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细胞工程

细胞工程
细胞工程

名词解释】:

【简答题】:

1.简述细胞工程在生物技术领域中的地位。

2.目前,常用的植物细胞培养基种类有哪些?各有什么特点?

3.配制培养基时,为什么要先配母液?如何配制母液?

4.例举三种常用的物理灭菌方式,简述其原理和优缺点。

5.常用的灭菌方法有哪些,各有哪些优缺点?

6.配制培养基时,加入一定量的植物生长调节物质,它们在离体培养过程中

有哪些作用?

7.试述植物细胞全能性的含义和应用。

8.实现植物细胞全能性的条件是什么?

9.优良愈伤组织有何生长特性?

10.何为胚状体?胚状体和合子胚有何异同?

11.影响胚状体发生的主要因素有哪些?

12.如何区分离体培养条件下的不定芽和胚状体?

13.目前研制的人工种子结构是怎样的?

14.控制胚性细胞同步化的方法有哪些?

15.植物离体无性繁殖主要适用于哪些植物?与常规无性繁殖相比有什么优

势?

16.分离植物单细胞的方法有哪些?

17.植物单细胞培养的方法有哪些?各有何特点?

18.什么叫细胞的悬浮培养?分批培养和连续培养各有何特点?

19.在细胞悬浮培养中,如何进行细胞生长量的计算?

20.悬浮培养细胞同步化的方法主要有哪些?

21.在植物细胞培养中如何提高植物次生代谢产物的产量?

22.简述细胞活力鉴定的方法。

23.简述细胞计数的方法。

24.影响原生质体分离效果的因素有哪些?试做分析。

25.制备原生质体时为何要在等渗或稍高渗溶液中进行?

26.原生质体再生植株的基本过程。

27.简述原生质体培养的意义。

28.原生质体的培养方法有哪些?各有何优缺点?

29.原生质体融合要经过哪些过程?

30.PEG融合与电融合各有何特点?两种方法的原理和关键技术是什么?

31.原生质体融合产物有哪些类型?

32.体细胞杂交有何意义?

33.什么是植物体细胞无性系变异?引起或影响植物体细胞无性系变异的因素

有哪些?

34.试述植物体细胞无性系变异的遗传学基础。

35.试述农杆菌Ti质粒基因转化的原理。

36.植物基因转化的方法有哪些?各自的特点是什么?

37.试述转基因植物在农业生产上的应用。

【问答题】:

1.离体无性繁殖一般可分为哪几个阶段?简述其操作的一般程序。

2.简述植物细胞大规模培养反应器的类型及原理。

3.简述植物细胞固定化的几种方法。

4.试述原生质体分离的方法和步骤。

5.植物体细胞无性系突变体筛选的方法有哪些?

6.成批培养(batch culture)细胞的生长曲线包括哪几个时期?各时期有何特

点?

细胞工程试题及答案

专题2细胞工程 一、选择题 1.运用下列各种细胞工程技术培育生物新品种,操作过程中能形成愈伤组织的是( )。 ①植物组织培养②植物体细胞杂交③动物细胞培养 ④转基因植物的培育 A.①②③ B.①②④ C.①③④ D.①②③④ 2.生物技术的发展速度很快,已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡,以下较易成功“复生”野驴的方法是( )。 A.将野驴的体细胞取出,利用组织培养技术,经脱分化、再分化,培育成新个体 B.将野驴的体细胞两两融合,再经组织培养培育成新个体 C.取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中,经孕育培育成新个体 D.将野驴的基因导入家驴的受精卵中,培育成新个体 3.下列关于细胞工程的叙述,错误的是( )。 A.电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合 B.去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理 C.小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体 D.某种植物甲、乙两品种的体细胞杂种与甲、乙两品种杂交后代的染色体数目相同 4.用高度分化的植物细胞、组织和器官进行组织培养可以形成愈伤组织,下列叙述错误的是( )。 A.该愈伤组织是细胞经过脱分化和分裂形成的 B.该愈伤组织的细胞没有全能性 C.该愈伤组织是由排列疏松的薄壁细胞组成的 D.该愈伤组织可以形成具有生根发芽能力的胚状结构 5.名为“我的皮肤”的生物活性绷带自从在英国诞生后,给皮肤烧伤病人带来了福音。该活性绷带的原理是先采集一些细胞样本,再让其在特殊的膜片上增殖。5~7天后,将膜片敷在患者的伤口上,膜片会将细胞逐渐“释放”到伤口,并促进新生皮肤层生长,达到加速伤口愈合的目的。下列有关叙述中,不正确的是( )。 A.“我的皮肤”的获得技术属于动物细胞工程 B.人的皮肤烧伤后会因人体第二道防线的破坏而导致免疫力下降 C.种植在膜片上的细胞样本最好选自患者本人 D.膜片能否把细胞顺利“释放”到伤口,加速患者自身皮肤愈合与细胞膜上的糖蛋白有关 6.既可用于DNA重组技术又可用于细胞融合技术的是( )。 A.病毒 B.纤维素酶 C.聚乙二醇 D.质粒 7.培育农作物新品种的过程中,常利用植物组织培养技术。下列叙述正确的是( )。 A.培育转基因的外植体得到的新个体属于基因突变个体 B.在植物组织培养过程中用理化因素诱导可获得大量有益突变体 C.单倍体育种中经减数分裂和组织培养两个过程能获得纯合二倍体 D.植物组织培养技术的理论基础是细胞的全能性 8.下列与细胞工程技术相关的表述中,不正确的是( )。 A.植物体细胞杂交技术可以克服常规的远缘杂交不亲和障碍 B.动物细胞培养与植物组织培养所用的培养基成分基本相同 C.动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同 D.植物组织培养技术的理论基础是细胞的全能性 9.经植物组织培养技术培养出来的植物一般很少有植物病毒危害,其原因在于( )。 A.在组织培养过程中经过了脱分化和再分化,进行的是快速分裂和分化

