岛津LC-20AT型高效液相色谱仪的图文操作手册

岛津LC-20AT型高效液相色谱仪

的图文操作手册

一、岛津LC-20AT型高效液相色谱仪：

岛津LC-20AT型高效液相色谱仪

二、功能和用途：

1、功能：本仪器采用高压梯度通过高压输液泵分别独立精确控制流量、调整

溶剂浓度比例，实现高效率、高精度混合；即配备了可提供全波长三维信息的二极管阵列检测器，全新的光路设计与有效的梯形狭缝池设计保证了高分辨率和高灵敏度；也配备了灵敏度更高、选择性更好的荧光检测器；

还配备了具有高灵敏度、检测范围更广的蒸发光检测器。

2、用途：本仪器可以高效地分离分析高沸点、热不稳定的有机及生化试样；

二极管阵列检测器对大部分有机化合物有响应；荧光检测器可以检测产生荧光的物质，对如多环芳烃、维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；蒸发光散射检测器对碳氢化合物、表面活性剂、聚合物、脂肪酸和氨基酸、油和挥发性低于流动相的任何样品、不含发色团的化合物有响应。

三、操作步骤：

1、色谱柱的安装

本仪器配备了SPD-M20A二极管阵列检测器、RF-10AXL荧光检测器和Varian380-LC蒸发光散射检测器。样品分析前首先要确定用什么检测器，然后把色谱柱连接到所需的检测器上。

2、开机

a、首先打开UPS，然后依次打开DGU-20A3真空脱气机、LC-20AT溶液

传输单元（泵）、CBM-20A系统控制器、所选用的检测器、自动进样器

SIL-20A，CTO-20A柱温箱电源打开。（HPLC组件的电源开关大都在仪

器的右下角）

b、将两个泵上部中间的黑色旋钮逆时针旋转90~180度，按purge键进行自

动脱气，一般设置为3分钟；然后按自动进样器软键盘的purge键，对

自动进样器上的样品进行脱气，一般为25分钟。

c、双击Lc solution图标。输入用户名Admin，点击OK。单击系统配置的

图标，出现系统配置的对话框。单击自动配置，仪器自动将能找到的仪

器配置，也可以用图示中的蓝色和红色箭头分别添加和去掉配置的仪

器。需要注意的是，仪器优先选择自动进样器，如果需要手动进样，需

将自动进样器去掉。单击仪器（通讯设置），选择正确的仪器类型，然后单击自动获取IP地址。

单击系统控制器，出现系统控制器的对话框，继电器的四个选项需要设置为start。

d 、单击仪器开关按钮，将软件与仪器连接

e、仪器参数视图里面，简单设置里面，模式选择二元高压梯度，设置总流

速，泵B浓度，时间，柱温箱温度，时间程序。然后选择下载，跑基线。

单击绘图，可以看查看基线。

3、方法编辑

a、下图中看到仪器参数视图，选择高级，然后依次改变其中的参数。如果

仪器为PDA检测器时，则按以下进行设置。

数据采集：LC停止时间为0.01。采集时间打勾，结束时间为分析样品

的时间。

LC时间程序：如果等度洗脱，则设置如图中0.01 controller stop。进行

梯度洗脱时需要如图所示进行设置。单击绘制曲线，可查看梯度曲线。泵：模式选择二元高压梯度，设置泵B的浓度。最大压力根据色谱柱的最大压力进行设置。

PDA：一般同时选择D2和W等，然后输入开始和结束时的波长。

柱温箱：设置柱温箱的温度。

控制器：将四个时间全部打勾。

自动进样器：不需要重新设置。

自动排气：不需要重新设置。

方法设置完后，选择文件，另存为方法文件。

当仪器稳定，基线稳定后，可以下载方法，进行样品的分析。

b、如果选择荧光检测器，首先需要色谱柱接荧光检测器，打开荧光检测器

的电源，系统配置自动配置荧光检测器。仪器参数设置部分检测器需要

输入激发光和发射光的波长。其他同PDA检测器。

c、4、如果选择蒸发光检测器，将色谱柱连接蒸发光散射检测器。打开

Varian-380电源开关，打开Varian ELSD Control软件

方法编辑器

单击Method，出来一对话框，Use my own instrument sett，则可以改变参数，设置新的方法。也可以不打勾，直接选择已经设置好的方法。

仪器开启时即处于STANDBY模式，加热块关闭，雾化气流速设定为较低的1.2SLM。

Standby模式下用户可设定仪器参数（雾化气流速，雾化温度，蒸发温度），然后将模式切换至RUN。

Run模式是正常工作模式，仪器处于完全设定控制状态。在加热或降冷却程中，仪器会显示“NOT READY”，表明仪器未达设定条件。当仪器平衡完毕，会显示“READY”。

方法使用

打开机器后，选择合适的方法。

将工作模式设定为RUN，使仪器加热平衡。

打开LC solution 软件，自动配置选择AD2，即选择了蒸发光检测器。其它设置同PDA检测器。

仪器平衡后检察基线。在洗脱液未接入时噪音应低于0.2mv，这表明雾化气洁净干燥。基线毛刺一般是由雾化气中的粒子或水分造成的。

引入洗脱液并待其平衡15min。

再次检查基线，应不超过1mv，如是为纯水应不超过0.25mv，纯有机溶剂也应不超过1mv。缓冲体系和稳定剂可显著增加噪音。

然后进行样品分析。

4、运行

a、单次运行

单击单次运行，出现对话框，选择已经编辑的方法，输入文件名，输入

样品瓶，样品架和样品的体积，单击确定可以进行样品的分析。点击辅

助栏停止或者停止的快捷键，可以将分析停止。

b、批处理运行

单击批处理，打开二级菜单，单击向导，可以新建，也可以附加一个批处理文件。

选择方法文件，输入开始样品瓶，样品架，进样体积。下一步。

输入样品组数，选择标准品和未知。下一步。

输入标准品名字，ID，校准级别，数据文件名。下一步。

输入未知品名字，ID，数据文件名。下一步。

下一步，完成。出现批处理文件。

另存批处理文件。

单击批处理开始，开始分析样品。

5、关机

样品分析完毕，按照色谱柱的冲洗要求进行冲洗。冲洗完后，仪器参数视图，将总流速设为0，下载。然后单击仪器开关，关闭软件，最后将电源关掉，关闭UPS。

6、积分

单击再解析，打开已经完成的数据，会看到数据、方法、报告格式、批处理、全部文件形式。

点击分析图标，选择多色谱，提取所要波长下的峰。

在积分页面，选择通道，半峰宽，斜率，最小峰面积，一般选择面积选项。识别页面，利用时间窗或时间带限制峰。

也可以选择积分页面的程序，进行手动积分。如果不了解方法，可以单击帮助。

点击确定，分析完成。

结果在视图，峰表内查看。

7、标准曲线

a、外标法定量

单击向导，打开化合物表向导窗口，选择通道，半峰宽，斜率，最小峰面积，一般选择面积选项，下一步。

选择要标定的峰，下一步。

选择外标法。计算面积。输入校准级别，曲线拟合类型，一般选择线性。

零点，一个校准级别，选择强制通过，其它选择未强制。加权方法无。

输入浓度，下一步。

识别，选择时间窗或者时间带。一般来说保留时间小的用时间窗。下一步。

定义峰的名字和标样的浓度。完成。

保存方法。

单击校准，双击已经建立的方法。然后将标样图谱拖动到左下角数据文件的级别中，有几个级别，则相应的拖到相应的级别中。

则自动生成标准曲线。

另存为方法。