葡萄糖-6- 磷酸酶染色液( 铅法)使用说明

葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)使用说明

货号：G1500

规格：3×50ml

保存：4℃避光，6个月

名称3×50ml Storage

试剂(A):G-6-Pase孵育液50ml4℃避光

试剂(B):ALP硫化液2×1ml RT避光

试剂(C):固定液50ml4℃避光

试剂(D):G-6-Pase对照液10ml4℃避光

产品说明：

葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6–phosphatase，G-6-Pase)是一种多存在于哺乳类动物肝、肾、肠等组织的膜结合酶，G-6-Pase和微体紧密结合，定位于内质网，是内质网的主要标志酶，能把葡萄糖-6-磷酸水解成葡萄糖和磷酸。G-6-Pase对维持血糖浓度的相对恒定有至关重要的作用，是糖代谢的关键酶。当血糖降低时，G-6-Pase促进肝糖原转变为血糖。当缺乏G-6-Pase时，会引起糖原分解障碍，使糖原积累在肝、肾、心脏等部位，导致肝糖原储积病。G-6-Pase最适pH为 6.5，在pH6.0～8.0亦可，pH8.0最稳定，pH5.0易变性。组织化学反应多用pH6.5～6.7。

葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)采用重金属捕捉剂和磷酸结合显示酶的活性。该酶对固定很敏感，组织经80%乙酸溶液固定后用石蜡包埋，G-6-Pase完全被抑制。需用新鲜组织低温恒冷切片，经甲醛短时固定酶即失活，但可短时低温丙酮固定，但一般不固定。

操作步骤（仅供参考）：

1.冰冻切片入蒸馏水清洗。

2.入G-6-Pase孵育液37℃孵育20min。

3.自来水冲洗后，蒸馏水冲洗。

4.在上述过程中配制ALP硫化工作液，即取试剂(B)用蒸馏水稀释50倍,即为ALP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育1min。

5.自来水水洗。

6.(可选)入固定液，固定2min。

7.入蒸馏水水洗2次。

8.甘油明胶封片。

染色结果：

G-6-Pase活性处棕色沉淀

阴性对照(可选)：将切片置入试剂(D)-G-6-Pase对照液中，其余步骤相同，结果为阴性。注意事项：

1.ALP硫化液易失效，最好分成小分储存，一经开启立即使用。

2.ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，应小心操作。

3.对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。

4.本染色液适用于冰冻切片，一般不固定，也可染色后固定，固定步骤非必须步骤。

5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6- 酶磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒

6-磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒 产品简介： 6-磷酸葡萄糖脱氢酶是磷酸戊糖途径的关键酶，催化6-磷酸葡萄糖氧化为6-磷酸葡萄糖酸内酯，同时将NADP还原为NADPH，以供生物合成及维持细胞内的还原状态，因此6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。 G6PDH能使NADP还原成NADPH，6-磷酸葡萄糖+NADP→6-磷酸葡萄糖酸内脂+NADPH；在一定反应时间内其活性高低与反应前后生成物浓度的变化呈线性关系。本测试盒通过在340nm下测定NADPH增加速率来反应G6PDH活性的大小，NADPH浓度升高越多则G6PDH 活力越大。 试验中所需的仪器和试剂： 紫外可见分光光度计、37℃恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、蒸馏水 产品内容： 提取液：60mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：储备液50mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×2支，-20℃保存；用时每只加275μL双蒸水充分溶解备用； 试剂三：粉剂×2支，-20℃保存；用时每只加275μL双蒸水充分溶解备用。 操作步骤： 一、样品测定的准备： (1)细菌、细胞或组织样品的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液的比例充分匀浆以破碎并裂解细胞。8000g离心10分钟，取上清，置冰上待测。 组织：称取100mg组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10分钟，

取上清，置冰上待测。 （2）血清（浆）样品：直接检测。 二、测定操作表： 测定管对照管试剂一（μL）750750 试剂二（μL）1010 试剂三（μL）1010 样本（μL）30 蒸馏水（μL）30 将上述试剂按顺序加入1mL石英比色皿中，加样本的同时开始计时，在340nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1，比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃或25℃水浴中（哺乳动物用37℃，非哺乳动物用25℃），准确反应5分钟。迅速取出比色皿并擦干，340nm下比色，记录5分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。 注意事项： 1、若A2-A1大于0.5，需将酶液用提取液稀释，使A2-A1小于0.5，可提高检测灵敏度。 2、实验时，试剂二、试剂三和样本在冰上放置，以免变性和失活。试剂一37℃或25℃水浴放置。 3、比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃，取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

