(完整版)植物组织培养试题及答案总结

《绪论》复习题及参考答案

一、填空：

★1、根据培养的材料，植物组织培养分：愈伤组织培养、器官培养、细胞培养、原生质体培养、悬浮培养等类型。

2、植物组织培养的发展分为三个阶段：萌芽阶段、奠基阶段和快速发展和应用阶段。

3、1902年，Haberlandt提出了植物细胞“全能性”学说，1934年，White出版了《植物组织培养手册》

从而使植物组织培养为一门新兴学科。

二、名词解释：

★1、植物组织培养(plant tissue culture)：是指通过无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。由于培养材料已脱离了母体，又称为植物离体培养（Plant culture in vitro）。

2、脱分化（dedifferentiation）：由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物

细胞的脱分化。

3、再分化（redifferentiation）：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养又可以重新分化成根或芽等器官，

这一过程称为植物细胞的再分化。

★4、外植体(explant)：由活体（in vivo)植物体上切取下来的，用于组织培养的各种接种材料。包括各种器官、组织、细胞或原生质体等

★5、愈伤组织(callus)：原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则的薄壁细胞，多在植物体切面上产生。

三、问答题：

1、简述植物组织培养的理论依据？

植物组织培养的理论依据是细胞全能性学说，即植物体的每一个细胞都携带有一套完整的基因组，并具有发育成为完整植株的潜在能力。

★2、植物组织培养有哪些特点？

（1）培养条件可以人为控制

（2）生长周期短，繁殖率高：

（3）管理方便，利于工厂化生产和自动化控制：

★3、植物组织培养的分类？

（1）根据培养对象不同：组织培养、器官培养、胚胎培养、细胞培养、原生质体培养等；

（2）根据培养物培养过程：初代培养、继代培养；

（3）根据培养基的物理状态：固体培养、液体培养。

★4、植物组织培养主要应用于哪些方面？

（1）快速繁殖运用组织培养的途径，一个单株一年可以繁殖几万到几百万个植株；

（2）种苗脱毒针对病毒对农作物造成的严重危害，通过组织培养可以有效地培育出大量的无病毒种苗；（3）培育和创制新品种利用组织培养可以使难度很大的远缘杂交取得成功，从而育成一些罕见的新物种；（4）大量生产次生代谢物质通过植物细胞培养获得的生物碱、维生素、色素、抗生素以及抗肿瘤药物不下50多个大类，其中已有30多种次生物质的含量在人工培养时已达到或超过亲本植物的水平。植物细胞次生物质的研制与生产硕果累累，后来居上。

（5）植物种质资源的离体保存植物组织培养结合超低温保存技术，可以给植物种质保存带来一次大的飞跃。因为保存一个细胞就相当于保存一粒种子，但所占的空间仅为原来的几万分之一，而且在-193度的液氮中可以长时间保存，不像种子那样需要年年更新或经常更新。

（6）人工种子人工种子便于贮藏和运输，适合机械化播种；繁殖速度快，不受季节和环境限制，利于工厂化生产；体细胞胚由无性繁殖体系产生，可以固定杂种优势。

第1章《实验室及基本操作》复习题及参考答案

一、填空：

1、组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、空调机、天平、显微镜、蒸馏水

发生器、酸度计等。

★2、培养基成分主要包括①无机营养成分、②有机营养成分）、③植物生长调节物质、④碳水化合物、⑤其它物质。

3、培养基最常用的碳源是蔗糖，使用浓度在1%-5% 常用3 %。

4、糖在植物组织培养中是不可缺少的，它不但作为离体组织赖以生长的碳源，而且还能维持培养基渗透压。

5、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的凝固剂和支持物，一般用量为6-10g／L 之间。

6、驯化的目的：在于提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高其光合作用的能力，促使试健壮，提高苗

的移裁成活率。

★7、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向，其比值

高：有利于根的形成和愈伤组织的形成；

低：有利于芽的形成。

8、培养基灭菌一般在108 kPa的压力下，锅内温度达121 ℃，维持20-30 min。

9、选择外植体时应选择①选择优良的种质、②选健壮的植株、③选最适的时期和④选取适宜的大小。

10、诱导胚状体比诱导芽的优点：(1)数量多、(2)速度快、(3)结构完整。

11、试管苗的生态环境：高温且恒温、高湿、弱光、无菌。

12、培养基中加入活性炭的目的：利用其吸附能力，减少一些有害物质的影响。

★13、筛选培养基的方法：单因子试验法、多因子试验法、光谱实验法

★14、植物培养技术：灭菌、接种、培养、驯化四个环节

★15、试管苗的驯化注意：基质、温、光、水、肥、气的综合管理

二、名词解释：

1、MS培养基（MS culture medium）：它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。是

目前应用最广泛的培养基。特点是无机盐离子浓度较高，有高含量的N、K，硝酸盐量大，营养丰富。

★2、母液：是欲配制液的浓缩液。配成比所需浓度高10-100倍。母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。好处: ①保证各物质成分的准确性②配制时的快速移取③便于低温保藏。

3、褐变：是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，

有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响材料的培养。

4、玻璃化现象（vitrification phenomenon）：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透

明水渍状，这种现象称为玻璃化。

5、消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。

6、灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质

全部杀死。

7、接种：在无菌条件下，用灼烧过的镊子将外植体放到培养基上的操作过程。

三、问答题

1、一般组织培养的操作工序：

（1）、培养器皿的清洗；

（2）、培养基的配制、分装和高压灭菌；

（3）、无菌操作——材料的表面灭菌和接种；

（4）、将培养物放到培养室培养；

（5）、试管苗的驯化、移栽和初期管理。

★2、论述植物生长调节物质在组织培养中的作用？并列举常见的种类

(1) 生长素类：主要被用于诱导愈伤组织形成，促进细胞脱分化；促进细胞伸长；诱导根的分化，促进

生根。如：IAA（吲哚乙酸）；NAA(萘乙酸)；IBA(吲哚丁酸)；2,4—D(2,4—二氯苯氧乙酸)

(2）细胞分裂素类：①诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。②促进细胞分裂与扩大。③抑制根的分化。

抑制衰老，减少叶绿素分解，有保鲜效果。如：包括6—BA(6—苄基腺嘌呤)、Kt ( 激动素)、Zt (玉米素)等。

★3、常用的培养基有哪些？说明其特点

(1）MS培养基：1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。是目前应用最广泛的培养基。

特点是无机盐离子浓度较高

(2)white培养基：无机盐浓度较低，适于生根培养。

(3)N6培养基：KNO3和（NH4）2SO4含量高，不含钼。广泛应用于禾谷类植物的花粉和花药培养。

(4）B5培养基：主要特点是含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素。适宜双子叶植物特别是木本植物的培养

★4、如何配制MS培养基？

(1）配制母液：一般母液配成比所需浓度高10-100倍的浓缩液，配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。

(2)配制方法：

①将母液按顺序摆放

②取适量的蒸馏水加入配制容器中

③按需要量依次取母液及生长调节物质

④加入蔗糖（30g/L）溶解

⑤定容

⑥调pH值

⑦加琼脂(6-10g/L)，完全融化后，分装至培养瓶中，封口

⑧高压灭菌

★5、如何对外植体进行表面消毒？

(1) 将需要的材料用水洗干净。

(2) 表面灭菌：用70%酒精浸30-60s左右。

(3) 灭菌剂处理：0.1%升汞10分钟、或在2%次氯酸钠液中浸泡20-25分钟。

(4) 用无菌水冲洗3-5次左右

6、接种后离体培养物对光、温、湿等环境条件的要求？

(1) 光照：愈伤组织的诱导不需光照或弱光，器官分化需要光照，一般12－16h/d，光照度1000－5000lx。

(2) 温度：一般25±2℃

(3) 湿度：培养室内的湿度要求保持70％－80％的相对湿度。

7、论述离体培养污染产生的原因及防治措施。

污染：污染原因从病源分面主要有细菌和真菌和两大类。

原因：（1）外植体材料消毒不彻底

（2）培养基灭菌不彻底

（3）操作环境不洁净

（4）操作人员操作不规范、不熟练。

预防措施：(1)减少或防止材料带菌

(2)外植体灭菌要彻底

(3) 培养基灭菌要彻底

(4) 玻璃器皿和金属器皿的灭菌要彻底

(5)无菌室的消毒

(6)操作人员一定要严格按照无菌操作的程序进行接种。

8、固体培养基与液体培养基相比有何特点？

优点:操作简便，通气问题易于解决，便于经常观察研究.

缺点:培养物与培养基的接触(即吸收)面积小，各种养分在琼脂中扩散较慢，影响养分的充分利用，同时

培养物排出的一些代谢废物，聚集在吸收表面，对组织产生毒害作用。

9、在培养基中加入活性炭有什么作用？

（1）主要是利用其吸附作用，减少一些有害物质的影响

（2）活性炭使培养基变黑，有利于某些植物生根

（3）对形态发生和器官形成有良好的效应

★10、植物组织培养技术主要包括哪些环节？各环节的主要工作内容？

（1）培养基的配制及灭菌

（2）外植体的选择及灭菌

（3）外植体的接种及培养

（4）试管苗的驯化与移栽

★11、组织培养中常用的灭菌方法？

分为物理的和化学的两类，

（1）物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(紫外线、超声波、微波)、过滤和大量无菌水冲洗等措施；

（2）化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。

12、怎样进行培养基的高压湿热灭菌?

