细胞色素c综述

综述

细胞色素c (cyt-c)是生命体中一种重要的水溶性氧化还原血红蛋白，整个分子由一条肽链包裹着一个血红素(中心卟啉铁)组成，广泛存在于原核生物和真核生物细胞的线粒体内膜上，是生命体内氧化还原反应电子传递中的一个环节。近年来，以cyt-c为代表的氧化还原蛋白质和酶的直接电化学研究引起了很多研究者的兴趣，这些研究不仅能获得其内在的热力学和动力学性质的重要信息，而且还可以促进电极物质与具有高催化和传感性的生物大分子结合，这对于了解生命体内的物质代谢和能量转换，了解生物分子的结构和各种物理化学性质、探索其在生命体内的生理作用及作用机制、开发新型生物传感器等都有重要意义。然而许多在生物体内具有氧化还原性质的蛋白质在金属电极上的电化学反应是十分不可逆的，所以人们更加关注生物大分子在电极上的直接电化学反应。由于cyt-c 分子较小，对其结构己了解得比较清楚，因此，对cyt-c的直接电化学研究进行得最早，有关的报道较多。

1.1 cyt-c的结构

cyt-c分子的形状近似于球形，直径约为34 ?，其外表面分布着许多带电的氨基酸残基，使得其在中性条件pH下带有九个净正电荷，而且cyt-c分子表面电荷的分布是不均匀的，靠近血红素裂隙的一侧分布着一系列赖氨酸残基，带正电荷，而远离血红素裂隙的一侧带有负电荷，这种表面电荷的非均匀分布对cyt-c 分子与电极表面或其它分子之间的电子传递具有重要的影响。根据血红素铁的价态不同，可将cyt-c分为氧化性cyt-c和还原性cyt-c，其中血红素侧链和蛋白质之间是以共价键结合，不同来源cyt-c的蛋白质部分略有不同。cyt-c是生物氧化的一个非常重要的电子传递体。还原型参与接收自氢脱下的质子，氧化型参与传递电子给氧，从而促进氢和氧的结合，加强体内代谢物质的氧化供能反应。其结构为：

Cyt-c结构

Cyt-c的平面结构图

1.2 cyt-c在电极上的电化学反应

为了揭示cyt-c在生物体内可逆的电子传递反应的实质，人们模拟其在生物体内的微环境，开展了cyt-c直接电化学的研究。

(l) cyt-c在金属电极上的电化学反应

虽然cyt-c在生物体内能进行可逆的电子传递反应，但其在金属，如Hg、Pt、Au、Ag等电极上的电化学反应却是不可逆的。一般认为这是由于cyt-c在金属电极上发生强烈吸附使cyt-c变性，而变性的cyt-c的电化学反应是不可逆的[1,2]。Hawkridge等[3]认为经过冷冻干燥后的cyt-c中存在部分cyt-c的低聚物。这些低聚物易在电极表面吸附。因而阻碍了电极与cyt-c分子之间的电子传递。

(2) cyt-c在媒介体修饰电极上的电化学反应

为了克服上述困难，一些研究组开始考察细胞色素c在媒介体存在下的间接电化学反应。媒介体是一种能加速细胞色素c氧化还原反应的物质，但其身在所研究电位范围内也发生电化学反应，如甲基紫精、黄素腺嘌呤二核甘酸等。显然，

媒介体的存在对研究cyt-c的电化学反应会产生不利影响。

(3) cyt-c在促进剂修饰电极上的电化学反应

Hill小组[2]发现在4，4’一联吡啶存在下，cyt-c在金表面也能发生准可逆的氧化还原反应。与媒介体不同，4，4’一联吡啶在所研究的电位范围内不发生任何电化学响应，故被称为cyt-c的电化学反应的促进剂。这一发现使细胞色素的电化学研究得到了迅速发展，此后许多促进剂被相继发现。如董绍俊研究组[4]系统地研究了细胞色素c在多种氨基酸和多肽修饰电极上的电化学反应，吴霞琴研究了腺嘌呤的促进作用。此外，无机物、有机物、聚合物等对细胞色素c的电化学反应也有促进作用。

(4) cyt-c在金属氧化物电极上的直接电化学反应

除了促进剂外，因金属氧化物表面具有含氧基团，其表面过剩电荷为负，有利于带正电荷的cyt-c在其电极表面的直接电子转移。Yeh和Kuwana [5]首次报道了cyt-c在掺杂氧化铟半导体电极上的直接电化学。循环伏安法和示差脉冲伏安法实验结果表明，出计算的扩散系数外，cyt-c在该电极上的所有电化学特征均表明电极反应时准可逆的。