生物化学 糖代谢

糖代谢 一、多糖的代谢 1.淀粉 凡能催化淀粉分子及片段中α- 葡萄糖苷键水解的酶，统称淀粉酶（amylase）。 主要可以分为α-淀粉酶、β-淀粉酶、γ-淀粉酶、和异淀粉酶4类。 (一)α-淀粉酶 又称液化酶、淀粉-1，4-糊精酶 1）作用机制 内切酶，从淀粉分子内部随机切断α-1，4糖苷键，不能水解α-1，6-糖苷键及与非还原性末端相连的α-1，4-糖苷键。 2）水解产物 直链淀粉 大部分直链糊精、少量麦芽糖与葡萄糖 支链淀粉 大部分分支糊精、少量麦芽糖与葡萄糖，底物分子越大，水解效率越高。 (二)β-淀粉酶 又叫淀粉-1，4-麦芽糖苷酶。 1）作用机制 外切酶,从淀粉分子的非还原性末端，依次切割α-1，4-糖苷键，生成β-型的麦芽糖；作用于支链淀粉时，遇到分支点即停止作用，剩下的大分子糊精称为β-极限糊精。 2）β-淀粉酶水解产物 支链淀粉 β-麦芽糖和β-极限糊精。 直链淀粉 β-麦芽糖。 (三)γ-淀粉酶 又称糖化酶、葡萄糖淀粉酶。 1）作用方式 它是一种外切酶。从淀粉分子的非还原性末端，依次切割α-1，4-葡萄糖苷键，产生β-葡萄糖。遇α-1，6和α-1，3-糖苷键时也可缓慢水解。 2) 产物 葡萄糖。 (四)异淀粉酶 又叫脱支酶、淀粉-1，6-葡萄糖苷酶。 1）作用方式 专一性水解支链淀粉或糖原的α-1，6-糖苷键，异淀粉酶对直链淀粉不作用。 2）产物 生成长短不一的直链淀粉(糊精)。 3）现象 碘反应蓝色加深 2.糖原 （一）糖原分解 糖原的降解需要三种酶，即糖原脱支酶，磷酸葡糖变位酶和糖原磷酸化酶。 （1）糖原磷酸化酶

该酶从糖原的非还原性末端以此切下葡萄糖残基，降解后的产物为1-磷酸葡萄糖。 （2）磷酸葡糖变位酶 糖原在糖原磷酸化酶的作用下降解产生1-磷酸葡糖。1-磷酸葡萄糖必须转化为6-磷酸葡糖后方可进入糖酵解进行分解。1-磷酸葡糖到6-磷酸葡糖的转化是由磷酸葡糖变位酶催化完成的。 （3）糖原脱支酶 该酶水解糖原的α-1，6-糖苷键，切下糖原分支。糖原脱支酶具有转移酶和葡糖甘酶两种活性。在糖原脱支酶分解有分支的糖原时，首先转移酶活性使其3个葡萄糖残基从分支处转移到附近的非还原性末端，在那里它们以α-1，4-葡萄糖苷键重新连接的单个葡萄糖残基，在葡萄糖苷酶的作用下被切下，以游离的葡萄糖形式释放。 补充： 1.糖原磷酸化只催化1，4-糖苷键的磷酸解，实际上磷酸化酶的作用只到 糖原的分支点前4个葡萄糖残基处即不能再继续进行催化，这时候就 需要糖原脱支酶。磷酸吡哆醛是磷酸化酶的必需辅助因子。 2.糖原的降解采用磷酸解而不是水解，具有重要的生物意义。 （1）磷酸解使降解下来的葡萄糖分子带上磷酸基团，葡萄糖-1-磷

葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)试剂盒使用说明

葡萄糖-6-磷酸酶（G6P)试剂盒使用说明 分光光度法货号：BC0930 规格：50管/48样 产品内容： 提取液：60mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体47.5mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1支，-20℃保存； 试剂三：粉剂×1支，-20℃保存； 试剂四：液体×1支，-20℃保存； 产品说明： 葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose6phosphatase，G6Pase，EC3.1.3.9）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。 G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH，在340nm下测定NADH生成速率，即可反映G6P活性。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。操作步骤： 一、样本的前处理： 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞 数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加

入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组 织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）样品：直接检测。 二、测定步骤： 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 工作液的配制：临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合待用；用不完的试剂4℃保存一周； 2、将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）预热5分钟。 3、在1mL石英比色皿中加入50μL样本和950μL工作液，立即混匀，记录340nm处 初始吸光值A1和2min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。 注意：在该试剂盒中，若ΔA大于0.3，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使ΔA小于0.3可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。 G6P活性计算： 1、血清（浆）G6P活力计算 单位定义：每毫升血清（浆）每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。 G6P（U/mL））＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=1608×ΔA 2、组织、细菌或细胞中G6P活力计算 （1）按样本蛋白浓度计算 单位定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。 G6P（U/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr

为什么说6-磷酸葡萄糖是各个糖代谢途径的交叉点

【第五章】 4、为什么说6-磷酸葡萄糖是各个糖代谢途径的交叉点？ 葡萄糖经过激酶的催化转变成葡萄糖－6－磷酸，可进入糖酵解途径氧化，也可进入磷酸戊糖途径代谢，产生核糖－5－磷酸、赤鲜糖－4－磷酸等重要中间体和生物合成所需的还原性辅酶Ⅱ；在糖的合成方面，非糖物质经过一系列的转变生成葡萄糖－6－磷酸，葡萄糖－6－磷酸在葡萄糖－6－磷酸酶作用下可生成葡萄糖，葡萄糖－6－磷还可在磷酸葡萄糖变位酶作用下生成葡萄糖－1－磷酸，进而生成糖原。由于葡萄糖－6－磷酸是各糖代谢途径的共同中间体，由它沟通了糖代谢分解与合成代谢的众多途径，因此葡萄糖－6－磷酸是各糖代谢途径的交叉点。 6、1分子葡萄糖在肝脏组织彻底氧化可生成多少分子ATP? 1molATP水解可释放30.54KJ能量，而1mol葡萄糖彻底氧化分解后可产生2870KJ能量但其中只有1161KJ能储存在ATP中，故可形成约38molATP。（效率约为40%） 10、计算由2摩尔丙酮酸转化成1摩尔葡萄糖需要提供多少摩尔的高能磷酸化合物？ 首先，2摩尔丙酮酸+2CO2+2ATP→2草酰乙酸+2ADP+2Pi；2草酰乙酸+2GTP→2磷酸稀醇式丙酮酸+2GDP+2CO2；其次，2摩尔磷酸稀醇式丙酮酸沿糖酵解途径逆行至转变成2摩尔甘油醛-3-磷酸，其中在甘油酸-3-磷酸转变成甘油酸-1,3-二磷酸过程中，消耗2摩尔ATP；甘油酸-1,3-二磷酸转变成甘油醛-3-磷酸中，必须供给2摩尔的NADH?H+。最后，2摩尔的磷酸丙糖先后在醛羧酶、果糖-1,6-二磷酸酶、异构酶、葡萄糖-6-磷酸酶作用下，生成1摩尔葡萄糖，该过程无能量的产生与消耗。从上述三阶段可看出，2摩尔丙酮酸转化成1摩尔葡萄糖需要提供6摩尔高能磷酸化合物，其中4摩尔为A TP，2摩尔为GTP。 【第六章】

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-PGDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法 注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 货号:BC2100 规格:50T/48S 产品内容： 试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。 试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。； 产品说明： 磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶6PGDH依次催化NADPH 合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。 6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿和蒸馏水。 操作步骤： 一、样本的处理 称约0.1g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清液，待测。 二、测定步骤 1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。 2.试剂一置于37℃水浴预热30min以上。 3.加样表：在比色皿中依次加入 试剂名称（μL）测定管（μL）空白管（μL） 样本100-

蒸馏水-100 试剂一700700 试剂二100100 试剂三100100 于340nm处测定3min内吸光值变化，第0s吸光值记为A1，第180s吸光值记为A2。记△A测定=A2测定-A1测定，△A空白=A2空白-A1空白。 三、6PGDH活性计算： 1）按蛋白浓度计算 活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U（U/mg pr）。 6PGDH酶活性(U/mg prot)=[(△A测定-△A空白)÷(ε×d)×106×V反总]÷(Cpr×V样)÷T =536×(△A测定-△A空白)÷Cpr （2）按样本鲜重计算 活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U（U/mg prot）。 6PGDH酶活性(U/g鲜重)=[(△A测定-△A空白)÷(ε×d)×106×V反总]÷(W÷V样总×V样)÷T =536×(△A测定-△A空白)÷W ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L/moL/cm；d：比色皿光径，1cm； V反总：反应体系总体积，0.001L；V样：反应体系中加入粗酶液体积，0.1mL； Cpr：粗酶液蛋白质浓度，mg/mL；V样总：提取液体积，1mL； T：反应时间，3min；W：样本质量，g。 注意事项： （1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在提取当日完成酶活性测定，粗酶液避免反复冻融； （2）试剂二和试剂三须现配现用，当天未用完试剂保存在4℃，可保存1周。 （3）若样本初始（0s）读值大于0.5且△A测定小于0.1，可尝试将样本进行稀释后测定。

葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)活性检测试剂盒说明书 微量法

葡萄糖-6-磷酸酶（G6P）活性检测试剂盒说明书微量法 注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号:BC3325 规格:100T/48S 产品内容： 提取液：液体120mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体12mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存； 试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前用4mL蒸馏水溶解备用。 试剂四：试剂×1瓶，4℃保存；临用前用4mL蒸馏水溶解备用。 试剂五：液体4mL×1瓶，4℃保存； 标准品：液体1mL×1支。10μmol/mL磷标准液。 产品说明： 葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose6phosphatase，G6Pase，EC3.1.3.9）是一种水解磷酸化合物的磷酸酶，广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。 G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和无机磷，利用钼蓝法测定无机磷含量的增加，即可反映G6P活性。试验中所需的仪器和试剂： 可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取