方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升到49kPa时，打开放气阀，放出空气（注意完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底），待压力表指针归零后，再关闭放气阀。当压力表上升达到108kPa时，锅内温度达121℃（在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢），维持20-30min。

13、无菌操作时应注意哪些事项？

(1) 在接种4h前用甲醛熏蒸接种室；

(2) 在接种前15-20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯；

(3) 接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；

(4) 上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。然后70%酒精喷雾降尘，并擦拭工作台面；

(5) 接种工具蘸95%酒精，灼烧；

(6) 接种时将试管斜着，使试管口在酒精灯火焰上转动，灼烧数秒钟。接完种后，将管口在火焰上再灼

烧数秒钟。

(7) 接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；

(8) 接种完毕后要清理干净并用酒精擦工作台。

14、在植物组织培养中，通过哪些途径可以得到完整的植株？

(1) 外植体→愈伤组织→根、芽→试管苗

①同时长芽和根

②先长芽，再长根

③先长根，再长芽

(2) 外植体→胚状体→试管苗

(3) 外植体→根、芽→试管苗。

15、与常规苗相比，试管苗具有哪些特点？

(1)生长细弱；

(2)光合作用差

(3)叶片气孔数目少，活性差

(4)根的吸收功能弱

(5)对逆境的适应和抵抗能力差

16、如何提高试管苗移栽的成活率？

（1）试管苗的生理状况应选择壮苗，以提高移栽后的成活率

（2）加入植物生长调节物质如生长素

（3）降低无机盐的浓度

（4）加入少量活性炭，尤其是用酸、碱和有机溶剂洗过的活性炭

（5）环境因子适当的环境条件能提高移栽的成活率

（6）移栽过程中让试管苗从无菌向有菌逐渐过渡

★17、接种程序：

（1）植物材料表面的消毒

（2）切割外植体

（3）将外植体移入培养基

第2章《基本原理》复习题及参考答案

一、填空：

1、绝大多数培养植物再生植株时都先经过愈伤组织阶段。

★2、愈伤组织形成大致经历诱导期、分裂期和分化期三个时期。

3、使用植物生长调节物质时要注意：种类和浓度生长素和细胞分裂素的比值。

★4、愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式和胚状体方式。

5、组织培养细胞再分化包括四个水平：细胞水平的再分化、组织水平的再分化、器官水平的再分化（器官发生）和植株水平的分化

二、名词解释：

★1、愈伤组织培养(callus culture):是指将母体植株上的外植体，接种到无菌的培养基上，进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。

★2、继代培养(subculture)：愈伤组织在培养基上生长一段时间以后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养。这个过程叫做继代培养

3、体细胞胚（somatic embryo）又称胚状体（embryoid）：指在组织培养中，由一个非合子细胞(体细胞)，

经过胚胎发生和胚胎发育过程（经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚5个时期），形成的具有双极性的胚状结构。

4、体细胞胚胎发生：植物组织培养细胞产生胚状体的过程，称为体细胞胚胎发生。

5、细胞全能性（cell totipotency）：每一个植物细胞具有该植物的全部遗传信息，在适当条件下可表达出该细胞的所有遗传信息，分化出植物有机体所有不同类型细胞，形成不同类型的器官甚至胚状体，直至形成完整再生植株

★6、形态建成：外植体细胞在适宜的培养条件下发生脱分化、再分化，产生芽和根，或者形成胚状体，发育成苗或完整植株。

三、问答题

★1、愈伤组织细胞的分化一般分几个时期？各有何特点？

（1）诱导期（起动期）：是细胞准备分裂的时期。细胞大小几不变，内部发生生理生化变化，迅速合成蛋白质和核酸。

（2）分裂期：外层细胞分裂，中间细胞常不分裂，形成小芯。细胞分裂快，结构疏松，缺少结构，浅而透明。在原培养基上，细胞必分化，及时转移，其可无限制地进行细胞分裂，维持不分化状态。

（3）分化期：细胞在形态和生理功能上的分化，出现形态和功能各异的细胞。

2、优良的愈伤组织必须具备哪4个特性？

（1）高度的胚性或再分化能力，以便从这些愈伤组织得到再生植物

（2）容易散碎，以便用这些愈伤组织建立优良的悬浮系，并且在需要时能从中分离出全能性的原生质体（3）旺盛的自我增殖能力，以便用这些愈伤组织建立大规模的愈伤组织无性系。

（4）经过长期继代保存而不丧失胚性，便有可能对它们进行各种遗传操作。

3、愈伤组织的形态发生有哪些情况？

（1）愈伤组织仅有根或芽器官的分别形成，即无根的芽或无芽的根；

（2）先形成芽，再在芽伸长后，在其茎的基部长出根而形成小植株，多数植物属这种情况；

（3）先产生根，再从根基部分化出芽而形成小植株。这种情况较难诱导芽的形成，尤其对于单子叶植物；

（4）先在愈伤组织的邻近不同部位分别形成芽和根，然后两者结合起来形成一株小植株。少见。

单子叶植物：与双子叶植物诱导发生过程类似，只是在形态上无鱼雷形胚等阶段，成熟体胚上有盾片、胚芽鞘和胚根等结构。

4、简述细胞脱分化过程。

细胞的脱分化过程可分为3个阶段：

第一阶段为启动阶段，表现为细胞质增生，并开始向细胞中央伸出细胞质丝，液泡蛋白体出现；

第二阶段为演变阶段，此时细胞核开始向中央移动，质体演变成原质体；

5、影响植物离体形态发生的因素有哪些？（不是重点）

（1）植物种类和基因型

（2）培养材料的生理状态

发育年龄：一般幼态比老态组织形态发生能力高；

培养器官或组织类型：细胞分裂旺盛的器官较好；

培养时间和细胞倍性：一般取处于旺盛生长期的愈伤来诱导器官形成。

（3）培养基

a营养成分：一般认为，培养基中的铵态氮和K+有利于胚状体形成，提高无机磷的含量可促进器官发生; 茎尖培养和芽诱导培养基主要是MS及其修改的培养和B5培养基; 碳水化合物种类及浓度对胚状体发育有重要作用,缺糖或低糖无法形成胚状体。

b 植物激素及生长调节剂

（起主导作用，通过影响内源激素的平衡起作用

c培养基的性质：愈伤组织诱导：在固体培养基上；细胞和胚状体的诱导在液体培养基上

（4）培养条件：光照；温度；气体；湿度等

★6、分裂期愈伤组织的共同特征：

细胞分裂快，结构疏松，缺少有组织的结构，维持其不分化的状态，颜色浅而透明。

★7、胚状体发生途径与器官发生途径形成植株的区别:

?①胚状体具有两极性，即在发育的早期阶段，从其方向相反的两端分化出茎端和根端；而不定芽和不定根都为单向极性。

?②胚状体的维管组织与外植体的维管组织无解剖结构上的联系。而不定芽或不定根往往总是与愈伤组织的维管组织相联系。

?③胚状体维管组织的分布是独立的“Y”字形。而不定芽的维管组织无此现象。

★8、器官发生形成小苗的方式

?（1）愈伤组织仅有根或芽器官的分别形成，即无根的芽或无芽的根；

?（2）先长芽，后长根，多数情况；

?（3）先长根，再从根的基部长芽。这种情况较难诱导芽的形成，尤其对于单子叶植物；

?（4）先在愈伤组织的邻近不同部位分别形成芽和根，然后两者结合起来形成一株植株。

第3章《器官和组织培养》复习题及参考答案

一、填空：

1、植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。

★2、茎尖培养根据培养目的和取材大小分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。前者主要是对茎尖长度不超过0.1mm，最小只有几十微米的茎尖进行培养，目的是获得无病毒植株；后者是对几

毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养，目的是离体快繁。

3、不定芽产生的途径：

一是从外植体上直接产生

二是从由外植体诱导产生的愈伤组织上产生。

4、离体叶培养是指包括叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶等叶组织的无菌培养。

5、在离体叶培养中，6-BA和KT利于芽的形成；2,4-D利于愈伤组织的形成

二、名词解释：

★1、植物器官培养（Organ Culture）：是指对植物某一器官的全部或部分或器官原基进行离体培养的技术。分为营养器官（根、茎、叶）和繁殖器官（果实、种子、花器官）培养。

2、花器官培养：是指对植物的整朵花或花的组成部分（包括花托、花瓣、花丝、花药、子房、胚珠）

进行离体培养的技术。

3、植物分生组织(meristem culture)培养：是指对植物的分生组织进行离体培养的技术，包括植物根

尖、茎尖等顶端分生组织和形成层组织的培养。其中茎尖培养广泛应用于植物再生和脱病毒研究。三：问答题：

★1、离体叶组织中再生植株发生途径有哪些？

在离体叶组织脱分化和再分化培养中，茎和芽分化的4个途径：

（1）直接产生不定芽

（2）离体叶-----愈伤组织------不定芽

（3）离体叶--------愈伤组织------胚状体-----不定芽

（4）离体叶→小鳞茎或球状体

↘愈伤组织↗

★2、根培养的取材部位：

答：一端切取长1.2厘米的根尖，接种于培养基中。这些根的培养物生长甚快，几天后发育出侧根。待侧根生长约1周后，即切取侧根的根尖进行扩大培养，它们又迅速生长并长出侧根，又可切下进行培养，如此反复，就可得到从单个根尖衍生而来的离体根的无性系。这种根可用来进行根系生理生化和代谢方面的实验研究。培养条件为暗光和25～27℃。

★3、离体根培养的一般方法：

（1）100ml三角瓶，装40~50ml培养液；

（2）液体培养，

（3）反复继代培养，

（4）流动式

★4、根培养的培养基的选择：

●无机离子较低

●White培养基或者其他培养基

●MS、B5也可用，但其浓度要稀释2/3或1/2

★5、影响离体根生长的因素

●1、基因型：品种差异大。

●2、培养基：生根培养基—盐浓度为MS的一半或四分之一。

●3、生长物质：适当的生长素，常用NAA和IBA，浓度为0.1-10.0毫克每升。但水仙，草莓等无需

激素。

●4、PH：中性偏酸。

●5、光照和温度：暗培养和25～27℃

★6、茎尖培养的含义：

是切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，进行无菌培养。

★7、茎尖培养的类型：

茎尖分生组织培养：对长度0.1mm左右，含1-2个叶原基的茎尖进行培养，即微茎尖培养；目的是

获得无病毒植株

普通茎尖培养：对几毫米至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养，目的是快速繁殖和用于植物开花生理的研究。

★8、茎段的培养材料的选择、处理和培养基的调整

选择：取生长健壮无病虫的幼嫩枝条或鳞茎盘，若是木本，取当年生嫩枝或一年生枝条，剪去叶片，剪成3～4cm的小段。

处理：在自来水中冲洗1～3h，在无菌条件下用75％酒精灭菌30～60s，再用浓度为0.1％升汞浸泡3～8min，或用饱和漂白粉浸泡10～20min，因材料老嫩和蜡质多少而定时间。最后用无菌水冲洗数次，以备接种。