新课标高中生物选修三2.1植物细胞工程导学案

2.1 植物细胞工程 一、知识与技能目标 1、简述植物组织培养和体细胞杂交技术,掌握它们的原理、过程及关键环节。 2、了解植物繁殖的新途径及作物新品种的培育的具体方法。 二、过程与方法目标 1、尝试进行植物组织培养,运用细胞的基础知识,分析植物细胞工程的理论基础;收集植物细胞工程的相关资料并进行整理、分析、交流。 2、以植物细胞工程的基本技术为基础,弄清楚其在生产实践中的实际应用。 三、情感与价值观目标 1、体验植物组织培养技术,讨论植物细胞工程的社会意义及细胞学基础理论与技术开发之间的关系。 2、搜集相关的实际技术应用,积极参加各种技术应用的讨论,体验现代生物科技的新进展带来的社会效益,激发学习生物学的兴趣。 四、教学过程 1、植物细胞的基本结构包括、、。 2、植物细胞主要的增殖方式是,细胞分化是指,_______________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________。原因是。 3、全能性是指,已分化的细胞表现为全能性的原因是。 4、织物组织培养就是在和条件下,将培养在上,给予条件,诱导其产生形成完整的植株。 5、植物体细胞杂交就是将细胞在一定条件下融合成,并把它培养成的技术,优点是。 6、生物体可遗传变异类型包括、、。

根据变异类型育种的方法有、、、等。 7、植物的微型繁殖技术指,_____________举例_________________________________________________________。 8、获得脱病毒的植株的方法 。 9、神奇的人工种子指。 10、生物育种技术比较 技术原理优点缺点 诱变育 种基因突变 提高生物变异的频率,使后代变异频率 较快稳定;可大幅度改良某些性状,缩 短育种进程 盲目性大,需大 量处理供试材料 杂交育 种基因重组 使位于不同个体的优良性状,集中于一 个个体 周期长,难以克 服远缘杂交的障 碍 单倍体 育种染色体变异获得个体均为纯种,明显缩短育种年限 技术复杂,须与 杂交育种配合 多倍体 育种染色体变异器官大,提高产量和营养成分 适用于植物,动 物方面难以开展 基因工 程育种分子遗传学原理 打破物种界限,定向地改造生物遗传性 状 细胞工程育种细胞生物学和分 子生物学原理 克服远缘杂交不亲和的障碍;扩大了用 于杂交的亲本组合范围;定向改变生物 遗传性状 不能按人们的需 要表现出亲代的 优良性状

细胞工程

名词解释】: 【简答题】: 1.简述细胞工程在生物技术领域中的地位。 2.目前,常用的植物细胞培养基种类有哪些?各有什么特点? 3.配制培养基时,为什么要先配母液?如何配制母液? 4.例举三种常用的物理灭菌方式,简述其原理和优缺点。 5.常用的灭菌方法有哪些,各有哪些优缺点? 6.配制培养基时,加入一定量的植物生长调节物质,它们在离体培养过程中 有哪些作用? 7.试述植物细胞全能性的含义和应用。 8.实现植物细胞全能性的条件是什么? 9.优良愈伤组织有何生长特性? 10.何为胚状体?胚状体和合子胚有何异同? 11.影响胚状体发生的主要因素有哪些? 12.如何区分离体培养条件下的不定芽和胚状体? 13.目前研制的人工种子结构是怎样的? 14.控制胚性细胞同步化的方法有哪些? 15.植物离体无性繁殖主要适用于哪些植物?与常规无性繁殖相比有什么优 势? 16.分离植物单细胞的方法有哪些? 17.植物单细胞培养的方法有哪些?各有何特点? 18.什么叫细胞的悬浮培养?分批培养和连续培养各有何特点? 19.在细胞悬浮培养中,如何进行细胞生长量的计算?

20.悬浮培养细胞同步化的方法主要有哪些? 21.在植物细胞培养中如何提高植物次生代谢产物的产量? 22.简述细胞活力鉴定的方法。 23.简述细胞计数的方法。 24.影响原生质体分离效果的因素有哪些?试做分析。 25.制备原生质体时为何要在等渗或稍高渗溶液中进行? 26.原生质体再生植株的基本过程。 27.简述原生质体培养的意义。 28.原生质体的培养方法有哪些?各有何优缺点? 29.原生质体融合要经过哪些过程? 30.PEG融合与电融合各有何特点?两种方法的原理和关键技术是什么? 31.原生质体融合产物有哪些类型? 32.体细胞杂交有何意义? 33.什么是植物体细胞无性系变异?引起或影响植物体细胞无性系变异的因素 有哪些? 34.试述植物体细胞无性系变异的遗传学基础。 35.试述农杆菌Ti质粒基因转化的原理。 36.植物基因转化的方法有哪些?各自的特点是什么? 37.试述转基因植物在农业生产上的应用。 【问答题】: 1.离体无性繁殖一般可分为哪几个阶段?简述其操作的一般程序。 2.简述植物细胞大规模培养反应器的类型及原理。 3.简述植物细胞固定化的几种方法。 4.试述原生质体分离的方法和步骤。 5.植物体细胞无性系突变体筛选的方法有哪些? 6.成批培养(batch culture)细胞的生长曲线包括哪几个时期?各时期有何特 点?