其他金属氧化物如氧化锡[6]、氧化铟[7]、氧化钌[8]、氧化铱电极上[9]，cyt-c 亦呈现准可逆的电子转移。但是cyt-c在金属氧化物电极上的电化学行为，除了与cyt-c的纯化有关外，还与电极表面的过剩电荷密度有关，电极表面过剩电荷密度的符号和大小取决于溶液的pH值、特性离子吸附、掺杂含量、表面状态和相对于平带电位(E fb)的电位。

1.3 cyt-c的电子传递模型

到目前为止，虽然人们对于cyt-c在金属电极上的不可逆的电化学行为和在促进剂修饰电极上能进行准可逆的电化学反应机理还不十分清楚，但已提出了一些模型来解释上述的现象。

1.3.1 Hill快速洗脱附模型

Albery等人[10]采用旋转圆盘、环盘技术研究了cyt-c在4，4’一联吡啶修饰金电极上的氧化还原反应特征，认为cyt-c在4，4’一联吡啶修饰金电极上的反应经历反应物和产物在电极表面的快速吸附和脱附过程。并运用促进剂“X-Y”结构模型提出了cyt-c在4，4’一联吡啶存在下的电化学反应机理。

1.3.2 Niki不可逆吸附模型

Niki等[11]采用交流阻抗法、紫外可见反射法、红外反射法研究了儿种4-吡啶

基衍生物促进剂在cyt-c传递中的作用，提出了至少存在的三种吸附类型: 第一种类型：cyt-c的吸附能力强于促进剂，当二者共存于溶液中时，cyt-c 优先吸附于金属电极表面。如果将促进剂预先吸附于电极表面，在cyt-c的溶液中会很容易被cyt-c所取代。

第二种类型：cyt-c的吸附能力与促进剂相当，两者产生竞争吸附，故存在两种吸附形式的cyt-c，有的直接吸附于电极表面，而有的则吸附于电极表面的促进剂分子上。因此，发生两种类型的氧化还原反应：一是共吸附于金电极上的cyt-c，一是吸附于促进剂上的cyt-c。由于共吸附cyt-c与促进剂间的相互作用，共吸附cyt-c在电极表面的变形程度远小于在裸电极上的变形程度。

第三种类型：促进剂的吸附能力强于cyt-c，能强烈地吸附于电极表面，cyt-c 吸附或键合于这些促进剂分子上，保持其自然形态并发生电子转移。

2 论文设想

如上所述，cyt-c是一种结构简单，容易提取并在体内具有重要生理作用的氧化还原蛋白质。研究其在生物体内直接的电子转移并拓展其在分析化学上的应用，仍是一个极富挑战而有意义的工作。在进行系统文献调研的基础之上，我们选择了研究cyt-c直接电化学行为和拓展其在分析化学上应用的研究目标，进行了较系统的基础研究工作。首先，用PFV研究cyt-c在EPPGE上耦合的质子传递。其次，分别用海藻酸钠和琼脂糖水凝胶将cyt-c固定在电极表面，研究cyt-c的直接电化学行为，并研究hydrogel-cyt-c/EPPGE电极对O2的还原作用，有可能发展成为一种溶解氧的生物传感器。最后研究了cyt-c在离子液体中的电化学行为，对cyt-c 在不同电极不同离子液体中进行了系统的研究总结，并研究了其催化性能。

[1]H.Durliat, M.B.Barrau, https://www.sodocs.net/doc/d317198049.html,tat, Bioelectronchem.Bioenerg., 1988, 19, 413

[2]M.J.Eddowes, H.A.O.Hill, https://www.sodocs.net/doc/d317198049.html,m., 1977, 771

[3]S.C.Sun, D.E.Reed, J.K.Callison, L.H.Richard, F.M.Hawridge, Microchim.Acta, 1988, 3,

99

[4]朱毅民, 硕士论文, 长春, 中国科学院长春应用化学研究所, 1989

[5]P.Yeh, T. Kuwana, Chem.Lett. 977, 1145

[6] E.F.Bowden, F.M.Hawkridge, H.N.Blount, J. Electroanal. Chem., 1984,161,355

[7]T.Daido, T.Akaie, J.Electroanal.Chem., 1983,344,91

[8]M.A.Harmer, H.A.O.Hill, J.Electroanal.Chem., 1985, 189,229

[9]M.A.Harmer, H.A.O.Hill, J.Electroanal.Chem., 1984, 170,369

[10]W J.Alberg, M.J.Eddowes, H.A.O.Hill, A.R.Hillamam, J.Am.Chem. Soc., 1981, 103,

