FDA分析方法进展及动态

?综述?

FDA生物分析方法确证的发展与动态

夏媛媛1，2，司端运1 *，刘昌孝1

1天津药代动力学与药效动力学省部共建国家重点实验室，天津 300193

2天津大学化工学院 制药工程专业，天津 300072

摘 要 美国制药学会（AAPS）联合美国食品药品监督管理局（FDA）分别于1990年、2000年以及2006年召开了3届生物分析方法研讨班，在前两届研讨班的基础上，FDA于2001年出台了一份正式的生物分析方法指导原则。回顾和阐述生物分析方法在近20年取得的发展和进步，为生物分析方法具体应用到动物或人体的生物利用度、生物等效性以及药代动力学研究提供指导和建议。

关键词 生物分析；生物等效性；LC-MS/MS；配体结合；确证

中图分类号：R917 R969.1 文献标志码：A 文章编号：1674–6376（2009）02–0123–07

Progress and developments for FDA bioanalytical method validation

XIA Yuan-yuan 1,2, SI Duan-yun 1 *, LIU Chang-xiao 1

1Tianjin State Key Laboratory of Pharmacokinetics and Pharmacodynamics, Tianjin Institute of Pharmaceutical Research, Tianjin 300193, China

2Department of Pharmaceutical Engineering, School of Chemical Engineering and Technology, Tianjin University, Tianjin 300072, China

Abstract The First, Second and Third AAPS/FDA Bioanalytical Workshop were held in 1990, 2000, and 2006, respectively. In the meantime, FDA issued a formal guideline of bioanalytical method validation in 2001.The purpose of this paper is to represent the progress and developments in analytical methodologies over the last 2 decades. The paper is also intended to provide guiding principles for validation of bioanalytical methods employed in support of bioavailability, bioequivalence, and pharmacokinetic studies in man and in animals.

Key words Bioanalytical; bioequivalence; LC-MS/MS; ligand binding; validation.

生物分析方法确证广泛应用于药物及其代谢产物的定量分析中，在生物利用度，生物等效性，药代动力学和毒代动力学的评价和阐述等方面起了重要作用。与之相关的生物分析数据直接影响着这些研究的质量和水平。因此，建立生物分析方法指导原则，并将其推广到制药行业中去的重要性显而易见。本文主要针对FDA生物分析方法的发展以及最新动态做详细介绍。

1 FDA生物分析方法发展历程

1.1 第1届生物分析方法研讨班

第1届AAPS/FDA生物分析方法研讨班于1990年12月3～5日在美国阿林顿郡水晶城（Arlington,Crystal City,VA）举办，这次研讨班以及报告[1]的主题集中在以下几个方面：1）生物分析方法确证的要求；2）建立可靠的生物分析方法的过程；3）评价方法能否被接受的参数；4）方法的建立；5）方法的应用。这次研讨班规定了生物分析方法确证的必要参数——精密度、准确度、选择性、灵敏度、重现性、定量限和稳定性，并且规定了如何评价和计算这些参数。这次研讨班还规定了标准曲线、回收率和重复进样分析。回收率不要求一定是100％，但要求是可重现的。这次研讨班明确的定义了生物分析方法应包括两个部分：1）分析方法的建立（研究前确证），是指建立适宜的生物分析方法以及计算相关参数；2）分析方法的应用，是指已建立的方法应用于生物利

收稿日期：2009-04-07

*

通讯作者 司端运，研究员。E-mail：ddysi@https://www.sodocs.net/doc/0f15840153.html,

用度、生物等效性以及药代动力学研究样品的测定。

1.2 FDA生物分析方法确证指导原则草稿[2]

第一届生物分析研讨班的召开在全球制药界引起了很大反响。随后，制药界又陆续举办了一些国内和国际的会议来讨论第一届研讨班的报告。但是，这个报告并不是FDA的官方文件，而一个统一规范的生物分析方法指导原则为提高生物分析方法水平，为向FDA提交药代动力学、生物利用度以及生物等效性研究等申报材料将产生深远影响。因此，FDA决定建立一个指导原则草稿，并于1999年1月出版。这份指导原则草稿的内容来源于第一届研讨班报告和这次研讨班开展以来获得的经验。出版这份草稿的目的是广泛获取制药界的评论和意见，以最终完成正式的生物分析方法指导原则。

1.3 第2届生物分析方法研讨班

第二届AAPS/FDA研讨班于FDA颁布指导原则草稿的1年后，即2000年1月举办。这次研讨班的召开也正是第一届生物分析方法研讨班结束后的第十年，因此，为制药行业的科学家提供了发表见解分享经验的平台。此次会议的报告[3]是对第一届研讨班报告以及这次会议讨论内容的总结。此外，这次研讨班还为制药界的科学家深入讨论指导原则草稿提供了机会，为制药工业界实现一致的、有效的、科学的分析方法确证原则产生了巨大的推动作用。

1.4 FDA生物分析方法确证指导原则[4]

生物分析方法确证要求证明一个适用于一种待测物（或一系列待测物）在特定的生物介质中进行浓度定量测定的生物分析方法是可靠的，并适用于其他应用研究。最广泛应用的生物分析技术包括传统的色谱方法〔气相色谱（GC）和高效液相色谱（HPLC）〕，基于质谱的方法〔气质联用（GC-MS）和液质联用（LC-MS）〕，以及基于配体结合的方法〔放射性免疫测定（RIA）和酶联免疫吸附测定（酶标法，ELISA）〕。许多关于定量生物分析方法确证的原则、规程和要求都适用于各种类型的分析方法。

FDA于2001年颁布了关于生物分析方法确证的指导原则，Guidance for Industry-Bioanalytical Method Validation。该指导原则有助于药物开发者在新药的研究申请（INDs）、新药的申请（NDAs）、加快新药申请程序（ANDAs）等领域进行研究；对人体在临床药理学、生物利用度（BA）、生物等效性（BE）等研究领域中进行药物动力学参数（PK）评估时，

该指导原则可作为建立生物分析方法确证信息的补充；也可用于非人类药理学、毒理学和临床前研究的生物分析方法确证。

该指导原则适用于对生物样品（如全血、血清、血浆或者尿液）中的药物及代谢物进行定量测定的生物分析方法，例如气相色谱（GC）、高效液相色谱（HPLC），以及气-质和液-质联用技术如LC-MS、LC-MS-MS、GC-MS和GC-MS-MS。

1.5 第3届生物分析方法研讨班

随着生物分析技术的不断更新，人们也不断扩充着相关方面的宝贵经验，而许多生物分析机构也在不断的检验现有指导原则的应用范围和适用性。第三届AAPS/FDA生物分析研讨班于2006年5月召开，这次会议的目的是鉴定、回顾以及评价现有规定、白皮书和相关条款，以使得FDA指导原则更加清晰明确。这次研讨班从色谱方法和配体结合两个方面讨论生物分析定量方法和样品分析中的应用。这次会议的报告[5]中引入了一些全新的概念，比如“真正样品再分析”（Incurred Sample Reanalysis，ISR）、“代谢物定量分析”，并对基质效应，标准曲线以及质控样品（QC）、残留以及记忆效应有了更加全面科学的定义和解释。

2 校正曲线和QC浓度范围

QC样品在整个分析过程中起到监测方法学表现的作用。它们是证明分析方法能否达到要求的准确度、精密度和灵敏度来进行体内样品浓度测定的基础。对于包括药代动力学这样的研究，其样品浓度范围横跨整个曲线，根据FDA2001版指导原则[4]，QC样品应选取高、中、低三个浓度点，覆盖整个标准曲线的范围，每个浓度点双样本（或至少占未知样品数的5％），才可以达到监测方法表现的作用。对于某些研究，其样品浓度范围只对应在标准曲线的一小部分，就会出现QC样品浓度不靠近任何未知样品浓度的情况，从而限制了QC样品的监测作用。