细胞工程原理

细胞工程原理 一、名词解释 1、生物工程:是以生命科学为基础,利用生物体系和工程原理生产生物制品和创造新物种的一门综合技术。 2、细胞工程:是指应用细胞生物学和分子生物学的方法,通过类似工程学的步骤,在细胞整体水平或细胞器水平上,有目的地利用或改造生物遗传性状,以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。 3、细胞全能性:是指分化细胞保留着全部的核基因组,具有生物个体生长、发育所需要的全部遗传信息,具有发育成完整个体的潜能。 4、细胞多能性:有些细胞能分化出多种组织的潜能,却失去了发育成完整个体的潜能。 5、植物组织培养:是指在无菌的条件下,将离体的植物器官、组织、细胞、胚胎、原生质体等培养在人工配制的培养基上,给予适当的培养条件,诱发产生愈伤、潜伏等,或者生长成新的完整植株的一种实验技术。 6、愈伤组织:脱分化后的细胞经过细胞分裂产生无组织结构、无明显极性的松散的细胞团,称之为愈伤组织。 7、继代培养:是愈伤组织在培养基上生长一段时间后,由于培养基枯竭、水分散失、并已积累了一些代谢产物,此时将组织继续转入新的培养基上培养。 8、胚状体:在培养过程中由外植体或愈伤组织产生的与正常受精卵发育的方式或类似的胚胎结构现象。 9、脱分化:已分化的细胞在一定因素作用下重新恢复分裂机能并改变原来的发展方向而沿着一条新的途径发育的过程。 10、再分化:脱分化的细胞团或组织经重新分化而变为具有未分化细胞特性的过程。 11、人工种子:又称合成种子或体细胞种子,是指将植物离体培养的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中的类似种子的颗粒。 12、看护培养:是指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞,使其持续分裂和增殖的一种培养方法。 13、饲养层培养:是把处理过的(如X射线处理)无活性的或分裂很慢的细胞来饲养所需培养的细胞,使其分裂和生长的方法。 14、固定化培养:将游离的细胞包埋在多糖或多聚化合物制备成的网状支持物中,培养液呈流动状态进行无菌培养的一种技术。 15、两相培养技术:是在培养体系中加入有机溶剂或者具有吸附作用的多聚化合物。细胞在水相中生长,合成次级代谢物质,分泌出来后转移至有机相中。16、微细胞:又称为微核体,是指含有一条或n条染色体(即含有部分基因组),外有一薄层细胞质和一个完整质膜的核质体。 17、胚胎干细胞:是从着床前胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外分化抑制培养分离的一种全能性细胞。 18、细胞融合:两个或多个相同或不同细胞通过物理、化学、生物的方法使膜融合形成单个细胞的过程。 二、填空题 1、生物工程的六大组成:发酵工程、酶工程、蛋白质工程、基因工程、生物化学工程、细胞工程。 2、基因工程(DNA重组技术)的一般步骤:(1)目的基因的获得,(2)将目的

细胞工程

高三生物一轮复习选修三必背知识点(二) 专题二细胞工程 细胞工程是指应用 和的原理和方法,通过 或上的操作,按照人们的意愿来改变细胞内的或获得 的一门综合科学技术。根据操作对象的不同,可分为和两大领域。 一、植物细胞工程 植物细胞工程通常采用的技术手段是:和。 (一)植物组织培养 1、理论基础(原理):。理论上每一个活细胞都应该具 有。因为。 2、细胞全能性排序:受精卵生殖细胞体细胞。 3、为什么体内细胞没有表现出全能性,而是分化成为不同的组织、器官? 4、植物细胞工程的过程: _________试管苗――→植物体 注意:a、操作在_________条件下进行。 b、____________不需要光照,_______________需要光照。 c、激素主要是_____________ 和___________________. d、适宜的温度和ph e、一定的营养成分 5、概念:植物组织培养就是在和条件下,将的植物, 培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其产生,最终 形成完整的植株。 6、用途: (1)植物繁殖的新途径 ① 从生殖方式看,植物组织培养技术通常是生殖,不仅可以保持优良品种的, 还可以快速高效地实现种苗的。人们形象地把用于快速繁殖优良品种的植物组织培养技 术,叫做植物的,也叫。 ②:通常选用植物附近(如)的组织通过组织培养技术获取达到此目的。 ③制作:以植物组织培养得到的、、和腋芽等为材料, 经过人工薄膜包装得到此类种子。 (2)作物新品种的培育 ① 原理: 方法:先通过获得单倍体幼苗,再用诱导幼苗染色体加倍后便可得到 稳定遗传的优良品种,极大地缩短了。 ② 原理:和。在植物组织培养过程中,由于培养细胞一直 处于不断地状态,因此容易受到培养条件和外界压力的影响而产生。 (3)细胞产物的工业化生产 细胞产物包括、、、、、等。 在植物组织培养的阶段即可大量生产细胞产物。 (二)植物体细胞杂交 (1)进行体细胞杂交前,必须先用和去除细胞壁,获得具有活力的。 (2)诱导融合的物理方法包括等;化学法一般是用作 为诱导剂来诱导细胞融合。 (3)植物体细胞杂交的原理:①; ②。 (4)意义:。 二、动物细胞工程 1、动物细胞工程常用的技术手段有、、 、等,其中是其他动物细胞 工程技术的基础。 (一)动物细胞培养 1、概念:从动物机体中取出相关的,将它分散成,然后放在适宜的培养 基中,让这些细胞生长和繁殖。 2、动物细胞培养的流程: 取动物组织块(动物胚胎或)→剪碎→用处理分散成单个细胞 →制成→转入培养瓶中进行培养→贴满瓶壁的细胞重新用等处理,然 后分瓶继续培养。 (1)细胞贴壁和接触抑制:悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为。细胞数目 不断增多,当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为。 (2)原代培养和传代培养:通常将组织消化后的初次培养成为;贴满瓶壁的细胞重

细胞工程学教学大纲

《细胞工程学》教学大纲 课程名称:细胞工程学 课程类别:专业必修课 学时:32 学时 学分:2学分 考核方式:考试 适用专业:生物技术 开课学期:第5学期 一、课程性质、目的任务 《细胞工程》是通过对细胞及其组分的人工操作,研究生命活动规律;实现对动植物的遗传改造,用于农业、林业、园艺等生产实践;结合非生物材料等手段,生产用于治疗人类疾病或缺陷的人工器官,组织, 细胞及其代谢产物或用于深入研究的材料等为主要研究内容的一门新兴学科。 通过本课程的学习,使学生系统掌握该门学科形成与发展,理论与原理,技术与方法等基础知识,结合科研实际以及最新研究动态,使学生对本课程有一个全面的了解;以适应后基因组学时代在教学、科研和生产开发各方面对当代生命科学人才知识结构的需求。 二、课程基本要求 通过对细胞工程学的特性和内容,细胞工程的主要类型和技术操作,细胞工程学研究的基本方法等进行阐述,使学生能够掌握如何将细胞工程学知识应用于生产实践。 三、学时分配

