戴安U-3000高效液相色谱仪基本操作说明书(2008)

戴安U-3000液相色谱使用手册之二

Chromeleon 6.80中文版

U-3000液相色谱基本操作

2008.

.戴安中国有限公司.

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目录

二 U3000基本操作 (1)

2.1 使用前的准备工作 (1)

2.1.1 接入稳压电源 (1)

2.1.2 打开电源开关 (1)

2.1.3 更换泵头清洗瓶中溶液 (1)

2.1.4 清洗定量环 (1)

2.1.5 流动相的更换和过滤 (1)

2.1.6 流动相的超声脱气 (2)

2.2 打开仪器电源开关 (2)

2.3. 打开软件 (2)

2.3.1 打开电脑 (2)

2.3.2 打开控制面板 (3)

2.4. 控制面板的使用 (6)

2.4.1 主页 (6)

2.4.1.1 常规按钮 (6)

2.4.1.2 Smartstartup启动 (6)

2.4.1.3 Smartshutdown关机 (10)

2.4.1.4故障指南 (16)

2.4.1.5信号显示 (17)

2.4.1.6审核记录 (18)

2.4.2 样品表控制 (19)

2.4.3 泵 (20)

2.4.3.1 基本按键 (20)

2.4.3.2 冲洗 (21)

2.4.3.3 更多选项 (211)

2.4.3.4 维修 (22)

2.4.3.5 验证 (23)

2.4.3.6良好性 (23)

2.4.4 进样器 (24)

2.4.4.1 命令 (24)

2.4.4.2 进样 (24)

2.4.4.3 启动 (25)

2.4.4.5 盘控制 (26)

2.4.4.6 温度控制 (27)

2.4.5 柱温箱 (27)

2.4.6 检测器 (27)

2.5 分析样品前的准备工作 (28)

2.5.1 系统的准备 (28)

2.5.2 分析样品的准备 (29)

2.5.3 排系统气泡 (29)

2.6 采集基线 (29)

2.7 进样与数据处理 (31)

2.8分析完样品后的维护工作 (31)

2.8.1 流路的清洗 (31)

2.8.2 样品瓶的清洗 (32)

2.8.3 洗针 (32)

2.8.4 关机 (32)

2.9 日常维护及注意事项 (32)

2.9.1 泵 (32)

2.9.2 手动进样阀或自动进样器 (33)

2.9.3 柱温箱 (33)

2.9.4 检测器 (33)

2.9.5 其它 (34)

2.9.6 软件 (34)

二 U3000基本操作

2.1 使用前的准备工作

2.1.1 接入稳压电源

将稳压电源的输入端插头插在墙上的插孔上。

2.1.2 打开电源开关

按下稳压电源前面板的“ON”键，大约一分钟后，稳压电源将正常供电。

2.1.3 更换泵头清洗瓶中溶液

必须采用非循环模式进行冲洗.

将一只1000ML容量的清洗瓶置于U-3000系统的最上方,清洗液为5%左右的甲醇或异丙醇的水溶液，所使用的试剂必须为色谱纯，用超纯水或二次蒸馏水来配置。

用一根硅橡胶管将清洗液通过蠕动泵直接连接到泵头的清洗液进口处,通过串联的方式对所有泵头进行清洗,最后经清洗出口直接排放到废液.

其它注意事项，可参考标准操作规程。

2.1.4 清洗定量环

若使用的是手动进样阀，需进行此步操作。

首先将手动进样阀的扳手反时针扳到头，手动进样阀将处于“Load”状态，用医用注射器吸入约1～2 ml的50%的甲醇或异丙醇后，接上7725阀专用接头（白色），从手动进样阀的进样口注入，进行手动进样阀的清洗；然后将手动进样阀的扳手顺时针扳到头，手动进样阀将处于“Inject”状态，以同样的方法清洗；使用前再用当天使用的流动相按上述操作清洗。

2.1.5 流动相的更换和过滤

1．检查流动相是否太少或放置太久。超纯水或缓冲盐建议每天必需更换且过滤，以防止长细菌。超纯水必须为新制，这一点尤其重要。（市售小瓶装质量好的纯净饮用水也是好的选择）

2.若您的仪器配置的是低压四元梯度泵，在摸索方法时可充分利用四元泵的作用，有机相用一个通道，超纯水或缓冲盐用另一个通道，一旦摸好条件可以配制该比例的混合溶剂，配好后先摇匀，后过滤，再超声脱气使用；当然也可设定好该比例由泵自动混合，减小人工混合带来的误差。