3903

[11]T.Sagare, K.Niwa, A.sone, C.Hinnen, K.Niki, Langumir, 1990, 6, 254

细胞培养综述

细胞培养综述 摘要：为了模拟机体生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。培养出的活细胞具有量大、均一和可重复性的特点，可以通过各种物理、化学、生物等因素进行调控，并且可以通过倒置、荧光、电子、激光共焦显微镜、流式细胞术、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等多样的方法进行研究，已广泛运用在不同科学研究领域。 关键词：分化，细胞分型，生长增殖过程，传代 一、体、外细胞的差异和分化 1、差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡的相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系[1]。因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体细胞的性状。实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生了。 虽然体外细胞与机体细胞存有差异，但并未失去研究的意义。且不论其有许多性状仍与体相同（如体外培养的心肌细胞仍可博动），只从细胞遗传学（Cyto－genetics）的角度看，离体细胞仍带有全套的二倍体基因。细胞在培养中的表现，只不过是相应基因关闭／开启

引起的现象，这并非是绝对缺陷。恰恰相反，在培养的细胞中某些特定功能的丧失，可为该基因的表达与调控提供线索。 2、分化；体外培养的细胞分化能力并未完全丧失，只是环境的政变，细胞分化的表现和在体不同。细胞是否表现分化关键在于是否存在使细胞分化的条件，如Friend细胞（小鼠红白血病细胞）在一定的因素作用下可以合成血红蛋白，血管皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状结构，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗体，这些均属于细胞分化行为[2]。 二、体外培养细胞的分型 （一）贴附型：大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞，判断细胞形态时不能接体组织学标推判定，仅大致分成以下四型： 1、成纤维细胞型：胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管皮等常呈本型状态。另外，凡培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。 2、上皮型细胞：细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。起源于、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态[3]。 3、游走细胞型：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其

细胞生物学论文

细胞生物学概述 摘要：细胞生物学是以细胞为研究对象，从细胞的整体水平、亚显微水平、分子水平等三个层次，（斯。诺。美。A11-走在生物医学的最前沿）以动态的观点，研究细胞和细胞器的结构和功能、细胞的生活史和各种生命活动规律的学科。细胞生物学是现代生命科学的前沿分支学科之一，主要是从细胞的不同结构层次来研究细胞的生命活动的基本规律。从生命结构层次看，细胞生物学位于分子生物学与发育生物学之间，同它们相互衔接，互相渗透。 英文摘要：Cell biology is to cell as the research object, from the three levels of the overall level of the sub microscopic level, cells, molecular level (,. Connaught. Beauty. A11- in the forefront of biomedical) from the dynamic point of view, the structure and function of cells, cell and organelle of the life history and various life activities of the discipline. Cell biology is one of the frontier branch of modern life science, mainly is the basic rule to study cell from different hierarchy of life activities of cells. From the life structure and arrangement, and developmental biology is located between cell biology molecular biology, their mutual connection, mutual penetration. 关键字：细胞学说显微技术遗传物质 前言：细胞是生命的基本单位，细胞的特殊性决定了个体的特殊性，因此，对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、改造生命和征服疾病的关键。在我国基础学科发展规划中，细胞生物学与分子生物学，神经生物学和生态学并列为生命科学的四大基础学科。 主体：细胞生物学(cell biology)是研究细胞结构、功能及生活史的一门科学。现代细胞生物学从显微水平，超微水平和分子水平等不同层次研究细胞的结构、功能及生命活动。细胞生物学是现代生命科学的前沿分支学科之一，主要是从细胞的不同结构层次来研究细胞的生命活动的基本规律。从生命结构层次看，细胞生物学位于分子生物学与发育生物学之间，同它们相互衔接，互相渗透。一、细胞生物学简史 从研究内容来看细胞生物学的发展可分为三个层次，即显微水平、超微水平和分子水平。i从时间纵轴来看细胞生物学的历史大致可以划分为四个主要的阶段：

细胞工程概述

第二章细胞工程 第一节细胞工程概述 学习目标 一、知识与技能 1.简述细胞工程的基本技术。 2.举例说出细胞工程的应用。 二、过程与方法 1.通过阅读生物科学史，简述细胞工程的发展过程。 2.利用教材，归纳出细胞工程的基本技术。 三、情感、态度和价值观 1.关注细胞工程研究的发展和前景。 课前导学 1. 二、细胞工程的基本技术 1.细胞工程的概念：以______________为基本单位，在体外无菌条件下培养、繁殖或利用细胞融合、核移植等技术使细胞某些生物学特性按照人们的意愿发生改变，从而改良生物品种、创造新品种和加速繁育生物个体，以及获得某些有用的细胞代谢产物的技术。 2.细胞工程的分类 （1）根据研究对象的不同分类： ________ __细胞工程，______ _ __细胞工程，____________ 细胞工程。 （2）根据所使用技术的不同分类： ①______________技术：在无菌条件下________________植物细胞或组织，将其放在适当的培养基上，给予必要的生长条件，使它们在体外继续生长、增殖与分化，形成新的组织、器官和个体的技术。 ②______________技术：采用自然或人工的方法使2个或多个_______________细胞融合为一个细胞的技术。常用的促进细胞融合的方法有生物法(如________________)、化学法(如________________)和物理法(如________________)等。 ③______________技术：将一个细胞的_____________转移到另一个__________的细胞中去，从而使受体细胞获得新的遗传信息，产生新的生命现象的技术。. ④_____________工程：人们按照一定的设计，有计划地消减、添加或替换同种或异种染色体，从而达到________________改变遗传性状和选育新品种的一种技术。 三、细胞工程的应用 1.快速培养花卉及濒危植物 2.获得无病毒作物 3.开发洁净能源减少环境污染