培养基的调整：最常用的基本培养基为MS培养基，加入3％蔗糖，用0.7％的琼脂固化。

9茎尖微繁过程有哪几个阶段

茎尖微繁殖过程一般包括五个阶段: 1 无菌培养的建立。 2 芽的增殖。 3 中间繁殖体的增殖。 4 诱导生根。 5 试管苗的移栽

第4章《胚胎培养及离体授粉》复习题及参考答案

一、填空：

★1、胚胎培养包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养。

2、离体胚的培养分为二种类型：成熟胚培养和幼胚培养。

★3、胚珠培养分二类：受精胚珠的培养和未受精胚珠的培养。受精胚珠培养目的一是打破种子的休眠；

二是挽救胚的发育，以获得杂交种。未受精胚珠培养的目的是获得单倍体植株。

4、子房培养分授粉子房培养和未授粉子房的培养。前者培养的目的是挽救杂种胚，后者培养的目的是

获得单倍体植株。

5、离体授粉的类型有离体柱头授粉、离体子房授粉、离体胚珠授粉。

★6、离体胚培养方法：成熟胚和幼胚培养

7、胚珠培养的培养基：Nitsch或N5,B5,MS，子房培养的培养基：N6,MS

二、名词解释：

★1、胚胎培养（embryo culture）：指对植物的胚、子房、胚珠和胚乳进行离体培养，使其发育成完整植物的技术。包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养。

★2、胚培养（embryo culture）：采用人工的方法将胚从种子、子房或胚珠中分离出来，再放在无菌的条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。

★3、胚乳培养（endosperm culture）：是指将胚乳从母体上分离出来，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。

4、胚珠培养（ovule culture）：是指将胚珠从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。

5、子房培养（ovary culture）：是指将子房从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下培养，使其生长发育形成幼苗的过程。

6、植物离体授粉：指将未授粉的胚珠或子房从母体上分离下来，进行无菌培养，并以一定的方式授以无菌花粉，使之在试管内实现受精的技术。

三、问答题：

★1、胚培养的作用有哪些？

1)在远缘杂交育种中的应用:克服杂种胚不能正常发育

2)克服珠心胚的干扰,提高育种效率

3)缩短育种周期

4)测定休眠种子的萌发率

5)理论研究中的应用

2、简述离体授粉的程序。（课件上没有）

（1）确定开花、花药开裂及授粉时间

（2）去雄后将花蕾套袋隔离

（3）制备无菌子房或胚珠

（4）制备无菌花粉

（5）胚珠或子房的试管内授粉

★3、胚胎培养的操作步骤。

●取子房

●常规表面消毒

●解剖镜下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。

●固体培养

★4、幼胚的发育方式：

1）胚性发育：继续进行正常的胚胎发育

2）早熟发育：迅速萌发成幼苗

3）产生愈伤组织：再分化形成多个胚状体或芽原基。

★5、胚胎培养的意义

①、克服远缘杂种的不育性

②、使胚胎发育不完全的植株获得后代

③、缩短育种年限，提高育种效率

★6、胚乳培养过程

?胚乳外植体制备:种子消毒---取出胚乳

?培养:White或MS诱导培养基---加入2，4-D或NAA0.5～2.0mg/L，BA 0.1～1.0mg／L——25-27℃

--暗或弱光

?发育:约6～lOd胚乳开始膨大，再诱导形成愈伤组织----转到分化培养基上培养，分化培养基可加入

0.5～3.0mg／L的BA及少量的NAA。待愈伤组织长出芽后，切下不定芽，插入生根培养基中，光

下培养10～15d，切口处可长出白色的不定根。

★7、检查胚乳植株的染色体数目的方法

●取根尖、幼叶或愈伤组织

●0.2%-0.5%秋水仙素碱溶液在25℃浸泡4-8hr

●流水冲洗5-10min

●卡诺氏液或FAA液固定

●1mol盐酸，60 ℃水浴8-10min

●染色、压片、镜检、计数

★8、胚珠培养的基本过程

1）、首先从花中取出子房进行表面消毒，

2）、然后在无菌的条件下进行解剖，取出胚珠，放在培养基上进行培养，

将胚珠培养成植株的关键是选择胚的发育时期，实验证明发育到球形胚期的胚珠较易培养成功，另外为了培养成功，可取用带胎座甚至带部分子房的胚珠进行培养。

★9、子房培养的培养过程

●1、制备外植体：在开花前后适宜时期取子房或幼花，消毒

●2、子房培养：固体或液体培养均可

★10、子房的发育的发育途径。

?性细胞（卵细胞、助细胞、极核、反足细胞）----胚状体或愈伤组织----单倍体植株；

?体细胞（珠被、子房壁）---胚状体或愈伤组织----二倍体植株；

★11、胚珠的发育途径。

1）、受精胚珠：一是形成种子；二是形成愈伤组织

2）、未受精胚珠：形成单倍体植株。

第5章《花药和花粉培养》复习题及参考答案

一、填空：

1、花药和花粉培养的共同特点是利用花粉(小孢子)染色体数目的单倍性，培育出单倍体植株。

2、花药和花粉培养时，花粉发育的最适宜时期是单核中、晚期（单核靠边期）。

3、MS和H培养基适合双子叶植物花药培养；B5培养基适合豆科和十字花科花药培养；N6培养基适合

禾谷类作物的花药培养。

4、花药培养前的预处理:低温冷藏是最常用的方法。

5、压片染色法是检测花粉发育时期的简便有效方法，常用染色剂为醋酸洋红。

6、花药培养包括：选择材料-消毒-接种培养-愈合组织生成-分化出单倍体植株。

7、花粉的四大发育途径包括：营养细胞发育、生殖细胞发育、营养和生殖细胞同时发育及花粉均等分裂发育

★8、花粉培养大致过程包括：花粉的分离-预处理-培养过程

9、花药培养一般选择花粉的单核期进行接种

10、花药培养是器官培养，花粉培养属细胞培养

11、较高浓度蔗糖可诱导花粉形成愈伤组织；较低浓度蔗糖可使愈伤组织分化成苗

二、名词解释：

★1、花药培养(anther culture)：是将花粉发育至一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的技术。

★2、花粉培养(pollen culture)：是将花粉从花药中分离出来进行离体培养的过程。

三、问答题：

1、如何确定水稻单核靠边期的花粉？

（1）在水稻中，在外部形态上可根据叶枕距为5-15cm，颖片淡黄绿色、雄蕊长度接近颖片长度的1/2这些条件鉴定。

（2）利用这些外部标志，选择符合条件的花蕾，经镜检确定花粉发育的准确时期。

（3）压片染色法是检测划分发育时期的简便有效方法，常用染色剂为醋酸洋红。

★2、比较花粉培养与花药培养

相同点：

（1）利用小孢子染色体数目的单倍性，培育出单倍体植株。

（2）成苗途径相同，即有胚状体成苗和愈伤组织再分化成苗两条途径。

不同点：

（1）花药培养属于器官培养；而花粉培养属于细胞培养。

（2）花粉培养没有药壁组织干扰；可计数小孢子产胚率；可观察雄核发育的全过程；单倍体产量高。

但技术更复杂。

3、简述花粉分离方法

（1）自然散落法(漂浮培养散落小孢子收集法) 将花药接种在预处理液或液体培养基上，待花粉自动散落后，收集培养。

（2）挤压法在烧杯或研钵中挤压花药，将花粉挤出后收集培养。

(3)机械游离

A磁搅拌法用磁力搅拌器搅拌培养液中的花药，使花粉游离出来；

B超速旋切法通过搅拌器中的高速旋转刀具破碎花蕾、穗子、花药，使小孢子游离出来

4、花药培养的大致过程

1）预处理:低温冷藏是最常用的方法,另有离心、低剂量辐射、化学试剂处理

2）表面消毒：因为未开放的花蕾中的花药为花被包裹，本身处于无菌状态，可仅用70％酒精棉球将花的表面擦洗即可。也可按对其他器官消毒处理方法进行，先用70％的酒精浸一下后，在饱和漂白粉溶液中浸10～20min，或用0.1％升汞液消毒7～lOmin，然后用无菌水洗3～5次。将花蕾剪下放入水中，在冰箱4～5℃下保持3～4d。

3）接种：接种时把花蕾用解剖刀、镊子小心剥开花蕾，取出花药，注意去掉花丝，然后散落接种到培养基上，一个l0ml的试管可接种20个花药。培养温度在23～28℃左右，每天11～16h的光照，光照强度2000～4000Lx。脱分化培养时，可用MS + 2,4-D的培养基，或N6+2,4-D的培养基，经10～30d，可诱导生成愈伤组织，或少数生成胚状体。

4）培养：一种植物的花药可以在一种培养基上长幼苗，而在另一种培养基上则形成愈伤组织。如水稻通常在含有生长素的培养基上诱导出愈伤组织，而在不含任何激素的N6培养基上长出胚状体。但在辣椒的花药培养中，只要培养基合适，甚至可以在同一花药上一部分花粉形成胚状体，而另一部分只形成愈伤组织。5）植株的诱导

诱导愈伤组织分化芽或根，需将其转入分化培养基和生根培养基

花粉---愈伤组织---苗

花粉---胚状体---苗

第6章《细胞培养》复习题及参考答案

一、填空：

1、一般平板培养要求细胞密度每毫升为1x103∽100x103个。

★2、条件培养基是悬浮培养过一段时间组织或细胞的液体培养基。

★3、细胞悬浮培养主要应用于植物有用物质的生产、诱发和筛选突变体、原生质体培养和细胞器分离、食品生产等。

4、由植物叶片分离单细胞的方法有机械法和酶解法。

★5、细胞悬浮培养方法：成批培养；连续培养

★6、连续培养的种类：(1)半连续培养；(2)连续培养

★7、连续培养的方法:（1）浊度恒定法;（2）化学恒定法

二、名词：

1、看护培养法(nurse culture)：是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。

★2、平板培养法(plante culture)：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。

★3、细胞悬浮培养（suspension culture）：是指将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。