如果在样品分析开始之前预先考虑到未知样品的浓度范围比较窄，可以将标准曲线的浓度范围缩小并且选择新的浓度点作为QC样品，或者仍旧使用原来的标准曲线，并改变已有QC样品的浓度或者根据待测样品的浓度增加相应浓度的QC样品。在以上提及的两种情况里，缩小标准曲线范围以及增加新的QC样品只需要进行部分确证来确保新的标准曲线和QC样品符合要求，而不必进行完全确证。

如果没有预先考虑到未知样品的浓度范围狭

窄，而是在正式分析之后才发现这样的情况，建议停止现有的分析过程，在继续进行样品分析之前，缩小标准曲线范围并改变现有QC样品的浓度，或者在原有标准曲线之上添加新的QC样品。对于那些已经分析过的样品，在改进标准曲线或QC浓度以后，则没有必要进行重复分析。

3 记忆效应和残留评价

由基质和溶剂带来的残留、记忆效应或者空白效应将会影响所有浓度样品在定量分析中的准确度和精密度，低浓度点的样品尤其易受影响。因此，应着重考虑将外界污染造成的干扰降到最低，使其不影响方法的准确度和精密度。

记忆效应可能不会影响到样品序列中的下一个样品。事实上，由色谱柱上洗脱残留物引起的记忆效应可能会影响到之后的几个样品的色谱响应。进样/转换阀中的残留物引起的记忆效应通常会出现在后来的样品当中。在样品采集和处理过程中应尽量避免污染。在方法学确证中，在高浓度样品或者标样进样后，通过分析一个或几个空白样品来确定记忆效应的大小。使用合适的溶剂冲洗进样器来减小记忆效应（残留）。如果对于一个高度保留的化合物来说，记忆效应不可避免，则应当在方法中采取特殊的步骤处理已知的记忆效应。这些步骤可以是在特定样品后进空白样品。要避免样品排放的随机性，因为这样会干扰对记忆效应的正确估计。可以通过在高浓度样品或标样之后监测空白样品的响应来确定残留是否存在。在确定残留来源时，应将方法创建的平台（手动或自动），采样的布局以及提取方法（手动、自动、在线或者固相萃取等等）考虑进去。在进行一个生物分析实验时，没有一个标准的可接受的度量来评价记忆效应的大小。在方法学确证中要做到记忆效应是有源可寻的，并且尽量降到最低，在分析批的评估中应给出客观的分析测定。

在方法学确证过程中，操作者在排除或降低其他污染时应弄清来自空白基质中的待测物响应。定量下限（LLOQ）的待测物响应至少是空白基质响应的5倍。对于免疫测定分析，如果基质的内源性物质中存在待测物，那么空白基质的响应可以超过定量下限的20％，但是不能影响定量下限测定的准确度。若存在以上这些情况，应在方法中采取特殊步骤控制空白基质的响应。

4 基于质谱方法的基质效应

基质效应是影响基于质谱的生物分析方法的因

素之一。基质效应是指在生物样品中由于基质因素的存在引起的离子增强或离子抑制。而基质效应的定量检测则为基于质谱的生物分析方法确证提供了有用信息。基质效应的定量检测可以用基质因子（Matrix Factor，MF）来表示，它定义为当基质离子存在时待测物峰响应值与基质离子不存在时待测物峰响应值的比值。

基质因子（MF）=基质粒子存在时的峰响应/基质离子不存在时的峰响应

基质因子等于1表明基质效应不存在；基质因子小于1表明存在离子抑制；基质因子大于1表明可能存在离子增强，也可能是因为分析过程中由于基质不存在所造成的待测物损失。使用内标定义的MF是指待测物MF与内标MF的比值。内标定义的MF 也可以通过在上面的MF公式里用峰响应比值（待测物/内标）代替峰响应来获得。稳定同位素标记的内标化合物可以最有效的将基质效应的影响降到很低，因为由稳定同位素标记的内标化合物所导致的基质效应与其所匹配的待测物的基质效应大体上是相似的。稳定同位素标记的内标化合物是目前最有效的方法，应尽量使用。

一个可靠的生物分析方法并不要求绝对MF（或者内标定义的MF）接近1。但是，如果单个受试者的MF之间差异大则会造成分析重现性较低。为了检验来自单个受试者的样品MF差异，需测定来自6个受试者基质的MF（或内标定义的MF）。MF的差异性由相对标准偏差（RSD）来衡量，RSD％应该小于15％。如果基质稀少并很难获得，那么可以不必对6种基质的MF进行评估。

稳定同位素标记内标有助于使MF达到理论值1，因此有效的减小了内标定义的MF的差异性。当使用了稳定同位素标记的内标，则不必测量6种不同基质的内标定义的MF。

5 真正样品再分析（Incurred Sample Reanalysis，ISR）

Incurred Sample是指真正的样品，即动物或人在给药后（口服、静脉等）获得的血样等生物样品。与Incurred Sample相对，标准曲线样品以及QC样品是文献中常提到的Spiked Sample。有很多情况表明，标样和QC样品的表现和来自给药后受试者的研究样品（Incurred sample）不同。造成这种情况的主要原因有代谢物在体内转化成母药、不同病人样品的蛋白结合差异、回收率、样品不均匀以

及质谱的基质效应等等。以上这些因素都会影响测量Incurred samples浓度时的重现性和准确度。通常在方法建立时使用QC样品就可以监测以上这些因素并减小它们的影响，当方法应用于测定Incurred samples时确保这些影响在控制之下是十分重要的。

FDA在2005年的一项调查显示，只有少数（约8％）的实验室对Incurred sample进行重复分析。最主要的问题是缺乏统一的指导原则来进行规范。一些企业以及研究机构考虑到时间和金钱的消耗，就会质疑ISR是否值得去做，并且是否真能检测到差异。一些人认为ISR值得一做，至少可以获得一些数据支持他们的想法。加拿大新药申请中曾经要求进行ISR，但是于2003年取消，原因竟然是“我们不知道如何处理这些数据”。

第三届AAPS/FDA生物分析研讨班的会议报告[5]中提到药物的临床前和临床研究都必须进行真正样品再分析。虽然这次会议为ISR的进行提供了一个总体框架和一个基本原理，但是并没有为如何具体的实施ISR以及ISR的可接受标准的提供更进一步的细节。因此，FDA于2008年专门召开了一次研讨班来讨论ISR，并于2009年发表了这次会议的白皮书[6]。在这篇会议报告发表之前，制药界已经提出了很多关于如何进行ISR的方法[7-10]，比如Mario L. Rocci, Jr.等[8]在文章中提到进行ISR分析应保证以下4个方面：

* 选择什么类型的研究进行ISR分析

* 选择什么类型的样品以及多少样品才能确保方法是可重现的

* 数据应采取什么方式处理才能达到确证的结论 * 一旦分析完成，数据进行了处理之后，下一步应该怎么做

但是直到这次研讨班的召开，还没有就这个问题达成一致的见解。这篇白皮书旨在为会议中出现的介绍做一个总结，讨论相关的具体细节，并提供一个有效的ISR规程。

5.1 ISR基本规范

ISR做为方法学确证的一部分，能为临床前和临床样品分析的可靠性和重现性提供额外的数据支持。如果ISR分析失败，则必须展开一项仔细的完整的调查。应对方法周边情况的调查以及原始结果正确性的纠正和介绍的结论进行记录保存。一个失败的ISR分析不会立即说明整个研究的结果无效，但是会要求立即停止生物分析部分的研究，在展开新的研究之前，应将相关调查完成，记录保存，安排好接下来的实验任务。