细胞色素C的制备及测定

细胞色素C的制备及测定 一．摘要 本实验以猪心为原料提取细胞色素C，通过三氯乙酸溶液沉淀、硫酸铵粉末抽提和透析等一系列步骤制备得细胞色素C溶液，并利用消光法对其进行鉴定。由实验可得，重量为166.6g心肌可得到38.0ml的细胞色素C溶液，其中蛋白质含量为0.71724mg/ml，细胞色素C产量为9.9023mg，产率为59.44mg/公斤；从实验中还可得，氧化型样品的最大吸收峰应在410毫微米、530毫微米。还原型样品的最大吸收峰应在410毫微米、520毫微米及550毫微米。 二．关键词：细胞色素C、猪心、制备、测定 正文 1.前言 细胞色素是包括多种能够传递电子或能够激活氧的含铁蛋白质的总称，是呼吸链中极重要的电子传递体，细胞色素 C 是其中的一种【1】。自然界中，细胞色素C 的含量与组织的活动强度成正比。以哺乳动物的心肌、鸟类的胸肌和昆虫的翼肌含量最多，肝、肾次之，皮肤和肺中最少。细胞色素 C 是一种重要的细胞呼吸激活剂，常作为组织缺氧治疗的急救用药和辅助用药，如 C O 中毒、安眠药中毒、初生婴儿窒息、严重休克期缺氧、麻醉前处理以及肺部疾患引起的呼吸困难、高山缺氧、各种脑部疾病引起的脑缺氧、各种心脏疾患的缺氧。也用于脑血管障碍、中风后遗症、乙型脑炎后遗症等的治疗。另外细胞色素 C 还能促进受损肝细胞的再生、骨髓造血机能修复以及显著减轻由放疗引起的白细胞减少症。通常外源性细胞色素 C 不能进入健康细胞，但在缺氧时，细胞膜的通透性增加，细胞色素 C 便有可能进入细胞及线粒体内，增强细胞氧化，提高氧的利用，最终在一定程度上恢复损伤的电子传递链【2-4】。因文献中有关细胞色素C的研究鲜见，本实验采用猪心为原料对其进行研究。 2．实验部分 2.1实验原理

武汉大学-细胞生物学2001-2011考研真题

武汉大学2001年细胞生物学 一、名词解释(10*2.5) 1、apoptosis body 2、receptor mediated endocytosis 3、lamina 4、nuclease hypersensitive site 5、gap junction 6、hayflick limitation 7、kinetochore 8、molecular chaperones 9、leader peptide 10、dedifferentiation 二、简答题 (8*5) 1. 冰冻断裂术将溶酶体膜撕裂出PS，ES，PF，EF四个面，请绘一简图标明。 2. 医生对心脏已经停止跳动的病人采取电击抢救，请说明其心肌细胞是如何同步启搏的。 3. 为什么凋亡细胞的核DNA电泳图谱呈梯状分布带。而病理坏死细胞却呈弥散状连续分布？ 4. 将某动物细胞的体细胞核移植到另一去核的体细胞之中，然后其余实验步骤完全按照动物克隆的方式，问能否培育出一头克隆动物来？为什么？ 5. 切取病毒感染马铃薯植株的顶芽进行组织培养，这是大量繁育无毒苗的成功技术。试述其去除病毒的原因。 6. 有人认为既然已经有放大几十万倍的电镜，可以不用光镜了，请反驳这种观点的错误。 7. 出生6个月之内的婴儿可由母乳获得抗病的抗体，试述这些抗体是如何由母亲血液转移到婴儿血液中的。 8. 1999年报道，我国科学家成功实现将离体的B型血液改造成O型，请解释其原理。 三、问答题（前两题10分，最后一题15分） 1. 概述Cyclin与CDK在细胞周期调控的工作机制及其在各期引起的下游事件。 2. 试述在细胞质中合成的线粒体内膜蛋白及叶绿体类囊体膜蛋白是如何运送到位与装配的。 3. 综述细胞外被中糖蛋白在细胞内合成，组装和运输的全过程及其对于细胞的主要生理功能。 武汉大学2002年细胞生物学 一、名词解释（10*2.5) 1.nucleosome 2.contact inhibition 3.Telomerase