液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）样品：直接检测。 二、测定步骤： 1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。 2、将10μmol/mL标准液用蒸馏水稀释16倍至0.625μmol/mL的标准溶液备用。 3、工作液的配制：试剂二中加入5mL试剂一充分溶解备用。 O:试剂三:试剂四:试剂五=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若4、定磷试剂的配制：按H 2 无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。 注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。 5、操作表： 测定管对照管标准管空白管样品（μL）2020 工作液（μL）80 充分混匀，37℃（哺乳动物）或者25℃（其他物种）水 浴反应10min。反应后迅速放入沸水中沸水浴10min。取出 冷却至常温 工作液（μL）-80 10000rpm常温离心10min后取上清。 上清液（μL）2525-- 标准溶液（μL）--25- 定磷试剂（μL）125125125125 蒸馏水（μL）100100100125 充分混匀，40℃反应10min。吸取200μL于微量玻璃比色皿或者96孔板中，测量660nm处吸光值，测定管、对照管、空白管、标准管测定的吸光度分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。计算△A=A测定管-A对照管，△A标准=A标准管-A空白管。 三、G6P活性计算：

热稳定葡萄糖脱氢酶的表达及在合成L-叔亮氨酸中的应用

热稳定葡萄糖脱氢酶的表达及在合成L-叔亮氨酸中的应用 葡萄糖脱氢酶(Glucose Dehydrogenase,GDH,EC1.1.1.47)属于短链脱氢酶/还原酶(Short-chain dehydrogenases/reductase,SDRs)。它具有四个相同亚基(28.2×4kDa),能够催化D-葡萄糖为D-葡萄糖酸内酯,同时还原NAD(P)+为NAD(P)H。 近些年,GDH的研究取得了一定进展,已经应用到很多领域,例如辅酶再生、临床检测和生物燃料电池等。早期的GDH来源主要是动物新鲜肝脏,目前大部分由微生物发酵而来。 国内的GDH产量还不高,主要依靠进口。本文研究的葡萄糖脱氢酶(GDH)来源于巨大芽孢杆菌(Bacillus megtaterium IWG3)的一个突变体GDH-DN46[1],其通过定向进化和96孔板法获得,提高了酶的热稳定性和耐碱性,不管NaCl的存在与否都不会对这种突变酶的催化活性产生影响。 这种氧化还原酶在催化反应中需要依赖辅酶NAD(P)+,但辅酶价格昂贵并且稳定性差,这大大限制了氧化还原酶在工业催化方面的应用[2]。本文以GDH的突变体GDH-DN46作为研究对象,通过构建重组质粒并在大肠杆菌中成功表达,优化表达条件提高酶的活性,研究该酶酶学性质。 将其用于辅酶再生系统,用以催化合成L-叔亮氨酸。同时本论文建立了可利用仿生辅酶的GDH的高通量筛选平台,探索仿生辅酶替代NAD(P)+在工业催化方面的应用。 论文的主要研究内容如下:1.构建了在大肠杆菌E.coli BL21中高效表达GDH的重组表达质粒pET28a-GDH,E.coliBL21(pET28a-GDH)的酶活可达到 0.95 U/mg。对重组菌的培养和诱导条件进行优化,优化后的酶活提高到1.52 U/mg,比

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症(G6PD) 简介(英文)

What is G6PD deficiency? Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency, or G6PD deficiency for short, is the most common “inborn metabolic disorder” in the world. This means that from the time a baby is born, thre is already something wrong with how his body makes and breaks important substances. According to statistics, about 400 million people have G6PD deficiency, and it is most common in Africa, Southeast Asia and the Middle East.Babies with G6PD deficiency have very little or no enzyme called Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase (G6PD). An enzyme is a kind of protein that speeds up chemical reactions in the body. The enzyme G6PD is especially important to red blood cells. If this enzyme is lacking or missing, red blood cells are easily destroyed. Another name for G6PD deficiency is favism because some people who have it, usually those living in the Meditteranean region, react very badly to fava beans. What causes G6PD deficiency? In order to understand what causes G6PD deficiency, one must first learn a bit about genes and chromosomes. Genes are like the body’s blueprints. They contain instructions on how specific parts of the body are made. For example, if the isntructions in your hair genes say your hair is black, your hair will be black. Genes are packaged into threadlike structures called chromosomes. A chromosome is very much like a beaded bracelet. The beads are the different genes that give instructions for different part of the body; the entire bracelet is the chromosome. Genes usually come and act in pairs. One member of a specific pair comes from the father, and the other member comes from the mother. The members of a pair are located on paired chromosomes. All normal human beings have 23 pairs of chromosomes. Each of the first 22 pairs contain the same number and kind of genes. The last and 23rd pair is the sex chromosomes. They are different from the first 22 pairs in that they do not have the same number and kind of genes. The sex chromosomes contain the genes that determine whether a baby will be a girl or a boy. There are 2 kinds of sex chromosomes, X and Y. All baby girls have two X chromosomes. All baby boys have one X and one Y. The gene that gives instructions on how G6PD is made is found in the X chromosome only, thus G6PD deficiency is described as X-linked. If a baby girl gets one defective G6PD gene from either of her parents, she will not have G6PD deficiency because she has another G6PD gene that can do the work (remember: a baby girl has two X chromosomes, thus two G6PD genes). But if she gets two defective G6PD genes from both her parents, she will have G6PD deficiency. On the other hand, a baby boy whose G6PD gene is defective will surely get G6PD deficiency because the Y chromosome has no G6PD gene. A defective G6PD gene will give wrong instructions on how to make the enzyme G6PD. As a result, too little or none of it is made. What are the harmful effects of G6PD deficiency? G6PD has a very small but strategic role in protecting the body from substances that can cause damage to cells or oxidative substances. Because of this important role, G6PD is normally found in all parts of the body. To be sure, most parts of the body also keep a “spare” enzyme, one that can do the w ork of G6PD in case it is lacking or missing entirely.