4、初始植板密度（inital planting density）：单细胞固体平板培养时，细胞悬浮液接种到琼脂培养基上最初细胞密度。

5、临界密度(critical density)：单细胞培养时，初始植板密度低于某值培养细胞就不能进行分裂和发育成细胞团，则该值就是临界密度。（课件没有）

6、植物细胞培养（plant cell culture）：是指对植物器官或愈伤组织上分离出的单细胞（或小细胞团）进行离体培养，形成单细胞无性系或再生植株的技术。

7、条件培养基：曾悬浮培养过一段时间组织或细胞的液体培养基。

8、植板率：是指已形成细胞团的单细胞与接种总细胞数的百分数

三、问答题：

1、如何得到单细胞无性系？

在细胞培养中，常由分散性较好的愈伤组织或悬浮培养物来制备单细胞，也可以用机械法和酶解法从植物器官直接制备单细胞。

由分离的单细胞经看护培养法、微室培养法或平板培养法，即可得到单细胞无性系

★2、单细胞培养有哪些方法？各有何含义及特点

单细胞培养：看护培养；微室培养；平板培养

（1）看护培养法：指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。

特点：优点：①简便易行。②效果好，易于成功。

缺点：①不能在显微镜下直接观察细胞的生长过程。

用途：诱导形成单细胞系。

（2）微室培养：即将细胞培养在很少量的培养基中。

特点：优点：在培养过程中，可以连续进行显微观察一个细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程

缺点：培养时间较短

用途:主要用来观察细胞生长、分裂、形成细胞团的过程。

（3）平板培养法：把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。

特点：优点：①可以定点观察；②分离单细胞系容易；

缺点：培养细胞气体交换不畅。

用途:分离单细胞无性系，研究其生理、生化、遗传上的差异而设计的一种单细胞培养技术。广泛应用于细胞、原生质体及融合产物的培养。

★3、什么是植板率？小细胞团的计数方法有哪几种？

植板率是指已形成细胞团的单细胞与接种总细胞数的百分数。

小细胞团计数方法：①低倍显微镜直接计算；

②细胞团显影法

4、什么是细胞悬浮培养？简述成批培养和连续培养的的特点？

细胞悬浮培养：是使离体的植物细胞悬浮在液体培养基中进行的无菌培养。

（1）成批培养的特点：

①细胞生长在固定体积的培养基上，直至养分耗尽

②用搅拌的方法使细胞团和细胞均匀分布

③细胞数目呈现慢—快—慢—停止生长的变化，但必须更换新鲜培养基才能进行下一批培养

（2）连续培养的特点：

①由于不断加入新鲜培养基，保证了养分的充分供应，不会出现悬浮培养物发生营养不足的现象

②可在培养期间使细胞保持在对数生长期中。细胞增殖速度快

③适于大规模工业化生产

★5、影响单细胞培养的因子

?1、条件培养基：条件培养基可有利于单细胞的生长与分裂

?2、细胞密度(>临界密度)：临界密度：单细胞培养时，初始植板密度低于某值培养细胞就不能进行分裂和发育成细胞团，则该值就是临界密度。

初始植板密度应根据培养基的营养状况而改变，培养基越复杂则植板细胞的临界密度越低，反之则相反。一般要求每毫升在1000个细胞以上。

?3、生长激素：生长激素加1种细胞分裂素和几种氨基酸(如：丙氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺)。临界密度只需25-30细胞/毫升。

?4、pH：偏酸。

?5、CO2：可诱导细胞分裂。

6、细胞悬浮培养主要应用

1）、植物有用物质的生产：在植物组织培养研究中，发现培养细胞中含有各种特殊的代谢产物。

2）、诱发和筛选突变体：在细胞培养过程中会产生一些突变体，常采用不同培养基来进行选择，也就

是把悬浮细胞培养于缺少某种营养物质或生长因子，或是添加某种抑制剂的培养基里，使突变细胞和正常细胞区别开来

3）、原生质体培养和细胞分离：利用细胞悬浮培养方法，对细胞原生质进行分离，在适宜的培养基上进行培养，使之生成完整植株，或对原生体的生理特性进行观察、研究。

4）、食品生产：通过对许多食用植物培养组织的细胞团生产的研究。

7、平板培养的基本技术

（1）单细胞悬浮液的制备

(2)悬浮细胞密度的调制

（3）琼脂培养基配制:0.7 % 琼脂条件培养基。

（4）平板制作

（5) 培养

第7章《原生质体培养和细胞融合》复习题及参考答案

一、填空：

★1、原生质体的分离方法有机械分离法和酶法分离法。

2、原生质体培养基常用的渗透剂是甘露醇和山梨醇。

★3、原生质体的纯化方法有：沉降法、漂浮法和界面法。

★4、原生质体活力的测定：形态识别；染色识别。

★5、原生质体培养方法：液体浅层培养；平板法培养；悬滴法培养；双层培养法；饲喂层培养

★6、原生质体融合的方法：无机盐诱导融合；高pH高钙离子法；PEG法；聚乙二醇与高pH高钙相结合的诱导融合；电融合技术

★7、杂种细胞的筛选与鉴定：互补选择；机械分离杂种细胞法；双荧光标记选择法

★8、杂种植株的鉴定：形态学鉴定；细胞学观察；DNA内切图谱分析；同工酶分析

二、名词解释：

★1、原生质体融合(protoplast fusion)：也称体细胞杂交（somatic hybridization），就是使分离下来的不同亲本的原生质体，在离体条件下通过诱导发生的质膜融合进而细胞核融合，像性细胞受精作用那样互相融合成一体的现象。

2、原生质体（protoplast）：是指除去了细胞壁后的裸露的植物细胞。

三、问答题：

1、简述原生质体作为遗传操作和生理生化研究的材料有何特点？

（1）没有细胞壁，有利于体细胞融合、体细胞杂交、基因转移和单细胞培养。

（2）原生质体能比较容易摄取外来的遗传物质。

2、酶法分离原生质体时使用的酶的种类有哪些？

（1）纤维素酶类

（2）半纤维素酶类

（3）果胶酶类

（4）崩溃酶

3、简述一步酶法分离原生质体的方法

一步分离法：把一定量纤维素酶和果胶酶组成混合酶液，对材料进行一次性处理而分离出原生质体。处理温度25-30oC，处理的时间根据材料及酶浓度的不同而不同，可为2-24h。

4、如何纯化分离的植物原生质体并鉴定其活力？

(1) 原生质体的纯化

①沉降法：应用原生质体的比重大于溶液的性质而使原生质体沉于底部。

②漂浮法：应用渗透剂含量较高的洗涤液使原生质体漂浮于液体表面。

③梯度离心法：选两种不同渗透浓度的溶液，其中一种溶液密度大于原生质体的密度，另一种溶液小于原生质体的密度。

(2) 原生质体活力的测定

①形态识别：形态上完整，呈圆形，含有饱满的细胞质，颜色鲜艳的即为存活的原生质体。

②染色识别

1）0.1%酚番红或Evans蓝染色：有活力的不被染色，死亡的被染上色。

2）双醋酸盐荧光素(FDA)染色法：在荧光显微镜下有荧光的即为有活性的原生质体。

★5、原生质体培养的方法有哪些？

（1）液体浅层培养

（2）平板法培养

（3）微悬滴法培养

（4）双层培养法

（5）饲养层培养

★6、原生质体融合有哪几种主要方法？

（1）化学法诱导融合；（2）高PH-高钙离子法；（3）PEG法；（4）PEG结合高钙-高pH诱导法；（3）电融合技术

7、原生质体培养的意义

★8、酶的种类及特点。

●纤维素酶类（Cellulase）：纤维素酶是从绿色木霉中提取的一种复合酶制剂，可降解纤维素，得到

裸露的原生质体。

●果胶酶类（Pectolyase）：果胶酶是从根霉中提取的，使细胞间的果胶质降解，把细胞从组织内分离

出来。

●半纤维素酶类（Hemicellulase）：降解半纤维素为单糖或单糖衍生物。

●崩溃酶：一种粗制酶。

●蜗牛酶：主要用于分离小孢子（花粉母细胞和四分体细胞）的原生质体

第8章《植物离体快繁和人工种子》复习题及参考答案

一、填空：

1、原球茎发生型是兰科植物特有的一种快繁方式。

2、离体快繁商业化生产应注意的问题是快繁苗的污染、玻璃化、褐化和黄化。

3、根据繁殖体的类型人工种子可分为两类：一类是体细胞胚人工种子；另一类是非体细胞胚人工种子。

4、人工种子包裹方法离子交换法；干燥法；冷却法。

二、名词解释：

1、离体繁殖（in vitro propagation)：微型繁殖（micropropagation)，指利用植物组织培养技术对外植体进行离体培养，使其在短期内获得遗传性一致的大量再生植株的方法。是工厂化育苗的技术基础。

★2、人工种子(artificial seeds)：亦称体细胞种子，任何一种经人工种皮包被或裸露的，具有形成完整植株能力的繁殖体均可称之为人工种子。

三、问答题：

1、植物快繁的器官再生主要类型？

短枝发生型；丛生芽发生型；不定芽发生型；胚状体发生型；原球茎发生型

2、植物快繁的程序。

（1）无菌（或初代）培养的建立

（2）繁殖体增殖

（3）芽苗生根

（4）小植株的移栽驯化

3、人工种子的优点。

（1）使自然条件下不易结实或种子昂贵的材料能快速繁殖和保存；（2）繁殖速度快；

（3）为基因工程技术应用于生产提供桥梁；

（4）固定杂种优势；

（5）提高植物抗逆性；

（6）取代天然种子，节约粮食。

第9章《植物无病毒苗木培育》复习题及参考答案

一、填空：

1、目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径是茎尖培养脱毒。

★2、通过茎尖培养脱毒时，常以带1-3个幼叶原基的茎尖（约0.3—0.5mm）作外植体较合适。

3、无病毒苗的保存分：隔离保存和长期保存两种方法。

二、名词解释：

1、无病毒苗（virus-free plantlets）：是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。

2、微尖嫁接技术（micrografting shoot-tip）：指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖以培养脱毒苗的技术。

3、指示植物法(indicator plant method)：利用病毒在其他植物（指示植物或鉴别寄主）上产生特定症状（枯斑和空斑）作为鉴别病毒存在与否和种类的方法。

三、问答题：

★1、植物脱毒的主要方法有哪些？其主要原理是什么？

（1）茎尖培养脱毒：病毒在植物体内的分布并不均匀，越靠近茎端的病毒的感染深度越低，生长点则几乎不含或含病毒很少

（2）愈伤组织培养脱毒法：通过植物的器官和组织的培养，脱分化诱导产生愈伤组织，然后从愈伤组织再分化产生芽，长成小植株，可以得到无病毒苗

（3）珠心胚培养脱毒：病毒一般不通过种子传播，由珠心细胞发育成的胚再生的植株是无毒的，并具有与母本相同的遗传特性。

（4）茎尖微体嫁接：将实生苗砧木在人工培养基上种植培育，再从成年无病树枝上切取0.4—1.0mm茎尖，在砧木上进行试管微体嫁接，以获得无病毒幼苗。

（5）热处理脱毒：一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（35-40℃），即钝化失活

（6）化学处理脱毒：抑制或杀死病毒

2、说明微尖嫁接技术脱毒的程序

微尖嫁接技术指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖以培养脱毒苗的技术。

主要程序：无菌砧木培养—茎尖准备—嫁接—嫁接苗培养—移栽。

★3、目前鉴定脱毒苗的方法有哪些？各有何特点？

（1）指示植物法：将一些对病毒反应敏感、症状特征显著的植物作为指示植物（又称鉴别寄主），利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法。这种方法条件简单，操作方便，为一种经济而有效的鉴定方法