细胞色素C的制备及测定

实验三吸附法制备细胞色素C 粗品 一、实验目的 1．学习细胞色素C 的理化性质及其生物学功能。 2．掌握制备细胞色素C 的原理。 3．掌握制备细胞色素C 的操作技术。 二、实验原理 细胞色素C（cytochrome,Cyt）是呼吸链的一个重要组成成份。是一种含铁卟啉基团的蛋白质，在线粒体呼吸链上位于细胞色素b 和细胞色素aa3 之间，细胞色素C 的作用是在生物氧化过程中传递电子。 细胞色素C 分子中含赖氨酸较高，所以等电点偏碱，为pH 10.8，分子量为12000～13000 道尔顿。它易溶于水及酸性溶液，且较稳定，不易变性，组织破碎后，用酸性水溶液即能从细胞中浸提出来。细胞色素C 分为氧化型和还原型两种，因为还原型较稳定并易于保存，一般都将细胞色素C 制成还原型的，氧化型细胞色素C 在408nm、530nm 有最大吸收峰，还原型细胞色素C 的最大吸收峰为415nm、520nm 和550nm，这一特性可用于细胞色素C 的含量测定。 由于细胞色素C 在心肌组织和酵母中含量丰富，常以此为材料进行分离制备。本实验以猪心为材料，经过酸溶液提取，人造沸石吸附，硫酸铵溶液洗脱，三氯醋酸沉淀等步骤制备细胞色素C，并测定其含量。 三、实验材料 1. 实验器材 绞肉机；电磁搅拌器；电动搅拌器；离心机；72l 型分光光度计；烧杯(2000、1000、500m1)；量筒；移液管；玻璃漏斗和纱布；玻璃棒；透析袋 2. 实验试剂 ⑴1M H2S04 溶液；1M NH40H 溶液；固体硫酸铵 ⑵25％硫酸铵溶液: 100m1 蒸馏水中含25 克硫酸铵，约相当于25℃时40％的饱和度 ⑶0.2％氯化钠溶液：称0.2 克氯化钠，用蒸馏水溶解并定容至100ml. ⑷10%乙酸钡试剂：称10 克乙酸钡, 溶于100ml 蒸馏水中。 ⑸20％三氯醋酸溶液 (6) 人造沸石(60～80 目)

细胞培养知识

细胞培养基础知识 细胞培养基本条件 1、合适的细胞培养基 合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。 2、优质血清 目前，大多数合成培养基都需要添加血清。血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。 3、无菌无毒细胞培养环境 无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。 4、恒定的细胞生长温度 维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。 5、合适的气体环境 气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。 细胞培养基种类与基本成分 细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培

养基两类。干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。 1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质： 氨基酸 氨基酸是组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。 碳水化合物 碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。 无机盐 培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。此外，通过提供钠，钾和钙离子，帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是一个非常重要的因素, 细胞通常可耐受260mOsm/kg ～320 mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意：向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压，特别是溶于强酸或强碱中的物质。向培养液中添加HEPES 时需按以下方法调节钠离子浓度。

《细胞生物学》习题集-细胞概述

《细胞生物学》习题集及参考答案 整理：trichodina 第一部分《细胞概述》填空题 1.年，第一个发现细胞的是英国学者。 2.1874年荷兰人列文虎克Leeuwenhoek采用自制的显微镜第一次观察到了活 细胞，即是池塘里的和鲑鱼的。 3.自17世纪60年代英国学者Hooke发现细胞起，到19世纪40年代的170多 年的时间里，关于细胞方面的研究进展不大，其原因是。 4.被誉为19世纪自然科学的三大发现是，和。 5.细胞是由包围着含有所组成。 6.目前发现的最小最简单的原核细胞是。 7.脱去细胞壁的植物、微生物细胞称作。 8.由于真核生物具有核膜，所以，其RNA的转录和蛋白质的合成是进行 的；而原核生物没有核膜，所以RNA 转录和蛋白质的合成是的。 9.真核生物与原核生物最主要的差别：前者具有，后者只具 有。 10.由于发现了，有理由推测RNA是最早形成的遗传信息的一级 载体。 11.无论是真核细胞还是原核细胞，都具有以下共性：1）， 2），3），4）。12.在单细胞向多细胞有机体进化的过程中，最主要的特点是出 现。 13.虽然按重量比计算，脂肪酸分解产生的能量相当于葡萄糖产能量的倍， 但细胞内脂肪酸的主要作用是。 14.从分子到细胞的进化过程中，两个主要事件是和。 15.无机盐在细胞中的主要功能有1）， 2），3）。

