分子诊断学复习资料
分子诊断学复习资料
——参照中国医药科技出版社（第二版）编写
1.分子诊断学:是以分子生物学理论为基础，利用分子生物学的技术和方法来研究人体内源性或外源性生物大分子和
大分子体系的存在、结构或表达调控的变化，为疾病的预防、诊断、治疗和转归提供信息和依据。
①主要特点：直接以疾病基因为探索对象，属于病因学诊断，对基因的检测结果不仅具有描述性，更具有准确性；
可准确诊断疾病的基因型变异，基因表型异常以及由外源性基因侵入引起的疾病。
灵敏度高，便于早期诊断及疾病预防；以基因分析为基础，特异性高。
②发展简史（三个阶段）
第一个阶段：准备和酝酿阶段1953年前，蛋白质是生命的物质基础，DNA是遗传物质基础。（三个实验：肺炎双球菌转化实验、体外转化实验、噬菌体转导实验）、
第二个阶段：DNA双螺旋结构、中心法则、PCR技术
第三个阶段：2001年，首张人类基因组序列图谱及其他物种基因组序列的公布。基因组分、蛋白质组学等方面的巨大技术进步，促进进入第三阶段，即以生物芯片技术为代表的高通量密集型技术。
③主要应用：感染性疾病、遗传性疾病、肿瘤的分子诊断，个体化医疗，其他如耐药性、疗效监测，多基因疾病
2.基因：是有功能的DNA片段，含有合成有功能蛋白质多肽链或RNA所必学的全部核苷酸序列，是遗传的结构和
功能单位。分为结构基因和调控基因。
①结构基因：编码蛋白质或RNA的编码序列调控基因：保证转录功能起调控作用的非编码序列
②操纵子（operon）操纵基因与其控制下的结构基因共同组成的功能单位
③断裂基因：指基因的内部存在间隔区，间隔区的DNA序列与该基因所决定的蛋白质没有关系。
间隔区又称为内含子。出现在成熟RNA中的有效区段为外显子。
重叠基因：指基因的开放阅读框（ORF）存在一个或多个核苷酸重叠的基因
跳跃基因：又称转座子，基因在染色体上的位置不固定，能由一条染色体跳到另一条染色体上。
必须基因：生物体中存在的一些维持生物细胞生长所必需的基因，缺少或突变这些基因均能导致生物体死亡
3.基因组（gnome）：细胞中一套完整单倍体的遗传物质的总和
基因组结构主要指不同的DNA功能区在DNA分子中的分布和排列
4.C值：基因组的大小又称C值，常用碱基数目或碱基对数目来描述
①C值是特异的，物种不同，差异极大，真核生物中，一般随着进化，C值增大
②C值矛盾：又称C值悖论，生物的进化程度与基因组大小不完全成比例的现象
5.真核生物基因组
1）基本特征：①有细胞核基因组和细胞器基因组之分；②核基因组以线状DNA分子的形式存在于染色质上；③基因多数为断裂基因，有内含子结构和大量重复序列；④单顺反子，基因家族；⑤核基因组由染色体DNA组成，分子量较大，结构复杂，与蛋白质结合。
注意点：①染色质的基本组成单位是核小体，由组蛋白核心和周围的DNA组成。组蛋白H2A、H2B、H3和H4各2个分子组成核心即组蛋白八聚体②一个基因有n个内含子，则相应有n+1个外显子③重复序列分为4类：单一序列、轻度重复序列（2—10个拷贝）、中度重复序列（10—12个拷贝）、高度重复序列（1万以上）④多基因家族：一些有编码功能的重复序列，即指起源相同，序列相似，功能相关的的一组基因，分为基因簇（相对集中分布在某一染色体的特定区域）和另一类基因家族成员在整个染色体上散在分布，甚至位于不同染色体⑤超基因家族：由基因家族和单基因组成的较大的基因家族，结构不等的同源性，功能不一定相同⑥假基因：基因家族中有的成员因突变而失活，不能表达出有活性的产物。
6、人类基因组计划（HGP）：旨在测出人类基因组30亿碱基对的核苷酸序列，发现所有人类基因并确定它们在染色体上的位置，破译人类全部遗传信息，发展基因组学新技术，探讨人类基因组研究的社会法律与伦理等问题的一个国际性研究项目。
1）主要任务：人类的DNA测序，包括序列图谱、遗传图谱、物理图谱、转录图谱等的绘制2）测序策略：经典的逐步克隆法、全基因组鸟枪法3）人类基因组概貌：①GC含量：平均41%（33%—65%）②CpG岛：即二核苷酸CG③染色体的重组率④基因突变率：男性多见⑤重组序列的含量，包括SINE、LINE、LTR、卫星DNA、Tn等⑥
单核苷酸多态性（SNP）含量⑦基因数量：2、6万—3、9万个⑧蛋白质数量：选择性剪接较多，使得蛋白质多而复杂⑨疾病基因⑩人基因组序列：99、99%相同4）人类基因组多样性：同一人种或不同人种基因组存在或多或少的差异。通常DNA分子中某一特定位点的变异频率低于1%为基因突变，高于1%为DNA分子多肽。人类DNA分子多肽性的产生有以下几种主要方式：①重复序列单元的拷贝数变异，如微卫星DNA多态性②转座因子导致的分子多肽，如Alu序列多态性③单个核苷酸的变异即SNP
7、原核生物基因组
1）一般特点：①基因组相对较小，通常为一条双链DNA分子②功能相关的基因高度集中，构成操纵子③重复序列少，大多数的蛋白质基因保持单拷贝形式，而RNA基因常是多拷贝④没有内含子，基因是连续的⑤多顺反子，构成转录单位⑥绝大部分DNA都是用于编码蛋白质的，只有很少不编码序列⑦DNA分子中有各种功能区
多顺反子（polycistron）：操纵子中常常有一至多个功能相关的结构基因串连一起，受同一个调控区调控，转录在同一个mRNA分子中。
8、质粒是多数细菌和某些真核生物细胞的染色体外的双链环状DNA分子
1）遗传特性：①双链环状DNA分子，且为共价闭合环状DNA（cccDNA）②质粒复制有赖于宿主细胞的复制，但其自身基因可控制合成的时限及拷贝数③垂直传递④不影响宿主细胞代谢，但可能
赋予宿主细胞新的表型⑤治理的复制方式为半保留复制。单向/双向，单向，双向。
2)特性：①质粒的不相溶性：两种不同质粒如果利用同一复制和维持机制，会在复制和随后向子代细胞分配的过程
中相互竞争，因而不能在同一宿主细胞内稳定存在，其中一种质粒将被丢失的现象。这两种质粒属于同一不相容群（InC）。②质粒的稳定性：质粒在宿主细胞内能稳定存在不被丢失称为质粒的稳定性。③质粒的转移性。
④质粒的选择性标记。
3）①质粒的拷贝数：在正常生长条件下，每个宿主细胞或每条染色体所对应的平均质粒数。由其携带的复制子决定。②复制子是一个复制单位，包括复制起点及其相关的调控元件。③质粒的复制由复制子与调节因子协同作用来启动。
4）松弛型质粒：以RNA为调节因子的质粒的复制不需任何自身编码的蛋白质，完全由宿主细胞提供的寿命较长的酶及其他蛋白质因子来完成，这些质粒的复制不受宿主细胞的控制，以所谓的“松弛”方式进行。属高拷贝质粒。严紧型质粒：携带与蛋白质调节因子相互作用的复制子的质粒。属低拷贝质粒。
9.转座因子：又称可转座元件，指能在基因组中从一个位点移至另一位点的DNA序列。
1）①转座现象或移位：指由可移动因子介导的遗传物质重排现象。
②转座作用结果：a.导致宿主细胞基因组DNA的插入突变或基因重排，是毗邻基因失活或表达水平下降。b.
转座因子被认为是基因组进化的重要推动力量，还可作为遗传学研究及基因工程的工具。
2）原核生物转座因子的种类：插入序列（IS）、转座子（Tn）、可转移性噬菌体。
①IS：a.IS两端有正向重复序列（DR）和反向重复序列（IR）；b.IR结构的对称使IS既可正向插入靶位点，也可反向插入靶位点；c.IS的中间位编码序列，仅编码与转座有关的酶，含有依赖p因子的转录终止信号及终止密码，从而导致插入位点的基因失活或表达水平下降。
②Tn：基因组中存在的能自主复制和位移的一些DNA序列。
特点：a.两端有反向重复序列；b.转座后靶位点重复序列是正向重复序列；c.编码与转座有关的蛋白；d.可以在基因组中移动。
3）转座类型：复制型转座、非复制型转座。
复制型转座：转座因子在转座过程中能够复制，结果是供体与受体都有一个拷贝的转座因子。需转座酶和解离酶。非复制型转座：转座因子不复制，直接从一个位点移到另一个位点，结果是供体失去一个转座因子而受体得到一个转座因子。需转座酶。
10.病毒基因组：1>特点：①只有一种核酸，4种类型，为双链DNA、单链DNA、双链RNA、单链RNA②核酸大小差别较大（1.3×103bp~3.6×106bp）③具有启动子和操纵子结构④具有重叠结构
2>结构：①帽子和poly（A）尾结构，对RNA起保护作用，并于病毒感染性有关
②黏性末端：基因组双链两端具有能够互补的单链DNA部分
③末端正向重复序列：又称末端冗余，指病毒双链DNA分子两端有一段相同的核苷酸
④末端反向重复序列（ITR）：指病毒基因组两端的反向互补重复序列
⑤重叠基因：指两个或两个以上基因的ORF共有一段DNA序列
⑥分段基因：指病毒基因组由几条不同的核酸分子组成，多冗于tDNA病毒，RNA病毒及双链RNA病毒
⑦CTR：即长末端重复序列，逆转录病毒逆转录后生产的dsDNA中，两端有CTR结构
11.核酸分子杂交基本原理：利用核酸变性和复性的性质，使具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下按照碱基互补配对原则形成异质双链的过程。（分子杂交可以发生在同源或异源的DNA链与DNA链之间，也可在RNA链与DNA链之间形成）
12.核酸变性（denaturation）：指维系核酸双链互补碱基对之间的氢链断裂变成单链的过程，并不涉及共价键的断裂。（黏度减小，浮力密度增大，260nm处紫外吸收增加，活性降低）（热变形，酸碱变性，化学变性）
Tm（melting temperature）：通常把热变性过程中DNA变性一半所需要的温度成为融解温度。DNA的Tm值在82~95℃之间
Tm影响因素：DNA的均一性，碱基组成，溶液的离子强度，pH，变性剂
13.DNA复性（renaturation）：当变性条件缓慢去除后，两条彼此分开的互补单链重新缔合成双螺旋结构的过程。（许多理化性质恢复，但热变性后骤然冷却，DNA则不可复性）
①退火（annealing）：热变性后，将温度缓慢降低而使DNA逐渐冷却即可复性的过程。
②复性过程分两步：成核作用（nucleation）和拉链作用（zippering）
成核作用：两条核酸单链随机碰撞形成暂时局部双链，如果局部双链周围碱基不能配对，则迅速解离，重新碰撞直到找到正确的互补序列，这个过程称为成核作用。
拉链作用：在成核的基础上，两条单链的其余部分碱基迅速互补配对，就像拉链那样形成完整的双链分子。
③复性速度用Cot1/2衡量，Co：单链DNA的起始浓度（mol/L），t为时间（s），Cot1/2表示单链DNA的起始浓度与复性一半所需时间之和，与复性速度成反比，与DNA复杂度有关
影响因素：DNA的分子大小和复杂度，离子强度，DNA的浓度，温度
14.探针（probe）：广义上指的是能特异性与特定靶分子发生相互作用，并能被某些方法所检测的分子
核酸探针：指能与特定靶基因序列发生特异性互补结合，并可用特殊方法检测的被标记的已知核酸序列
15.核酸探针的种类：基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针、寡核苷酸探针