四、教学方法与考核 1.教学方法:讲授法、案例分析法 2.课程考核方法:考试 1)平时成绩占20%,期末考试成绩占80% 2)平时成绩评分标准 平时成绩(100分),包括学生课堂出勤情况(20分)、课堂发言及积极参与情况(20分)、课后作业完成情况及质量(60分)。此项成绩需由教师提供评分依据及记录。 3)期末成绩评分标准 以评分标准为依据,所得卷面成绩为准,以考试试卷形式考查,考试形式为笔试,满分100分,试题包括基本知识概念,知识的理解和应用,综合应用等能力等教学内容的考查。全面涵盖本课程知识重点和难点,渗透学科前沿及进展,能够真实反映学生对本课程的知识和能力的学习情况。 五、大纲正文 绪论(2学时) 【目的要求】 1. 了解细胞工程的发展历史。 2. 了解生物工程学的组成内容 3. 了解细胞工程的应用。 4. 理解生物工程学与其它学科之间的学科交叉。 5. 理解细胞工程学与生物工程的其他技术之间的联系。 6. 掌握细胞工程学的主要组成。 7. 培养严谨、认真的科学观。

细胞工程概述

第二章细胞工程 第一节细胞工程概述 学习目标 一、知识与技能 1.简述细胞工程的基本技术。 2.举例说出细胞工程的应用。 二、过程与方法 1.通过阅读生物科学史,简述细胞工程的发展过程。 2.利用教材,归纳出细胞工程的基本技术。 三、情感、态度和价值观 1.关注细胞工程研究的发展和前景。 课前导学 1. 二、细胞工程的基本技术 1.细胞工程的概念:以______________为基本单位,在体外无菌条件下培养、繁殖或利用细胞融合、核移植等技术使细胞某些生物学特性按照人们的意愿发生改变,从而改良生物品种、创造新品种和加速繁育生物个体,以及获得某些有用的细胞代谢产物的技术。 2.细胞工程的分类 (1)根据研究对象的不同分类: ________ __细胞工程,______ _ __细胞工程,____________ 细胞工程。 (2)根据所使用技术的不同分类: ①______________技术:在无菌条件下________________植物细胞或组织,将其放在适当的培养基上,给予必要的生长条件,使它们在体外继续生长、增殖与分化,形成新的组织、器官和个体的技术。 ②______________技术:采用自然或人工的方法使2个或多个_______________细胞融合为一个细胞的技术。常用的促进细胞融合的方法有生物法(如________________)、化学法(如________________)和物理法(如________________)等。 ③______________技术:将一个细胞的_____________转移到另一个__________的细胞中去,从而使受体细胞获得新的遗传信息,产生新的生命现象的技术。. ④_____________工程:人们按照一定的设计,有计划地消减、添加或替换同种或异种染色体,从而达到________________改变遗传性状和选育新品种的一种技术。 三、细胞工程的应用 1.快速培养花卉及濒危植物 2.获得无病毒作物 3.开发洁净能源减少环境污染

细胞工程学复习题

细胞工程学习题 1.诱导试管苗生根时,培养基的调整应 A.加大盐的浓度B.加活性炭 C.加大分裂素的浓度D.加大生长素的浓度 2.下列实验中可能获得三倍体植株的是 A.小麦的茎尖培养B.番茄花药培养 C.玉米胚乳培养D.玉米花粉培养 3.动物体内各种类型的细胞中,具有最高全能性的细胞是 A.体细胞B.生殖细胞C.受精卵D.干细胞 4.下列哪个是植物离体培养常用的主要糖类 A.葡萄糖B.果糖C.麦芽糖D.蔗糖 5.农杆菌介导的转化方法主要适用于 A.草本植物B.木本植物C.单子叶植物D.双子叶植物 6.原生质体纯化步骤大致有如下几步: ①将收集到的滤液离心,转速以将原生质体沉淀而碎片等仍悬浮在上清液中为准,一般以500r/min离心15min。用吸管谨慎地吸去上清液。

②将离心下来的原生质体重新悬浮在洗液中(除不含酶外,其他成分和酶液相同),再次离心,去上清液,如此重复三次。 ③将原生质体混合液经筛孔大小为40~100um的滤网过滤,以除去未消化的细胞团块和筛管、导管等杂质,收集滤液。 ④用培养基清洗一次,最后用培养基将原生质调到一定密度进行培养。一般原生质体的培养密度为104~106/ml。 正确的操作步骤是:() A ①②③④B②③①④C③①②④D③②①④ 7.常用的细胞融合剂是 A.刀豆球蛋白B.聚乙二醇(PEG)C.细胞松弛素B D.脂质体 8.利用细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体过程中,HAT培养基用来进行 A.细胞融合B.杂交瘤选择C.检测抗体D.动物免疫 9.下列过程中,没有发生膜融合的是 A.植物体细胞杂交B.受精过程 C.氧进入细胞中的线粒体D.单克隆抗体的产生 10.科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合,得到杂交细胞,经培养可产生 大量的单克隆抗体。与骨髓瘤细胞融合的是 A.经过免疫的B细胞B.没经过免疫的T细胞