糖的生理功能

第七章糖代谢 第一节概述 一、糖的生理功能 （一）氧化分解，供应能量 生命活动需要能量，糖是最主要的能源物质 （二）储存能量，维持血糖 糖在体内可以糖原的形式进行储存，这是机体储存能源的重要方式。当机体需要时，糖原分解，释放入血，可有效地维持正常血糖浓度，保证重要生命器官地能量供应。 （三）提供原料，合成其他物质 糖分解代谢的中间产物可为体内其他含碳化合物的合成提供原料。如糖在体内可转变为脂肪酸和甘油，进而合成脂肪；可转变为某些氨基酸以供机体合成蛋白质所需；可转变为葡萄糖醛酸，参与机体的生物转化反应等；因而糖是人体重要的碳源。 （四）参与构造组织细胞 糖是体内重要的结构组织 （五）其他功能 糖能参与构成体内一些具有生理功能的物质。 二、糖代谢概况 糖的合成代谢包括糖原合成、糖异生和结构多糖的合成；糖的分解代谢包括糖酵解、有氧氧化、磷酸戊糖途径及糖原分解等。 第二节糖的无氧氧化 （一）概念：在缺氧条件下，葡萄糖或糖原分解为乳酸的过程称无氧氧化，又称糖酵解。（二）反应过程 1.葡萄糖生成2分子磷酸丙糖 （1）葡萄糖生成6-磷酸葡萄糖己糖激酶 （2）6-磷酸葡萄糖生成6-磷酸果糖变构酶 （3）6-磷酸果糖生成1，6-二磷酸果糖磷酸果糖激酶 （4）磷酸丙糖的生成醛缩酶 2.磷酸丙糖氧化为丙酮酸 （1）3-磷酸甘油醛氧化 3-磷酸甘油醛脱氢酶 3-磷酸甘油酸的生成磷酸甘油酸激酶(3) 2-磷酸甘油酸的生成变位酶 (4) 磷酸烯醇式丙酮酸的生成烯醇化酶 (5) 丙酮酸的生成丙酮酸激酶

3. 丙酮酸还原为乳酸 乳酸脱氢酶 （三） 反应特点 1．没有氧参与。 2．1分子葡萄糖净生成2分子ATP ，从糖原开始，净生成3分子ATP 。 3．有三步不可逆反应，分别由己糖激酶、磷酸果糖激酶、丙酮酸激酶催化。 4．红细胞中存在2，3-二磷酸甘油酸支路 （四） 生理意义 1. 糖酵解是机体在缺氧情况下供应能量的重要方式。 2. 糖酵解是红细胞供能的主要方式。 3. 2，3-二磷酸甘油酸对调节红细胞的带氧功能有重要意义。 4. 某些组织在有氧条件下仍以糖酵解为主要供能方式。 （五） 糖酵解的调节 1. 激素的调节作用 胰岛素的诱导 2. 代谢物对限速酶的变构调节 1，6-二磷酸果糖、ATP 、AMP 等是磷酸果糖激酶的变构 激活剂。 第三节 糖的有氧氧化 （一） 概念：在有氧条件下，葡萄糖或糖原彻底氧化为CO 2和H 2O 的过程称糖的有氧氧化。 有氧氧化是糖氧化产能的主要方式。 （二） 反应过程： 1. 葡萄糖生成丙酮酸 葡萄糖经糖酵解途径生成丙酮酸 2. 丙酮酸氧化脱羧生成乙酰辅酶A 丙酮酸进入线粒体在丙酮酸脱氢酶复合体催化下氧化脱羧，并与辅酶A 结合生成乙酰CoA 。此反应不可逆，总反应式为： 丙酮酸脱氢酶复合体+HSCoA + NAD +NADH+H +CO 2++C=O COOH CH 3C CH 3O ~SCoA 丙酮酸脱氢酶复合体由丙酮酸脱氢酶、二氢硫辛酰胺转乙酰酶和二氢硫辛酰胺脱氢酶三种酶组成的多酶复合体，有5种辅酶，即TPP 、硫辛酸、FAD 、NAD ＋ 和HSCoA ，分别含有B 1、硫辛酸、B 2、PP 、泛酸等维生素。当这些维生素缺乏将导致糖代谢障碍。 3. 乙酰辅酶A 彻底氧化分解（三羧酸循环） 三羧酸循环是指乙酰CoA 和草酰乙酸缩合生成柠檬酸，经过一系列脱氢、脱羧反应，再生成草酰乙酸的循环过程。