16.植物中多糖作为细胞结构成分主要是参与的形成。 17.细菌细胞的基因组大约有个基因，而人的细胞基因组中约有 个功能基因。 18.从进化的角度看，真核细胞之所以不同于原核细胞，主要表现 在。 19.原核细胞的核是原始状态的核，主要表现在。 20.体外培养的细胞生长时要发生形态变化，但基本上分为两种类型 1），2）。 21.构成细胞最基本的要素是，和完整的代谢系统。 22.没有细胞壁的细胞称为，细胞中含有细胞核及其他细胞器的 部分称为，称为将细胞内的物质离心后得到的可溶相称为或。 23.细胞是的基本单位，最早于年被英国学者发 现。细胞是由包围着所组成。与之间的部分叫细胞质。动物细胞和植物细胞在表面结构上的主要差别是。 24.细胞是的基本单位，最早是由英国学者胡克于1665年发现。不过 他当时发现的只是来源于植物软木组织的。1839年，德国学者和提出的对细胞学的研究起了重要的推动作用，这一理论的核心观点是。 25.细胞是物质的，是有有机物组装而成。组装的方式有多种，像蛋 白质和DNA组装成核小体，属于组装，而由葡萄糖合成纤维素和淀粉则是组装。 26.细胞有原核和真核之分，而介于两者之间的叫，其主要特点 是。迄今发现的最小原核细胞是，它的结构很简单，是其细胞内唯一的一种细胞器。 27.从结构上看细胞是所组成。细胞质和原生 质的概念是不同的，前者是指，后者则是指。

血管内皮细胞培养

血管内皮细胞（endothelial cell, EC）体外培养 1．概述血管内皮细胞（endothelial cell, EC）是衬于心，血管和淋巴管腔内表面的一种单层扁平上皮细胞。EC极薄，厚度约为0.1～1μm，长约25～50μm，宽约10～15μm，在体内呈梭形，相邻细胞之间借少量粘合质彼此嵌合，细胞长轴与血流方向平行。其超微结构特点是在胞质中含有的特殊颗粒，称Weibel-palade小体（内含有与凝血有关的第Ⅷ因子相关抗原）；细胞间有紧密连接的缝隙相连。EC除了能保持血管壁内表面的光滑和通透性外，还有多种生物学功能：维持正常的血液流动性，分泌多种生物活性物质，在调节细胞生长，改变脂质代谢，维持血管壁的完整性，调节血管张力和选择性通透性以及免疫调节方面起到重要作用。EC功能的异常，与血栓形成、动脉粥样硬化、高血压等心血管疾病及肿瘤扩散，免疫疾病都有密切关系。体外培养中的EC形态呈“鹅卵石样”镶嵌排列，细胞长满后呈接触抑制现象。 2．培养方法EC生长在血管内表面，由于其所处的独特位置不利于观察和研究，所以体外培养EC显得特别重要，目前已有多种种属（人、牛、猪、兔、大鼠等），多种组织（脐带动脉、静脉、肺动脉、主动脉、脑毛细血管、心脏毛细血管等）的EC能在体外培养成功。人们将培养器皿预先用明胶或纤连蛋白或胶原等粘附蛋白包被后，形成人工的EC下基质层，可促进EC的粘附与生长。 2.1 方法原理用酶消化法，酶消化＋机械刮脱法或单纯刮脱法将EC分离下来，在适宜的条件下可贴壁并长成致密单层。 2.2 介绍几种主要EC的分离 2.2.1 酶消化法大血管内皮细胞的分离 2.2.1.1 人脐带动、静脉（或其它大血管） a．在37℃水浴中，预热培养用的所有无菌溶液，备用。 b．在无菌条件下，取健康产妇分娩后新鲜的婴儿脐带（25cm左右，不超过6h），选择无夹痕、无扭曲、无凝血阻塞的部分，放入含有100 U/ml的青霉素和100 μg/ml链霉素的D-Hanks液中，在脐静脉或脐动脉的两端插入磨平的注射器针头用丝线扎紧，用注射器从一端注入D-Hanks液冲洗血管，直到流出的液体无血迹。

(初试科目) 细胞生物学专业 864-细胞生物学

湖南师范大学硕士研究生入学考试自命题考试大纲考试科目代码：[864] 考试科目名称：细胞生物学 一、考试形式与试卷结构一 1)试卷成绩及考试时间 本试卷满分为150分，考试时间为180分钟。 2)答题方式 答题方式为闭卷、笔试。 3)试卷内容结构 各部分内容所占分值为： 细胞生物学基本概述、细胞基本特性及研究方法约30分 细胞膜及物质的跨膜运输约25分 细胞的内膜系统及各细胞器约50分 细胞增殖、分化、衰老、凋亡及其社会联系与信号转导约45分 4)题型结构 名词解释题：10小题，每小题4分，共40分 专业英文词语翻译成中文：10小题，每小题2分，共20分 简答题：6小题，每小题5分，共30分 论述题：3小题，每小题20分，共60分 二、考试内容与考试要求 （一）细胞生物学基本概述、细胞基本特性及研究方法 考试内容： 细胞生物学研究的内容与现状；细胞学与细胞生物学发展简史；细胞的基本概念；原核细胞与古核细胞；真核细胞；非细胞形态的生命体－病毒与细胞的关系；细胞形态结构的观察方法；细胞组分的分析方法；细胞培养、细胞工程与显微操作技术。