细胞工程知识点

细胞工程知识点 1、细胞工程:以细胞为对象,应用生命科学理论,借助工程学原理与技术,有目的地利用或改造生物遗传性状,以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。 2、细胞工程的应用: 1)动植物快速繁殖技术:植物组织培养、人工种子、试管动物、克隆动物 2)新品种的培育:细胞融合、细胞水平的重组 3)细胞工程生物制品:单克隆抗体制备、疫苗生产 4)细胞疗法与组织修复: 2细胞工程理论基础 1、细胞全能性:每个活的体细胞都具有像胚性细胞那样,经过诱导能分化发育成为一个新个体的潜在能力,并且具有母体的全部的遗传信息。 2、细胞分化:指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程。 3、细胞的脱分化:在一定营养和刺激因素作用下,具有特定结构与功能的植物组织的细胞被诱导而改变原来的发育途径,逐步失去原来的分化状态,细胞特性消失,转变为具有分生机能的细胞,并进行活跃的细胞分裂,这一过程称为去分化。 3细胞工程技术 1、实验室条件:组成:准备室、无菌间、操作间、培养室、分析室。 2、无菌技术、显微技术、细胞观察与分析、细胞分离、细胞保存与复苏 (1)细胞保存方法传代培养保存法低温冷冻保存法(低温、超低温保存) 液体固化的方式(形成冰晶、形成无定型的玻璃化状态) 玻璃化指液体转变为非晶态(玻璃态)的固定化过程,在此状态时,水分子没有发生重排,不产生结构和体积的变化,因此不会由于机械或溶液效应造成组织和细胞伤害,化冻后的细胞仍有活力。 冷冻方法(缓慢冷冻法、快速冷冻法预冷冻法包括逐级冷冻和两部冷冻) 细胞复苏按一定复温速度将细胞悬液由冻存状态恢复到常温的过程。 复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化,以避免慢速融化水分渗入细胞内,再次形成胞内结晶损伤细胞。 细胞培养和代谢调控:

细胞工程学相关考试题及答案

细胞工程学名词解释及问答题 一、名词解释 1、细胞工程(cytotechnology或cell engineering):它是以生物细胞、组织或器官为研究对象,运用工程学原理,按照预定目标,改变生物性状,生产生物产品,为人类生产或生活服务的科学。 或应用细胞生物学和分子生物学和分子生物学的理论和方法,按照人们的设计蓝图,在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。通过细胞工程可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株,并可以产生新的物种或品系。 2、看护培养(nursing culture):用一块活跃生长的愈伤组织来促进培养细胞持续分裂增殖的方法。 3、细胞杂交(cell hybridization):指用人工方法把不同类型的两个或两个以上细胞合并成一个细胞的技术。 4、外植体〔explant〕:从植物体上分离下来的用于离体培养的植物组织、器官等材料。 5、人工种子:是指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中所形成的能发芽出苗的颗粒体。 6、花药培养(anther culture):将成熟或未成熟的花药从母体植株上取下,放在无菌的条件下,使其进一步生长、发育成单倍体细胞或植株的技术。(指离体培养花粉和花药,使小孢子改变原有的配子体发育途径,转向孢子体发育途径,形成花粉胚或花粉愈伤组织,最后形成花粉植株,并从中鉴定出单倍体植株,使之二倍化的细胞工程技术。 7、条件培养基(conditioned medium):培养过程中,有些细胞可能会分泌活性物质到培养液中,这种培养过某种细胞以后,含有细胞分泌物的培养液称为条件培养基。 8、植物脱毒:由人工用物理、化学和生物方法将植物体组织器官病原体消除,以使这些组织器官生成完整植株。 9、原代细胞系:指从机体中取出而直接培养的细胞,从一代到十代的细胞培养是原代培养,形成的整个系统叫原代细胞系。 10、体细胞杂交:指在人工控制条件下,不经过有性过程,两种体细胞原生质体相互融合产生杂种的方法。 11、胚胎培养:是指胚或具胚器官(如子房、胚珠等)在离体无菌条件下发育成幼苗的技术。 12、互补选择:是指利用两个亲本具有不同的遗传和生理特征,在特定培养条件下,具有发生互补作用的杂种细胞才能生长的选择方法。 13、悬浮培养(suspension culture):是细胞培养的基本方法,是将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。 14、植板率:植板率是能长出细胞团的单细胞在接种单细胞中所占的比例。 15、玻璃化冻存:是指液体转变为非晶态(玻璃态)的固化过程。 16、接触抑制(contact inhibition):当细胞在基质上分裂增殖,逐渐汇合成片即每个细胞与其周围的细胞相互接触时,细胞就停止增殖,即细胞密度不再增加,这一现象称之为接触抑制或密度依赖抑制现象。 17、非对称融合(aymmetric fusion):利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再进行融合。 18、对称融合(symmetric fusion):两个完整的细胞原生质体融合。 19、胞质体:不含细胞核而仅含有部分细胞质的原生质体。 20、体细胞胚:离体培养下没有经过受精过程,但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物(不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞)。 21、永久细胞系:大多数细胞系在有限的代数内以不变的形式增殖,当超过有限世代后,在体外永久存活下来发育成永久细胞系或称连续细胞系。

细胞细胞工程

2005年生物学高考第二轮复习 第51讲细胞·细胞工程 一考点聚焦 2005年高考《考试大纲·生物学》涉及本部分的内容有: 1.生命的物质基础 (1)组成生物体的化学元素 (2)组成生物体的化合物 2.细胞——生命活动的基本单位 (1)细胞的结构和功能 细胞膜的分子结构和主要功能 细胞质基质 细胞器(线粒体、叶绿体、内质网、核糖体、高尔基体和中心体)的结构和功能 细胞核的结构和功能 生物膜(生物膜系统的概念、各种生物膜在结构和功能上的联系、研究生物膜的重要意义) 原核细胞的基本结构 (2)细胞增殖 细胞周期 有丝分裂 无丝分裂 (3)细胞的分化、衰老和癌变 (4)植物细胞工程 植物细胞的全能性 植物组织培养 植物体细胞杂交 (5)动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体 二考点分析 细胞是组成大多数生物结构的基本单位,其基本结构和功能是本部分的重点和难点,此外,构成细胞的化合物的元素组成、细胞中糖分和核酸的分布、无机盐的功能、蛋白质分子中肽键数的计算、水的生理功能以及有关细胞工程的材料题也是高考的热门知识点。作为生物学知识的基础篇章,它处于不可替代的地位。通过对近几年高考题的分析可以看出,本部分属于高考的重点内容之—。 “生物的基本特征”是绪论课的重点,出自绪论部分的题目,都是围绕这个问题来考查学生,题目都比较容易。 《生命的物质基础》一章高考点主要有:①DNA与RNA的化学组成(选择题);②各种化合物的含量,特别是水和蛋白质在细胞内的含量(多次出选择题)。③蛋白质的结构,特别是由氨基酸脱水缩合形成蛋白质时,所形成的肽键数和产生的水分子数是高考重点,高考中多次出现这方面的选择题。④糖类、脂质、蛋白质和核酸的组成元素各以比较归纳的形式出选择题。 《生命的基本单位——细胞》一章中,《细胞的结构和功能》一节主要考点有:①细胞膜的结构和功能。 ②原核细胞与真核细胞的比较,原核生物的举例。③病毒、原核生物、真核生物共有的物质(核酸)。④高尔基体和核糖体的功能。⑤线粒体和叶绿体的结构、功能和都含有DNA和RNA的特点是高考的热点。以上五个方面的内容主要出选择题,所以在平日学习时应多注意它们之间的相同点与不同点的比较。本节还很容易出动、植物细胞亚显微结构模式图的识图作答题。如1999年广东高考题和2001年上海高考题都出了分值在10分以上的大题,都是有关动物和植物细胞的亚显微结构模式图的识图作答题,重点考查学生对细胞结构和功能的综合理解。 《细胞增殖》一节主要考点有:①有丝分裂过程中各时期DNA含量、染色体数目变化规律(常出选择题)。 ②分裂间期中G1期、S期、G2期分别合成哪些物质,是近几年高考的热点,出题方式既有选择题也有简答