1）基因组DNA探针：①制备方法：a.分子克隆 b.采用聚合酶链反应扩增特定的基因组DNA片段②优点：制备方法简便、省时、易得，稳定不易降解，标记方法多样也较成熟
2）cDNA探针：①cDNA（complementary DNA）：指与mRNA互补的DNA分子，它是以mRNA为模板，遵循碱基互补配对原则，由逆转录酶催化合成②优点：基因组DNA优点，不存在内含子和其他高度重复序列，尤其适用于基因表达研究（但制备困难）
3）RNA探针：杂交效率高，杂交分子稳定，不存在高度重复序列，非特异性杂交较少，不易标记，易降解
4）寡核苷酸探针：①特点：a.根据实验需要合成 b.长度一般为20~50nt c.可以识别靶分子的单个碱基变化 d.特异性不高，杂交信号不强②设计原则：a.探针长度一般20~50nt b.剪辑成分，Gtc含量在40%~60%为宜 c.不应存在大于4bp的互补序列 d.避免同一碱基重复出现多于4次e.同源性不应超过70%或有连续8个上碱基同源
16核酸探针的标记，两大类
1）放射性核素：最常用，灵敏度和特异性极高，但半衰期短，检测时间长，污染环境
非放射性核素：稳定、安全、经济、检测时间短，但灵敏度
2）理想标记物：①高灵敏度②标记物与探针结合后，不影响碱基对的特异性，杂交体的稳定性及其Tm值。
③检测方法应高灵敏度、特异、假阳性率低④标记物与探针结合后稳定，保存时间长⑤标记物对环境无污
染、对人体无损伤、价格低廉。
17 放射性核素的标记常用32P 35S 3H 125I 131I
1)类型特点：
①32P:比放射活性 3.4×1014Bg/mmol.最常用。放射性强，释放的β粒子能量高，穿透能力强，灵敏度高，半衰期仅14.4d，射线散射严重而影像分辨率，影响结果分析。
②35S：比放射活性5.55×1013Bg/mmol.释放的β粒子较32P稍低，半衰期87.1d，灵敏度比32P低，散射作用弱，分辨率较高，适用于原位杂交。
③3H：比放射活性1.07×1012Bg/mmol，释放的β粒子能量较低，半衰期12.1年，采用延长曝光时间的方法可产生本底低，分辨率高的结果，金庸与细胞原位杂交，可反复使用，对环境影响大。
④125I、131I：释放β粒子和γ射线，具有较高敏感性，较强分辨率，危害性大。
2)标记法：采用体外标记法，包括化学法和酶法
化学法：利用标记物分子和探针分子上活性基团间的化学反应，将标记物结合到探针分子的标记方法。
酶法：预先将标记物标记在核苷酸分子上，经过酶促反应将标记号的核苷酸分子或标记基因掺入或交换到探针分子中的方法，有切口平移法，随机引物法，末端标记法，PCR标记法。
①切口平移法：DNaseI Mg2+随机切割3’—OH引物EcoliDNA聚合酶I d NTP切除5’端的核苷酸合成互补单链
②随机引物法：随机引物是人工合成的由6个核苷酸残基构成的寡核苷酸片断的混合物。Klenow酶
③末端标记法：1）3’端标记法：限制性内切酶、klenow酶2）5’端标记法; T4噬菌体多核苷酸激酶（PNK）标记法、碱性磷性磷酸酶（ALP）切除5’端的磷酸基团PNK作用转移
18.非放射性核素标记：生物素、地高辛、光敏生物素、荧光素、酶标法（ALP HRP）
19.核酸探针的检测：
放射性：①放射自显影②液体闪烁计数法
非放射性：偶联反应、显色反应（酶促显色法、荧光法、化学发光法）
20.核酸分子杂交的类型：固相杂交和液相杂交两大类
1）①液相杂交：将待测核酸样品和核酸探针同时放入杂交液中进行反应，然后分离杂交分子和过量的未杂交探针，再对杂交结果进行检测
②固相杂交：预先将待测的靶核酸链固定在固相支持物上，然后与溶解于杂交液中的核酸探针进行杂交反应，洗去支持物上未参加反应的游离核酸探针，再检测杂交信号，分析结果。
2）常用固相杂交：Southern EP迹杂交NorthernEP迹杂交、菌落原位杂交、斑点杂交、狭缝杂交、原位杂交
3）Southern EP迹杂交:指经凝胶电泳分离的待测DNA片断转印并结合到一定固相支持物，然后用标记的探针DNA分子检测靶DNA的一种方法。
基本过程：限制性核酸内切酶消化待测DNA→琼脂糖凝胶电泳分离DNA片断→DNA变性并转印到固相支持物上→预杂交→与特异DNA探针杂交→杂交信号检测及结果分析
常用固相支持物：尼龙膜、硝酸纤维素膜。
（1）Northern印记杂交：指待测RNA（主要是mRNA）从凝胶转印到固相支持物上，与标化的DNA探针进行杂交的印迹技术。
与Sowthern印迹杂交不同点：a . RNA易被环境中存在的RNA酶降解，应避免RNA酶污染 b. RNA需要在变性剂存在下进行电泳，保持其单链状态，防止RNA分子形成二级结构，不能用碱变性 c. 印迹前将含有变性剂的凝胶用水浸泡除去。
21. 聚合酶链反应（Polymerase chain reaction,PCR）技术是指生物技术领域中最重要的四项技术之一（细胞融合技术，分子克隆技术，蛋白工程技术，基因扩增技术）特异，敏感，高效，简便，重复性，移易化等优点。
22.PCR的原理：模拟体内DNA半保留复制过程，通过变性，退火，延伸，三步反应的循环完成，靶基因的双链DNA通过变性解链为单链，特异的引物通过退火与单链DNA模版结合，在靶DNA的指导下引物的3’端延伸靶DNA的互补链完成一个循环，理论上每次循环结束后靶DNA扩增一倍，即靶DNA数目以2?几何级数方法。（1）反应体系：模版DNA，四种dNTP，引物，TaqDNA聚合酶、缓冲液（含Mg2+）
（2）变性（denaturation）:模版DNA经加热至95℃左右一定时间后，使模版DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链。
退火（annealling）:将下降至适宜温度（一般较Tm低5℃）引物与变性的DNA单链在碱基互补的基础上形成引物，模版杂交双链。
延伸（exension）:将温度上升至在70℃左右时，TapDNA聚合酶催化以引物为起点的从5’—3’端DNA链延伸反应，随着4种dNTP的掺入，合成新的DNA互补链。
（3）动力学：y=A(1=R) ?估算PCR产量，A为起始模板量，R为扩增效率
23.扩增产物的检测与分析
（1）凝胶电泳：琼脂糖凝胶电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳。
（2）PCR产物的酶切技术：PCR限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）
（3）PCR单链构象多态性分析PCR-SSCP
（4）核酸探针杂交分析
（5）PCR-酶联免疫吸附法
（6）PCR产物测序
25.PCR衍生技术：巢式PCR，逆转录PCR，多重PCR，锚定PCR，反向PCR，免疫PCR，原位PCR，定量PCR （QPCR）
26.荧光定量PCR技术：
（1）基本原理：基于荧光能量传递技术，通过对PCR扩增反应每个循环结束时产物荧光信号的检测，对起始模版进行定量分析。
2）实时荧光定量（real time FQ-PCR）：在荧光定量PCR反应中，引物的荧光化学物质，在每经过一个循环后，产生一个荧光强度信号，利用荧光信号累积及荧光强度变化实现对整个PCR过程实现监测。
荧光阈值：设定在荧光扩增曲线上处于荧光信号指数扩增阶段是的任意一个值，一般荧光阈值设置在3-15个循环内Ct值：每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数，与模板的起始拷贝数的对数存在线性关系3）荧光定量PCR技术：荧光染料法和荧光探针法
常用染料：SYBBGreenI
探针法：TaqMan技术，lightCycler探针技术，分子信标技术，复合探针法
各法原理图见P86-88
P90 表5-4 不同核酸扩增技术比较
27.实验区分为四个独立的工作区域：试剂贮存和准备区，标本制备区，扩增区，扩增产物分析区
四个基本原则：1.四个区域必须是相互独立的，2.各区的仪器设备及物品必须是专用的，3.各区不能直通，应没有缓冲间，4.产物分析区产安装排风扇或其他抽风装置
十六字口诀：各区独立，注意风向，因地制宜，方便工作。还应设立临床标本接收区
28.室内质量控制（IQC）室外质量控制（EQC）
IQC:包括测定前的质量控制，统计学质量控制，质量控制的评价等
29．DNA序列测定：即DNA一级结构的测定，指用人工的方法测定并分析核酸的碱基组成及排列顺序。它是研究基因结构，功能及其关系的前提，是临床疾病的分子诊断最为精确的判定依据
四种常用方法：Sanger双脱氧链末端终止法，Manxam-Glibert化学降解法，焦磷酸测序技术，杂交测序法
各原理及图见P100，103，105，106
自动化测序与传统方法比较
1．标化物不同：荧光染料（自动）放射性核素（传统）
2.加样方式不同：
3.监测手段不同：扫描仪放射自显影
PCR循环测序反应方法酶反应方法
集束话的毛细管电泳凝胶电泳
特点：简便，快速，结果准确可靠，安全无污染，测序能力增强
30、生物芯片技术：指通过微加工和微电子技术，在固相基质表面集成了成千上万密集排列的分子微阵列，以实现
对组织、细胞、核酸、蛋白质及其他生物分子进行高效、准确、高通量检测（微阵列芯片、微流体芯片）常用：基因芯片、蛋白质芯片、组织芯片、液相芯片、微缩芯片实验室等。
31、基因芯片（Gene Chip）：又称DNA芯片，DNA微阵列；将大量的基因片段有序的、高密度的固定排列在载体
上制成点阵，称之为芯片。
其原理：经过标记的待测样品DNA通过与芯片上特定位置的探针按碱基配对原理杂交后，经激光聚集荧光检测系统等对芯片进行扫描，通过检测杂交信号强度来获取样品分子的数量和序列信息，用计算机软件
进行数据比较和分析，从而对基因序列及功能进行大规模、高通量研究。
主要包括四个基本技术环节：芯片微阵列制备、样品制备及标记、样品与基因芯片的杂交、信号的检测及分析。
32、蛋白质芯片：指固定于支持节制上的多肽或蛋白质构成的阵列。据用途分：蛋白质功能芯片、蛋白质检测芯片。
据载体分：蛋白质微阵列、微孔板蛋白芯片、三位凝胶块芯片。还可分：抗体芯片、抗原芯片、肽芯
片、小分子芯片、适配体芯片。
33、组织芯片：也称组织微阵列（TMA），将成百上千个不同组织标本按预先设计的顺序排列固定在一张载玻片上
所成的微阵列。
34、液相芯片：又称悬浮阵列，流式荧光技术，是基于XMAP技术的新型生物芯片技术平台。其核心技术是把微
小的聚苯乙烯微球用荧光染色的方法进行编码，然后将每种颜色的荧光编码微球共价交联上针对特定
检测物的寡核苷酸或蛋白质探针。
优点：①仅需少量样本即可同时定性、定量检测同一样本中的多种不同目的分子——最突出优点②高
通量、高效率③灵敏度高④线性范围宽⑤重复性好⑥操作简单⑦灵活性好
35、微缩芯片实验室：又称微型生物（全：这个字不认识）分析系统（μ—TAS）