考试要求： 1、了解细胞生物学研究的内容、现状及发展。 2、掌握细胞的基本概念、基本共性及理解细胞是生命活动的基本单位；掌握病毒的基 本分类及特征，理解病毒及其与细胞的关系；掌握真核细胞、原核细胞的结构 特征及进化上的关系；细胞生命活动的基本含义。 3、了解和掌握细胞生物学研究领域所使用的实验技术的基本原理和应用；理解细胞组 分的分析方法；掌握细胞培养类型和方法及细胞工程的主要成就。 （二）细胞膜及物质的跨膜运输 考试内容： 细胞质膜的结构模型；生物膜基本特征与功能；细胞骨架；膜转运蛋白与物质的跨膜运输；离子泵和协同转运；胞吞与胞吐作用。 考试要求： 1、了解生物膜的结构模型、组成与功能等基本知识。 2、掌握物质的跨膜运输的方式、特点、作用机理及生物学意义。 （三）细胞的内膜系统及各细胞器 考试内容： 细胞质基质的涵义与功能；细胞内膜系统及其功能；细胞内蛋白质的分选与膜泡运输；线粒体与氧化磷酸化；叶绿体与光合作用；线粒体和叶绿体是半自主性细胞器；线粒体和叶绿体的增殖与起源；微丝与细胞运动；微管及其功能；中间丝；核被膜与核孔复合体；染色质；染色质结构与基因活化；染色体；核仁；核糖体的类型与结构；多聚核糖体与蛋白质的合成。 考试要求： 1、掌握细胞质基质的涵义、功能及细胞质基质与胞质溶胶概念；掌握内质网的基本类型、 功能及与基因表达的调控的关系；掌握高尔基复合体的形态结构和高尔基体的极性特征、膜泡运输的分子机制高尔基体的功能以及它和内质网在功能上关系、高尔基体与细胞内的膜泡运输及内膜系统在结构、功能上的相互关系；掌握溶酶体与过氧化物酶体的差异以及后者的功能发生；了解细胞内蛋白质的分选与细胞结构的装配。 2、掌握真核细胞内两种重要的产能细胞器——线粒体和叶绿体的基本结构特征与功能机

细胞工程简介 (1)

细胞工程 主讲人王文星 学前导引 本课程为必修考试课,理论授课32学时，期末考试闭卷 总成绩为100分：出勤+课堂提问占10%, 平时测验占20%,期末试卷占70%. 平时测验1～次,随堂考试,闭卷. 选用教材: 安利国,杨桂文.?细胞工程?第3版，科学出版社，2016 主要参考教材: 李志勇.?细胞工程?第2版，科学出版社，2010 殷红.?细胞工程?第2版，化学工业出版社，2013 第1章细胞工程简介 内容提要 一、定义五、主要研究内容 二、与其它生物工程的关系六、重要应用 三、发展历史七、本章小结 四、研究对象八、思考题 一、细胞工程定义 细胞工程：应用细胞生物学和分子生物学的方法，通过类似于工程学的步骤，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获取新型生物或特种细胞产品的一门科学技术。 广义的细胞工程：包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术，狭义的细胞工程则是指细胞融合和细胞培养技术。 二、细胞工程与其它生物工程的关系 生物化学工程为基因工程、细胞工程、微生物工程、蛋白质工程、酶工程、代谢工程提供产业化技术支持。