细胞工程

细胞工程在生物制药中的应用 摘要:细胞工程是生物制药工业中的关键技术,它是利用动物细胞体外培养和扩增来生产生物产品,或者作为发现和测试新药的工具。本文综述了细胞工程发展的历史、现状和未来,以及它在生物制药领域中的应用和局限。 关键词细胞工程;生物制药 Abstract: Cell Engineering biopharmaceutical industry is a key technology, which is the use of animal cells in vitro and amplified to produce biological products, or as a tool for discovering and testing new drugs. This article reviews the history, present and future, as well as its applications and limitations of cell engineering development in the biopharmaceutical field. Keywords: cell engineering; biopharmaceutical 1.动物细胞技术的历史 在疫苗产业早期,往往利用动物来生产疫苗,如用家兔人工感染狂犬病毒生产狂犬疫苗,用奶牛来生产天花疫苗,用某些细菌接种到动物身上来生产抵抗该种细菌的疫苗。在1920年至1950年,已经开发了多种病毒或细菌疫苗,如伤寒疫苗、肺结核疫苗、破伤风疫苗、霍乱疫苗、百日咳疫苗、流感疫苗和黄热病疫苗等。 早在1950年代,已经能够利用动物细胞培养技术来生产病毒。先在反应器中大规模培养动物细胞,待细胞长到一定密度后,接种病毒,病毒利用培养的细胞进行复制,从而生产大量的病毒,这一突破

细胞工程知识点填空(附答案)

专题2 细胞工程 (一)植物细胞工程 1.理论基础(原理): 全能性表达的难易程度: 2.植物组织培养技术 (1)过程:离体的植物器官、组织或细胞―→愈伤组织―→试管苗―→植物体 (2)用途:。(3)地位:是培育、培育植物新品种的最后一道工序。 3.植物体细胞杂交技术 (1)过程: (2)诱导融合的方法:物理法包括等。化学法一般是用 作为诱导剂。(3)意义: (二)动物细胞工程 1. 动物细胞培养 (1)概念:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的,将它分散成,然后放在适宜的中,让这些细胞。 (2)动物细胞培养的流程:取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织)→剪碎→用 处理分散成→制成→转入培养瓶中进行培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续培养。(3)细胞贴壁和接触抑制:悬液中分散的细胞很快就,称为。细胞数目不断增多,当贴壁细胞分裂生长到表面时,细胞就会,这种现象称为。 (4)动物细胞培养需要满足以下条件 ①:培养液应进行处理。通常还要在培养液中添加一 定量的,以防培养过程中的污染。此外,应定期更换培养液,防 止。 ②:合成培养基成分:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入 等天然成分。 ③:适宜温度:哺乳动物多是;pH:。 ④:95%+5%。O2是所必需的,CO2的主要作用 是。 (5)动物细胞培养技术的应用: 2.动物体细胞核移植技术和克隆动物 (1)哺乳动物核移植可以分为核移植(比较容易)和核移植(比较难)。

(2)选用去核卵(母)细胞的原因:卵(母)细胞; 卵(母)细胞。 (3)体细胞核移植的大致过程是:(下图) (4)体细胞核移植技术的应用: ①② ③④ ⑤ (5)体细胞核移植技术存在的问题: 克隆动物存在着问题、表现出缺陷等。 3.动物细胞融合 (1)动物细胞融合也称,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来细胞遗传信息的单核细胞,称为。(2)动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同,诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似,常用的诱导因素有等。 (3)动物细胞融合的意义:克服了,成为研究 的重要手段。 (4)动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较: 比较项目细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用法 植物体细 胞杂交 细胞膜的流动性去除细胞壁后诱 导原生质体融合 离心、电刺激、 振动,聚乙二醇 等试剂诱导 克服了远缘杂交 的不亲和性,获得 杂种植株 动物细胞 融合 细胞膜的流动性使细胞分散后诱 导细胞融合 除应用植物细胞 杂交手段外,再加 灭活的病毒诱导 制备单克隆抗体 的技术之一 4.单克隆抗体 (1)抗体:一个B淋巴细胞只分泌一种。从血清中分离出的抗体 。 (2)单克隆抗体的制备过程: 注入小鼠 细胞融合 分离 抗原注入小鼠体内 B淋巴细胞骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 细胞培养 选择培养细胞 培养基 体内培养体外培养 从腹水提取从培养液提取 单克隆抗体 核移植 胚胎移植