把生物和化学等领域所（波or谱：不认识）及的样品制备，生物化学反应和检测分析的整个过程集成
化，并缩微到一张芯片上自动完成，形成所谓的微型全分析系统。
36、分子诊断法：（目的物：病原微生物的DNA或RNA）
对病原体特异性核酸序列的杂交，对病原体基因序列的限制性内切酶酶谱分析，限制性片段长度多态
性连锁分析，对病原体基因保守序列的扩增检测基因芯片技术，支链DNA技术依赖核酸序列的扩增，
连接酶链式反应等。
乙型肝炎病毒：PCR
临床意义：HBV感染的早期诊断，监测治疗效果，判断病情，指导制订合理的治疗方案。其他方面结核分枝杆菌TB：TB DNA检测可采用PCR，FQ—PCR，竞争性PCR，免疫杂交PCR等，PCR—SSCP
血红蛋白病两类：①由于珠蛋白一级结构的变化所导致的异常血红蛋白病；②由于珠蛋白多肽链的组成比例改变和珠蛋白含量降低所导致的地中海贫血
镰状细胞贫血：β珠蛋白基因中第六位密码子的序列由原来的GAC改变为GTG，使对应的氨基酸由原来的谷氨酸→缬氨酸用RE酶切法诊断
地中海贫血：分为α地贫，β地贫，γ地贫，δ地贫，δβ地贫，γβ地贫等，表型基因型见P195表11-2
第一章：概念三个阶段
第二章：一些基本概念及各基因组特点质粒转坐因子基因多态性SNP
第三章：各酶概念及作用特点载体概念分类常用载体及筛选方法基本结构分子克隆的基本步骤及筛选方法第四章：核酸杂交基本原理探针分类标记方法常用标记物杂交类型（Southhern Blot）
第五章：PCR原理反应体系及优化检测与分析常见问题的分析与处理如何提高特异性
荧光定量PCR原理探针染料P90表5-4实验室分区
第六章：ＤＮＡ序列的测定４个方法的基本原理
第八章：概念种类液相芯片
乙型肝炎病毒结核分枝杆菌血红蛋白病
（一）核酸的分离纯化与鉴定：
1、核酸分离制备总原则：①保证核酸一级结构的完整性②尽量排除其他的污染，保证核酸的纯度
2、完整性鉴定：可采用凝胶电泳法，DNA看是否拖尾，RNA为2:1的关系
3、核酸的保存：双蒸水及TE缓冲液储存DNA，醋酸钠溶液或三蒸水、RNA酶储存RNA
4、抑制剂：①抑制DNase：A、柠檬酸、EDTA等金属螯合剂B、加去污剂SDS C、加蛋白变性剂②抑制RNase：
A、高温高压灭菌或用DEPC处理
B、加强的蛋白变性剂
C、加核糖核酸酶阻抑蛋白
5、技术路线的设计：
（1）核酸的释放①目的：裂解细胞、释放核酸②物理方法：物理干燥法、冻融法、渗透压调节法③化学法：酶解法
（2）核酸分离纯化：除去①非核酸类大分子污染物②不需要的核酸③溶剂等
（3）核酸的浓缩沉淀洗涤：多价阳离子沉淀，70%-75%乙醇洗涤
（4）核酸的鉴定：①紫外分光光度法检测核酸的浓度及纯度（>0.25ug/ml ） ②荧光分光光度法：溴化乙锭染料
6、酚抽提法制备哺乳动物细胞DNA （前处理→粗分离→精分离）
1）、EDTA 、SDS 等存在下用蛋白质酶K 消化细胞 2）酚-氯仿抽提含核酸的水溶液，除蛋白质3）氯仿抽提，取水相
7、质粒提取方法：碱裂解法、煮沸裂解、SDS 裂解、CsCl
8、蛋白酶K 酚抽提法：（DNA ）
匀浆组织→（SDS 、蛋白酶K 、EDTA ）→酚氯仿抽提????→?DNA
变性提取离心、蛋白质 水相/有机相→取上层水相→乙醇沉淀→重溶解DNA
9、异硫氰酸胍-酚-三氯甲烷一步法：（RNA ）
匀浆组织→苯酚-氯仿抽提→离心后取上层水相→乙醇沉淀→DEPC 水重新溶解RNA
（4’C/细胞裂解液、异硫氰酸胍、硫基乙醇、SDS ）
mRNA 提取：Oligo(dt)-柱层析法
第三章 分子克隆
1 DNA 重组：是指将不同来源的DNA 分子通过磷酸二酯键将末端连接形成重组DNA.
2.DNA 克隆（分子克隆）：将某一特定DNA 片段通过重组DNA 技术插入到一个载体（质粒和病毒等）中，然后在宿主细胞中进行自我复制所得到的大量完全相同的该DNA 片段的群体。
3.分子克隆技术中，常用的工具酶有：限制性核酸内切酶，DNA 聚合酶Ⅰ,逆转录酶，DNA 连接酶，碱性磷酸酶，多核苷酸激酶等。
4.限制性核酸内切酶（RE ）→重要的工具酶之一。RE 是一类能识别和切割双链DNA 特定核苷酸序列的核酸水解酶。
1）RE 命名与分类：命名：Hin d Ⅲ ①H 产生该酶的宿主菌属名→大写，斜体②③in 代表宿主菌的种名缩写→小写，斜体④d 代表宿主菌的株或型→正体⑤Ⅲ代表同一种菌株中不同限制酶的编号（按发现先后顺序）→罗马数字。分类：根据限制酶性内切酶结构作用不同，可将其分为Ⅰ型Ⅱ型Ⅲ型。①.Ⅰ型和Ⅲ型兼有修饰（甲基化）作用和依赖于ATP 的活性，但不能在识别序列上直接裂解DNA ，故用途较少，但Ⅲ型酶有其他特定用途。②Ⅱ型酶具有高度特异性的DNA 裂解点是基因工程和基因诊断中重要的工具酶，通常不特别说明即为Ⅱ型限制性内切酶。③Ⅱ型酶限制修饰系统分别由限制酶和修饰酶两种不同酶组成。2）Ⅱ型限制性核算内切酶的作用。P31-32,看表3-1.用途：①改造和构建质粒②绘制基因组DNA 物理图谱③基因组DNA 同源性研究④DNA 重组克隆及亚克隆⑤DNA 杂交与序列分析。回问结构：通常是双链DNA 分子中按对称轴排列的反向互补序列。星号活力：RE 在非标准条件下，能切割一些与其特异识别顺序类似的序列，酶的特异性降低，这种现象称为星号活力，使用时应避免产生星号活力。同工异源酶：在DNA 上，来源不同但能识别和切割同一位点的酶。
5.DNA 聚合酶.
1）DNA 聚合酶Ⅰ 和Klenow 片段
①DNA 聚合酶Ⅰ 是从大肠杆菌中发现的第一个DNA 聚合酶，分子量为109000.具有3种酶活性：①5’—3’聚合酶活性②3’—5’核酸外切酶活性 ③5’-3’核算外切酶活性
②Klenow 片段：用特异性的蛋白酶可将DNA 聚合酶Ⅰ 裂解为小片段与大片段后者即Klenow 片段，它具有5’--3’聚合酶活性及3’--5’外切酶活性，而失去了5’—3’外切酶活性，是分子生物学研究的常用工具酶
Klenow 片段的主要用途：①补齐双链DNA 的3’端，使3’端标记；②在cDNA 克隆中，第二股链的合成；③DNA 序列分析
③TaqDNA 聚合酶：最佳温度是70~80℃，Taq 酶具有5’—3’聚合酶活性和依赖于聚合作用的5’—3’外切酶活性。TaqDNA 聚合酶可用于DNA 测定及通过聚合酶链反应（PCR ）对DNA 分子的特定序列进行体外扩增（领域） ④逆转录酶：（多功能酶）P33图3-3
功能：（1）依赖RNA 的DNA 聚合酶活性，以RNA 为模版，4种dNTP 为底物（此过程称为逆转录作用），催化合成DNA 。（2）核酸酶H 的水解作用（3）以DNA 为模版的DNA 聚合酶作用
⑤末端脱氧核糖核苷酰转移酶（简称末端转移酶）TdT
功能：①在载体或目的基因3’端上加上互补的多聚体尾，形成便于重组的人工黏性末端②用于DNA 片段3’端的同
位素探针标记
6.DNA连接酶
主要有两者：大肠杆菌DNA连接酶和T4噬菌体DNA连接酶
辅基分别为NAD+（只能连接黏性末端）A TP（既能连接黏性末端，又能连接平末端）
☆重组DNA技术中常用T4噬菌体DNA连接酶
T4DNA连接酶最初来自受T4噬菌体侵染的大肠杆菌，但目前的分离纯化手段已能快速而又简便的得到大量高度特异性酶。
注意：DNA分子磷酸二酯键的断裂称为切口（Nick），可以用T4 DNA连接酶来修复。DNA分子中核酸缺失，称缺口（gap），不能单独用连接酶来修复。
7.碱性磷酸酶
常用两种细菌碱性磷酸酶（BAP）→由大肠杆菌分离出来的
小牛肠碱性磷酸酶（CIP）→由牛肠道分离出来的（两个催化去除DNA、RNA或dNTP上的5’-磷酸基团）主要用途：
①.除去DNA段上的5′磷酸，以防自身连接。
②.在使用T4多核苷酸激酶和32P同位素标记前，除去RNA或DNA上5′端的磷酸，以便进一步用32P标记的r-磷酸重新磷酸化，使5′端段被32P标记。
8. T4多核苷酸激酶（来源于T4噬菌体感染的大肠杆菌）。P35. 图3-5. 包括前向反应和交换反应。
9. 核酸酶S1:可水解双链DNA、RNA或DNA-RNA杂交分子中的单链部分。
作用：①.除去双链DNA的黏性末端以生产平末端。
②.除去cDNA合成时形成的发夹结构。
③.分析RNA的茎环结构和DNA-RNA分子的杂交情况等。
（二）载体
1.载体（vector）：是携带靶DNA（目的DNA）片段进入宿主细胞进行扩增和表达的运载工具，本质为DNA。
①.目前使用载体主要有质粒载体、噬菌体载体、病毒载体和人工染色体等多种类型。
②.根据其用途不同分为克隆载体和表达载体两类。
③.载体应具有以下特征：
1）在宿主细胞中具有自主复制能力或能整合到宿主染色体上与基因组一同复制的能力。
2）有合适的限制性酶切位点供外源DNA片段插入。载体上具有多个限制性酶的单一点（即在载体的其他部位无这些酶的相同切点）称为多克隆位点。
3）载体应赋予宿主某种十分明确的表型。
4）分子量不宜过大，以便于容纳较大的外源DNA片段并获得较高的拷贝数，也有利于体外重组操作。
5）具有合适的筛选标记，以便于区分阳性重组体和阴性重组体，常用的筛选标记有抗药性、酶基因、营养缺陷或形成噬菌斑的能力等。
6）配备与宿主相适应的调控元件，入启动子、增强子和前导序列等。
2.克隆载体
能将目的基因在受体细胞中复制扩增并产生大量目的基因的载体称为克隆载体。常有两种：质粒载体和噬菌体载体
①.质粒载体：
1）生物学特性
2）复制特性：紧密型和松弛型（与宿主有关）
3）用途：1.用于保存课扩增﹤2kb目的DNA。2.构建cDNA文库。3.目的DNA的测序。4.作为核酸杂交是的探针来源。
作为克隆体的质粒应具备以下特点：
①具有松弛型复制子；②在复制子外存在几个单一的酶切入点，以便目的DNA插入；③具有插入失活的筛选标记，理想的质粒载体应具有两种抗生素抗性标记；④分子量相对较小和较高的拷贝数。
质粒缺点：容量较小，一般只能接受小于15kb的外来DNA。
目前常用的质粒有PBR322，PUC系列，以及由后者衍生而来的PSP和PGEM系列等。
1）PBR322系列载体P36 图3-6看
特点：①带有一个复制起始点②具有二个抗生素抗性基因③具有较小的分子量④具有较高的拷贝数
2）PUC18、PUC19质粒载体
PUC系列质粒包含四个组成部分：P37 上数第三行①②③④
与PBR322质粒相比，PUC系列具有许多方面优越性，P37 第二段①②③P37看图3-7
②噬菌体载体：入噬菌体载体、MB噬菌体
噬菌体是指感染细菌的病毒，按其生活周期分为溶菌性噬菌体和溶源性噬菌体
1）入噬菌体主要用途：①用作一般的克隆载体；②用于构建一般的基因体或cDNA文库（小于22kb）；③用于抗体库或随机肽库的构建; ④核酸的序列分析。
入噬菌体包括插入型和置换型两类。具体自己看P37-38。其他的载体不是重点，但要了解P38-39
3、表达载体和穿梭载体讲的很少，了解它们的结构便可P39-41.
