散射光的干扰：包括瑞利光和拉曼光对荧光测定有干扰。 4．请设计两种方法测定溶液Al3+的含量。（一种化学分析方法，一种仪器分析方法） 配位滴定：利用铝与EDTA的配位反应进行滴定分析，因铝与EDTA的反应速率比较缓慢，而且铝对指示剂有封蔽作用，因此铝的测定一般用EDTA作为标准溶液，返滴定法或置换滴定法测定。 仪器分析法：利作铝离子与有机试剂如桑色素组成能发荧光的配合物，通过检测配合物的荧光强度以来测定铝离子的含量。另可采用原子吸收分光光度法或原子发射光谱法进行测定。

分子荧光光谱法实验报告范文

分子荧光光谱法实验报告范文 一、实验目的 1.掌握荧光光度计的基本原理及使用。 2.了解荧光分光光度计的构造和各组成部分的作用。 3.掌握分子荧光光度计分析物质的特征荧光光谱：激发光谱、发射光谱的测定方法。 4.了解影响荧光产生的几个主要因素。 5.学会运用分子荧光光谱法对物质进行定性和定量分析。 二、实验原理 原子外层电子吸收光子后，由基态跃迁到激发态，再回到较低能级或者基态时，发射出一定波长的辐射，称为原子荧光。对于分子的能级激发态称为分子荧光，平时所说的荧光指分子荧光。 具有不饱和基团的基态分子经光照射后，价电子跃迁产生荧光，是当电子从第一激发单重态S1的最低振动能级回到基态S0各振动能级所产生的光辐射。 (1)激发光谱 是指发光的某一谱线或谱带的强度随激发光波长(或频率)变化的曲线。横坐标为激发光波长，纵坐标为发光相对强度。 激发光谱反映不同波长的光激发材料产生发光的效果。即表示发光的某一谱线或谱带可以被什么波长的光激发、激发的本领是高还是低；也表示用不同波长的光激发材料时，

使材料发出某一波长光的效率。荧光为光致发光，合适的激发光波长需根据激发光谱确定——激发光谱是在固定荧光波长下，测量荧光体的荧光强度随激发波长变化的光谱。获得方法：先把第二单色器的波长固定，使测定的λem不变，改变第一单色器波长，让不同波长的光照在荧光物质上，测定它的荧光强度，以I为纵坐标，λex为横坐标所得图谱即荧光物质的激发光谱，从曲线上找出λex，，实际上选波长较长的高波长峰。 (2)发射光谱 是指发光的能量按波长或频率的分布。通常实验测量的是发光的相对能量。发射光谱中，横坐标为波长（或频率），纵坐标为发光相对强度。 发射光谱常分为带谱和线谱，有时也会出现既有带谱、又有线谱的情况。发射光谱的获得方法：先把第一单色器的波长固定，使激发的λex不变，改变第二单色器波长，让不同波长的光扫描，测定它的发光强度，以I为纵坐标，λem为横坐标得图谱即荧光物质的发射光谱;从曲线上找出最大的λem。 (3)荧光强度与荧光物质浓度的关系 用强度为I0的入射光，照射到液池内的荧光物质时，产生荧光，荧光强度If用仪器测得，在荧光浓度很稀(A0.05)时，荧光物质发射的荧光强度If与浓度有下面的关系：If=KC。 三、实验试剂和仪器

(完整版)荧光分析法练习题

第十二章荧光分析法（药学） A型题 1.若需测定生物试样中的微量氨基酸应选用下述哪种分析方法（）。 A、荧光光度法 B、磷光光度法 C、化学发光法 D、X荧光光谱法 E、原子荧光光谱法 答案：A 2.分子荧光分析比紫外-可见分光光度法选择性高的原因是（）。 A、分子荧光光谱为线状光谱，而分子吸收光谱为带状光谱 B、能发射荧光的物质比较少 C、荧光波长比相应的吸收波长稍长 D、荧光光度计有两个单色器，可以更好地消除组分间的相互干扰 E、分子荧光分析线性范围更宽 答案：B 3荧光量子效率是指（）。 A、荧光强度与吸收光强度之比 B、发射荧光的量子数与吸收激发光的量子数之比 C、发射荧光的分子数与物质的总分子数之比 D、激发态的分子数与基态的分子数之比 E、物质的总分子数与吸收激发光的分子数之比 答案：B 4.激发光波长和强度固定后，荧光强度与荧光波长的关系曲线称为（）。 A、吸收光谱 B、激发光谱 C、荧光光谱 D、工作曲线 E、标准工作曲线 答案：C 5.荧光波长固定后，荧光强度与激发光波长的关系曲线称为（）。 A、吸收光谱 B、激发光谱 C、荧光光谱 D、工作曲线 E、标准工作曲线 答案：B 6.一种物质能否发出荧光主要取决于（）。 A、分子结构 B、激发光的波长 C、温度 D、溶剂的极性

E、激发光的强度 答案：A 7.下列结构中荧光效率最高的物质是（）。 A、苯酚 B、苯 C、硝基苯 D、苯甲酸 E、碘苯 答案：A 8.下列因素会导致荧光效率下降的有（）。 A、激发光强度下降 B、溶剂极性变小 C、温度下降 D、溶剂中含有卤素离子 E、激发光强度增大 答案：D 9.为使荧光强度和荧光物质溶液的浓度成正比，必须使（）。 A、激发光足够强 B、吸光系数足够大 C、试液浓度足够稀 D、仪器灵敏度足够高 E、仪器选择性足够好 答案：C 10.在测定物质的荧光强度时，荧光标准溶液的作用是（）。 A、用做调整仪器的零点 B、用做参比溶液 C、用做定量标准 D、用做荧光测定的标度 E、以上都不是 答案：D 11.荧光分光光度计与分光光度计的主要区别在于（）。 A、光源 B、光路 C、单色器 D、检测器 E、吸收池 答案：B 12.激发态分子经过振动弛豫回到第一电子激发态的最低振动能级后，经系间窜越转移至激发三重态，再经过振动弛豫降至三重态的最低振动能级，然后发出光辐射跃迁至基态的各个振动能级，这种光辐射称为（）。 A、分子荧光 B、分子磷光 C、瑞利散射光 D、拉曼散射光