4.糖代谢

第四章糖代谢 一、A型选择题 01. 淀粉经α-淀粉酶作用后的主要产物是 A. 麦芽糖及异麦芽糖 B. 葡萄糖及麦芽糖 C. 葡萄糖 D. 麦芽糖及临界糊精 E. 异麦芽糖及临界糊精 02. 糖酵解时下列哪一对代谢物提供～P使ADP生成ATP A. 3-磷酸甘油醛及6-磷酸果糖 B. 1,3-二磷酸甘油酸及磷酸烯醇式丙酮酸 C. 3-磷酸甘油酸及6-磷酸葡萄糖 D. 1-磷酸葡萄糖及磷酸烯酸式丙酮酸 E. 1，6-双磷酸果糖及1,3-二磷酸甘油酸 03. 下列有关葡萄糖磷酸化的叙述中，错误的是 A. 已精激酶有四种同工酶 B. 己糖激酶催化葡萄糖转变成6-磷酸葡萄糖 C. 磷酸化反应受到激素的调节 D. 磷酸化后的葡萄糖能自由通过细胞膜 E. 葡萄糖激酶只存在于肝脏和胰腺p细胞 04. 下列哪个酶直接参与底物水平磷酸化 A. 3-磷酸甘油难脱氢酶 B. α-酮戊二酸脱氢酶 C. 琥珀酸脱氢酶 D. 磷酸甘油酸激酶 E. 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 05. 1分子葡萄糖酵解时可生成几分了ATP？ A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 06. 1分子葡萄糖酵解时可净生成几分子ATP？ A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 07. 糖原的1个葡萄糖基经糖酵解可生成几个ATP A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 08. 糖原的1个葡萄糖基经糖酵解可净生成几个ATP？ A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 09. 肝脏内据酵解途径的主要功能是 A. 进行糖酵解 B. 进行糖有氧氧化供能 C. 提供磷酸戊精 D. 对抗糖异生

E. 为其他代谢提供合成原料 10. 糖酵解时丙酮酸不会堆积的原因是 A. 乳酸脱氢酶活性很强 B. 丙酮酸可氧化脱羧生成乙酰CoA C. NADH／NAD+比例太低 D. 乳酸脱氢酶对两酮酸的K m值很高 E. 丙酮酸作为3-磷酸甘油难脱氢反应中生成的NADH的氢接受者 11. 6-磷酸果糖激酶-l的最强别构激活剂是 A. AMP B. ADP C. 2,6-双磷酸果糖 D. A TP E. 1,6-双磷酸果糖 12. 与糖酵解途径无关的酶是 A. 己糖激酶 B. 烯醇化酶 C. 醛缩酶 D. 丙酮酸激酶 E. 磷酸烯酸式丙酮酸羧激酶 13. 下列有关糖有氧氧化的叙述中哪一项是错误的？ A. 糖有氢氧化的产物是CO2及H2O B. 糖有氧氧化可抑制糖酵解 C. 糖有氧氧化是细胞获取能量的主要方式 D. 三羧酸循环是在糖有氧氧化时三大营养素相互转变的途径 E. 1分子葡萄糖氧化成CO2及H2O 时可生成38分子ATP 14. 丙酮酸脱氢酶复合体中不包括 A. FAD B. NAD＋ C. 生物素 D. 辅酶A E. 硫辛酸 15. 不能使同酮酸脱氢酶复合体活性降低的是 A. 乙酰CoA B. A TP C. NADH D. AMP E. 依赖cAMP的蛋白激酶 16. 下列关于三羧酸循环的叙述中，正确的是 A. 循环一周可生成4分子NADH B. 循环一周可使2个ADP磷酸化成A TP C. 乙酰CoA可经草酸乙酸进行糖异生 D. 百二酸可抑制延胡索酸转变成苹果酸 E. 琥珀酸CoA是α酮戊二酸氧化脱羧的产物 17. 1分子乙酰COA经三羧酸循环氧化后的产物是 A. 草酰乙酸 B. 草酸乙酸和CO2 C. CO2＋H2O D. 草酰乙酸十CO2＋H2O E. 2CO2＋4分子还原当量