（三）分子克隆的基本步骤：
1.基本步骤P41 图3-10看
①目的基因的制备②载体的选择和制备③目的基因与载体的连接④重组DNA导入受体细胞⑤目的基
因的筛选和鉴定
1）目的基因的获取：（一）基因从文库中获取：
基因文库（G-文库）：是指含有某种生物全部基因随即片段的重组DNA克隆群。
（C-文库）：将细胞的全部mRNA经逆转录制备出全套的cDNA克隆群
（二）逆转录合成cDNA
（三）人工合成DNA片段（100bp）
（四）PCR合成
（五）直接从染色体DNA中分离目的基因
2）载体的选择：克隆载体及表达载体见第二节
3）目的基因和载体的连接：平末端连接和粘性末端连接（容易些）
黏性末端DNA分子连接：P43 图3—11
平末端连接法有以下几种方法①T4DNA连接酶连接 P48 图3—12、3—13 ②人工头连接③通过同聚尾连接4）将重组DNA导入受体细胞
（1）重组DNA分子导入原核细胞
将重组的DNA分子引入细菌（原核细胞），使其在细菌体内扩增及表达的过程称为转化作用
目的基因与载体在体外连接成重组体后，需先导入受体细胞，常用的受体细胞是大肠杆菌。转化方法：①感受态（Cacl2处理法）②电击法
5）重组体的筛选和鉴定
将重组质粒或重组噬菌体导入宿主细胞经初步扩增后，常利用遗传标记的型特征和重组子的结构特征来筛选和鉴定含有目的基因的阳性菌落加以加倍。
（１）根据载体的性状变化进行筛选：筛选出转化菌，筛选带重组体的克隆，对
ＤＮＡ重组体进行鉴别。
插入失活效应：选用含有两个以上的抗药基因的载体，外源DNA片段插入其中一个基因，并导致这个基因的失活，就可用两个含不同药物的平板，互相对照，筛选含重组DNA的菌落。这就是插入~~~~
2）、根据重组DNA的结构特征进行筛选
①重组子大小鉴别筛选②限制性内切酶图谱进行分析③PCR扩增方法进行鉴定④核酸分子杂交方法进行鉴定⑤DNA序列分析鉴定
（四）克隆基因的表达
☆1、原核生物基因表达的特点：P47、?????
☆2、真核生物基因表达的特点：P48、???
各章要点目录：
第一章：概念三个阶段
第二章：一些基本概念及各基因组特点质粒转坐因子基因多态性SNP
第三章：各酶概念及作用特点载体概念分类常用载体及筛选方法基本结构分子克隆的基本步骤及筛选方法第四章：核酸杂交基本原理探针分类标记方法常用标记物杂交类型（Southhern Blot）
第五章：PCR原理反应体系及优化检测与分析常见问题的分析与处理如何提高特异性
荧光定量PCR原理探针染料P90表5-4实验室分区
第六章：ＤＮＡ序列的测定４个方法的基本原理
第八章：概念种类液相芯片
乙型肝炎病毒结核分枝杆菌血红蛋白病
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医学影像诊断学考试题库 医学影像学 标准化试题 A 型题： 1、 下列哪项不是骨肿瘤的基本 x 线征象。（） A .骨质破坏 B ?软骨破坏 C ?椎旁脓肿 D .瘤骨和瘤软骨 E ?肿瘤的反应骨 2、 患者30岁，述膝关节间歇性隐痛，肿胀半年多, 触之有乒乓球感， 在 x 片上胫骨上端内侧呈膨胀性皂泡样骨质破坏， （） A ?骨囊肿 B ?动脉瘤样骨囊肿 C ?软骨母细胞瘤 D ?熔骨型骨肉瘤 E ?骨巨细胞瘤 3、 骨巨细胞瘤的典型 x 线征象。（） A ? 位于干骺端的膨胀性偏心性囊性骨质 破坏，内有 B ?远距骨干骺端的偏心性囊性骨质破坏， 边缘硬化。 C ? 骨端的囊性破坏区，其透亮区模糊，皮 质变薄。 D ?近距骨干骺端的中心性囊性骨质破坏，常伴有病理性骨折。 E ? 位于 骨骺处多发性骨质破坏，内有钙化。 4、 非骨化纤维瘤的好发部位是（ ） A ? 胫骨近端及股骨远端。 B ? 胫骨远端 及股骨近端。 C ? 肱骨近端。 D ? 颅顶骨。 E ? 脊柱骨。 5、 骨肉瘤的好发年龄是（ ） A .15岁以下。 B ?15-25 岁之间。 C ?20-40 岁之间。 D ? 婴幼儿。 E ?40 岁以上。 6、 从骨髓瘤的 x 线表现中，找出错误的（ A ? 好发于颅骨，脊柱，骨盆，肋骨等部位。 B ? 骨质普遍稀疏。 C ? 颅骨呈多发性穿凿状骨质破坏。 D ? 脊柱侵蚀常破坏椎弓根。 E ? 肋骨呈膨胀性分房状骨质破坏。 7、 下述哪个肿瘤来源于骨髓及造血组织（ A ?骨巨细胞瘤 B ? 骨样骨瘤。 C ?骨软骨瘤。 D ? 尤文氏瘤 E ? 动脉瘤样骨囊肿。 &骨肉瘤的最主要的 x 线征象（） A .骨质破坏 B .软组织肿块。 C .codman 氏三角。 D .软骨破坏 E .骨肿瘤骨。 9、 下列哪项临床表现对诊断骨髓瘤最有价值： A ． 50岁以上的男性 B .全身性疼痛 C . 尿中出现本周蛋白 D .进行性贫血 E.血清钙及球蛋白升高 10、 X 线表现的严重程度与患者的无明显临床症状不相称, 转移之特征 A. 乳癌骨转移 B. 甲状腺癌骨转移 C. 前列腺癌骨转移 D. 鼻烟癌骨转移 查胫骨上端内侧肿胀， 横径大于纵径， 诊断为： 皂泡样骨间隔。 为下述何种肿瘤骨
临床诊断学考试重点
二、各章重点(按照课件顺序) (二)发热:当抗体在致热源作用下或各种原因引起体温调节中枢得功能障碍时,体温升高超出正常范围,称为发热。 1热型及其临床意义(选择或者名解,要注意写“此种热常见于……”) (1)稽留热:指体温恒定地维持在39—40℃以上得高水平,达数天或数周,24小时内体温波动范围不超过1℃,常见于大叶性肺炎与伤寒高热期。 (2)弛张型:指体温常在39℃以上,波动幅度大,24小时内波动范围超过2℃,且都在正常水平以上,常见于败血症、风湿热、重症肺结核与化脓性炎症。 (3)间歇热型:指体温骤升达高峰后持续数小时,又迅速至正常水平,无热期(间歇期)可持续1天至数天,如此高热期与无热期反复交替出现,常见于疟疾、急性肾盂肾炎 (4)波状型:指体温逐渐上升达39℃或以上,数天后又逐渐下降至正常水平,持续数天后又逐渐升高,如此反复多次。常见于布鲁菌病、结缔组织病、肿瘤。 (5)回归热:指体温急骤上升至39℃或以上,持续数天后又骤然下降至正常水平,高热期与无热期各持续若干天后规律性交替一次。常见于回归热,周期热,霍奇金病。 (6)不规则热:指发热得体温曲线无一定规律,常见于结核病、风湿热。 2呼吸困难病因分析(只记病因即可)。“三凹征”必考,肺性呼吸困难临床分类(类型、特点与病因) （1）病因肺源性//心源性//中毒性//神经精神性//血液性 （2）三凹征:上呼吸道部分阻塞患者,因气流不能顺利进入肺,故当吸气时呼吸肌收缩,造成肺内负压极度增高,从而引起胸骨上窝、锁骨上窝与肋间隙向内凹陷,称为三凹征,常见于气管肿瘤、气管异物、喉痉挛。 ,常见于气管肿瘤、气管异物、喉痉挛。 呼气性呼吸困难得特点就是呼气费力、呼气时间明显延长而缓慢,常伴有干啰音,常见于哮喘。 混合性呼吸困难得特点就是呼吸气都困难,呼吸频率加快变浅,听诊肺常有呼吸音异常,可有病理性呼吸音,常见于广泛肺实变与肺间质病变以及阻塞性肺气肿。 3心源性呼吸困难——左心衰得三大特点,粉红色泡沫痰——急性左心衰,酸中毒性大呼吸得常见两个疾病。 (1)左心衰竭呼吸困难特点 △活动时出现或加重,休息时减轻或缓解 △仰卧时加重,坐位时减轻(回心血量↓、膈肌位置↓)→强迫体位 △夜间阵发性呼吸困难:睡时迷走兴奋性增高,冠脉收缩,心率减慢,心肌收缩力降低;卧位,膈肌上移,肺活量减少; 卧位,静脉回流量增多,肺淤血加重。 （2）粉红色泡沫痰——急性左心衰 (3)酸中毒性大呼吸(Kussmaul呼吸):常见于慢性肾功能衰竭(尿毒症)&糖尿病酮症酸中毒 4思考题 △夜间阵发性呼吸困难:由急性左心衰引起。机制①迷走神经兴奋→冠状动脉收缩→心肌供血下降→心功能下降②回心血量上升→肺淤血加重 5咳嗽得音色等(选择题,老师尤其提到“金属音”),铁锈色痰——肺炎球菌大叶性肺炎,粉红色乳状痰与红砖色痰(这两个老师没提,顺带瞧瞧吧) (1)音色:指咳嗽时声音得色彩与特性①嘶哑:声带炎症或肿瘤等②犬吠样:会厌、喉部病变或气管受压③金属音调样:纵隔肿瘤、主动脉瘤、肺癌④微弱:极度衰竭或声带麻痹 (2)性质:铁锈色痰(肺炎球菌、大叶性肺炎)、粉红色乳状痰(金葡菌)、灰绿色/红砖色痰(克雷伯杆菌)
遵义医学院诊断学考试重点