5.2 总体原则

如果一项研究的目的是测定药代动力学相关参数，那么ISR的评价应设置在研究的生物分析部分。总的来说，血浆和血清样品都要进行ISR分析。因为考虑到药物安全性评价的严格性，生物分析工作者应为测量药物浓度的方法提供尽可能多的置信度。

ISR试验结果应包含在研究报告里。这将有助于机构在评审所提交的文档时确保ISR是已完成的，其结果是可信的。ISR试验可以作为分析方法确证的一部分，尤其是针对于临床前研究，因为动物的种群通常认为是一致的，饮食和饲养条件相对保持恒定，但是ISR并不要求作为分析方法确证的一部分。如果ISR试验包括在分析方法确证里，那么对每个应用到这个确证方法的研究，它的生物分析报告里应提及ISR试验的结果。

标准操作规程（SOP）或者研究计划对于一个操作规范的ISR试验是十分重要的。SOP或者计划应包括以下细节：进行ISR试验的方法，原始数据和重复分析数据的计算差异，使用什么可接受标准，一个失败的ISR试验的调查应如何进行、记录、报告、存档，试验的结果应如何报告和存档。

5.3 ISR试验时间安排和样品范围

临床前和临床试验都应尽早的进行ISR试验，来告知生物分析人员可能的重现性问题。但是考虑到实验室的效率以及操作等因素，因此ISR试验可能会安排到一些小型研究的末尾来进行（比如短期毒代动力学研究）。

对于临床前研究，每个化合物的ISR试验应采用来自亚慢性毒理试验的样品。如果ISR试验样品来自于一个早期的非GLP研究，生物分析工作人员应保证这个研究与首次规范研究的相关性。普遍认为动物在遗传学、饮食以及饲养等方面是更具有一致性的，因此，对每个种属，每个方法以及实验室只需做一次ISR试验。

对于临床研究，ISR试验应在所有的生物等效性研究中进行。生物分析工作者应该根据研究的基础来判断是否要在如下的几种条件下进行ISR试验：健康的志愿者，罕见的病人群体，测试小分子药物之间的相互作用，或者评价疾病状态在病人群

体中的改变。

5.4 ISR样品的选择

ISR试验的样品应该是单独的样品而非合并的样品。合并的样品可能会应用到测定ISR样品的稳定性，单独的样品涵盖了所提供的试验条件下各个方面的可能性，这一点将有助于评价方法的重现性。从一个样品较多的研究里选择较少的样品同样可以提高找到不规则样品的可能性。在血药浓度—时间曲线里选择样品时，应包括达峰时间附近的样品以及消除相和曲线终点的样品。

如果原始结果的数据处理方法是采用单一样品的结果，那么ISR试验应当采用同样的方法。如果原始结果来自多个样品的平均值（配体结合方法），那么ISR的试验结果也要计算样品的平均值。

样本量的大小要求非常严格，样品的数量应代表整个研究的完整性和方法学的表现。为了减少混乱，建立一个简单明了的ISR试验方案，推荐采用总样品数目的固定百分比来确定样品的数目大小。比如样品数目等于总的样品数目的5％～10％，较大型研究的ISR样品数目不应小于总样品数目的5％。

5.5 ISR试验的可接受标准

当ISR试验通过了其可接受标准，可能会增加对整个方法确证的置信度，但是生物分析工作者必须清楚的认识到单独一个ISR试验不足以接受或否决任何研究的实验结果。ISR只是一个用来支持方法学表现的重要方面。在接受或否决实验结果之前，还需要考虑引入一个良好科学的评判机制应用到整个研究当中，还需要考虑很多其他因素才能得出结论说样品结果是可写入报告的。当调查正在进行的过程中，应停止相关的生物分析研究，除非不进行研究是“有风险的”。一个失败的ISR试验需要进行调查来确定该分析方法是否会影响到后面的研究。调查的结果必须予以存档，并且在决定接受或者放弃数据结果之前应当针对方法的可靠性得出结论。

对于小分子化合物（非配体结合），要求2/3的重复分析样品的差异小于20％，对于配体结合方法，要求2/3的重复分析样品的差异小于30％。两次数据的差异性（百分误差）应按照如下的公式计算。

差异性（％）=（重复进样数据－原始进样数据）/两次数据平均值×100％

6 药物研发中代谢物的检测

美国FDA药品评价与研究中心（CDER）于2005

年7月发布了一份FDA指导原则草稿[11]，名为“药物代谢物的安全测试”。制药界都普遍支持这样一种观点：越广泛的研究人体特异或普遍存在的代谢物（unique and/or major human metabolites，UMMs）的药代动力学，越能深入的洞察代谢物及其毒理学观察之间的联系。在药物研发过程中，通过多次使用不同的生物分析方法，可以获取这些信息。

UMMs的表征需要采用一个灵活的层列式的方法来达到生物分析方法确证。这个层列式方法允许使用在代谢物的筛选研究中，即在早期药物研发过程中使用有限的确证，随着产品进入临床试验阶段，确证的标准也随之提高。当药物研发有很大可能性取得成功时，一个针对于代谢物测定的层列式确证方法应顺应药物研发的时间表来合理安排生物分析资源的分配。

CDER于2008年2月发布了正式的“药物代谢物的安全测试”指导原则[12]。这份指导原则为工业界就何时并且如何鉴定那些在临床前毒理试验需要进行评估的药物代谢物提供了建议。药物代谢物需要在临床前研究进行安全性评价，是因为这些代谢物可能只存在人体内，或者人体内代谢物的浓度比任何经过标准的临床前毒理试验的动物体内的浓度高。

药物代谢物的安全测试可以用图1来简要概括。这项测试命名为“不成比例的药物代谢物分析”。当药物的一个代谢物在体内的AUC小于母药在体内AUC的10％时，FDA认为不需要对这个代谢物做进一步的毒理试验。如果该代谢物的AUC大于母药AUC 的10％，那么应该了解在动物实验中是否出现过类似的情况。如果没有，也就是表明母药在动物体内没有形成这种代谢物，那么需要对该代谢物做临床前毒理试验。如果动物体内有这种代谢物，则需要了解该代谢物在动物以及人体内的AUC是否相符，如果相符，则不需要进行代谢物的毒理试验，如果不相符，则需要针对该代谢物做进一步的临床前毒理试验。

7 结语

第三届AAPS/FDA生物分析研讨班澄清了有关QC样品的安排、基质效应的确定、记忆效应和残留等问题，虽然没有就Incurred Sample的重现性问题达成一致性的指导意见，但是却为制药界以及相关研究机构提供了一个探索前进的方向。经过各方的努力，最终发表了关于ISR分析的白皮书，该白

皮书就ISR 的基本规范、总体原则、时间安排和样品范围、样品选择以及可接受标准等问题做了详尽的说明。ISR 的引入表明生物分析机构以及制药企业在进行药代动力学、生物利用度、生物等效性等研究的过程中将面临更多的挑战，但是一个成功的ISR 试验会大大提高生物分析方法的可靠性，因此，也同样确保了这些研究结果是真实可信的。另外，FDA 还于2008年出台了关于药物代谢物的安全测试指导原则，该指导原则对代谢物的定量分析、代谢物的毒理试验等提出了更多要求。

