逆相层析移动相调和酸、盐,防止拖尾图峰说明

逆相层析移动相调和酸、盐，防止拖尾图峰说明

商用 RPC18 Column，大部份都有针对残存-Si-OH ( Silanol Group )作妥善的终结处理( End Capping )，另有称谓是 Base Deactivated Phase。由于各家厂牌终结处理方式的不同，仍有或多或少-Si-OH 的残存。RPC18 Column，具非极性十八硅烷( -Si-C18H37 )与分析物进行“分配” Partition 作用，分析物依极性差异性，比较极性物先将被溶洗出，而非极分析则延后被溶洗出，即极性物先于非极性物的分离顺序。

若是前述-Si-OH 仍有相当的残存，该-Si-OH 提供了-SiO-离子交换基，加上原 Silica 仍有些微重金属，例如： Na+…形成 -SiO-Na+更促进 -SiO-交换作用力。参照右图，如此，-SiO-极性官能基的

呈现，是与非极性-C18 官能基，有所矛

盾，因此卓越优秀的 RPC18 Column，必

须是甚少残存的硅醇基 ( Silanol Group )。

残存 -Si-OH 的具酸 -SiO-，它非常容易与

有机氨碱物( R-N+ )的作用，这也就是容

易造成该有机氨碱物的“拖尾”图峰

(Tailing peak)。

为了防止此类拖尾图峰的形成，除了妥当选购卓越终结处理的 RPLC C18 Column 之外，参照下图。

可按以下的方式试之：

1.) 移动相调酸

*调和 1% 醋酸，适用至 220nm 波长

*调和 0.1% 三氟醋酸，适用至 210nm 波长

*调和 0.1% 磷酸，适用至 200nm 波长

当移动相调和了“酸”≦pH3.0 时，它防止 Silanol 的解离，仍然维持-Si-OH原型，就不再对有机氨碱物有吸附作用，也不致于形成拖尾图峰。就分析物而言如果是有机的酸 R-COOH 于调酸移动相时，保持 R-COOH 更非解离性，则更作用滞留于 C18 (ODS)官能基。反之，如果是有机的氨碱 R-NH2，于调酸移动相时，促进 R-NH2 成为更解离性，即极性型 R-NH3+，则降低与 C18官能基的作用，而减少滞留。

2.)移动相调和 20mM ~ 100mM 的醋酸盐或磷酸盐，适当调和pH 值，以防止-SiO-基的呈现。

3.)移动相试调和 5mM ~ 10mM TEA (Triethylamine)，它将优先与 -SiO-基作用，具终结该Silanol group 的活性的效应，而促使分析物成无拖尾而尖锐图峰。参照图(三)

范例：

层析管柱： INERTSIL 5um ODS-3 4.6×250mm 移动相： Methanol/H2O=90/10

侦检器： UV235nm

流速： 1.0ml/min

样品：Econazde Nitrate,Isoconazole Nitrate