090904葡萄糖脱氢酶

2009年09月04日 医疗器械不良事件信息通报（2009年第5期）警惕采用葡萄糖脱氢酶吡咯喹啉醌（GDH- PQQ）技术的血糖检测产品潜在风险 警惕采用葡萄糖脱氢酶吡咯喹啉醌（GDH- PQQ）技术的血糖检测产品潜在风险葡萄糖脱氢酶吡咯喹啉醌（GDH- PQQ）血糖检测技术是一种用于血糖检测的酶技术。GDH- PQQ 血糖检测技术不能将血液中葡萄糖和其它糖类物质区分开来。因而，在使用该类产品时，如果患者正在接受含有某些非葡萄糖类物质的治疗，这些糖类物质会使血糖检测结果高于真实值，从而可能会掩盖严重的低血糖症或引起胰岛素的过量使用，进而导致严重的人身伤害或死亡。这些非葡萄糖糖类物质包括：麦芽糖、木糖、半乳糖，其存在于某些药物和生物制剂中，也可能由药物或治疗产品的代谢而产生。 鉴于采用该技术的血糖检测产品的潜在风险，建议医疗机构和患者采取以下措施，加以控制。 一、对医疗机构的建议： 1、尽量避免使用GDH- PQQ技术的血糖检测产品。 2、如使用该类产品，应严格按照产品说明书有关要求使用。 3、严禁将该类产品用于以下患者：正在使用含有非葡萄糖糖类物质的干扰类药品或治疗方案的患者，或无法向患者了解其药物同用情况，如反应迟钝或不能与之进行有效沟通的患者等。这些干扰类药品或治疗方案包括：含艾考糊精的腹膜透析液、含麦芽糖的免疫球蛋白制剂、注射用阿巴西普、放射免疫治疗药物托西莫单抗、静脉注射麦芽糖制剂、手术中使用含艾考糊精的防肠粘连液，以及其它任何含有或代谢为麦芽糖、木糖、半乳糖的药物或治疗方案。 4、在患者入院时应确认其是否正在接受干扰类药品的治疗，并在住院期间定期确认。

5、应对工作人员和患者进行相关培训，使其知晓使用该类产品时，有些非葡萄糖糖类物质可能会导致血糖测定结果的虚假升高。 6、应考虑在电脑处方录入系统、患者个人资料和检验报告单中增加药物相互作用的警示，以提醒工作人员存在血糖测定结果虚假升高的可能性。 7、应根据实验室血糖测定法对该类产品进行定期校对。 二、对患者的建议 1、根据医护人员的指导意见进行检测血糖。 2、对如使用含有非葡萄糖糖类物质的干扰药品或治疗方案时不应该再使用该类产品。 3、可以通过阅读血糖仪和血糖试纸的说明书及其外盒标识来产品采用的血糖检测技术。如果无法确定，请询问医护人员或生产厂家。 4、如没有使用含有非葡萄糖糖类物质的干扰药品或治疗方案时，该类产品是可以使用的。 5、了解您正在服用的药物，保留一份当前用药清单。 6、如果检测结果与自我感觉不一致，请及时就诊。 https://www.sodocs.net/doc/d910149240.html,/WS01/CL0438/41174.html

葡萄糖磷酸脱氢酶缺乏症

葡萄糖磷酸脱氢酶缺乏症

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葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症，又名G6PD缺乏症（英文：G lucose-6-P hosphate D ehydrogenase deficiency），俗称蚕豆症，是一种常见的先天遗传性疾病。患者由于遗传基因的先天缺陷，无法正常地分解葡萄糖。除此以外，部份药物和化学物如蚕豆、樟脑、臭丸、龙胆紫（紫药水）、都会令患者出现急性溶血反应，症状包括黄疸、精神不佳，严重时会出现呼吸急速、心脏衰竭，甚至会出现休克而有生命危险。 症状 由于先天性六磷酸葡萄糖去氢酵素缺乏症（以下简称为G6PD）是X染色体联锁遗传性疾病，而男性只得一条X-染色体，故此病症几乎只出现于男性身上，但带有此病因的女性亦有可能出现轻微的症状。 以下为G6PD发病时可能出现的症状： ?持续的黄疸 ?溶血反应，由以下项目引发： ?某类药物（见下） ?某类食物（如蚕豆、金银花） ?其他物品（如樟脑、龙胆紫（紫药水）） ?其他疾病（如受到严重病菌感染、糖尿病） ?严重症状可引致急性肾衰竭 诱发G6PD症状的药物有： ?伯氨喹（Primaquine） ?奎宁、汤力水（tonic water）等抗疟药物 ?磺胺类抗生素 ?砜类：如用以治疗麻疯病的氨苯砜 ?其他含硫磺的药品，如治疗糖尿病、控制血糖的药物血糖平（Glibenclamide） ?呋喃妥因：治疗尿道感染的抗生素 ?阿司匹林 当某些族裔的病人，出现黄疸、贫血，以及对某些诱因产生溶血反应时，又或是家族中有G6PD患者，都会被列为G6PD 的疑似个案，需要作进一步的测试。 G6PD的测试包括： ?全套血球计数（Complete blood count）及网状细胞（reticulocyte）计数；当症状出现时，G6PD患者的海因兹小体（Heinz bodies）会出现于在检验血液玻片的红血球内。 ?肝脏蛋白酶测试，以剔除其他黄疸症状的诱因 ?结合珠蛋白（Haptoglobin）于溶血反应中会减少