图1 药物研发阶段药物代谢物分析流程图

Fig.1 Workflow for determination of metabolites during drug development

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荧光光度分析法测定维生素B2的含量

荧光光度分析法测定维生素B 2的含量 引言 荧光分光光度法简介 有些物质，当用紫外光照射时，它吸收某种波长之后还会发射出各种颜色和强度不同的光；而当紫外光停止照射后，这种光线也随之消失，这种光线称为荧光。荧光的波长比吸收的紫外光波长要长。 由于物质分子结构不同，所吸收的紫外光波长和发射的荧光波长也有所不同。利用物质的这个特性，可以对物质进行定性分析。同一种分子结构的物质，用同一种波长的紫外光照射，可发射相同波长的荧光；若该物质的浓度不同，所发射的荧光强度也不同，利用这个性质可以对物质进行定量分析。这种定量方法称为荧光分析法，简称荧光法。测量荧光的仪器有滤光片荧光计，滤光片—单色器荧光计和荧光分光光度计。荧光法的选择性好，灵敏度比紫外-可见分光光度法高2~3数量级，检出限低，可以达到10~12g ／m1，线性范围宽。现在主要应用的是荧光分光光度计。 【实验目的】 1. 学习荧光光度法测定维生素B 2的含量的基本原理和方法。 2. 熟悉荧光光度计的结构及使用方法。 【实验原理】 在经过紫外光或波长较短的可见光照射后，一些物质会发射出比入射光波长更长的荧光。在稀溶液中，荧光强度IF 与物质的浓度c 有以下关系： bc I 303.2I 0F εφ= 当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系： Kc I F = 这种以测量荧光的强度和波长为基础的分析方法叫做荧光光度分析法。荧光强度与激发光强度成正比，提高激发光强度，可成倍提高荧光强度。同时，提高仪器灵敏度，可提高荧光光度法的灵敏度。而吸收光度法，无论是提高激发光强度还是提高仪器灵敏度，入射光和出射光同时增大，其灵敏度不变。因此，荧光光度法比吸收光度法灵敏度高。

荧光光度分析法及药物分析

荧光光度分析法与药物分析 化材院化工3班姚依弟10081224 前言 当紫外光照射到某些物质的时候，这些物质会发射出各种颜色和不同强度的光，而当紫外光停止照射时，这种光线也随之很快地消失，这种光线称为荧光。利用这种能够反映物质特性的荧光对该物质进行定性和定量分析的方法称为荧光分析法。 荧光是分子从激发态的最低振动能级回到它原来的基态时发射的光，激发的完成是由于光的吸收。吸收与荧光密切相关，因为吸收必须先于荧光发射。由于碰撞和热的耗散常使一部分吸收能丧失，剩余荧光的能量比吸收的能量小，因此荧光在更长的波长发射。 【一】荧光分光光度法的分析方法 荧光分析的灵敏度一般都高过应用最广泛的比色法和分光光度法。比色法及分光光度法的灵敏度通常在千万分之几；而荧光分析法的灵敏度常达亿分之几，甚至有千亿分之几的。荧光分析法的另一优点是选择性高。荧光分析法还有方法快捷，重现性好，取样容易，试样需要少等优点。荧光分析法也有它的不足之处，主要是指它比起其它方法来说应用X围还不够广泛，因为有许多物质本身不会产生荧光。 为使荧光分析法的应用更加广泛，发展了各类荧光分析方法，如

对不发荧光的物质可通过某类化学反应使其转变为适合测定的荧光物质，对荧光较弱的物质可采取荧光增敏分析法。荧光分析法可分为直接荧光测定法和间接荧光测定法。直接测定法是利用物质自身发射的荧光进行定量测定。但是自身发荧光的药物寥寥无几，所以一般采用间接法测定。 1、直接荧光分析法 直接荧光分析法适用于自身能产生荧光的药物。因荧光性质与溶液的EF值有关，故荧光强度的测定需在适宜的EF缓冲溶液中进行。对于成分复杂的生物供试品，为了防止干扰，有时需利用萃取、沉淀、色谱分离等方法除去干扰物，以降低荧光空白本底，提高分析灵敏度。已用于直接荧光分析法的药物有盐酸洛哌丁胺、双水杨酯、左旋溶肉瘤素、叶酸等。 本身能发荧光的物质,可用荧光分光光度法直接测定。鲍霞认为可用荧光分光光度法直接测定氧氟沙星胶囊的含量。取氧氟沙星胶囊药粉用醋酸-醋酸钠缓冲溶液配溶液,2h后,室温,用试剂作空白,在RF-5301 型荧光分光光度(日本岛津) 上,以427nm 为激发长,500nm 为发射波长测定荧光强度,计算其标示量的百分含量。本法操作简单,快捷,灵敏度高,结果满意。 2、间接荧光分析法 本身荧光很弱的物质,常采用氧化还原反应、配位反应等化学反应将其变为能发荧光的物质,用荧光分光光度法间接测定。

美国FDA分析方法验证指南中英文对照

I. INTRODUCTION This guidance provides recommendations to applicants on submitting analytical procedures, validation data, and samples to support the documentation of the identity, strength, quality, purity, and potency of drug substances and drug products. 1. 绪论 本指南旨在为申请者提供建议，以帮助其提交分析方法，方法验证资料和样品用于支持原料药和制剂的认定，剂量，质量，纯度和效力方面的文件。 This guidance is intended to assist applicants in assembling information, submitting samples, and presenting data to support analytical methodologies. The recommendations apply to drug substances and drug products covered in new drug applications (NDAs), abbreviated new drug applications (ANDAs), biologics license applications (BLAs), product license applications (PLAs), and supplements to these applications. 本指南旨在帮助申请者收集资料，递交样品并资料以支持分析方法。这些建议适用于NDA，ANDA，BLA，PLA及其它们的补充中所涉及的原料药和制剂。 The principles also apply to drug substances and drug products covered in Type II drug master files (DMFs). If a different approach is chosen, the applicant is encouraged to discuss the matter in advance with the center with product jurisdiction to prevent the expenditure of resources on preparing a submission that may later be determined to be unacceptable. 这些原则同样适用于二类DMF所涉及的原料药和制剂。如果使用了其它方法，鼓励申请者事先和FDA药品评审中心的官员进行讨论，以免出现这种情况，那就是花了人力物力所准备起来的递交资料后来发现是不可用的。 The principles of methods validation described in this guidance apply to all types of analytical procedures. However, the specific recommendations in this guidance may not be applicable to certain unique analytical procedures for products such as biological, biotechnological, botanical, or radiopharmaceutical drugs. 本指南中所述的分析方法验证的原则适用于各种类型的分析方法。但是，本指南中特定的建议可能不适用于有些产品所用的特殊分析方法，如生物药，生物技术药，植物药或放射性药物等。 For example, many bioassays are based on animal challenge models, 39 immunogenicity assessments, or other immunoassays that have unique features that should be considered when submitting analytical procedure and methods validation information. 比如说，许多生物分析是建立在动物挑战模式，免疫原性评估或其它有着独特特性的免疫分析基础上的，在递交分析方法和分析方法验证资料时需考虑这些独特的性质。Furthermore, specific recommendations for biological and immunochemical tests that may be necessary for characterization and quality control of many drug substances and drug products are beyond the scope of this guidance document. 而且，许多原料药和制剂的界定和质量控制所需的生物和免疫化学检测并不在本指南的范围之内。 Although this guidance does not specifically address the submission of analytical procedures and validation data for raw materials, intermediates, excipients, container closure components, and other materials used in the production of drug

荧光光谱法

荧光分析法测定维生素B2 一、实验目的 1.学习与掌握荧光光度分析法测定维生素B2的基本原理与方法; 2.熟悉荧光分光光度计的结构及使用方法; 3、学习掌握固体及液体试样的荧光测试方法。 二、实验原理 当用一种波长的光照射某种物质时,这种物质会在极短的时间内,发射出一种比照射光波长较长的光,这种发射出来的光就叫做荧光。当照射光停止照射时,荧光也随之很快地消失。利用某些物质被紫外光照射后所产生的、能够反映出该物质特性的荧光,以进行该物质的定性分析与定量分析,称为荧光分析。 实验证明,荧光通常发生于具有刚性平面的л-电子共轭体系分子中。随着л-电子共轭度与分子平面度的增大,荧光也就越容易产生。因此几乎所有对分析化学有用的荧光体系都含有一个以上的芳香基团,芳环数越多,荧光愈强。能发荧光的纯无机物很少,通常就是利用有机配位体与金属离子形成荧光络合物进行无机离子的分析。 图1.荧光分光光度计的结构原理图