细胞工程应用及发展前景

细胞工程的应用及发展前景 姓名:刘长红学号:200908010310 专业:生物科学3班 摘要:细胞工程,就是以细胞为单位,按人们的意志,应用细胞生物学、分子生物学等理论和技术,有目的地进行精心设计,精心操作,使细胞的某些遗传特性发生改变,达到改良或产生新品种的目的,以及使细胞增加或重新获得产生某种特定产物的能力,从而在离体条件下进行大量培养、增殖,并提取出对人类有用的产品的一门应用科学和技术。它主要由上游工程(包括细胞培养、细胞遗传操作和细胞保藏)和下游工程(即将已转化的细胞应用到生产实践中用以生产生物产品的过程)两部分构成。当前细胞工程所涉及的主要技术领域包括细胞融合技术、细胞器特别是细胞核移植技术、染色体改造技术、转基因动植物技术和细胞大量培养技术等方面。 关键字:细胞工程,实际应用,发展前景 1.引言 当前细胞工程细胞工程是生物工程的一个重要方面。总的来说,它是应用细胞生物学和分子生物学的理论和方法,按照人们的设计蓝图,进行在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。。所涉及的主要技术领域有细胞培养、细胞融合、细胞拆合、染色体操作及基因转移等方面通过细胞工程可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株,并可以产生新的物种或品系。细胞工程与基因工程一起代表着生物技术最新的发展前沿,伴随着试管植物、试管动物、转基因生物反应器等相继问世,细胞工程在生命科学、农业、医药、食品、环境保护等领域发挥着越来越重要的作用。 1.细胞工程的概念及研究内容 1.1细胞工程 具体是指应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论与方法,按照人们的需要和设计,在细胞水平上的遗传操作,重组细胞的结构和内含物,以改变生物的结构和功能,即通过细胞融合、核质移植、染色体或基因移植以及组织和细胞培养等方法,快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。21世纪合成生物学的发展,采用计算机辅助设计、DNA或基因合成技术,人工设计细胞的信号传导与基因表达调控网络,乃至整个基因组与细胞的人工设计与合成,从而刷新了基因工程与细胞工程技术,并将带来生物计算机、细胞制药厂、生物炼制石油等技术与产业革命。 1.2细胞工程的研究内容 动植物细胞与组织培养、细胞融合(新的物种或品系、单克隆抗体)、细胞核移植(无性繁殖、克隆动物)、染色体工程(多倍体育种,例:八倍体小黑麦)、胚胎工程(优良品种、试管婴儿)、干细胞与组织工程(胚胎干细胞、组织干细胞)、转基因生物与生物反应器(转基因动物、转基因植物) 2.细胞工程的应用 2.1细胞工程在植物方面的应用

细胞工程学复习资料迟长凤

细胞工程学 1. 细胞工程指以细胞为研究对象,应用生命科学理论,借助工程学原理与技术,有目地利用或改造生物遗传性状,以获得特定细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术 2. 显微操作术借助显微操作仪和微针。微吸管等工具实现细胞操作和研究的一种技术 3. 细胞培养指从组织分离细胞,模拟体内环境,在无菌,适当条件下使其生长繁殖的一种技术 4. 原代培养直接取材于有机体组织的细胞进行培养 传代培养把原代培养的细胞从培养瓶中取出进行培养 5. 细胞工程的研究对象:动物、植物、微生物 6. 发现鸡神经元在生理盐水中可以存活,并使用了“组织培养”一词——Roux 卢克斯分离蝌蚪神经组织,开创动物组织培养先河——Harrison 哈里森 7. 植物组培奠基人:Went,Gautheret,Nobercount 8. 第一个体外受精动物——试管兔——张明觉仓鼠肾细胞的悬浮培养,为动物细胞大规模培养技 术的建立提供了基础——Capstick 9. Carlson -- 用NaN03作为融合诱导剂进行烟草原生质体融合,获得世界第一个体细胞杂种 植株 10. 成功利用胚胎细胞克隆出一只绵羊,首次证实的通过核移植技术克隆的哺乳动物—— Villadsen 多莉羊——证明高等动物体细胞细胞核的全能性 11. 血细胞计数板使用方法 12. 单细胞的获得:有限稀释法、显微操作分离法、流式细胞仪分离法、激光捕获纤维切割、免 疫磁珠分离 13. 细胞保存方法: 传代培养保存法 低温冷冻保存法:a低温保存(-20C左右)b超低温保存(液氮-196C) 14. 细胞培养方式:分批式、流加式、半连续式、连续式、灌流式 15. 分批培养的5 个时期: 适应期:cell很少分裂,营养不消耗平台期:cell浓度max,生长静止 指数生长期:max-V生长,细胞浓度指数增长衰退期:cell开始自溶,死亡 减速期:cell 生长受抑制,V 生下降 16. 外植体指用于离体培养的植物或组织切段 17. 人工种子指将植物离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中形成的类似种子的颗粒 18. 植物组织培养的应用:快速繁殖、种苗脱毒、突变育种、基因工程育种、远缘杂交 19. 常用生长素(根):吲哚乙酸(IAA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2, 4-D)、萘乙酸(NAA)、吲哚 丁酸(IBA) 常用细胞分裂素(芽):6-芐氨基嘌呤(BA)、6-呋喃氨基嘌呤(激动素KT) 生长素/ 细胞分裂素:高(根的形成,愈伤组织的形成)中(根芽分化)低(芽的分化) 2 0 .人工种子三大结构:人工种皮外层、人工胚乳、胚状体或芽 2 1 .胚状体同步发育的调节方法(5 种):抑制剂法、低温法、渗透压法、通气法、分离筛选法

细胞工程学专业复习文件

绪论 一.细胞工程(Cell Engineering):(定义)是应用细胞生物学和分子生物学方法,借助工程学的实验方法或技术,在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特性,以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的学科。 分类(包括):(填空)植物细胞工程和动物细胞工程 植物细胞工程:(定义)以植物细胞组织为差不多单位,在离体条件下进行培养、生殖或人为的精细操作,使细胞的某些生物学特性按人们的意愿发生改变,从而改良品种或制造新物种,或加速生殖植物新个体,或获得有用物质的过程。 动物细胞工程:(定义)是依照细胞生物学及工程学原理,定向改变动物细胞内的遗传物质从而获得新型生物或特种细胞产品的一门技术。 二.(填空)细胞学讲的提出:施旺,施莱登(1838年)