1、三凹征：当上呼吸道有部分阻塞时，气流进入体内不畅，呼吸肌收缩，肺内压极度升高，使胸骨上窝，锐骨上窝，肋间隙明显凹陷。 2、奇脉：平静吸气时脉搏明显减弱甚至消失的现象，机制：左室排血量减少，见于心胞积液。 3、Murphy征：检查时医师以左手掌平放于患者左胸下部，以拇指腹勾压于右肋下胆囊点处，然后嘱患者缓慢深吸气，在吸气过程中发炎的胆囊下移时碰到用力按压的拇指，即可引起疼痛，此为胆囊触痛，如因剧烈疼痛而致吸气中止。 4、棒状小体：在细胞出现红色的细小棒状简称棒状小体。初步诊断为急性白血病。可以鉴别急性淋巴白血病和急性非淋巴白血病。 5、阵挛：在锥体束以上病变，深反射亢进进，用力使相关肌肉处于持续性紧张状态，该组肌肉发生节律性收缩，称为阵挛，常见的有以下两种：踝阵挛、髌阵挛。 6、等渗尿：禁饮尿渗量在300mOsm/kgH2O左右时，即与正常血浆渗量相等，称为等渗尿。 7、核右移：周围血若中性粒细胞核出现5叶或更多分叶，其百分率起过3%。 1、脑膜刺激征：脑膜受激动的体征，阳性出现于脑膜炎，蛛网膜下腔出血，和质压增高等。包括：颈强直、Kernig征、Brudzinski征。 2、二尖瓣P波：有肺心病病史者出现，P波增宽的心电图改变，（P波增宽时限>=0.12s，P 波成双峰型，双峰间距>=0.04s。 3、蜘蛛痣：皮肤动脉末端分支性扩张所形成的血管痣，形似蜘蛛。 4、心悸：是一种自觉心脏跳动的不适感觉或慌感，当心率加快时感心脏跳动不适，心率缓慢时则感搏动有力，心悸时心率可快可慢也可有心率失常，发生机制认为与心动过速每次心搏出量和心率失常有关。 5、胃肠型：胃肠到梗阻塞，梗阻近端的胃或肠段饱满而隆起，可显出各自的轮廓。 6、内生肌肝清除率：肾单位时间内把若干毫升血液中的内在肌酐全部清除出去，称为内生肌酐清除率。 7、窦性心率：P波规则出现二联直立，AVR联倒置。 1、集合反射：嘱病人注视1m以外的目标，然后将目标逐淅称近眼球，正常人此时可见双眼内聚，瞳孔缩小，称为集合反射。 2、负性心尖搏动：心脏收缩时，心尖搏动内陷，称负性心尖搏动。见于粘连性心包炎。 3、核左移：周围血中出现不分叶核粒C的百分率增高时称核左移。 4、Rivaita试验：浆膜上皮细胞受炎症刺分泌黏蛋白量增加，黏蛋白是一种酸性糖蛋白，其等电点为Ph3-5，因此可在稀醋酸溶液中析出，产生白色沉淀，漏出液黏蛋白含量很少，多为阴性反应，渗出液中因含有大量黏蛋白，多呈阳性反应。 5、期前收缩：期前收缩是指原于窦房结以外的异位起搏点提前发出的激动，又称为过早搏动。 6、舟状腹：严重时前腹壁凹陷几乎贴近脊柱，肋弓、髂嵴和耻骨联合显露，使腹外形如舟状腹。 7、管型：是蛋白质、细胞或碎片在肾小管、集合管中凝固而成的圆柱形蛋白聚体。 1、异常支气管呼吸音：如正常肺泡呼吸音部位听到支气管呼吸音，则为异常的支气管呼吸音，或称管样呼吸音。 2、杜氏双重杂音：将听诊器置于股动脉上，稍加压力，即可听到收缩期与舒张期皆可出现，不连续的双重杂音。 3、液波震颤：腹腔内有大量游离液体时，如用手指叩击腹部，可感到液波震颤，或称波动感。需有3000-4000ml以上液量才能查出，不如移动性浊音敏感。
诊断学试题及答案完整版本
佳木斯大学继续教育学院考试卷 专业班级康复治疗学专升本科目诊断学 班级学号姓名 一、名词解释（每小题4分，共20分） 1. Kayser—Fleischer：环角膜边缘出现黄色或棕褐色的色素环，环的外缘较清晰，内缘较模糊，称Kayser—Fleischer环，是铜代谢障碍的结果，见于肝豆状核变性。 2. 肝颈静脉回流征：当右心衰竭引起肝淤血肿大时，用手压迫肝脏可使颈静脉怒张更加明显，称为肝颈静脉回流征阳性。 3. Kussmaul呼吸：当有重度代谢性酸中毒时，出现深而快的呼吸，使机体代偿性地排出过多的二氧化碳，以调节血中的酸碱平衡，该呼吸称为Kussmaul呼吸或深长呼吸。 4. 三凹征：当上呼吸道部分梗阻时，气流进入肺中畅，吸气时呼吸肌收缩加强，肺内负压明显增高，出现胸骨上窝，锁骨上窝及肋间隙向内凹陷，称为“三凹征”。 5. 类白血反应：是指机体受某些疾病或外界因素刺激而产生白细胞总数显著增多，和（或）外周血中出现幼稚细胞，类似白血病表现的血象反应。 二、填空题（每空0.5分，共20分） 1. 发热的临床分度，按发热的高低可分为：低热37.3-38℃，中等度热38.1-39℃，高热39.1-41℃，超高热41℃以上。 2. 常见热型有稽留热、弛张热、间歇热、波状热、回归热以及不规则热。 3. 胆汁淤积性典疸患者，检查时可见血清结合胆红素增加，尿色变深，粪便颜色变浅或呈白陶土色。 4. 问个人史中的居住地时，应注意是否到过疫源病和地方病流行地区。 5. 手的感觉以指腹和掌指关节的掌面的皮肤最为敏感，故多用此两个部位进行触诊。 6. 营养状态通常根据皮肤、皮下脂肪、肌肉发育、毛发等情况进行综合判断。 7. CRP是一种急性时相反应蛋白，具有激活补体、促进吞噬等作用。 8. 出现异常支气管呼吸音的原因有肺组织实变、肺内大空腔、压迫性肺不张。 9. 常用于计数胸椎的标志是第七颈椎棘突 10. 左心室增大时，心尖搏动向左下移位；右心室增大时，心尖搏动向左移位，右位心时，心尖搏动位于右侧第五肋间即正常心尖搏动的镜相位置。左侧卧位时，心尖搏动向左移 2-3cm ；右侧卧位时，心尖搏动向右移 1.0-2.5cm 三、选择题（每小题1分，共30分） 1. 体温持续在39.0～40.0℃以上，数天或数周，24h内波动范围<1℃称之为( A ) A、稽留热 B、间歇热 C、回归热 D、波状热 E、驰张热 2. 一青年男性，饱餐后突发剧烈中上腹部刀割样疼痛，板状腹，最可能的诊断是（C ） A、急性胰腺炎 B、急性胆囊炎 C、消化性溃疡 D、急性胃炎 E、以上都不是 3. 某患者生气后突发呼吸困难，呼吸60次/分，伴手足抽搐，最可能的诊断是( E ) A、自发性气胸 B、肺梗死 C、支气管哮喘 D、心源性哮喘 E、癔病 4. 中枢性发绀见于( B )
诊断学知识点汇总_复习资料.doc
诊断学知识点汇总，复习资料 绪论 1、症状概念，2体格检查，,诊断学内容 第一篇常见症状 1、体征，2正常体温.稽留热、弛张热的定义，\咯血定义，4 '呼吸困难定义，6三种肺性呼吸困难表现（尤期前二种），1心 原性呼吸困难的特点 &胸痛的病因, 9中心与周围性紫组不同原因，1Q心原性与肾 原性水肿的鉴别 11、肝原性水肿表现特点12急性腹痛的常见原因 H呕血的常见原因，出血量的估计，呕血与便血的相互关系 14黄疸（和隐性）的定义，三种黄疸的鉴别，15嗜睡与昏睡的区 别，浅与深昏迷的区别 第二篇问诊 1、问诊的内容，2主诉的定义和组成 艮现病史是病史中的主体部分，由哪些组成，与既往史有何不同第三篇检体诊断 1、体检基本方法有哪些？触诊的方法有哪些？叩诊的方法，体型的分类2,常见面容，三种体位，皮肤发黄二种原因的区别，红疹与出血点
的区别，蜘蛛痣与肝掌购 艮霍纳氏征，瞳孔大小的改变，4扁桃体肿大的分度，5.颈静脉 怒张的定义 6甲状腺肿大的分度，听到血管杂音的意义，1桶状胸 义，9深大呼吸，潮式 及间停呼&胸式（男，小孩〉腹式（女）呼吸增减意吸 Id 触觉语颤.听觉语音的定义及方法，增减意义、 11、正常胸部叩诊音（4种），肺下界及移动度，1Z 三种呼吸音的 区别 H 异常支气管呼吸音听诊意义，14罗音产生机理，二种罗音的鉴 别 的综合体征。 18、震颤定义与杂音的辨证关系 H 心脏叩诊的方法，左右心界的组成，心浊音界改变的原因（左室 肥大、右室肥大肺脉高压，心包积液，左气胸及胸腔积液） 2Q 心脏听诊内容，听诊部位， 21、早搏及房颤的体征，室早及房颤的B3G 表现。二、三联律的概念。 22第一.二心音的鉴别，23.第一心音增减及第二心音增减的意义, 24钟摆律，胎心律 25.第二心音分裂的听诊特点及临床意义（正常人，二狭，RBBB DG 胸膜磨擦音的听诊特点 16肺实变、肺气肿.胸腔积液、气胸 H 心尖搏动点的位「 ，范围，左、右心室肥大及纵隔移位时的变化
医学影像诊断学考试重点-上
影诊 1、1895年德国伦琴发现X线 2、部分容积效应（P5） 3、颅壁正常压迹（P19） 4、蝶鞍、内耳道数值（P19） 5、颅内非病理性钙化（P19） 6、颅压增高原因及基本X线表现（P29） 7、颅内病理性钙化（P29） 8、脑质异常MRI信号（P31） 9、椎管内占位病变表现（P33） 10、脑膜瘤起源、发生部位、影像学表现 （P44—45） 11、脑膜尾征（P45） 12、垂体大腺瘤生长方式（P48） 13、束腰征（P49） 14、肿瘤脑转移频率、各自特点（P53） 15、听神经瘤的鉴别（P53） 16、硬膜外红肿与硬膜下血肿的鉴别（P60—62） 17、脑梗死CT表现、部位（P63- 64） 18、高血压性脑出血不同时期CT MRI表现（P70—71） 19、脑脓肿影像学表现（P81） 20、白靶征、黑靶征（P86） 21、直角脱髓鞘征（P100） 22、胆脂瘤好发部位、发展路径、影像表现（P139—141） 23、鼻咽癌好发部位、影像学表现（ P151 —154） 24、喉癌分型及影像表现（P162—163） 25、肋骨常见先天性变异（P175） 26、胸廓正常软组织结构（P176） 27、纵膈的划分（P178）28、阻塞性肺气肿两类各自影像表现 29、阻塞性肺不张影像表现（P184） 30、空气支气管征（P184） 31、肺部异常肿块、空洞、钙化细看（P185） 32、渗液曲线（P186） 33、纵膈摆动（P187） 34、肺部结节与肿块（P189） 35、横膈附近胸腹水鉴别（P190） 36、支扩分型及影像表现（P195—196） 37、轨道征、印戒征（P196） 38、大叶性肺炎分期及X线表现（P200） 39、支气管肺炎典型表现（P202） 40、肺脓肿X、CT表现（P208） 41、肺结核分型（P212） 42、原发综合征（P212） 43、肺结核分型及其X线表现 44、晕轮征、曲菌球（P219） 45、柯氏B线、肺上沟瘤、反“ S”征 46、中央型肺癌X线表现 47、周围型肺癌X线表现 48、间质性肺水肿、肺泡性肺水肿影像表现 49、蝶翼征（P233） 50、W estermark 征（P234） 51、肺栓塞影像表现（P235） 52、胸膜斑（P237） 53、胸腺瘤、畸胎瘤、淋巴瘤位置及影像表现 54、E isenmenger 综合征、Lutembacher syndrome 综合征（P283） 55、漏斗征（P285） 56、法四组成、影像表现 57、循环系统重点是：X线正常及异常表现、四种先天性心脏病 58、视网膜母细胞瘤影像表现（P619） 59、呼吸系统第一节正常影像学表现和第 二节异常影像学表现必须好好看，非常重点 （P183） 以上是课堂内容的总结，只适合课本空白同学的复习及考试检测，以上内容不对考试负责。 影诊 第一章 1、1895年德国伦琴发现X线