荧光分光光度计工作原理(图1)可简述为:光源发出的光束经激发单色器色散,提取所需波长单色光照射于样品上,由样品发出的荧光经发射单色器色散后照射于检测器上,检测器把荧光强度信号转变为电信号并经放大器放大后,由信号显示系统显示或者记录。 荧光光谱包括激发光谱与发射光谱两种。激发光谱就是就是指发射单色器波长固定,而激发单色器进行波长扫描所得到的荧光强度随激发光波长变化的曲线。荧光发射光谱就是指激发单色器波长固定,发射单色器进行波长扫描所得到的荧光强度随发射光波长变化的曲线。一般所说的荧光光谱实际上仅指荧光发射光谱。这一光谱为分析指出了最佳的发射波长。 荧光定性定量分析与紫外可见吸收光谱法相似。定性时,就是将实验测得样品的荧光激发光谱与荧光发射光谱与标准荧光光谱图进行比较来鉴定样品成分,一般荧光定性的依据就是荧光光谱峰的个数、位置、相对强度及轮廓。 定量分析时,一般以激发光谱最大峰值波长为激发光波长,以荧光发射光谱最大峰值波长为发射波长,测量样品的荧光强度。对同一物质而言,荧光强度F 与该物质的浓度c 有以下的关系: F = 2、303Фf I0 a b c ⑴ Фf－荧光过程的量子效率; a－荧光分子的吸收系数; I0－入射光强度; b－试液的吸收光程。 在I0 与b 不变时,2、303Фf I0 a b为常数,则⑴式可以表示为 F＝Kc ⑵ ⑵即可作为荧光定量检测的依据。 图2 VB2的结构式

二氧化硅的测定(钼蓝光度法)

矿石中二氧化硅的测定 硅钼蓝光度法 方法提要 在0.1～0.3mol/LHCl介质中，硅酸要离子与钼酸铵生成黄色的硅钼酸配合物。当提高溶液的酸度为0.6～1mol/L时，加入钼蓝色显色剂，使成硅钼蓝进行测定。硅钼蓝的颜色至少可稳定8h。 溶液的酸度和温度对硅钼黄显色影响较大。酸度过高，显色不完全；酸度过低，显色速度减慢。温度以20～30℃为宜，5～10min即显色完全。 本法适用于含量0.05%～4%二氧化硅的测定。 仪器 分光光度计。 试剂 氢氧化钠。 盐酸。 乙醇。 钼酸铵溶液（100g/L）称取10g(NH4)2MoO4溶于80mL水，倾入盛有20mL3mol/LH2SO4的容器中。 钼蓝显色剂溶液称取20g草酸、15g硫酸亚铁铵，溶于1000mL3mol/LH2SO4中。 二氧化硅标准溶液ρ(SiO2)=100μg/mL 称取0.1000g优级纯二氧化硅，置于铂坩埚中，加入2.5～3g无水NaCO3,搅匀，于950～1000℃熔融20～30min，取出，用400mL水加热提取，冷却后移入1000mL容量瓶中，迅速用水稀释至刻度，摇匀。将溶液立即倒入干燥塑料瓶中备用。此溶液一个月内有效。 标准曲线 移取0.00mL、0.50mL、1.00mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00mL二氧化硅标准溶液（100μg/mL），置于100mL容量瓶中，加100mL乙醇，用水稀释至约30mL，加5mL（5+95）HCl、2.5mL（NH4）2MoO4溶液，加1滴0.004mol/LKMnO4溶液，放置10～20min(放置时间应根据室温而定。低于20℃时，放置20min；20～30℃时，放置5～10min；30℃以上放置时间不能超过5min)。加入20mL钼蓝显色剂溶液，立即摇匀，用水稀释至刻度，摇匀。5min后在分光光度计上，用试剂空白作参比，于波长600nm处测量吸光度。绘制校准曲线。 分析步骤 称取0.2000g试样，置于银坩埚中，加数滴乙醇润湿，加入约1.5g粒状NaOH，于650～700℃熔融10min，取出，冷却。放入塑料烧杯中，往坩埚内加入大半埚热水，溶解完后，倒入预先盛有15mL（1+1）HCl及40mL水的100mL容量瓶中，立即摇匀，用水及（5+95）HCl 洗净坩埚，用水稀释至刻度，摇匀。此溶液尚可备作铁、铝、钙、镁等组份的测定用。 移取上述制备溶液10.0mL（相当于20mg试样），置于100mL容量瓶中，用水稀释至30mL。以下步骤同校准曲线。 注意事项 1）试样用氢氧化钠在银坩埚中熔融，为了防止试样溶液中可能存在的胶体银会还原游离钼酸而影响结果，故需加入1滴高锰酸钾溶液，若褪色则应补加。 2）加入乙醇可增加硅钼黄的稳定性。

201507fda行业指南：分析方法验证(中英文)(下).doc

201507 FDA行业指南：分析方法验证（中英文）（下） VII. STATISTICAL ANALYSIS AND MODELS 统计学分析和模型 A. Statistics 统计学 Statistical analysis of validation data can be used to evaluate validation characteristics against predetermined acceptance criteria. All statistical procedures and parameters used in the analysis of the data should be based on sound principles and appropriate for the intended evaluation. Several statistical methods are useful for assessing validation characteristics, for example, an analysis of variance (ANOVA) to assess regression analysis R (correlation coefficient) and R squared (coefficient of determination) or linear regression to measure linearity. Many statistical methods used for assessing validation characteristics rely on population normality, and it is important to determine whether or not to reject this assumption. There are many techniques, such as histograms, normality tests, and probability plots that can be used to evaluate the observed distribution. It may be appropriate to transform the data to better fit the normal distribution or apply distribution-free (nonparametric) approaches when the observed data are

药物分析简答题(部分来自历年)

1.简述采用紫外分光光度法鉴别药物时常用的方法，以及薄层色谱法检查药物中特殊杂质的方法。 答: 1)测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长 2)规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度 3）规定吸收波长和吸收系数法 4）规定吸收波长和吸收度比值法 5）经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性 1）杂质对照品法 2）供试品溶液自身稀释对照法 3）杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照并用法 4）对照药物法 2.试述古蔡法测砷原理。操作中为何要加碘化钾试液和酸性氯化亚锡试液？醋酸铅棉花起什么作用？ 答:1)原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢与药物中微量的砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准溶液所生成的砷斑比较，判断供试品中重金属是否符合限量规定。 2)五价砷在酸性溶液中也能被金属锌还原为砷化氢，但生成的砷化氢的速度较三价砷慢，故反应中加入碘化钾及氯化亚锡将五价砷还原为三价砷，碘化钾被氢化生成的碘又可被氯化亚锡还原为碘离子，后者与反应中产生的锌离子能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反应进行，还可抑制锑化氢的生成，因锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑。 3)锌粒及供试品种可能含少量硫化物，在酸性液中能产生硫化氢气体，与溴化汞作用生成硫化汞的色斑，干扰试验结果，故用醋酸铅棉花吸收硫化氢 3.简述薄层色谱法检查药物中的杂质，可采用高低浓度对比法检查，何为高低浓度对比法？答: 先配制一定浓度的供试品溶液，然后将供试品溶液按限量要求稀释至一定浓度作为对照溶液，将供试品溶液和对照溶液分别点样于同一薄层板上，展开、斑点定位。供试品溶液所显示杂质斑点与自身稀释对照品溶液或系列浓度自身稀释对照溶液的相应主斑点比较，不得更深。 4.药物分析在药品的质量控制中担任着主要的任务是什么？ 答: 保证人们用药安全、合理、有效，完成药品质量监督工作。 5.常见的药品标准主要有哪些，各有何特点？ 答: 国家药品标准(药典)；临床研究用药质量标准；暂行或试行药品标准；企业标准。 6.药品检验工作的基本程序是什么？ 答: 取样、检验(鉴别、检查、含量测定)、记录和报告。 7.简述RPHPLC法测定有机含氮类药物时色谱峰拖尾的原因，以及克服的措施。 一、造成色谱峰( 不对称)拖尾的原因 1.色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷; 2.柱头有污染;