分子荧光光谱实验报告doc

分子荧光光谱实验报告 篇一：分子荧光光谱实验报告 分子荧光光谱实验报告 一、实验目的： 1.掌握荧光光度法的基本原理及激发光谱、发射光谱的测定方法；学会运用分子荧光光谱法对物质进行定性分析。 2.了解荧光分光光度计的构造和各组成部分的作用。 3.了解影响荧光产生的几个主要因素。二、实验内容：测定荧光黄/水体系的激发光谱和发射光谱； 首先根据已知的激发波长（如果未知，则用紫外分光光度计进行测量，以最大吸收波长为激发波长）测定发射光谱，得到最大发射波长；然后根据最大发射波长测定激发光谱，得到最大激发波长；然后在根据最大激发波长测定测定发射光谱； 根据所得数据，用origin软件做出光谱图。三、实验原理： 某些物质吸收光子后，外层电子从基态跃迁至激发态，然后经辐射跃迁的方式返回基态，发射出一定波长的光辐射，此即光致发光。光致发光现象分荧光、磷光两种，分别对应单重激发态、三重激发态的辐射跃迁过程。本实验为荧光光谱的测定。

激发光谱：在发射波长一定的条件下，被测物吸收的荧光强度随激发波长的变化图。 发射光谱：在激发波长一定的条件下，被测物发射的荧光强度随发射波长的变化图。 各种物质均有其特征的最大激发波长和最大发射波长，因此，根据最大激发波长和最大发射波长，可以对某种物质进行定性的测定。 四、荧光光谱仪的基本机构 五、实验结果与讨论： XX00 S1 / R1 (CPS / MicroAmps) 150000 100000 50000 0Wavelength (nm) 400000 S1 / R1 (CPS / MicroAmps) 300000 XX00 100000 Wavelength (nm)

子宫上皮肿瘤细胞能量代谢重编程及其临床意义

子宫上皮肿瘤细胞能量代谢重编程及其临床意义 温鑫 【摘要】在致癌因素的作用下，子宫上皮细胞稳态失调，出现能量代谢重编程。子宫上皮细胞代谢出现瓦博格氏效应，导致细胞内低氧和还原态微环境，激活氧感受器和缺氧信号传导通路，促使缺氧特异性转录因子-低氧诱导因子和第二信使-活性氧族活性增高，改变细胞色素等细胞蛋白的极性量值，使位居蛋白疏水核中的还原态铁原卟啉自由体（FH）析出。FH干扰细胞的微环境，催生多种自由基，引起细胞膜脂质、脂蛋白、细胞骨架、DNA等的氧化损伤，使子宫上皮细胞周期中的DNA损伤检查点失去阻滞作用，引起染色体端粒附近DNA序列丢失以及染色体的重排和基因扩增，细胞发生恶变。这种子宫上皮细胞能量代谢重编程，导致宫颈渗液中FH物质含量增加，FH析出量与子宫上皮细胞癌变程度呈正相关。测定宫颈渗液中FH物质含量，即可显示细胞是否稳定，是否存有细胞癌变及其程度。因此，FH 物质检测技术可以应用于子宫癌筛查和诊断领域。 【关键词】瓦博格氏效应；肿瘤细胞能量代谢；细胞周期；低氧诱导因子；活性氧族；p53基因；还原态铁原卟啉自由体； 充足的营养和能量供应是肿瘤细胞得以无限增殖、浸润和转

移的基础和前提。肿瘤细胞的葡萄糖、氨基酸和脂肪代谢都与正常细胞不同,存在着能量代谢重编程，ATP生成受阻。 细胞代谢依赖ATP提供能量。细胞产生ATP的方式主要有两种, 糖酵解（glycolysis）和氧化磷酸化（oxidative phosphorylation, OXPHOS）。糖酵解是指在细胞质中分解葡萄糖生成丙酮酸（pyruvate）的过程, 此过程仅产生2个ATP。正常细胞从糖酵解中获取大约20%~30%自身代谢所需的能量。在有氧条件下, 丙酮酸被转运至线粒体内进一步氧化分解生成乙酰CoA进入三羧酸循环（tricarboxylic acid cycle，TCA cycle）, 经氧化磷酸化完全分解成水和二氧化碳并产生ATP （此过程可产生36个ATP）和NADPH。这一过程提供了细胞代谢所需能量的70%。在有氧的情况下，有氧氧化过程对糖酵解产生抑制，称为Pasteur效应。诺贝尔奖获得者德国生物化学家奥托.海因里希.瓦博格（Otto Heinnich Warburg ）发现肿瘤细胞主要通过有氧糖酵解、磷酸戊糖途径产能，使肿瘤细胞的耗糖速度是正常细胞的10倍，却仅产生1/10的能量。即便在有氧情况下有氧氧化过程也不能对糖酵解产生抑制，这称为瓦博格氏效应（Warburg effect）【1-2】。 磷酸戊糖途径（pentose phosphate pathway）是指从6磷酸葡萄糖（G-6-P）脱氢反应开始，经一系列代谢反应生成磷酸戊糖等中间代谢物，然后再重新进入糖氧化分解代谢途径的一条旁路