规培考试题库-诊断学考试题库 (52)
诊断学知识 姓名：刘佳得分：18.00 总分：100 及格分：60 考试时间：2016-0 一 . 单选题（共80题，每题1分） 1 ． V1R/S>1，V5R/S<1，常见于下列哪项? A . 左心室肥大 B . 左束支传导阻滞 C . 左前分支传导阻滞 D . 右心室肥大 E . 左后分传导阻滞 2 ．联合药敏试验中协同作用是指： A . 药效大于单个药物使用的总和 B . 药效等于单个药物使用的总和 C . 药效等于活性较大药物的药效 D . 药效小于活性较大药物的药效 E . 药效大于活性较小药物的药 3 ．正常人昼尿量与夜尿量之比为： A . 2：1 B . 3：1 C . 3～4：1 D . 1：1 E . 1：3～4 4 ．外源性凝血途径抑制物(TFPI)的作用原理是： A . 通过吞噬作用 B . 通过中和组织因子活性物质 C . 通过介质间接发挥作用 D . 通过介质直接发挥作用 E . 通过释放灭活物质 5 ．肾源性水肿的特点： A . 钠、水潴留 B . 血浆胶体渗透压降低 C . 水肿常从眼睑颜面开始延及全身 D . 水肿部位可随体位变动而改变 E . 水肿常从下肢开始向上延及全身 6 ．乙型血友病缺乏的因子为： A . 因子Ⅻ B . 因子Ⅸ
C . 因子Ⅺ D . 因子Ⅷ E . 因子Ⅹ 7 ．下列哪项疾病的发生率号性别无关? A . 甲状腺疾病多发生在女性 B . 系统性红斑狼疮多发生在女性 C . 肝硬化多发生在男性 D . 胃癌多发生在男性 E . 甲型血友病多见于男性，偶发于女性 8 ．下列哪项与原始细胞的共同特点不相符? A . 胞浆中无颗粒 B . 均有核仁 C . 胞体较大 D . 均见瘤状突起 E . 核染色质细致疏松 9 ．主动脉瓣第二听诊区有舒张期叹气样杂音，见于哪种疾病? A . 主动脉瓣关闭不全 B . 主动脉瓣狭窄 C . 主动脉扩张 D . 室间隔缺损 E . 高血压性心脏病 10 ．血清钾增高见于： A . 醛固酮增多症 B . 代谢性碱中毒 C . 肾上腺皮质功能亢进 D . 急性肾功能衰竭 E . 胃肠减压 11 ．女，15岁，心尖区听到舒张期隆隆样杂音。应考虑为： A . 功能性杂音 B . 二尖瓣关闭不全 C . 室间隔缺损 D . 乳头肌断裂 E . 二尖瓣狭窄 12 ．关于指鼻试验，下列叙述哪项不正确? A . 嘱被检者前臂外展伸直，再以示指尖触自己的鼻尖 B . 由快到慢，先睁眼后闭眼，重复进行 C . 正常人动作准确，共济失调患者指鼻动作经常失误 D . 如睁眼时指鼻准确，闭眼时出现障碍则为感觉性共济失调 E . 小脑半球病变时同侧指鼻不准
诊断学考点汇总
诊断学 名词解释： 1. 稽留热：是体温恒定在39-40 ℃以上，持续数天或数周24h内体温波动不超过1 ℃。见于伤寒、大叶性肺炎等。 2. 呼吸困难：是指病人主观上有空气不足或呼吸费力的感觉；客观上有呼吸频率、深度和节律的改变。可见呼吸肌参与呼吸运动，严重者呈端坐呼吸及发绀。见于支气管炎，肺炎等。 3. 莫非氏征（Murphy）:检查时医师以左手掌平放于患者右胸下部，以拇指指腹勾压于右肋下胆囊点处然后嘱患者缓慢吸气，宰吸气过程中发炎的胆囊下移时碰到用力按压的拇指，即可引起疼痛，此为胆囊触痛，如因剧烈疼痛而致吸气终止。见于胆囊炎。 4. 移动性浊音：检查者自腹中部脐水平面开始想患者左侧叩诊，发现浊音时，扳指固定不动，嘱患者右侧卧，再度叩诊，如呈鼓音，表明浊音移动。同样方法想右侧叩诊，叩得浊音后嘱患者左侧卧，已核实浊音是否移动。这种因体位不同出现浊音区变动的现象。称为移动性浊音。见于肝硬化腹水。 5. 主诉：是病人就诊的主要原因，是感觉最明显、最痛苦的症状或体征，包括一个或数个主要症状及持续时间。主诉必须包括症状、部位、时间。 6. 肝颈静脉反流征：当右心衰引起肝淤血肿大时，用手压迫肝脏可使颈静脉怒张更明显。见于肝硬化。 7. 潮式呼吸：是一种由浅慢逐渐变为深快，然后再由深快转变为浅慢，随之出现一段呼吸暂停后，又开始如上变化的周期性呼吸。见于脑炎，脑膜炎等。 8. 周围血管征：由枪击音，Duroziez双重杂音，毛细血管搏动征组成，见于主动脉瓣重度关闭不全、甲状腺功能亢进等。 9. 肺型P波：P波尖而高耸，电压≥0.25mV,以Ⅱ、Ⅲ、aVF导联表现最为突出，见于右心房肥大，肺心病等。 10. 腹膜刺激征：板状腹，压痛，反跳痛组成，见于急性腹膜炎，胃肠穿孔等。 11. 抬举性心尖搏动：心尖区徐缓、有力、较局限的搏动使手指尖端抬起，见于左室肥厚等。 12. 弛张热：是指体温常在39度以上，24小时内温差超过1C°，但最低体温仍高于正常体温。常见于败血症，风湿热，重症肺结核及化脓性炎症等。 13. 三凹征：是指呼吸极度困难，辅助呼吸肌如胸部及腹部的肌肉都强力运动以辅助呼吸活动，此时虽企图以扩张胸廓来增加吸气量，但因肺部气体吸入困难，不能扩张，致使在吸气时可见胸骨上窝、两侧锁骨上窝以及下部肋间隙均显凹陷，故称“三凹症”。此时亦可伴有干咳及高调吸气性喉鸣。常见于喉部、气管、大支气管的狭窄和阻塞，当伴随出现发绀、双肺湿罗音和心率加快时，提示左心衰竭。 14. 眼眼球震颤：是一种不自主的、有节律性的、往返摆动的眼球运动。常由视觉系统、眼外肌、内耳迷路及中枢神经系统的疾病引起。
诊断学考试重点总结完整
《诊断学》重点 1.症状：患者病后对机体生理功能异常的自身体验和感觉 2.体征：患者体表或内部结构发生可察觉的改变 3.问诊的内容：一般项目、主诉、现病史、既往史、系统回顾、个人史、婚姻史、月经史与生育史、家族史 4.主诉：患者感受最主要的痛苦或最明显的症状和体征，是本次就诊最主要的原因及持续时间 5.现病史的内容：①起病的情况与发病时间②主要症状的特点③病因与诱因④病情发展与演变⑤伴随症状⑥治疗经过⑦病后一般情况 6.发热：机体体温升高超出正常范围，分度：低热3 7.3~38℃，中等度热3 8.1~39℃，高热3 9.1~41℃，超高热41℃以上。热型：稽留热、弛张热、间歇热、波状热（布氏杆菌病）、回归热（霍奇金病）、不规则热（结核病、风湿热、支气管肺炎） 7.稽留热：体温恒定的维持在39-40℃以上的高温水平，达数日或数周，24h内体温波动不超过1℃，常见于大叶性肺炎、斑疹伤寒及伤寒高热期 8.弛张热：又称败血症热，体温常在39℃以上，波动幅度大，24h内波动范围超过2℃，但都在正常水平以上，常见于败血症、风湿热、重症肺结核及化脓性炎症等 9.间歇热：体温骤升达高峰后持续数小时，又迅速降至正常水平，无热期可持续1天至数天，高热与无热反复交替，见于疟疾、急性肾盂肾炎
10.发热的原因：①感染性发热：病原体代谢产物或毒素作为发热激活物通过激活单核细胞产生内生致热源细胞，释放内生致热源而导致发热(细菌最常见)②非感染性发热，如无菌性坏死物质的吸收（吸收热：由于组织细胞坏死、组织蛋白分解及组织坏死产物的吸收，所致的无菌性炎症引起的发热），抗原-抗体反应，内分泌和代谢障碍，皮肤散热减少，体温调节中枢功能失常（中枢性发热的特点是高热无汗），自主神经功能紊乱等③原因不明发热 11.水肿：人体组织间隙有过多的液体积聚使组织肿胀 12. 全身性水肿：心源性水肿、肾源性水肿、肝源性水肿、营养不良性水肿14.发绀：是指血液中还原血红蛋白增多使皮肤和黏膜呈青紫色改变的表现。即紫绀。分为中心性发绀和周围性发绀，前者表现为全身性，皮肤温暖，多由心肺疾病引起SaO2降低所致；后者表现的发绀出现在肢体末端和下垂部位，皮肤冷，系由周围循环血流障碍所致，如左心衰 15.呼吸困难分为：肺源性~（吸气性，呼气性，混合性）、心源性~、中毒性~、神经精神性~、血源性~ 16.三凹征：又称吸气性呼吸困难，上呼吸道部分阻塞时，气流不能顺利进入肺，当吸气时呼吸肌收缩，造成肺内负压极度增高，引起胸骨上窝、锁骨上窝及肋间隙向内凹陷 17.心源性哮喘：急性左心衰竭时，常可出现夜间阵发性呼吸困难，轻者数分钟至数十分钟后症状逐渐减轻、消失，重者可见端坐呼吸、面色发绀、大汗、有哮鸣音，咳浆液性粉红色泡沫痰，两肺底有较多湿性啰音，心率加快，可有奔马律，此种呼吸困难称~
分子诊断学复习