二氧化硅 硅钼黄光度法

HZHJSZ00147 水质二氧化硅的测定　硅钼黄光度法 HZ-HJ-SZ-0147 水质硅钼黄光度法 1 范围 本方法最低检出浓度为0.4mg/L 测定最适宜浓度范围为0.4~20mg/Lò2?éó?óúò?°??·?3???ù·??? ?éò?2éó?213￥·¨(不加钼酸铵的水样为参比)予以消除 大量的铁加入草酸能破坏磷钼酸 在测定条件下样品中含铁20mg/L 磷酸盐0.8mg/L2??éè?2a?¨ ó?2￡á§?÷?óê± ó???3y??°×μ?·?·¨??3y2￡á§?÷?óμ?ó°?ì ?a?á?§ó?1è?á·′ó| 在一定浓度范围内可于波长410nm处测定其吸光度并与硅校准曲线对照求得二氧化硅的浓度 离子交换水可能含胶态的硅酸而影响测定 3.1 1+1盐酸溶液 溶解10g钼酸铵[(NH4)6Mo7O24· 4H2O]于水中(搅拌并微热) 如有不溶物可过滤　 ３．３ 草酸溶液溶解7.5g草酸 (H2C2O4??êí?á100mL 3?è???′?êˉó￠é°(二氧化硅)0.2500g置于铂坩埚中混匀在1000取出冷却后用水洗净坩埚与盖用水稀释至标线贮于聚乙烯瓶中 此溶液每毫升含l.00mg二氧化硅(SiO2) ?üè?50.0mL贮备溶液用聚乙烯瓶密封保存 3.6 永久性颜色溶液 3.6.1 铬酸钾溶液稀释至1 L èü?a10g硼酸钠(Na2B4O7??êí?á 1 L 30~50mL 5 试样制备 水样应保存在聚乙烯瓶中以避免玻璃瓶中的硅溶出而污染水样这种溶出的危险性更大 ０．５０３．００７．００ 分别移入50mL比色管中迅速顺次加入1.0mL 1+1盐酸溶液和2.0mL钼酸铵试剂使之混合均匀加入2.0mL草酸溶液从加入草酸溶液后的时间算波长采用410nm ò????a2?±è2￠×÷??°×D￡?y

abaqus中的动态分析方法

ABAQUS 线性动态分析 如果你只对结构承受载荷后的长期响应感兴趣，静力分析（static analysis）是足够的。然而，如果加载时间很短（例如在地震中）或者如果载荷在性质上是动态的（例如来自旋转机械的荷载），你就必须采用动态分析（dynamic analysis）。本章将讨论应用ABAQUS/Standard进行线性动态分析；关于应用ABAQUS/Explicit进行非线性动态分析的讨论，请参阅第9章“非线性显式动态分析”。 7.1 引言 动态模拟是将惯性力包含在动力学平衡方程中： +P u M&& I - = 其中 M结构的质量。 u&&结构的加速度。 I在结构中的力。 P 所施加的外力。 在上面公式中的表述是牛顿第二运动定律（F = ma）。 在静态和动态分析之间最主要的区别是在平衡方程中包含了惯性力（M u&&）。在两类模拟之间的另一个区别在于力I的定义。在静态分析中，力仅由结构的变形引起；而在动态分析中，力包括源于运动（例如阻尼）和结构的变形的贡献。 7.1.1 固有频率和模态 最简单的动态问题是在弹簧上的质量自由振动，如图7-1所示。

图7–1 质量－弹簧系统 在弹簧中的力给出为ku ，所以它的动态运动方程为 mu ku P &&+-=0 这个质量－弹簧系统的固有频率（natral frequency ）（单位是弧度/秒（rad/s ））给出为 k m ω= 如果质量块被移动后再释放，它将以这个频率振动。若以此频率施加一个动态外力，位移的幅度将剧烈增加，这种现象即所谓的共振。 实际结构具有大量的固有频率。因此在设计结构时，非常重要的是避免使可能的载荷频率过分接近于固有频率。通过考虑非加载结构（在动平衡方程中令0P =）的动态响应可以确定固有频率。则运动方程变为 Mu I &&+=0 对于无阻尼系统，I Ku =，因此有 Mu Ku &&+=0 这个方程的解具有形式为 t i e u ωφ= 将此式代入运动方程，得到了特征值（eigenvalue ）问题 K M φλφ= 其中2λω=。 该系统具有n 个特征值，其中n 是在有限元模型中的自由度数目。记j λ是第j 个

美国FDA分析方法验证指南中英文对照

美国FDA分析方法验证指南中英文对照 美国FDA分析方法验证指南中英文对 照 I. INTRODUCTION This guidance provides recommendations to applicants on submitting analytical procedures, validation data, and samples to support the documentation of the identity, strength, quality, purity, and potency of drug substances and drug products. 1. 绪论 本指南旨在为申请者提供建议，以帮助其提交分析方法，方法验证资料和样品用 于支持原料药和制剂的认定，剂量，质量，纯度和效力方面的文件。 This guidance is intended to assist applicants in assembling information, submitting samples, and presenting data to support analytical methodologies. The recommendations apply to drug substances and drug products covered in new drug applications (NDAs), abbreviated new drug applications (ANDAs), biologics license applications (BLAs), product license applications (PLAs), and supplements to these applications. 本指南旨在帮助申请者收集资料，递交样品并资料以支持分析方法。这些建议适 用于NDA，ANDA，BLA，PLA及其它们的补充中所涉及的原料药和制剂。 The principles also apply to drug substances and drug products covered in Type II drug master files (DMFs). If a different approach is chosen, the applicant is encouraged to discuss the matter in advance with

荧光分光光度计- 原理

分子荧光分析法 发光光谱：物质分子或原子吸收辐射被激发后，电子以无辐射跃迁至第一电子激发态的最低振动能级，再以辐射的方式释放这一部分能量而产生的光谱称为荧光、磷光。 根据物质接受的辐射能量的大小及与辐射作用的质点不同，荧光分析法可分为以下几种： 1. X射线荧光分析法 用X射线作光源，待测物质的原子受激发后在很短时间内（10-8 s）发射波长在X 射线范围内的荧光。 2. 原子荧光分析法： 待测元素的原子蒸气吸收辐射激发后，在很短的时间内（10-8 s），部分将发生辐射跃迁至基态，这种二次辐射即为荧光，根据其波长可进行定性，根据谱线强度进行定量。 荧光的波长如与激发光相同，称为共振荧光。 荧光的波长比激发光波长长，称为stokes荧光；若短，称为反stokes荧光。 3. 分子荧光分析法： 有些物质的多原子分子，在用紫外、可见光（或红外光）照射时，也能发射波长在紫外、可见（红外）区荧光，根据其波长及强度可进行定性和定量分析，这就是通常的（分子）荧光分析法。