（2）抗血清鉴定法：用已知抗血清鉴定未知病毒的种类。这种方法特异性高，测定速度快。所以抗血清法成为植物病毒鉴定中最有用的方法之一。

（3）电镜检查法：可以直接观察病毒，检查出有无病毒存在，了解病毒颗粒的大小、形状和结构，又可以鉴定病毒的种类。优点是方法先进、灵敏度高、能在植物粗提取液中定量测定病毒。但需一定的设备和技术。

4、简述植物无病毒原种长期保存的方法。

（1）低温保存：将茎尖或小植株接种到培养基上，置低温（1-9℃）、低光照下保存。材料生长极缓慢，只需半年或一年更换一次培养基，又叫最小生长法。

（2）冷冻保存（又叫超低温保存），一般以液氮（-196℃）保存植物材料。在如此低温下，新陈代谢活动基本停止，处于“生机停顿”状态

5、植物脱毒的意义

1）、能够有效地保持优良品种的特性

2）、快速繁殖品种，使优良品种迅速应用

3）、生产无病毒种苗，防止品种退化

4）、节约耕地，提高农产品的商品率

5）、便于运输

第10章《种质保存》复习题及参考答案

一、填空：

1、种质保存分为原生境保存和非原生境保存两种方式；

★2、超低温保存冷冻处理的方法包括：快冻法、慢冻法、预冻法和干冻法四种方法；

3、预冻法即分步冷冻法分为：两步冷冻法和逐级冷冻法两种方式；

★4、冷冻保存后细胞和器官最基本的活力检测方法是再培养法。

5、种质资源离体保存方法有两种：限制生长保存和超低温保存。

二、名词解释：

1、种质保存（germplasm conservation）：是利用天然或人工创造的适宜环境，保存种质资源，使个体中所含有的遗传物质保持其完整性，有高的活力，能通过繁殖将其遗传特性传递下去。

2、超低温保存（cryopreservation）：也叫冷冻保存（freeze preservation ），是指将植物的离体材料包括茎尖（芽）、分生组织、胚胎、花粉、愈伤组织、悬浮细胞、原生质体等，经过一定的方法处理后在超低温（-196℃液氮）条件下进行保存的方法。

3、种质资源的离体保存：是指对离体培养的小植株、器官、组织、细胞或原生质等材料，采用限制、延缓或停止其生长的处理使之保存，在需要时可重新恢复其生长，并再生植株的方法。

三、问答题

1、低温保存和超低温保存技术冷冻的方法

（1）快速冷冻法

（2）冷冻前的预处理

（3）解冻方法

（4）重新培养

2、冷冻保存的应用前景

1）、长期保存种质的遗传稳定性。

2）、长期保存去病毒的种质。

3）、保持稀有珍贵及濒危植物的种质资源。

4）、保持不稳定性的培养物，如单倍体。

5）、保持培养细胞形态发生的能力。

6）、防止种质衰老。

7）、延长花粉寿命，解决不同开花期和异地植物杂交上的困难。

8）、冷冻解冻过程可筛选抗逆新品种。

9）、便于国际间的种质交换。

植物组织培养实验基本步骤。。

植物组织培养实验基本步骤 一、母液的配置 1、MS大量元素母液的配制 将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3 、KNO3 、KH2PO4 、 MgSO4·7H2O 、CaCl2·2H2O ，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 2、MS微量元素母液的配制 将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4· 4H2O 、ZnSO4·7H2O 、 H3BO3 、KI 、CuSO4·5H2O 、CoCl2·6H2O ，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 3、MS铁盐母液配制 将铁盐配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：称

FeSO4·7H2O 和Na2·EDTA ，把FeSO4·7H2O和Na2·EDTA·2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解（磁力搅拌器，边加热，边搅拌）。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2·EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后加蒸馏水到最终容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。 4、MS有机化合物母液的配制 将有机化合物配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：肌醇、维生素B1 、烟酸、甘氨酸、维生素B6 、蔗糖，用蒸馏水依次溶解并定容至500ml后，转入500ml 细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 二、植物激素的配置 常见激素：二氯苯氧乙酸（2，4－D）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚－3－丁酸（IBA）、激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT）、6－苄氨基嘌呤（6－BA）、赤霉素（GA3）、 1、生长素类： （1）、生长素类在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织

植物组织培养的基本步骤

植物组织培养的基本步骤 成熟细胞离体——（脱分化）——分生细胞——（分裂）——愈伤组织——（再分化）——形态建成————完整植株。 培养基的主要成分 【水分】 【无机盐】1.大量元素：N，P，K，Ca，Mg，S（由相关的无机盐提供） 2.微量元素：Fe，B，Cu，Mn，Mn，Zn，Co 【有机营养成分】1.糖类 2.维生素 3.氨基酸 4.肌醇 5.天然有机物【植物生长调节剂】1.生长素 2.细胞分裂素 3.其他生长调节剂 【凝固剂】琼脂 【其他物质】1.活性炭 2.抗生素 3.抗氧化物质 4.硝酸银 培养基和组织培养用具的灭菌方式 【培养基，无菌水】高压蒸汽灭菌，0.105MPa灭菌15~30分钟 【移栽基质】曝晒，甲醛熏蒸或高压蒸汽灭菌0.14MMPa灭菌1~2h 【接种室，缓冲室】紫外线灯照射30min，或气雾消毒剂 【超净工作台】紫外线灯30min，之后打开风机过滤除菌 【外植体】不同的化学消毒剂浸泡消毒 【接种工具】70%乙醇浸泡或擦拭，之后用火焰灼烧灭菌 【培养室】3%来苏尔喷雾，或甲醛，气雾消毒熏蒸 【皮肤】先用肥皂洗手，接种前用70%乙醇擦拭 【瓶口，管口】70%乙醇擦拭，用火焰封口

【培养瓶表面】70%乙醇擦拭 【台面，桌面】70%乙醇擦拭或喷雾消毒 植物外植体的灭菌方式 【茎尖，茎段，叶片】1. 用70%乙醇浸泡30秒，再用无菌水冲洗1次。 2.用2%次氯酸钠浸泡15min或0.1%升汞浸泡5~10min。 3.若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴吐温。 4.消毒时要不断震荡，使植物材料与消毒剂充分接触。 5.最后用无菌水冲洗3~5次。 【果实】1.用乙醇迅速漂洗一下，再用无菌水冲。 2.用2%次氯酸钠浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【种子】用10%次氯酸钠浸泡20~30min，或0.1%升汞消毒5~10min，然后再用无菌水冲洗3~5次。 【花蕾】1.用70%乙醇浸泡10~15秒，无菌水冲洗一次。 2.在漂白粉中浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【根及地下部器官】用0.1%升汞浸泡5~10min 或用次氯酸钠浸泡10~15min，再用无菌水冲洗3~5次。 【消毒后的外植体应及时按照无菌操作技术接种在适宜的培养基上】

选修专题植物组织培养技术时作业堂堂清

专题三植物的组织培养技术 一、选择题 1.用菊花的茎尖植物组织培养可培育出试管苗。下面关于这一过程的说法正确的是 () A.进行培养时，一次性加足营养物质以防止污染 B.整个培养过程应在光下进行，有利于长叶 C.要根据培养过程的实际情况，更换培养基 D.整个培养过程都应在密闭条件下进行，以免杂菌的污染 解析：进行植物组织培养时，外植体不能进行光合作用，因此培养基中要加入有机物。一般来说，从接种外植体到出现愈伤组织，需要经过2周时间。2周以后，由于培养基中的营养成分已接近耗尽，必须更换培养基，进行继代培养。20 d以后，可以根据愈伤组织的大小，决定是继续进行继代培养，还是进行试管苗培养。如果愈伤组织长到直径为1～1.5 cm时，即可以进行试管苗培养，否则还需要进行第二次继代培养。首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭，不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长得更快。在愈伤组织进行继代培养期间，可将恒温箱的门打开，让愈伤组织见光。愈伤组织见光后，颜色可以转为绿色，试管苗应该进行见光培养。 答案：C 2.下列关于花药离体培养过程的叙述中正确的是() A.花药培养成功与否与材料选择无关 B.花药培养成幼苗后，一定不能分瓶培养 C.花药培养成幼苗的过程中，除了适宜的温度、pH等，还要注意照光 D.一般地讲，材料选在单核期时花药培养成功率最高 解析：花粉植株能否培育成功受多种因素影响，其中材料的选择与培养基组成是主要影响因素；当培养获得愈伤组织或幼小植株时必须分瓶培养，才能诱导愈伤组织或幼苗分化；从花粉到幼苗阶段，由于无叶绿体，所以不需照光；对一般植物来讲，选择单核期往往成功率最高。 答案：D 3.关于花药培养产生花粉植株的途径，下列叙述错误的是() A.主要由培养基中激素的种类及用量决定途径 B.花粉经脱分化形成胚状体，再分化成丛芽，然后诱导生根 C.产生胚状体是花药离体培养中特有的途径 D.花粉先形成愈伤组织再诱导分化成植株