名词解释 1.DNA测序：基因是遗传信息的物理和功能单位，含有产生一条多肽链或功能RNA所必需的全部核苷酸序列，即一段DNA序列 2.蛋白质组（proteome）：源于蛋白质（protein）与基因组（genome）两个词的杂合，意指“一种基因组所表达的全套蛋白质”，即包括一种细胞或一个组织乃至一种生物所表达的全部蛋白质。 3.蛋白质组学(proteomics) ：蛋白质组学就是对机体或组织或细胞的所有蛋白质进行鉴定和结构功能分析的一个研究领域。基因：是一段携带功能产物信息的DNA片段，是控制某种性状的遗传单位。 4.基因组（genome）：是指一个细胞或生物体的一套完整的单倍体遗传物质。 5.基因组学（Genomics）：指对所有基因进行基因组作图（包括遗传图谱、物理图谱、转录图谱，核苷酸序列分析，基因定位和基因功能分析的一门科学。 6.基因扩增：定义：指基因拷贝数增加的现象，基因扩增是基因表达增加的一种重要机制。 7.聚合酶链反应（PCR）：利用DNA聚合酶催化一对引物间的特定DNA片段在体外进行快速、大量扩增的方法，也称无细胞克隆技术。 8.增色效应：DNA变性后，双螺旋解体，碱基堆积不复存在，螺旋内部的碱基暴露，致变性后的DNA对260nm紫外光的吸光率明显增加，这种现象称为增色效应。 9.熔解温度：将DNA解链达到50%或OD260达到最大值的50%时的温度，称为解链温度或熔解温度。 10.溴化乙锭(ethidium bromide，EB)是一种荧光染料，可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下发出红色荧光。 11.引物：与靶基因片段两侧互补的寡核苷酸，其本质是单链DNA，它决定扩增产物的特异性和长度。 12.短产物片段：的长度严格限定在2个引物链的5’端之间，是需要扩增的特定片段，以指数形式扩增(2n)。 13.长产物片段：比两引物限定区更长的延伸产物，是以原始模板DNA为模板的扩增反应产物，以倍数形式扩增(2n)。 14.加端PCR （add-PCR）：即让扩增产物的5’-末端带上一段特殊的、满足需要的DNA顺序的PCR。 15.原位PCR（In Situ PCR）：在组织细胞内进行PCR扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测，可检测出该特异序列在细胞中的存在量和存在部位。 16.逆转录PCR（RT-PCR）原理：先在逆转录酶的作用下，以mRNA为模板合成互补的cDNA；再用后者为模板进行PCR反应。 17.反向PCR (reverse OR inverse PCR) ：是用一对反向的引物来扩增两引物以外的（vs 一对引物间）、未知的DNA片段，即对某个已知DNA片段两侧的未知序列进行扩增。 18.不对称PCR（asymmetric PCR ）原理：最初的10-15个循环中的主要产物是双链DNA；但是，当低浓度的引物（限制性引物）被耗尽后，以后的循环只产生高浓度引物的延伸产物，结果便产生大量单链DNA（ssDNA） 19.多重PCR（multiple PCR）（检测一组特定基因序列的存在或缺失） 原理和方法：在同一反应体系中加入多对引物，扩增同一模板的多个区域（相同或不同基因的多个部位）。如果其中某一区段缺失，则电泳图谱上该区带就会消失。 20．巢式PCR（nested PCR）定义及原理：用两对PCR引物扩增完整的DNA片段，以提高检测的灵敏度和特异性。 21.标记引物的PCR（Labelled primers PCR，LP-PCR)：利用同位素、荧光素等对PCR引物进行标记，以便直观检测目的基因。 22.实时荧光定量PCR：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号监测整个PCR过程，获得在线描述PCR过程的动力学曲线，最后通过标准曲线对未知核酸进行定量分析。 23.绝对定量（测定X的分子数量）：即用已知的标准曲线来精确推算待测的起始模板拷贝数，又称外标法 24.相对定量（测定不同样本中X的比率）: 在一定样本中，靶分子相对于参照样本中该分子的量的变化程度，又称内标法。 25.循环阈值（Ct）：在PCR扩增过程中，荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的拐点所对应的循环次数，是FQ-PCR定量的理论基础。 26.荧光共振能量传递 (FRET)：某荧光标记基团在激发光刺激下生成某波长的发射光，当另一屏蔽基团与其距离合适时，其发射光将会被屏蔽基团所吸收，并转化为其它波长的发射光或热能，称之为FRET。 27.荧光淬灭：任何引起荧光强度降低甚至消灭的现象。能够引起该现象的物质即荧光淬灭剂。 28.连接酶链反应（LCR）原理：以DNA连接酶将某一DNA链的5’-P与另一相邻链的3’-OH连接为基础的循环反应。 29.核酸杂交:不同来源、具有互补序列的单链核酸分子，在一定条件下、按碱基配对原则退火形成双链的过程。 30.核酸杂交技术：是一种分子生物学的标准技术。它基于核酸杂交的原理，利用带标记的核酸探针分子去检测具有同源序列的特定DNA或RNA分子（靶序列），实现对靶序列的定性或/和定量分析。 31.核酸变性：某些理化因素导致DNA双链间的氢键断裂成为单链的过程，称DNA变性。 32.探针(probe)：核酸杂交技术中，两条单链之一是待测序列（DNA或RNA），另外一条单链则是带有可检测标志的、与待测序列存在同源性的特异核酸序列，即探针。 33.核酸探针(probes) ：是指能与待测的靶核酸序列互补杂交、序列已知、并且带有可检测标记的核酸片段。 34.cDNA探针：从已构建的cDNA文库中筛选和分离的靶基因探针。 35.寡核苷酸探针-oligonucleotide probe ：根据已知基因序列合成的、与靶基因互补的DNA片段（DNA探针）。 36.核酸分子杂交：不同来源的单链核酸分子在合适的条件下，根据碱基互补原则形成双链杂交体的过程。 37.荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)：是一种利用荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。原理：它通过荧光标记的探针与待测标本的核酸进行原位杂交，在荧光显微镜下对杂交信号的大小、数目、定位和分布等进行分析，从而对染色体或基因异常的细胞、组织标本进行检测和诊断。 38.分子诊断：利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法，直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。 39.DNA多态性：在人类基因组中，平均约200对碱基可发生一对变异（称为中性突变），导致个体间核苷酸序列的差异。 限制性片段长度多态性：不少DNA多态性发生在限制性内切酶识别位点上，酶解该DNA片段就会产生长度不同的片段。 40.单基因病：指一种遗传病的发生只受一对等位基因的控制，他们的遗传方式遵循孟德尔分离定律。 41.PCR扩增阻碍突变系统(PCR-ARMS) ：由于Taq DNA聚合酶缺乏3’－5’的外切酶活性，不能纠正引物3’端的错配，因此对于Taq酶的扩增反应，要求3’端必须完全正确配对，以到达高效扩增。 42.寡核苷酸连接实验(OLA) ：设计两个寡核苷酸相邻的探针（约20个核苷酸）其相邻接的位点正好是已知的突变位点，探
诊断学考试重点
诊断名词解释： 1.稽留热：是体温恒定在39-40 ℃以上，持续数天或数周24h内体温波动不超过1 ℃。见于伤寒、大叶性肺炎等。 2.呼吸困难：是指病人主观上有空气不足或呼吸费力的感觉；客观上有呼吸频率、深度和节律的改变。可见呼吸肌 参与呼吸运动，严重者呈端坐呼吸及发绀。见于支气管炎，肺炎等。 3.莫非氏征（Murphy）:检查时医师以左手掌平放于患者右胸下部，以拇指指腹勾压于右肋下胆囊点处然后嘱患者 缓慢吸气，宰吸气过程中发炎的胆囊下移时碰到用力按压的拇指，即可引起疼痛，此为胆囊触痛，如因剧烈疼痛而致吸气终止。见于胆囊炎。 4.移动性浊音：检查者自腹中部脐水平面开始想患者左侧叩诊，发现浊音时，扳指固定不动，嘱患者右侧卧，再度 叩诊，如呈鼓音，表明浊音移动。同样方法想右侧叩诊，叩得浊音后嘱患者左侧卧，已核实浊音是否移动。这种因体位不同出现浊音区变动的现象。称为移动性浊音。见于肝硬化腹水。 5.主诉：是病人就诊的主要原因，是感觉最明显、最痛苦的症状或体征，包括一个或数个主要症状及持续时间。主 诉必须包括症状、部位、时间。 6.肝颈静脉反流征：当右心衰引起肝淤血肿大时，用手压迫肝脏可使颈静脉怒张更明显。见于肝硬化。 7.潮式呼吸：是一种由浅慢逐渐变为深快，然后再由深快转变为浅慢，随之出现一段呼吸暂停后，又开始如上变化 的周期性呼吸。见于脑炎，脑膜炎等。 8.周围血管征：由枪击音，Duroziez双重杂音，毛细血管搏动征组成，见于主动脉瓣重度关闭不全、甲状腺功能亢 进等。 9.核左移：外周血杆状核或杆状核以上的幼稚粒细胞增多，超过5%。见于急性化脓性感染，急性失血等。 10.肺型P波：P波尖而高耸，电压≥0.25mV,以Ⅱ、Ⅲ、aVF导联表现最为突出，见于右心房肥大，肺心病等。 11.腹膜刺激征：腹肌紧张，压痛，反跳痛组成，见于急性腹膜炎，胃肠穿孔等。 12.抬举性心尖搏动：心尖区徐缓、有力、较局限的搏动使手指尖端抬起，见于左室肥厚等。 13.弛张热：是指体温常在39度以上，24小时内温差超过1C°，但最低体温仍高于正常体温。常见于败血症， 风湿热，重症肺结核及化脓性炎症等。 14.三凹征：是指呼吸极度困难，辅助呼吸肌如胸部及腹部的肌肉都强力运动以辅助呼吸活动，此时虽企图 以扩张胸廓来增加吸气量，但因肺部气体吸入困难，不能扩张，致使在吸气时可见胸骨上窝、两侧锁骨上窝以及下部肋间隙均显凹陷，故称“三凹症”。此时亦可伴有干咳及高调吸气性喉鸣。常见于喉部、气 管、大支气管的狭窄和阻塞，当伴随出现发绀、双肺湿罗音和心率加快时，提示左心衰竭。 15.眼眼球震颤：是一种不自主的、有节律性的、往返摆动的眼球运动。常由视觉系统、眼外肌、内耳迷路及中枢神 经系统的疾病引起。 16.间停呼吸：表现为有规律的呼吸几次后，突然停止一段时间，又开始呼吸，周而复始。发生机制是由于 呼吸中枢的兴奋性降低，使调节呼吸的反馈系统失常，只有在严重的缺氧和二氧化碳积聚到一定的时候，才能有效刺激呼吸中枢，进入到下一个呼吸周期。 17.触觉语颤：被检查者发出语音时，声波起缘于喉部，沿气管、支气管及肺泡传到胸壁所引起共鸣的振动， 可由检查者的手触及，故又称触觉震颤。减弱或消失）：1、肺泡内含气量过多（肺气肿）2、支气管阻塞（阻塞性肺不张）3、大量胸腔积液或气胸 4、胸膜高度增厚粘连5、胸壁皮下气肿（增强）：1、肺泡内有炎症侵润，肺组织实变使语颤传导良好。（大叶性肺炎实变期，肺阻塞）2、接近胸膜的肺内巨大空腔，声波在空洞内产生共鸣，尤其是当空洞周围有炎症侵润并于胸壁粘连时，则更有利于声波传导， 使语音震颤增强。（空洞型肺结核、肺脓肿） 18.胸骨角：其两侧分别与左右第2肋软骨连接，为计数肋骨和肋间隙顺序的主要标志。胸骨角还标志支气管分叉、 心房上缘和上下纵隔交界及相当于第5胸椎的水平。 19.开瓣音：是舒张早期血流自左心房快速流人左心室，弹性尚好的二尖瓣迅速开放又突然停止，引起瓣叶 张帆性振动，产生拍击样声音。提示二尖瓣轻、中度狭窄，瓣膜弹性和活动性较好，常用来作为二尖瓣分离术适应证的参考条件。二尖瓣严重狭窄、瓣膜钙化或伴有明显二尖瓣关闭不全，则开瓣音消失。20.管样呼吸音：指在正常肺泡呼吸音分布区听到支气管呼吸音。1.肺组织实变，见于肺炎实变期；2.肺内大