梯度洗脱则有机相用一个通道（如A通道），超纯水或缓冲盐用另一个通道（如B通道），使用一段时间建议A和B通道进行更换。

3. 混合流动相的过滤原则：纯有机相或含一定比例有机相的就要用有机系0.45μm的滤膜，水相或缓冲盐的就要用水系0.45μm滤膜。这一点需特别注意,因有机溶剂可以溶解水系滤膜,被溶解的水系滤膜更易损坏密封圈和柱塞杆。

4. 配好的流动相真空过滤时，当抽滤完后可继续抽滤几分钟，起到抽滤脱气的作用。

2.1.6 流动相的超声脱气

1. 过滤后的流动相需要超声脱气约10～20分钟。

2. 超声波清洗器的功率和频率不宜太小，且长宽高不宜太小，否则超声效果不佳。建议:功率≥200W，频率≥40KHZ，长宽高约：30×30×25cm（内径）。

3. 建议超声波中的水位尽量高于流动相瓶中的水位，超声脱气效果会更佳。

4. 超声的时间不易过长，超声波工作会发热，超声时间过久时，超声波中的水会发热，随之流动相也发热升温，导致改变流动相的组成比例。

2.2 打开仪器电源开关

打开仪器各部份后面板电源线下方的电源开关，仪器将开机自动进行自检。各部分自检成功后，方可正常进行以下各步操作。

2.3. 打开软件

2.3.1 打开电脑

打开电脑，等待约1~2分钟，变色龙服务监视器将会自动启动。

或者要双击电脑右下角的变色龙软件的服务监测器（Chromeleon server

monitor），

将跳出如下图所示界面：鼠标左键单击“启动”，激活监视器，方能进行以后的各项操作(包括以后用软件控制仪器也需要先激活监视器)。

如下图：“启动”后将变灰色，并显示软件的系列号，表明监视器已经启动。

2.3.2 打开控制面板

双击电脑桌面的“变色龙Chromeleon”图标。将出现如下界面：

类似电脑操作系统中的资源管理器，左方为根目录，右方为该目录下的文件夹或文件。

双击右方框下方中的“U3000仪器控制面板.pts”。或点击工具栏中“查看”

下方的“默认面板Tabset” 弹出如下所示界面，可自动创建一个新面板。

为方便使用，可将该面板保存到控制面板文件夹中，如下图所示：

软件会自动根据配置文件的设置生成相应的面板。以配置有泵、自动进样器、柱温箱、检测器为例，该面板中分别有6项（不同的仪器配置会略有不同）：主页、样品表控制、泵、进样器、柱温箱、检测器等。每一项的功能各有不同，在

以下部分中分别介绍每一部分的功能。

2.4. 控制面板的使用

2.4.1 主页

2.4.1.1 常规按钮

连接全部：点击连接全部，软件与仪器各部件全部建立起联接。

断开全部：软件与仪器各部件全部断开联接。

系统：

⑴ 监测基线_开：开始采集基线。

⑵ 监测基线_关：停止采集基线。

运行：将在以后章节中详细说明。

⑴ 开始批处理：开始运行一个或多个序列文件。

⑵ 终止批处理：停止运行一个或多个序列文件。

⑶ 停泵：泵停止运行。

创建：将在以后章节中详细说明。

⑴ 仪器方法：建立一个程序文件，即设定测样时的HPLC色谱条件。

⑵ 新建样品表：建立一个序列文件，即设定待测标样和样品的信息。

2.4.1.2 智能启动（Smart start up）

智能启动系统可以提前使仪器按指定程序开机和平衡系统。例如2007年10月15日设定智能启动程序，把延迟时间设定为2007年10月16日早上8点开机和平衡系统，那么10月16日早上8点仪器会自动开机和平衡系统，

示例：

点击”智能启动”键，在下图智能仪器平衡向导中选择“手动输入”点击“下一步”

在平衡条件页左下角最大平衡时间后空格中输入需平衡的时间，再双击左上角的Pump，进行泵平衡条件的设定。

在泵平衡页中进行泵平衡条件的设定。点击“确定”

在下面启动平衡图中点击“完成”。

查看下图叠加的中框：立即显示平衡启动记录：准备平衡启动；连接平衡设备；正在检查设备等，问是否要保存平衡程序？选 “是”或“否”

弹出下图U3000批处理表中就有”U3000Equilibration”，点击右下角的“延迟”

上8点仪器会自动开机并平衡系统。点击“确定”