18知识讲解植物的组织培养技术

植物的组织培养技术 【学习目标】 1、指导植物组织培养技术的基本原理和基本技术。 2、掌握植物培养过程中使用的无菌技术（重点）。 3、掌握植物知识培养的基本过程及操作。 4、说出被子植物花粉发育的过程及花药例题培养产生花粉植株的两种途径。 5、说出花药离体培养的因素，学习话要例题培养的基本技术。 【要点梳理】 要点一、植物组织培养的基础知识【高清课堂：植物的组织培养技术 高清未发布 课题1：基础知识】 1、植物组织培养的基本过程： 离体的植物器官、组织或细胞，在培养了一段时间以后，会通过细胞分裂，形成愈伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化（去分化）。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫再分化。再分化形成的试管苗移栽到地里，可以发育成完整的植物体。植物组织培养的过程可以简要归纳为： 离体的植物器官、组织或细胞（外植体）???→脱分化愈伤组织???→再分化根、芽—→植物体。 2、植物组织培养的理论基础：细胞的全能性 要点诠释： 细胞的全能性与植物组织培养间的关系 ①细胞的全能性是植物组织培养的理论基础。 植物组织培养的理论基础是细胞的全能性。植物细胞只有脱离了植物体，在一定的外部因素作用下，经过细胞分裂形成愈伤组织，才能表现出全能性，由愈伤组织发育、分化出新的植物体。 ②高度分化的植物细胞仍具有全能性的原因是所有体细胞均来自受精卵的有丝分裂，均有和受精卵相同的一整套遗传信息。 ③植物体的组织、器官的形成，是基因选择性表达的结果，其细胞的全能性受到限制，在离体状态下，其全能性才容易得以表达，表达的过程须经过脱分化和再分化。 ④容易进行营养繁殖的植物细胞，其全能性容易表达，易进行植物组织培养。 要点二、影响植物组织培养的因素 1、无机营养 （1）大量元素：除碳（C ）、氢（H ）、氧（O ）外，还有氮（N ）、磷（P ）、钾（K ）、钙（Ca ）、镁（Mg ）、硫（S ）等元素。 （2）微量元素：包括铁（Fe ）、铜（Cu ）、钼（Mo ）、锌（Zn ）、锰（Mn ）、钴（Co ）、硼（B ）和碘（I ）等。 2、有机营养 （1）维生素类：植物组织培养中经常使用维生素C 、维生素B 1（盐酸硫胺素）、维生素B 6（盐酸吡哆醇）、维生素H （生物素）、叶酸和烟酸等，一般使用浓度为0.1～10 mol ／L 。 （2）氨基酸：有甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、水解酪蛋白（CH ）和水解乳蛋白（LH ）等，是重要的有机氮源。 （3）有机添加物：是一些成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等的复杂化合物，它们对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用。 3、植物生长调节物质 植物生长调节物质是培养基中的关键物质，对植物组织培养起着重要、明显的调节作用。植物生长调节物质包括生长素、细胞分裂素及赤霉素等。

(医疗药品)药用植物组织培养实验指导

甘肃农业大学农学院 药用植物组织培养实验指导 柳福智编 农学院中草药栽培与鉴定教研室 2007年8月 前言 药用植物组织培养实验是根据中草药栽培与鉴定专业的培养要求，为学生开设的一门实验课程。药用植物组织培养实验的任务是使学生加深对药用植物组织培养基本理论的理解，掌握药用植物组织培养实验的基本操作技能，学习药用植物组织培养实验的基本知识，养成严格、认真和实事求是的科学态度，提高观察、分析和解决问题的能力，为将来参加工作打下良好的基础。 编者 2007年8月 学生实验守则 1、实验前认真预习，领会实验原理，明确本次实验的目的和要求，了解实验步骤和注意事项。

2、实验时要严格按照规范操作进行，仔细观察实验现象，认真记录有关数据。 3、要认真写好实验报告，实验报告要清楚、简练、整洁。 4、学生进入实验室必须严格遵守实验室规则，服从带教老师的指导。 5、爱护实验室的仪器设备，不准将实验室的仪器设备私自带出室外。 6、严格遵守操作规程及实验时应注意的事项，在使用不熟悉其性能的仪器和药品之前，应查阅有关资料或请教指导教师，不要随意进行实验，以免损坏仪器，浪费试剂，使实验失败，更重要的是预防发生意外事故。 7、实验过程中应注意防火灾、防爆炸、防腐蚀、防污染工作，牢固树立“安全第一”意识。 8、实验结束后，一切仪器试剂应放回原处，玻璃仪器要清洗干净，一些有毒、有腐蚀性的废液应倒入废液缸内。 9、实验台面要擦试干净，由值日生负责安全卫生工作，包括清理实验室，检查水、电的开关，清除垃圾和污物，关好门窗后方可离开实验室。 药用植物组织培养实验报告一般包括以下内容和要求： （1）实验名称、实验日期。 （2）实验目的写明通过本实验要达到的训练目的。

植物组织培养习题及答案

0．填空 1.根据培养的材料,植物组织培养分:愈伤组织培养、(器官培养、细胞格养、原生质体培养(悬浮培养 2.植物组织培养的发展分为三个阶段:萌芽阶段、奠基阶段，快速发展和快速发展和应用阶段 3，1902年,Haberlandt提出了植物细胞“全能性”学说,1934年, White出版了《植物组织培养手册》培养等类型从而使植物组织培养为一门新兴学科。 一．填空、 1，组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、调机、_天平、显微镜、_蒸馏水，发生器，酸度计 养基成分主要包括①无机营养成分、②有机营养成分)、_③植物生长调节物质、_④碳水化合物、⑤其它物质 3、培养基最常用的碳源是_蔗糖,使用浓度在1%-5%常用3% 4、糖在植物组织培养中是不可缺少的,它不但作为离体组织棱以生长的碳源而且还能维持培养基渗透压 5、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的凝固剂和支持物般用量6-10g/L之间 6.驯化的目的:在于于提高试管苗对外界环境条件的适应性,提高其光合作用的能力,促使试健壮,提高苗的移裁成活 7、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向,其比值高:有利于根的形成和愈伤组织的形成:低:有利于芽的形成 8、培养基灭菌一般在108kPa的压力下,锅内温度达_121℃C,维持_20-30min、 9.选择外植体时应选择①选择优良的种质、②选健壮的植株、③选最适的时期和④选取适宜的大小。 10、诱导胚状体比诱导芽的优点:(1)数量多、(2)速度快、_(3)结构完整 11、试管苗的生态环境:高温且恒温、高湿、弱光、无菌 12、培养基中加入活性炭的目的:利用其吸附能力,减少一些有害物质的影响大 13、筛选培养基的方法:单因子试验法、多因子试验法、广谱实验法 14、植物培养技术:灭菌、接种种、培养、驯化四个环节 15、试管苗的驯化注意:基质、温、光、水、肥、气的综合管理 二．填空 1.绝大多数培养植物再生植株时都先经过愈伤组织阶段 2.愈伤伤组织形成大致经历诱导期、分裂期一和分化期三个时期 3、愈用植物生长调节物质时要注意:种类和浓度生长素和细胞分裂素的比值4.愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式和胚状体方式 5.组织培养细胞再分化包括四个水平:细胞水平的再分化、组织水平的再分化、器官水平的再分化(器宣发生)和植株水平的分化 三．填空: 1.植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 2、茎尖培养根据培养目的和取材大小分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。前者主要是对茎尖长度不超过,最小只有几十微米的茎尖进行培养,目的是获得无病毒植株:后者是对几毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养,目的是离体快繁 3.不定芽产生的途径一是从外植体上直接产生二是从由外植体诱导产生的愈伤组织上产生 4.离体叶培养是指包括叶原基、叶栖、叶鞘、叶片、子吐等叶组织的无菌培养 5.在离体叶培养中,6-BA和KT利于芽的形成;24D利于愈伤组织的形成 四．填空 1、胚胎培养包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养 2、离体胚的培养分为二种类型:。成熟胚培养和_幼胚培养六

2010-2014植物组织培养高考题汇编(含详解)汇总

1.（2014广东卷）（16分）铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一，应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎（简称PLBs，类似愈伤组织）生产生物碱的实验流程如下： 在固体培养基上，PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图17所示，请回答下列问题： ⑴选用新生营养芽为外植体的原因是，诱导外植体形成PLBs的过程称。 ⑵与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在，，。 ⑶脱落酸（ABA）能提高生物碱含量，但会抑制PLBs的生长。若采用液体培养，推测添加适量的ABA可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案是探讨了以下问题： ①ABA的浓度梯度设置和添加方式：设4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复。因ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基后按比例加入。②实验进程和取样：实验50天完成，每10天取样，将样品（PLBs）称重（g/瓶）后再测定生物碱含量。如初始（第0天）数据已知，实验过程中还需测定的样品数为。 ③依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培养时间：当某3个样品（重复样）的时，其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。

【答案】（1）细胞分化程度低，容易诱导形成PLBs（2分）；细胞的脱分化（2分）（2）生长起始快（2分），快速生长时间较长（2分）；PLBs产量较高（2分）；（3）①灭菌、冷却（2分）；②75（2分）；③PLBs重量和生物碱含量乘积的平均值最大（3分） 【解析】（1）新生营养芽分裂能力强，全能性容易表达；根据题干可知，PLBs类似愈伤组织，外植体形成愈伤组织的过程是脱分化。（2）据图分析，光照下PLBs的重量高于黑暗条件下，原因可能是光照有利于细胞增殖、叶绿体的形成和进行光合作用制造有机物。（3）①由于ABA受热易分解，所以各种液体培养基灭菌后，冷却，再加入不同浓度的ABA ②根据题干可知，实验50天完成，每10天取样，需要取样5次，4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复，因此每次取样需要记录15个样品中的数据，共需要测定样品数75 ③适量的ABA可提高生物碱产量，当样品的平均值最大时，所对应的ABA浓度和时间为最适。 2.（2014江苏卷）（9分）为了获得植物次生代谢产物，先用植物外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中悬浮培养。请回答下列问题： （1）外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为。 （2）在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重、蔗糖浓度和pH的变化如右图所示。细胞干重在12d后下降的原因有；培养液中蔗糖的作用是、。 （3）多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。二倍体愈伤组织细胞经处理，会产生染色体加倍的细胞。为检测愈伤组织细胞染色体数目，压片前常采用纤维素酶和酶解离愈伤组织。若愈伤组织细胞（2n）经诱导处理后，观察到染色体数为8n的细胞，合理的解释是、。 （4）为了更好地获得次生代谢产物，生产中采用植物细胞的固定化技术，其原理与酵母细胞固定化类似。下列说法正确的有（填序号）。 ①选取旺盛生长的愈伤组织细胞包埋②必须在光照条件下培养