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诊断学试题 一、名词解释（每小题4分，共20分） 2. 肝颈静脉回流征：当右心衰竭引起肝淤血肿大时，用手压迫肝脏可使颈静脉怒张更加明显，称为肝颈静脉回流征阳性。 3. Kussmaul呼吸：当有重度代谢性酸中毒时，出现深而快的呼吸，使机体代偿性地排出过多的二氧化碳，以调节血中的酸碱平衡，该呼吸称为Kussmaul呼吸或深长呼吸。 4. 三凹征：当上呼吸道部分梗阻时，气流进入肺中畅，吸气时呼吸肌收缩加强，肺内负压明显增高，出现胸骨上窝，锁骨上窝及肋间隙向内凹陷，称为“三凹征”。 1、发热：致热源作用于抗体或各种原因引起体温调节中枢功能障碍，体温升高超出正常范围的现象。 2、管型：在一定条件下，肾脏滤出的蛋白质、细胞或碎片在远曲肾小管、集合管中凝固形成的圆柱形蛋白聚体。可随尿排出，尿中多量出现是肾脏病变的主要特征。4、主诉：患者本次就诊感受最明显、最重要的症状或体征，也即本次就诊的最主要原因。 5、啰音：呼吸音之外出现的病理性附加音。 7、发绀：血液中脱氧血红蛋白增多使皮肤粘膜呈青紫的现象。 10、黄疸：因胆红素代谢障碍，血中胆红素浓度增高并渗入组织，使巩膜、皮肤和黏膜等发生黄染的现象。 11、人工对比：对缺乏自然对比的组织、器官，人为地引入一定量的在密度上高于或低于它的物质使之产生对比。 12、移动性浊音：因体位不同而产生浊音区变动的现象，当腹腔内游离腹水在 1000ml 以上时可见，是检查腹腔内有无积液的重要方法。 14、症状：机体在患病状态下生理功能发生异常时病人的主观不适感、异常感觉或病态改变。 15、脑膜刺激征：脑膜或其附近病变波及脑膜时可刺激脊神经根使相应的肌群发生痉挛，当牵扯到这些肌肉时被检查者出现防御反应。 17、核左移：外周血杆状核或杆状核以上的幼稚粒细胞增多超过 5%。 18、病理反射：锥体束病损时大脑失去了对脑干和脊髓的抑制作用而出现的异常反射。 19、蛋白尿：尿蛋白含量大于 100mg/L 或 150mg/24h 时，尿蛋白定性试验呈阳性反应。 20、呼吸困难：患者感到空气不足、呼吸费力，客观上表现为呼吸频率、深度和节律的异常。 21、心脏杂音：在心音与额外心音之外出现的具有不同频率、不同强度、持续时间较长的夹杂声音。 22、咯血：喉部以下呼吸器官的出血经咳嗽反射从口腔排出的现象。 23、墨菲征：医者左手掌平放于患者右肋下部，以拇指指腹勾压右肋下胆囊点处，然后嘱患者缓慢深吸气，在吸气过程中发炎的胆囊下移时碰到用力按压的拇指时可引起疼痛，此为胆囊触痛，如因疼痛剧烈而致吸气终止称墨菲征阳性。 二、填空题（每空0.5分，共20分） 1. 发热的临床分度，按发热的高低可分为：低热37.3-38℃，中等度热38.1-39℃，高热39.1-41℃，超高热41℃以上。 2. 常见热型有稽留热、弛张热、间歇热、波状热、回归热以及不规则热。 3. 胆汁淤积性典疸患者，检查时可见血清结合胆红素增加，尿色变深，粪便颜色变浅或呈白陶土色。 4. 问个人史中的居住地时，应注意是否到过疫源病和地方病流行地区。 5. 手的感觉以指腹和掌指关节的掌面的皮肤最为敏感，故多用此两个部位进行触诊。 6. 营养状态通常根据皮肤、皮下脂肪、肌肉发育、毛发等情况进行综合判断。 8. 出现异常支气管呼吸音的原因有肺组织实变、肺内大空腔、压迫性肺不张。 9. 常用于计数胸椎的标志是第七颈椎棘突 10. 左心室增大时，心尖搏动向左下移位；右心室增大时，心尖搏动向左移位，右位心时，心尖搏动位于右侧第五肋间即正常心尖搏动的镜相位置。左侧卧位时，心尖搏动向左移2-3cm ；右侧卧位时，心尖搏动向右移 1.0-2.5cm 1、一个完整的诊断应包括病因诊断、病理解剖诊断、病理生理诊断。
广州中医药大学诊断学基础考试重点
酶分离”现象:指急性重症肝炎时,肝坏死严重,线粒体大量破坏,AST明显升高,但在病情恶化时,黄疸进行性加深,酶活性反而降低,即出现“胆-酶分离”现象.（248） 蛋白细胞分离现象：脑脊液蛋白细胞分离现象是指脑脊液中蛋白明显增加而细胞数轻度增多。见于脊髓受压、蛛网膜下腔梗阻及脊髓肿瘤等。（311） 黄疸：由于血清中胆红素升高致使皮肤、粘膜和巩膜发黄的症状和体征。（43） 隐性黄疸：17.1-34.2umol/L，（43） 脑膜刺激征: 指脑膜病变或其附近病变波及脑膜时,刺激脊神经根,使相应肌群发生痉挛,当牵扯这些肌群时出现防御反应的现象（204）腹膜刺激征: 腹壁紧张,同时伴有压痛和反跳痛,称为腹膜刺激征,为急性腹膜炎的重要体征（160） 听觉语音定义及方法: 嘱被检查者用一般的声音强度重复发“yi”长音,喉部发音产生的振动经气管,支气管肺泡传至胸壁,由听诊器听及. （121） 触觉语颤定义: 被检查者发出语音时,声波起源于喉部,沿气管,支气管及肺泡传到胸壁所引起的共鸣的震动,可由检查者的手触及,故又称触觉震颤. （113） 奔马律:在S2后出现的响亮额外心音,当心率快时与原来的S1,S2组成类似马奔跑时的蹄声,称为奔马律. （138） 水冲脉：脉搏骤起骤落、犹如潮水涨落、故各水冲脉。检查：握紧患者手腕掌面，将其前臂高举超过头部，可明显感知犹如水冲的脉搏，系因脉压差增大所致。（发热.主动脉瓣关闭不全、甲亢、严重贫血）（149） 奇脉: 吸气时脉搏明显减弱或消失的现象,又称为吸停脉,常见于心包积液和压缩性心包炎,是心包填塞的重要体征之一. （149）核左移：周围血中杆状核增多,并可出现晚幼粒,中幼粒,及早幼粒等细胞,称为核左移. （214） 核右移：正常人血中的中性粒细胞以3叶为主,若5叶者超过0.03,或中性粒细胞分叶过多,大部分为4~5叶或更多(以至15叶),则称为核右移. 常见于巨幼细胞贫血,恶性贫血,预后不良. （216） 移动性浊音及腹水: 腹腔内游离液体在1000ml以上,因体位不同而出现浊音区变动的现象,称为移动性浊音及腹水.(腹水叩诊腹中部为鼓音,两侧为浊音) （169） 颈静脉怒张的定义及意义：在坐位或半卧位明显见到颈静脉充盈,称为颈静脉怒张.颈静脉怒张提示体循环静脉血回流受阻或上腔静脉压增高,常见于右心衰竭,缩窄性心包炎,心包积液及上腔静脉综合征(受压).: （100） 肝颈静脉反流征：当右心功能不全时，右心输出量减少，静脉回流到右室受阻，腔静脉淤血，肝脏则发生淤血性肿大，若按压肿大的肝脏，则将血液从肝脏挤入下腔静脉回到右心房，但由于右心功能衰竭，不能接受增加的回心血量而返流到上腔静脉使颈静脉充盈。同理，渗出性和缩窄性心包炎时，限制了心脏舒张，使体循环血液、回流受阻而肝淤血，也可出现肝颈静脉返流阳性。（148） 震颤定义: 震颤为触诊时手掌感到的一种细小震动感,与在猫喉部摸到的呼吸震颤类似,义称猫喘,为心血管器质性病变的体征（129）管呼吸音：在正常肺泡呼吸音分布的区域内听到了支气管呼吸音，即为病理性支气管呼吸音，亦称为管呼吸音。（119） 呼吸困难：患者自觉空气不足、呼吸费力：呼吸频率、深度、节率改变；张口呼吸；端坐呼吸；紫绀；辅助呼吸肌参加活动。（26）干罗音：又称连续性呼吸附加音，是一种持续时间较长的呼吸性附加音。（119） 湿罗音：又称不连续性呼吸附加音，是因为气道或空洞内有较稀薄的液体，呼吸时气道通过液体形成水泡并立即破裂时所产生的声音，故也称水泡音。（120） 莫菲氏征阳性:见于急性胆囊炎;胆总管渐进阻塞征:见于黄疸进行性加深（163） 库斯莫尔呼吸：严重代谢性酸中毒时，病人可以出现节律匀齐，呼吸深而大(吸气慢而汉、呼气短促)病人不感呼吸困难的呼吸，称为库斯莫尔(Kussmad)呼吸，又称酸中毒大呼吸；见于尿毒症、糖尿病酮症酸中毒等疾病。（163） 潮式呼吸: 潮式呼吸是一种山浅慢逐渐变为深快,然后再由深快转为浅慢,随之出现一段呼吸暂停后,又开始加上变化的周期什呼吸.潮式呼吸周期可长达30秒至2分钟,暂停期可持续5～30秒,多见于脑炎,脑膜炎,颅内压增高等（111） 库瓦西耶征：又称无痛性胆囊增大征，胰头癌压迫胆总管导致阻塞，出现黄疸进行性加深，胆囊显著肿大，但无压痛。（111）比奥呼吸：又称间停呼吸，表现为有规律的深度相等的呼吸几次后，突然停止呼吸，间隔一个短时间后又开始深度相同的呼吸，如此周而复始。（111） 二、咯血与呕血的鉴别