基本原理 一. 分子荧光的发生过程 （一）分子的激发态——单线激发态和三线激发态 大多数分子含有偶数电子，在基态时，这些电子成对地存在于各个原子或分子轨道中，成对自旋，方向相反，电子净自旋等于零：S=?+(-?)=0，其多重性M=2S+1=1 (M 为磁量子数)，因此，分子是抗（反）磁性的，其能级不受外界磁场影响而分裂， 称“单线态”； 图1 单线基态（A）、单线激发态（B）和三线激发态（C） 当基态分子的一个成对电子吸收光辐射后，被激发跃迁到能量较高的轨道上，通常它的自旋方向不改变，即?S=0，则激发态仍是单线态，即“单线(重)激发态”； 如果电子在跃迁过程中，还伴随着自旋方向的改变，这时便具有两个自旋不配对的电子，电子净自旋不等于零，而等于1：S=1/2+1/2=1 其多重性：M=2S+1=3 即分子在磁场中受到影响而产生能级分裂，这种受激态称为“三线(重)激发态”； “三线激发态” 比“单线激发态” 能量稍低。但由于电子自旋方向的改变在光谱学上一般是禁阻的，即跃迁几率非常小，只相当于单线态→单线态过程的10-6~10-7。（二）分子去活化过程及荧光的发生： （一个分子的外层电子能级包括S0（基态）和各激发态S1，S2，…..，T1…..，每个电子能级又包括一系列能量非常接近的振动能级） 处于激发态的分子不稳定，在较短的时间内可通过不同途径释放多余的能量（辐射或非辐射跃迁）回到激态，这个过程称为“去活化过程”，这些途径为： 1. 振动弛豫：在溶液中，处于激发态的溶质分子与溶剂分子间发生碰撞，把一部分能

动态电路分析方法大汇总

动态电路分析方法大汇总 电路的动态分析，是欧姆定律的具体应用，在历年的高考中经常出现。此类问题能力要求较高，同学们分析时往往抓不住要领，容易出错。电路发生动态变化的原因是由于电路中滑动变阻器触头位置的变化，引起电路的电阻发生改变，从而引起电路中各物理量的变化，在此将动态电路的分析方法介绍如下。 一、 程序法 根据欧姆定律及串、并联电路的性质进行分析。基本思路是：“部分—整体—部分”，即从阻值变化的部分如手，由串并联电路规律判知R 总的变化情况，再由欧姆定律判知I 总和U 端的变化情况，最后由部分电路的欧姆定律得知个部分物理量的变化情况，一般思路是： 1确定电路的外电阻R 外总如何变化。 2根据闭合电路的欧姆定律E I R r =+总外总确定电路的总电流如何变化。（利用电动势不变） 3由U I r =内内确定电源内电压如何变化。（利用r 不变） 4由U E U =-外内确定电源的外电压如何变化。 5由部分电路的欧姆定律确定干路上某定值电阻两端电压如何变化。 6由部分电路和整体的串并联规律确定支路两端电压如何变化及通过各支路电路如何变化。 二、 图像法 电路发生动态变化时，其电路图可等效为如图（1）所示，根据闭合电路的欧姆定律得到U E Ir =-,其图像如图（2）中的a ，根据部分电路的欧姆定律可知U IR =，其导体的 U —I 图像如（2）中b ，在电源确定的电路中，由图（2）得，当电阻R 增大时（即图中的角度变大），通过R 的电流减小，R 两端的电压变大，当电阻R 减小时（即图中的角度变小），其电流增大，电压减小。 三、“串反并同”法 所谓“串反”，即某一电阻增大（减小）时，与它串联或间接串联的电阻中的电流、两端电压、电功率都减小（增大）。所谓“并同”，即某一电阻增大（减小）时，与它并联或间接并联的电阻中的电流、两端电压、电功率都增大（减小）。但须注意的前提有两点：1电路中电源内阻不能忽略；2滑动变阻器必须是限流接法。 三、 极限法 即因滑动变阻器滑片滑动引起的电路变化问题，可将变阻器的滑动端分别滑至两个极端讨论。（一般应用于滑至滑动变阻器阻值为零） 例1、 在图中电路中，当滑动变阻器的滑动片由a 向b 移动时，下列说法正确的是：

原料药分析方法开发流程

原料药分析方法开发流程 分析方法在药物的研发过程中起到的就是“灯塔”的作用,就是原料药及制剂开发、质量控制的标尺及眼睛,因此分析方法在药物开发过程中起到了领航员的作用。下面简单的介绍一下原料药分析方法的开发流程。 原料药的分析方法开发一般分为两大部分:1、起始物料的分析方法开发;2、中间体及API的分析方法开发。按照正常的逻辑顺序,应该就是起始物料的分析方法开发先行,但就是一般在实际操作过程中,往往就是中间体及API的分析方法先行开发。主要就是因为,在打通工艺路线时期或者就是文献调研的阶段,主要就是针对中间体及API的分析方法的工作。只有在工艺优化的中期或者中后期,对起始物料厂家基本选定时才会有针对性的启动起始物料的分析方法开发工作。虽然如此,考虑到逻辑顺序,还就是按照起始物料、中间体、API这样的顺序进行逐一介绍。 3、分析方法的开发

二、中间体 中间体分为过程控制及质量控制,过程控制主要监控反应进行的程度,质量控制就是制定中间体的中控标准。 1、过程控制方法 1)过程控制方法的开发 根究反应液的具体情况以及涉及物料自身的性质,中间体的过程控制方法可以选择TLC 或者HPLC的手段进行控制。一般在反应过程中主要关心的就是原料的剩余及产物的生成情况,所以确保在原料及产物峰周围没有干扰。如果有需要特殊关注的杂质,也需确保杂质的分离度、峰纯度等。

2)过程控制方法的验证 如果过程控制的方法只就是定性的检测,在方法验证时一般只需进行:专属性、检测限、耐用性等方面的验证工作。如果涉及定量检测的方法,则需要进行全面的分析方法验证工作。 2、质量控制方法 1)质量控制方法的开发 对中间体的质量控制,一方面根据工艺优化的结果制定质量控制的限度,另一方面需要根据API质量的要求对中间体所涉及杂质的限度进行定量的控制。当然,质量控制方面不只就是杂质限度的控制,如果接下来的反应就是无水反应,上一步的中间体依然需要对水分的限度进行严格的控制。 中间体的制备过程中,也会涉及GTI、手性杂质及重金属等杂质的研究。一般情况,此类杂质最好放在中间体的质量标准中进行,如果控制有难度或者在之后的反应过程中仍然会又引入及生成,放在之后的步骤控制或者API控制均可。 2)质量控制方法的验证 一般情况下,中间体的质量控制均会涉及杂质的定量检测,因此中间体质控方法的验证均需要按照定量检测的方法进行全面的分析方法验证工作。 三、API 同起始物料分析方法开发基本一致,在API分析方法的开发前期,首先需要进行有关化合物或者相似化合物分析方法的调研工作,其次进行杂质的分析工作。针对不同类型的杂质选择有针对性的文献报道的方法为方法开发的基础,结合工艺本身,对分析方法进行逐步的优化。有关物质的制定,可以根据靠近终反应步骤的杂质谱以及最后一步反应的杂质体系进行制定。 溶剂残留的制定需要结合起始物料所涉及的溶剂,如果有与起始物料有差异的溶剂,那么差异溶剂需要在起始物料中进行控制;若能包含起始物料所涉及溶剂,可以将所用溶剂在终产品中进行控制,起始物料中只需进行干燥失重的检测。同时,还需要关注一些潜在的溶剂,例如:反应中涉及苯的衍生物,也需要关注苯的残留控制等。 3、分析方法的开发 根据不同的杂质种类,API的分析方法涉及到普通杂质、手性杂质、残留溶剂、基因毒性杂质、重金属等。 普通杂质:一般采用HPLC法,在进行分析方法开发之前,首先要进行充分的文献调研工作,查询各国药典标准、文献、专利中就是否收载了相同或同类化合物,以此为基础进行分析