扬州市植物组织培养实验室建设指导方案

扬州市植物组织培养实验室建设指导方案 （试行） 一、建设目的 植物组织培养是20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。在快速繁育、种苗脱毒、远缘杂交、突变育种、基因工程和生物制品等方面都得到了应用。植物组织培养技术涉及到多项高中生命科学课程中的基础知识，例如：细胞全能性原理、细胞增殖、细胞分化、植物激素及生命的基本元素和物质等。在生物选修一《生物技术》教材中，组织培养已经作为一个专题实验，成为高中升学考试的一个考点。组织培养作为一项生物技术，它对学生的动手能力和科学素养都提出新的要求，使学生能够在知识层面、能力层面和情感层面上达到了全面的拓展。 二、建设要求 组织培养实验室面积一般为96-120平方米，学生实验依据无菌间超净工作台的多少分组进行，原则上6~8人一组。 组织培养实验基于对无菌条件的严格要求，由准备室、缓冲间、无菌室、培养室和炼苗室四部分组成。 1、准备室 功能：进行一切与实验有关的准备工作。完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。 设备：准备室应具备实验边台、药品柜、水池、仪器、药品、天平、纯水机（制作组织培养基用水）、酸度计、烘干箱、高压灭菌锅、超声波清洗器及常用的培养基配制用玻璃仪器等。 2、缓冲间 功能：是进入无菌室前的一个缓冲场地，减少人体从外界带入的尘埃等污染物。 要求：缓冲间需5～8平方米，保持清洁无菌。缓冲间需安装紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。 3、无菌间 功能：也叫接种室，主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序，是植物离体培养研究或生产中最关键的一步。

植物组织培养实验报告

植物组织培养实验报告 Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020

院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号 姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。 植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件

把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加

植物组织培养的应用及发展前景修订稿

植物组织培养的应用及 发展前景 集团档案编码：[YTTR-YTPT28-YTNTL98-UYTYNN08]

植物组织培养技术应用及进展 摘要：本文综述了植物组织培养理论的发展，重点论述其再脱毒、快繁、育种与有机化合物工业生产以及种质资源的保存等方面的应用，并对应用的前景作简单的展望。 关键词:植物组织培养；应用；进展 中图分类号： 1.理论起源 19世纪30年代，德国家施莱登和德国动物学家创立了细胞学说，根据这一学说，如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活。1902年，德国植物学家哈伯兰特在的理论是植物组织培养的理论基础。1958年，一个振奋人心的消息从传向世界各地，美国植物学家斯等人，用韧皮部的细胞进行培养，终于得到了完整，并且这一植株能够开花结果，证实了哈伯兰特在五十多年前关于细胞全能的预言。 植物组织培养的简单过程如下：剪接植物器官或组织——经过（也叫去分化）形成愈伤组织——再经过形成组织或器官——经过培养发育成一颗完整的植株。 植物组织培养的大致过程是：在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下来，用纤维素酶与果胶酶处理用以去掉细胞壁，使之露出原生质体，然后放在适当的人工上进行培养，这些器官或组织就会进行，形成新的组织。不过这种组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞，叫做。在适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。 植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及,在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科 2.植物组织培养发展简史 植物组织培养是20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。它是在人工配制的培养基上，于无菌状态下培养植物器官、组织、细胞、原生质体等材料的方法。 植物细胞的全能性是植物组织培养的理论基础。20世纪初，曾有人提出能否将植物的薄壁细胞培养成完整植株研究者从胡萝卜根的韧皮部取下一块组织，并在液体培养基中培养，使其分化出了愈伤组织，从愈伤组织又得到胚状体，胚状体转移到固体培养基上继续培养后，获得了完整的胡萝卜试管植株。经过栽培，此植株能够正常生长并开花结果，其种子繁衍出来的后代与正常植株的种子所繁衍出的后代别无二致。根据此实验可以得出以下结论：即不经过有性生殖过程也能将植物的薄壁细胞培养出与母体一样的完整植株。由于植物的每个有核细胞都携带着母体的全部基因，故在一定条件下，它们均能发育成完整植株，这就是所谓的植物细胞全能性。

植物组培自测题与参考答案(简)

第1章复习测试题 二、填空题 1．根据外植体的不同，一般可以将植物组织培养分为：植株培养、胚胎培养、器官培养、组织培养、细胞培养和原生质体培养。 2．在植物组织培养中，外植体脱分化后，再分化形成完整植株的途径有两条：一是器官发生途径，二是胚状体途径。 3．通过器官发生再生植株的方式有三种：第一种最普遍的方式是先分化芽，再分化根；第二种是先分化根，再分化芽，这种方式中芽的分化难度比较大；第三种是在愈伤组织块的不同部位上分化出根或芽，再通过维管组织的联系形成完整植株。 4．体细胞胚发生的途径可分为间接途径和直接途径。 5．植物组织培养的整个历史可以追溯到19世纪末和20世纪初。一个多世纪来，植物组织培养的发展大致可以分为探索、奠基和迅速发展三个阶段。 6．在Schleiden和Schwann所发展起来的细胞学说推动下，1902年德国植物生理学家G．Haberlandt提出了细胞全能性的设想，并成为用人工培养基对分离的植物细胞进行培养的第一人。 7．White、Gautheret和Nobecourt在1939年确立的植物组织培养的基本方法，成为以后各种植物组织培养的技术基础，他们三人被誉为植物组织培养的奠基人。 8．1958年英国人Steward等将胡萝卜髓细胞培养成为一个完整植株，首次通过实验证明了植物细胞的全能性，成为植物组织培养研究历史中的一个里程碑。 9．1960年Cocking等人用酶分离原生质体获得成功，开创了植物原生质体培养和体细胞杂交工作。同年Morel培养兰花的茎尖，获得了快速繁殖的脱毒兰花。其后，国际上相继把组织培养技术应用到兰花的快速繁殖上，建立了“兰花工业”。 10．花药培养在20世纪70年代得到了迅速发展，获得成功的物种数目不断增加，其中包括很多种重要的栽培物种。烟草、水稻和小麦等的花培育种在我国取得了一系列举世瞩目的成就。 三、是非题 （×）1．从理论上说，所有的植物细胞与组织材料都能培养成功，其培养的难易程度基本相同。 （√）2．愈伤组织是一种最常见的培养类型，因为除了茎尖分生组织培养和少数器官培养外，其它培养类型都要经历愈伤组织阶段才能产生再生植株。 （√）3．在组织培养中可采用愈伤组织诱变、花粉培养诱变等方法来进行植物育种等。 （×）4．单倍体育种已成为改良植物抗病、抗虫、抗草、抗逆性、品质等特性的新的重要手段。 （√）5．利用植物组织或细胞大规模培养，可以从中提取所需的天然有机物，如蛋白质、脂肪、糖类、药物、香料、生物碱、天然色素以及其它活性物质。 四、选择题 1．在A中培养物生长过程中排出的有害物质容易积累，由此造成自我毒害，所

植物组织培养知识点归纳教学提纲

第一章 1、植物组织培养：是指在离体条件下，利用人工培养基对植物的器官、组织、细胞、原 生质体等进行培养，使其长成完整植株 2、外植体：在植物组织培养中，由活体（in vivo）植物上提取下来的、接种在培养基上的 无菌细胞、组织、器官等均称为外植体。 3、愈伤组织：指在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。 4、应用 一、农业上的应用 1. 种苗快速繁殖(rapid propagation) 2.无病毒苗(virus free)的培养 3.在育种上的应用(breeding) （1）倍性育种，缩短育种年限，杂种优势明显； （2）克服远缘杂交的不亲合性和不孕性（胚培养）； （3）保存种质 （4）创造变异 二、在遗传学、分子生物学、细胞生物学、组织学、胚胎学、基因工程、生物工程等方面的应用。用于基因工程技术创造植物新种质。用于植物生长发育理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等。 三、利用组织培养材料作为植物生物反应器 第二章 1、细胞全能性（Totipotency）：指任何具有完整的细胞核的植物细胞都拥有形成一个完整植 株所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。 2、细胞分化（cell differentiation）：指导致细胞形成不同结构，引起功能或潜在的发育方式 改变的过程。 3、脱分化（Dedifferentiation）：指离体条件下生长的细胞、组织或器官逐渐失去原来的结构 和功能而恢复分生状态，形成无组织结构细胞团或愈伤组织 的过程。 4、再分化（Redifferentiation）：指脱分化的细胞重新恢复分化能力，形成具有特定结构和功 能的细胞、组织、器官甚至植株的过程。 5、植物组织培养中常遇到的问题以及解决措施 一、污染及防治： 1、真菌污染后，如果已形成孢子，则必须经高压灭菌后扔掉。但若是细菌污染，只 要及时发现，将材料上部未感菌的部分剪下转接，材料仍可使用。 2、用抗生素等杀菌药剂的处理，会影响植物材料正常生长。 二、褐变及防止 （1）选择合适的外植体 （2）合适的培养条件 （3）使用抗氧化剂 （4）连续转移 三、玻璃化问题及其防止

植物组织培养实验报告

如对你有帮助，请购买下载打赏，谢谢！ 院(系、部) 化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学实验日期2016.3-6 指导老师实验名称植物组织培养综合实验 一、实验目的 1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法 2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法； 3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法； 4.了解组织培养的基本程序； 5.掌握接种的方法和材料的培养过程； 6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术； 7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体； 8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别 二、实验原理 1.植物细胞的全能性 一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。 2.植物细胞表现出全能性的条件 1.离体状态； 2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）； 3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型 3.无菌条件 把植物的组织、器官等，使其在人工控制的无菌条件下，使植物在人工培养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、植物体、接种室都应是无菌的。 4.脱分化与愈伤组织 已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。 5.培养基 植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；营养丰富，在一般培养中无须额外加入复杂的有机成分；微量元素种类全，浓度高。这类培养基是目前使用最广泛的培养基。 6.生长调节物质 包括天然植物激素额人工激素类似物。植物激素是一类植物自身合成、同时对其生长发育具有重要调节作用的有机化合物。生长调节物质对于离题培养中的细胞分裂分

《植物组织培养》试题及答案教学教材

试卷编号NO： 高等函授教育《植物组织培养》试题 学号：姓名： 一名词解释：（10*2分=20分） 1、植物细胞组织培养 2、细胞全能性 3、脱分化 4、外植体 5、试管苗驯化 6、间接不定芽发生 7、双极性 8、微体嫁接 9、人工种子 10、体细胞无性系变异 二填空：（30*1分=30分） 1、目前植物组织培养应用最广泛的方面是 和。 2、由脱分化的细胞再分化出完整植株有两种途径，一种叫做，另一种叫做。 3、培养用具的常用灭菌方法有、、 。 4、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定，对其灭菌时不能进行，而要进行。 5、一般来说，黑暗条件下有利于的增殖，而往往需要一定的光照。 6、植物离体授粉技术通常包括、、 三个方面。 7、一般液体培养的继代时间较短，继代一次；而固体培