软件中会自动生成一个平衡的序列文件“Equilbration”，按“开始”，立即弹出下图，根据提示完成指定操作后，系统将自动进行平衡，如下图所示：自动显示压力的波动值、检测器的漂移和噪音，若在设定的范围内，将认为系统已趋于平衡。

2.4.1.3 智能关机

在样品分析过程中，可以进行智能待机；如果将关机程序加入批处理后面，会自动进行智能关机。点击“Smartshutdown智能关机”键，进行关机或待机程序的设定，仪器将按指定程序自动关机或待机。操作步骤参照下列图表：

1．在智能关机向导页选择U-3000

2．为U-3000仪器选择“关机”或“待机”模式

3．进行泵的设置

4．自动进样器的设置

5．柱温相的设置

6．紫外检测器的设置

7．U-3000准备待机或关机

点击上图中的“完成”，在下图U3000批处理列表中生成待机程序，点击“开始”立即执行关机或待机程序。

如果流动相中使用了酸或缓冲盐，可以先手动设定或调用一个梯度清洗程序，运行该清洗程序作为关机程序。新建一个梯度清洗程序如下：

;001号15cm新柱子20071009开始使用

AcquireExclusiveAccess

ColumnOven.TempCtrl =ON

ColumnOven.Temperature.Nominal = 37.0 [℃]

ColumnOven.Temperature.LowerLimit = 5.0 [℃]

ColumnOven.Temperature.UpperLimit =85.0 [℃]

Pressure.LowerLimit = 3 [bar]

Pressure.UpperLimit = 250 [bar]

MaximumFlowRampDown = 6.000 [ml/min2]

MaximumFlowRampUp =6.000 [ml/min2]

%A.Equate = "100%甲醇"

%B.Equate = "%B"

%C.Equate = "%C"

%D.Equate = "10%甲醇/水"

PumpDevice = "Pump"

Wash

UV_lamp=OFF

Visible_Lamp=OFF

0.000 Flow = 1.000 [ml/min]

%B = 0.0 [%]

%C = 0.0 [%]

%D = 100.0 [%]

60.000 Flow = 1.000 [ml/min]

%B = 0.0 [%]

%C = 0.0 [%]

%D = 100.0 [%]

62.000 Flow = 1.000 [ml/min]

%B = 0.0 [%]

%C = 0.0 [%]

%D = 0.0 [%]

92.000 Flow = 1.000 [ml/min]

%B = 0.0 [%]

%C = 0.0 [%]

%D = 0.0 [%]

95.000 Flow = 0.000 [ml/min]

%B = 0.0 [%]

%C = 0.0 [%]

%D = 0.0 [%] ColumnOven.TempCtrl = Off

Pump.Standby =Standby

Sampler.standby=standby

ColumnOven.standby=standby

UV.standby=standby

ReleaseExclusiveAccess

End

备注：

1．如果分析用流动相是水/甲醇体系，清洗就用水和甲醇，如果分析用水/乙腈体系，建议仍用水和乙腈清洗，因为甲醇的粘度系数较高，洗脱强度又弱于乙腈。

2．从水系直接换到有机系。一般情况下，不要使用甲醇：水（50:50）冲洗色谱柱，因为甲醇：水（50:50）时的粘度系数最高，很容易造成压力超上限值，也易损坏色谱柱。

3．一般15cm的柱子须用50ml纯水以上（20倍柱体积）25cm柱子用80ml纯水以上冲洗柱子才能充分洗去盐，之后才能换甲醇冲洗后保存。

4．如果分析条件是加温的，建议到清洗完后再关柱温箱，因为温度降低导致流动相粘度升高，很容易造成压力超上限值。

5．最后把泵，检测器，柱温箱，自动进样器等设为待机状态。

2.4.1.4故障指南

若仪器出现故障或需要查看各部件的中文说明书，可点击“故障指南”，然后选择需要查询的部件即可，如下图所示：

的章节，帮助您解决问题。

考。

2.4.1.5信号显示

要调整在线采集色谱图的时间横坐标和信号纵坐标，可在“信号显示”的窗口中双击左键，即弹出属性对话框。

坐标轴/修饰：可调节横/纵坐标，使最佳显示色谱信号。

信号：可以选择UV通道，泵压，柱温等为显示信号。

色谱叠加：可以选择当前序列中对照品或某一样品谱图或历史序列中的色谱图作为背景比较。使用不是当前所运行序列中的谱图时，需选择“固定的色谱”，然后自行选择谱图。

1．点击左上角的“坐标轴/修饰”，在下图中可以设定时间横坐标和信号纵坐标

2．点击“信号” 可以选择UV通道，泵压，柱温等为显示信号。