动态分析方法

动态分析的方法 一、单井动态分析 单井动态分析包括油井动态分析和注水井动态分析,以研究阶段性的分层调整管理措施为主。油田的变化总要通过单井反映出来，所以管好油、水井是管好油田的基点。油井分析以所管某一油井为重点联系到周围有关的注水井和相邻油井进行综合分析。注水井分析则以所管某一注水井为中心，联系到周围的油、水井进行综合分析。现分述如下。 （一）油井动态分析 对注水开发的油田来说，油井动态分析的目的就是要在保证达到一定采油速度的前提下实现三稳迟见水。三稳就是产量稳、地层压力稳、流动压力稳。迟见水就是无水采油期长、无水采收率高。油井动态分析方法可综合为以下几点： 第一，清点油层。对所管油井的各小层要进行清点，了解全井射开的油层数、有效厚度和产能系数；了解射开各单层的类型，如水驱层（与注水井连通）、弹性层（与注水井不连通，与其它油井连通）、“土豆”层（与邻井全不连通）和“危险”层（与注水连通特别好，有见水危险）；了解每个单层的渗透性、厚度和储量，掌握油层特性，胸中有数，分析就主动了。 第二，核实资料。油井的生产特点和变化规律，总要通过观察现象和整理资料才能掌握。在平时就必须取准油井动态资料，如油管压力、套管压力、流动压力、地层压力、产油量、油气比和油样分析资料（含水、含蜡、含砂等）。及时观察记录油井变化情况如

结蜡软硬、原油乳化、出砂、油井间歇出液现象。新的变化情况出现后，要先从地面查清原因，弄清情况，落实资料，然后再进行动态分析。 第三，联系历史。油井的每一变化都是有其根源的，要结合油井开采历史进行分析。一方面要熟悉井史，结合钻井、固井、诱喷等有关情况进行分析。另一方面要应用采油曲线，研究每个开采时期的生产指标变化特点，由它的过去，分析它的现在，由它的现在预测它的将来。分析哪些是一贯的规律，哪些是突然的变化，便于综合考虑，得出系统概念。 第四，对比邻井。首先要和注水井对比，如果见到注水效果或者见水，就要顺着连通层追踪到注水井，综合分析。见不到注水效果也要找出原因。其次要和周围油井对比，研究哪些是多数井存在的普遍规律，哪些是本井出现的特殊现象。要具体分析每一种变化，联系到对油田有利或有害。 第五，掌握界限。油井开采指标的变化是有一定界限的，这个界限应根据油田实际情况具体制订。在生产中，油井变化超出了所规定的开采界限，就要采取措施，进行调整。有了合理的开采界限，就有了分析对比的标准。油田开采界限的主要指标有：总压差、地饱压差、流饱压差、采油速度、无水采收率、含水上升速度、油气比等。 第六，分析矛盾。油井分析就是为了发现和解决矛盾，使油井合理发挥能力。要层层深入，把所有矛盾揭露出来，抓住主要矛盾，研究解决办法。

美国FDA分析方法验证指南中文译稿[1]

1 II. 背景 (2) III. 分析方法的类型 (3) A. 法定分析方法 (3) B. 可选择分析方法 (3) 3 C. 稳定性指示分析 (3) IV. 对照品…………………………………………………………………………… 4 A. 对照品的类型 (4) B. 分析报告单 (4) C. 对照品的界定 (4) V. IND 中的分析方法验证 (6) VI. NDA, ANDA, BLA 和PLA 中分析方法验证的内容和格式 (6) A. 原则 (6) B. 取样 (7) C. 仪器和仪器参数 (7) D. 试剂 (7) E. 系统适应性实验 (7) F. 对照品的制备 (7) G. 样品的制备 (8) H. 分析方法 (8) L. 计算 (8) J. 结果报告 (8) VII. NDA，ANDA,BLA 和PLA 中的分析方法验证 (9) A．非法定分析方法 (9) 1．验证项目 (9) 2. 其它分析方法验证信息 (10) a. 耐用性 (11) b. 强降解实验 (11) c. 仪器输出/原始资料 (11) 3．各类检测的建议验证项目 (13) B．法定分析方法 (15) VIII. 统计分析………………………………………………………………………… 15 A. 总则 (15)

C. 统计 (16) IX. 再验证 (16) X. 分析方法验证技术包：内容和过程…………………………………………… 17 A. 分析方法验证技术包 (17) B. 样品的选择和运输 (18) C. 各方责任 (19) XI. 方法……………………………………………………………………………… 20 A. 高效液相色谱(HPLC) (20) B. 气相色谱(GC) (22) C. 分光光度法，光谱学，光谱法和相关的物理方法 (23) D. 毛细管电泳 (23) E. 旋光度 (24) F. 粒径相关的分析方法 (25) G. 溶出度 (26) H. 其它仪器分析方法 (27) 附件A：NDA，ANDA，BLA 和PLA 申请的内容 (28) 附件B：分析方法验证的问题和延误 (29) 参考文献…………………………………………………………………………………… 30 术语表……………………………………………………………………………………… 32 This guidance provides recommendations to applicants on submitting analytical procedures, validation data, and samples to support the documentation of the identity, strength, quality, purity, and potency of drug substances and drug products. 1. 绪论 本指南旨在为申请者提供建议，以帮助其提交分析方法，方法验证资料和样品用于支持 原料药和制剂的认定，剂量，质量，纯度和效力方面的文件。 This guidance is intended to assist applicants in assembling information, submitting samples, and presenting data to support analytical methodologies. The recommendations apply to drug substances and drug products covered in new drug applications (NDAs), abbreviated new drug applications (ANDAs), biologics license applications (BLAs), product license applications (PLAs), and supplements to these applications.

动态设计分析方法DDAM介绍及应用

动态设计分析方法DDAM 介绍及应用 李增刚 （北京诺思多维科技有限公司，forengineer@https://www.sodocs.net/doc/0f15840153.html, ） 摘 要： DDAM 在水面战舰和水下潜艇的抗冲击计算中有着广泛的应用，本文着重介绍了DDAM 的概念，以及在NEi Nastran 中如何进行DDAM 计算，并提供了进行DDAM 分析的详细步骤，以及对计算结果的统计信息的说明。 关键词：DDAM NEi Nastran 冲击响应 1 DDAM 概念 DDAM(Dynamic Design Analysis Method,动态设计分析方法)是美国海军广泛使用的基于冲击谱的响应分析方法。二战中大量战舰在非接触式爆炸冲击作用下失去战斗力。现代舰船设计时，都应该进行抗冲击试验，对于不能进行抗冲击试验的设备应进行有限元动态设计DDAM ，以检验设备的抗冲击能力。DDAM 计算方法是先计算出结构的某些阶模态阵型和模态质量，将这些模态进行响应计算，得到每阶模态的响应，然后将每阶模态的响应按照某种规则进行合成，得到总的响应。DDAM 分析的输入激励是由美国海军在进行了大量的实验基础上总结出来的经验公式，输入加速度a A 和速度a V 见表1，它根据设备安装在舰船或潜艇的位置不同而有所不同。 我国国军标GJB1060.1-91规定了DDAM 输入公式中的系数和常数。根据输入，可以得到各阶模态的响应，然后将各阶模态进行合成，得到总的响应，模态合成的方法有三种，绝对值求和（Absolute Sum ，ABS ）、平方和之平方根（Square Root Sum of Squares, SRSS ）和美国海军研究实验室求和（NRL Sum, NRL ），三种合成方法如下：