养继代时间可以长些，继代一次。 8、外植体器官发生的三种途径包括、、。 9、从再生植株倍性来看，小孢子培养通常产生植株，胚 培养通常产生植株，通常产生三倍体植株。 10、脱毒苗鉴定与检测的主要方法有、、 、。 11、在生长素中，对于许多作物花粉的启动、分裂、形成愈伤组织和胚状体起着决定性作用，但是对却有抑制作用。 12、用平板培养法培养单细胞或原生质体时，常用 来衡量细胞培养效果。 13、用药剂处理是诱导染色体加倍的传统方法。 三计算题（1*10分=10分） 某培养基的配方是MS＋BA 2.0mg/L＋NAA 0.5mg/L＋2.5%蔗糖＋0.7％琼脂粉。MS母液的浓度分别是：大量元素２０倍，微量元素500倍，铁盐100倍，有机物５０倍；BA母液浓度1.0 mg/ml ，NAA母液浓度0.1mg/ml。要配制400ml 该培养基，需要吸取各种母液各多少ml？分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克？（要求写出计算步骤）四简答题（5*5分=25分） 1、造成组织培养过程中发生污染的原因有哪些？如何有效控制污染？ 2、简述外植体消毒的一般步骤。

植物组织培养重点

器官培养：即离体器官的培养。植株培养：对完整植株材料的培养。 组织或愈伤组织培养:是对植物体的各部分组织进行培养或对由植物器官培养产生的愈伤组织进行培养，二者均通过再分化诱导形成植株. 细胞培养:是对由愈伤组织等进行液体振荡培养所得到的能保持较好分散性的离体单细胞或花粉单细胞或很小的细胞团的培养. 原生质体培养:是用酶及物理方法除去细胞壁的原生质体的培养。 初代培养：芽、茎段、叶片、花器等外植体在离体培养条件下诱导愈伤组织、侧芽或不定芽、胚状体过程植物组织培养：是指通过无菌操作分离植物体的一部分（外植体），接种到培养基上，在人工控制的条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。 愈伤组织：原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞，多在植物体切面上产生。 外植体：从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。 植物细胞全能型：任何具有完成细胞核的植物细胞，能拥有形成一个完整植株所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。 脱分化:已分化好的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到分生组织状态的过程。 再分化:脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。胚状体：在离体过程中产生一种形似胚（具有明显的根端和芽端），功能与胚相同的结构。 褐变现象：指在接种后，其表面开始褐变，有事甚至会使整个培养基褐变的现象。 继代培养材料的玻璃化：当植物材料不断的进行离体繁殖时，有些培养物的嫩芽，叶片往往会呈半透明水迹状，这种现象通常成为玻璃化。 人工种子：通过植物组织培养的方法获得的具有正常发育能力的材料，外被有特定的物质，在适宜的条件下可以发芽成苗的植株幼体。 植板密度：形成的细胞团数/植板的细胞总数×100% 对称融合：双方原生质体均带有核基因组和细胞质基因组的全部遗传信息。 非对称融合：指一方亲本的全部原生质与另一方亲本的部分核物质及细胞质物质重组产生不对称杂种。 继代培养：是初代培养之后的连续数代的扩繁培养过程。目的：繁殖出相当数量的无菌苗，最后达到边繁殖边生根的目的。 细胞悬浮培养：将游离的植物细胞按一定的细胞密度悬浮在液体培养基中进行培养的方法。根据培养基的类型分为: 固体培养（琼脂、卡拉胶等固化），半液半固体培养(固液双层)，液体培养（震荡、旋转或静置培养）。 液体培养的优点：不使用凝固剂，节约生产成本，营养吸收充分；操作过程简化。 组织培养按培养对象可分为：植株培养，器官培养，组织培养，细胞培养，原生质体培养。 植物组织培养一般过程:初代培养，继代培养，生根培养，驯化移栽。 植物组织培养的特点：培养条件可以人为控制，生长周期短，繁殖率高，管理方便，利于工厂化生产和自动化控制。 组织培养技术在农业生产上的应用主要体现于以下几个方面：快速繁殖优良苗木；获得脱毒苗；育种上应用；工厂化育苗。 1902年，德国著名的植物生理学家和植物学家哈伯兰特提出了高等植物细胞全能性。1958年，美国植物学家斯图尔德等人，用胡萝卜根韧皮部的细胞进行培养，得到了完整植株，证明了细胞全能性。 怀特于1943年发表了《植物组织培养手册》专著，使植物组织培养开始成为一门新兴的学科。 腺嘌呤与生长素的比例是控制芽和根形成的主要条件之一，这一比例高时，产生芽，这一比例低时，则形成根，相等则不分化。 标准的组培实验室包括：1、洗涤室，器具的洗涤，干燥和消毒，2、配置室，进行药品的保存，配置，消毒，分装等，3、灭菌室，培养基及使用器具的消毒与灭菌，4、接种室，进行材料的接种，内置超净工作

《植物组织培养》课程标准

《园林植物组织培养》课程标准 适用专业：园林技术、烟草栽培技术 第一部分前言 植物组织培养是在无菌条件下，将离体的植物材料（器官、组织、细胞、原生质体等）培养在人工控制的条件下，使其再生形成完整植株的技术。进入21世纪，生物技术发展迅猛，在植物生产中的应用愈来愈多，植物组织培养也成为生产中不可或缺的一种手段。基于工作过程的《植物组织培养》课程开发与设计，坚持以服务为宗旨，以就业为导向，直接面向生产实践，构建学校与企业供需和谐的技术平台，通过分解组培工作过程能力，将组培企业生产环节模块化，工作过程项目化、任务化，采用多种教学方法与手段，培养具有敬业精神和协作能力的专业技术人才。 一、课程性质 《植物组织培养》是园林技术、烟草栽培技术专业学习领域中的专业核心技术课程，是基于植物组织培养生产过程，突出培养学生组织培养操作技能应用的一门工学结合的课程。 本课程重视实践能力的培养，强调通过项目实战、理论与实训一体等方法，激励学生主动思考和大胆实践，进而形成积极的职业态度和和熟练的职业能力。 该课程以《植物及植物生理》、《植物生长与环境》等为前导课程，学习完本课程，学生直接进入顶岗实习阶段，在园林技术专业职业能力培养中起到了明显的支撑作用。 二、课程设计思路 围绕“工学结合，能力为本”的理念，通过校企合作，共同开发，根据组培具体工作岗位的典型工作任务，依照岗位对组培工作的职业能力要求，兼顾学生未来的可持续发展，运用项目引导教学、现场教学、企业实景教学等多种教学方法和手段，以培养学生组培职业工作能力为重点，选取教学内容。 1、面向职业岗位，注重素质结构 本课程是面向组培企业培养基制作工、组织培养接种工和组培苗驯化管理员3个岗位的需要，培养掌握组培核心职业能力的专业人才，提倡在全面素质结构基础上培养职业能力。 2、基于工作过程，建立职场环境 根据组培工作的内容，依照一般组培的工作流程，组织课程内容。依托“洋兰组培生产任务”、“铁皮石斛有机基质无土栽培技术研究”等课题，充分利用真实职业环境，组织参与真实职业活动，积累经验，锻炼学生的心智，培养学生合作共事能力，并使学生熟练掌握职业所需的主要知识、技能、态度和关键能力。 3、采用项目途径，开展体验参与 本课程构建“教、学、做一体”教学模式，以项目为载体，让学生在教师的指导下，通过实践、参与和合作等方式，实现项目目标，感受成功。在学习过程中进行情感和策略调整，以形成积极的学习态度，促进职业能力的提高。 4、注重过程评价，促进学生发展 建立能激励学生学习兴趣和自主学习能力发展的评价体系。注重学生学习的积极性和自信心。评价要有利于促进学生综合能力和健康人格的发展，促进教师不断提高教育教学水平，促进本课程的不断发展与完善。

植物组织培养实验参考答案9

植物组织培养实验复习题 一、名词解释 1、大量元素:指含量占生物总重量万分之一以上的元素，包括C、H、O、N、P、S、K、C、Mg等。 2、微量元素:含量占生物总重量万分之一以下的元素。 3、植物生长调节剂:人工合成的对植物的生长发育有调节作用的化学物质。 4、外植体：把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官 5、细胞全能性：植物体的每个细胞都含有该植物全部的遗传信息。 6、基础培养基：根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人工配置的营养基质。 7、愈伤组织:人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞。 8、褐变:植物组织中多酚氧化酶被激活，使酚类物被氧化成醌类物，可抑制其他酶活性，毒害外植体。 9、茎尖脱毒:茎尖分生区的病毒传播速度很慢，利用茎尖组培获得无病毒苗，来达到脱毒的目的。 10、不定芽：凡从叶、根或芽节间或是离体培养的愈伤组织上等通常不形成芽的部位生出的芽。 11、污染率：污染数除以接种数，再乘以100%。 12、诱导率：愈伤数除以未污染数，再乘以100%。 13、成活率：成活数除以未污染数，再乘以100%。 14、接种：将表面消毒的外植体转接到无菌的培养基上的过程。 15、消毒：消灭材料上的病菌（不损伤植物材料）。 16、灭菌：利用物理或化学的方法，达到组织培养所学的无菌环境。 17、母液：欲配培养液的浓缩液。 18、无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要危害病毒在植物内的存在表现为阴性反应的苗木。 19、植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体，培养在无菌培养基上和人工控制的环境中，使其生长、分化、增殖，甚至长出新的植株的过程和技术。 20快速繁殖：采取培养基配制，材料灭菌，无菌培养，幼苗转移到苗床，成苗转至大田栽种五步走的繁殖培养方式 21、继代培养：继代培养是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上的培养方式。 22、生根培养：将长到一定长度的微枝（>10mm）转移到生根培养基上培养。 23、玻璃化现象：试管苗的茎叶变成透明水渍状，生长畸形，增殖系数明显下降，难以诱导生根，即使诱导生根，其根系质量极差，移栽成活率极低。 24、暗培养： 25、液体培养：将所需培养物的悬浮液在液体培养基中培养的方法。 26、脱分化：一个成熟细胞回复到分生状态或胚性细胞状态的现象。 27、分化：由于细胞的分工而导致的细胞结构和功能的改变或发育方式改变的过程。 28、热处理脱毒：利用高温下使植物组织中的病毒部分钝化或完全失去活性的方法。 1 / 6 29、微尖嫁接技术：把极小（<0.2mm）的茎尖作为接穗嫁接到实生砧木上（无菌种子培养获无菌