糖代谢作业

糖代谢作业 1、简述葡萄糖无氧分解的基本途径、关键酶的调节及其生理意义。 2、简述葡萄糖有氧氧化的三个阶段。 糖的有氧氧化分为三个阶段，第一阶段为葡萄酸至丙酮酸（糖酵解过程），反应在细胞液中进行；第二阶段是丙酮酸进入线粒体被氧化脱羧成乙酰辅酶A，反应在线粒体膜上进行；第三阶段是乙酰辅酶A进入三羧酸循环生成CO2和H2O 第一阶段：糖酵解 糖酵解第一阶段：葡萄糖的磷酸化 葡萄糖 3步 1,6,—二磷酸果糖 第二阶段：糖的裂解过程 1,6,—二磷酸果糖 2步两分子的磷酸丙糖 第三阶段：产能阶段 两分子的3—磷酸甘油醛 5步两分子丙酮酸 总反应式 G+2NAD+2ADP+2Pi 2丙酮酸+2NADH+2H +2ATP +2H2O 特点：1、整个过程无氧参加； 2、三个关键酶；（己糖激酶、磷酸果糖激酶、丙酮酸激酶） 3、从葡萄糖开始净生成2分子ATP， 4、一次脱氢，辅酶为NAD＋，生成NADH＋H＋。 第二阶段：丙酮酸的氧化脱羧—乙酰CoA的生成 总反应式： TPP，FAD， 硫辛酸，Mg2+ 丙酮酸脱氢酶系三种酶 E1-丙酮酸脱羧酶（也叫丙酮酸脱氢酶） E2-二氢硫辛酸乙酰基转移酶 E3-二氢硫辛酸脱氢酶。 六种辅助因子焦磷酸硫胺素（TPP)、硫辛酸、 COASH、FAD、NAD+、Mg2+ 第三阶段：三羧酸循环 总反应式： CH3COSCoA+3NAD++FAD+GDP+Pi+2H2O 2CO2+CoASH+3NADH+3H+ +FADH2+GTP 特点：1、需氧 2、不可逆：三个限速酶（柠檬酸合酶、异柠檬酸脱氢酶、α-酮戊二酸脱氢酶复合

体） 3、两次脱羧、四次脱氢（三次受体是NAD，一次是FAD）、一次底物水平磷酸化 4、共产生10molATP 三羧酸循环第一阶段：柠檬酸生成 1）缩合反应柠檬酸合酶 2）柠檬酸异构化为异柠檬酸顺乌头酸酶 第二阶段：氧化脱羧 3）异柠檬酸氧化生成α-酮戊二酸异柠檬酸脱氢酶，生成一分子还原型NADH 4）α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰CoA α-酮戊二酸脱氢酶复合体，生成一分子还原型NADH 5）琥珀酰CoA生成琥珀酸琥珀酰CoA合成酶，生成一分子CoASH 第三阶段：草酰乙酸再生 6）琥珀酸脱氢生成延胡索酸琥珀酸脱氢酶，生成一分子FADH2 7）延胡索酸加水生成苹果酸延胡索酸酶， 8）草酰乙酸的再生苹果酸脱氢酶，生成一分子还原型NADH 3、简述三羧酸循环过程及其调节。 4、详细列表计算1分子葡萄糖经过有氧氧化净生成多少A TP? 其中底物水平磷酸化和氧化磷酸化各 生成多少？P243 5、简述磷酸戊糖途径的反应过程、调节及其生理意义。 6、简述糖原的合成与分解及其调节。 糖原合成：葡萄糖、半乳糖和果糖等在体内相应酶的作用下合成糖原的过程。 合成部位：组织定位：主要在肝脏、肌肉 细胞定位：胞液 途径： 1.葡萄糖磷酸化生成6-磷酸葡萄糖 ATP ADP 葡萄糖己糖激酶; 6-磷酸葡萄糖 葡萄糖激酶（肝） 2.6-磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖变位酶 1-磷酸葡萄糖 3.1- 磷酸葡萄糖转变成尿苷二磷酸葡萄糖 4. α-1,4-糖苷键式结合 糖原n + UDPG 糖原合酶糖原n+1 + UDP 5.糖原分枝的形成（分支酶）

大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)酶联免疫分析试剂盒使用说明书使用目的： 本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)水平。用纯化的大鼠葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)，再与HRP 标记的葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)抗体结合，形成抗体-抗 原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝 色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)呈 正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠葡 萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)浓度。 试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶 2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（400U/L）0.5ml×1 瓶 3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶 4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份 5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张 6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进 行稀 释。 200U/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液 100U/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液 50U/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液 25U/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液 12.5U/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl， 然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此 重复5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。 9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显