三.1902年,H aberlandt提出了细胞全能性学讲。 第一章差不多技术 一.湿热灭菌:103-137kPa(121-126°C),15-30min. 二.干热灭菌:利用烘箱加热到位60-180°C 三.培养基差不多成分:无机盐(大量元素,微量元素),有机成分(激素,植物生长调节剂),水 常用有机成分:糖类(蔗糖),维生素,肌醇,腺嘌呤,氨基酸 激素:生长素(根),细胞分裂素(芽),赤霉素(细胞伸长)四.差不多培养基种类:MS,B5,N6,White(P26) (1)高盐平衡培养基:MS培养基、LS培养基、BL培养基、BM培养基和ER培养基。特点:无机盐浓度较高,元素间的比例适当,离子平衡性好,具有较强的缓冲性;营养丰富;微量元素种类全,浓度高。 (2)高硝态氮培养基:B5培养基,N6培养基及SH培养基等。特点:硝酸钾的含量高,氨态氮的含量低,含有较高的盐酸硫胺素。(3)中盐培养基:H培养基、Nitsch培养基、Miller培养基和Blaydes培养基。特点:大量元素无机盐约为MS的一般,微量元素种类减少而含量增高,维生素种类比MS多。

细胞工程简介 (1)

细胞工程 主讲人王文星 学前导引 本课程为必修考试课,理论授课32学时,期末考试闭卷 总成绩为100分:出勤+课堂提问占10%, 平时测验占20%,期末试卷占70%. 平时测验1~次,随堂考试,闭卷. 选用教材: 安利国,杨桂文.?细胞工程?第3版,科学出版社,2016 主要参考教材: 李志勇.?细胞工程?第2版,科学出版社,2010 殷红.?细胞工程?第2版,化学工业出版社,2013 第1章细胞工程简介 内容提要 一、定义五、主要研究内容 二、与其它生物工程的关系六、重要应用 三、发展历史七、本章小结 四、研究对象八、思考题 一、细胞工程定义 细胞工程:应用细胞生物学和分子生物学的方法,通过类似于工程学的步骤,在细胞整体水平或细胞器水平上,按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获取新型生物或特种细胞产品的一门科学技术。 广义的细胞工程:包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术,狭义的细胞工程则是指细胞融合和细胞培养技术。 二、细胞工程与其它生物工程的关系 生物化学工程为基因工程、细胞工程、微生物工程、蛋白质工程、酶工程、代谢工程提供产业化技术支持。

基因工程技术为细胞工程提供转基因细胞。 细胞工程技术为微生物工程、酶工程及工程产业化提供充足的 经过遗传改良和性状稳定的微生物、动植物细胞原料。 总结:细胞工程技术是现代生物工程技术各领域连接的桥梁和 纽带;与其它生物工程技术是密切联系,不可分割的有机整体。 三、细胞工程发展历史 细胞工程的理论基础是细胞学说和细胞全能性学说。 在植物学界,100年前,德国学者Haberlandt(1902)发表了着名 的论文《植物细胞离体培养实验》,提出了细胞全能性的观点。 20AD中叶,植物细胞组织培养与细胞的遗传操作相结合,发展 成为植物细胞工程。 20AD60s末兴起的植物单倍体技术是一项在植物育种上用途广 泛的细胞工程技术。 20AD90s以来,虽然基因工程成为生物技术的主流,但是细胞工 程并为失去独立存在价值,它继续在优良苗木繁育、农作物育种和 植物天然药物的开发中起着举足轻重的作用。 在动物学界,1907年美国学者哈里森等人采用盖玻片悬滴培养 蛙胚神经组织,存活数周,而且观察到生长现象,从而开创了动物细 胞培养的先河。 1965年,哈利斯和沃特金斯证明了灭活的病毒在控制的条件下 可以用来诱导动物细胞的融合。至此细胞融合作为一个重要的研究 领域已经引起人们的浓厚兴趣。 20AD70s初,诞生了细胞拆合工程。1972年,Prescott等人首先应用离心技术结合细胞松弛素B分离哺乳类细胞的胞质体获得成功,为研究哺乳类细胞核、质相互关系、细胞质基因的转移开创了新的途径。 近年来,细胞工程取得了迅速发展。如试管植物、试管动物、克隆动物、转基因生物反应器、干细胞等等。其中最具代表性的成就有:1977年,英国采用胚胎工程技术成功培育出世界首例试管婴儿。1997年英国利用成年动物体细胞首次克隆出绵羊“多莉”。2001年英国又宣布成功培育出世界首批转基因猪。2008年:美国科学家利用人胚胎干细胞可以在实验室培育出有携带氧功能的成熟红细胞,这个成果将可能解决个别血型血源紧缺的问题,也可帮助避免输血相关疾病的发生;美国研究人员在患糖尿病的老鼠身上做实验,将普通细胞转化成可分泌胰岛素的胰岛β细胞,减轻了病情。这一研究利用基因重组技术,实现不同种类成体细胞间直接转化,代表再生医学的重大进步。 细胞工程发展历史 2009年,马萨诸塞州总医院(MGH)的研究人员找到一种成功地体外培养肝细胞的方法,培养的肝细胞具有药物毒性筛选功能。研究报告详细介绍了肝细胞如何在高氧条件和无动物血清的条件下生长,并如何快速发挥正常肝脏所具有的功能。 2010年,科学家首次实现将多功能干细胞变成功能性人体肠道组织。 2011年,肿瘤的细胞免疫治疗研究进展:细胞免疫疗法能够靶向肿瘤细胞而不伤及正常组织细胞,并可产生免疫记忆来预防肿瘤复发,有可能成为肿瘤治疗的第四种方法。四、细胞工程的研究对象 细胞或其组成部分和构成的组织、器官等如染色体、细胞核、原生质体、整个细胞、受精卵、胚胎、组织或器官。 五、细胞工程的主要研究内容

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