基因工程技术为细胞工程提供转基因细胞。 细胞工程技术为微生物工程、酶工程及工程产业化提供充足的 经过遗传改良和性状稳定的微生物、动植物细胞原料。 总结：细胞工程技术是现代生物工程技术各领域连接的桥梁和 纽带；与其它生物工程技术是密切联系，不可分割的有机整体。 三、细胞工程发展历史 细胞工程的理论基础是细胞学说和细胞全能性学说。 在植物学界，100年前，德国学者Haberlandt(1902)发表了着名 的论文《植物细胞离体培养实验》，提出了细胞全能性的观点。 20AD中叶，植物细胞组织培养与细胞的遗传操作相结合，发展 成为植物细胞工程。 20AD60s末兴起的植物单倍体技术是一项在植物育种上用途广 泛的细胞工程技术。 20AD90s以来，虽然基因工程成为生物技术的主流，但是细胞工 程并为失去独立存在价值，它继续在优良苗木繁育、农作物育种和 植物天然药物的开发中起着举足轻重的作用。 在动物学界，1907年美国学者哈里森等人采用盖玻片悬滴培养 蛙胚神经组织，存活数周，而且观察到生长现象，从而开创了动物细 胞培养的先河。 1965年，哈利斯和沃特金斯证明了灭活的病毒在控制的条件下 可以用来诱导动物细胞的融合。至此细胞融合作为一个重要的研究 领域已经引起人们的浓厚兴趣。 20AD70s初，诞生了细胞拆合工程。1972年，Prescott等人首先应用离心技术结合细胞松弛素B分离哺乳类细胞的胞质体获得成功，为研究哺乳类细胞核、质相互关系、细胞质基因的转移开创了新的途径。 近年来，细胞工程取得了迅速发展。如试管植物、试管动物、克隆动物、转基因生物反应器、干细胞等等。其中最具代表性的成就有：1977年，英国采用胚胎工程技术成功培育出世界首例试管婴儿。1997年英国利用成年动物体细胞首次克隆出绵羊“多莉”。2001年英国又宣布成功培育出世界首批转基因猪。2008年：美国科学家利用人胚胎干细胞可以在实验室培育出有携带氧功能的成熟红细胞，这个成果将可能解决个别血型血源紧缺的问题，也可帮助避免输血相关疾病的发生；美国研究人员在患糖尿病的老鼠身上做实验，将普通细胞转化成可分泌胰岛素的胰岛β细胞，减轻了病情。这一研究利用基因重组技术，实现不同种类成体细胞间直接转化，代表再生医学的重大进步。 细胞工程发展历史 2009年，马萨诸塞州总医院(MGH)的研究人员找到一种成功地体外培养肝细胞的方法，培养的肝细胞具有药物毒性筛选功能。研究报告详细介绍了肝细胞如何在高氧条件和无动物血清的条件下生长，并如何快速发挥正常肝脏所具有的功能。 2010年，科学家首次实现将多功能干细胞变成功能性人体肠道组织。 2011年，肿瘤的细胞免疫治疗研究进展：细胞免疫疗法能够靶向肿瘤细胞而不伤及正常组织细胞，并可产生免疫记忆来预防肿瘤复发，有可能成为肿瘤治疗的第四种方法。四、细胞工程的研究对象 细胞或其组成部分和构成的组织、器官等如染色体、细胞核、原生质体、整个细胞、受精卵、胚胎、组织或器官。 五、细胞工程的主要研究内容

从二维到三维细胞培养的变迁

从二维到三维细胞培养的 变迁 Newly compiled on November 23, 2020

细胞培养技术进展概述及分析 细胞培养一直是细胞生物学中基础且核心的部分。无论是进行细胞性状研究，还是进行细胞产物的研发，都需要以细胞体外扩增技术-即细胞培养技术为基础。随着生命科学的发展，细胞培养技术更是被广泛应用于生物学、、新药研发等多个领域，成为生命科学最重要的基础技术之一。 传统的细胞培养即细胞的平面培养，细胞在培养过程中只能沿平面延伸，属于细胞的二维培养技术。这种培养方式经济、便利、易操作，符合某个历史阶段对细胞培养技术的要求。但随着研究的深入，传统的二维培养技术已经不能满足细胞培养需求。盖因生物体内的细胞是在立体三维的微环境中生长的，二维培养微环境与体内微环境差异太大，影响细胞的基因表达、信号转导等，导致所培养的细胞逐渐丧失其在生物体内的生物学特性及功能，失去研究及应用价值。传统的二维培养技术，已经成为细胞学为基础的众多学科进步的壁垒之一。 科学家开始寻求更贴近自然状态的细胞培养技术。一种与活体组织内的细胞外基质相似的，能更好的模拟细胞在体内生长环境的培养技术，即细胞的三维培养技术。 目前已开发出很多细胞三维培养技术，大致可分为需要支架的三维培养技术和不需要支架的三维细胞培养技术。支架类主要是在三维空间内构建供细胞附着和生长的类似脚手架的多孔结构, 细胞依附于支架进行三维生长和迁移, 主要的支架材料有胶原和水凝胶等；而不需要支架的三维培养技术主要是通过物理方法使贴壁细胞悬浮于培养基中以达到三维培养的目的, 目前主要的技术有微载体、磁悬浮、悬滴板和磁性三维生物印刷等技术。

高中生物 第二章 课时6 细胞工程概述课后作业(含解析)苏教版选修3

第二章细胞工程 第6课时细胞工程概述 目标导航 1.了解细胞工程的发展历程。2.简述细胞工程的基本技术，如植物细胞与组织培养技术、细胞融合技术、细胞核移植技术、染色体工程等。3.了解细胞融合的方法。 4.举例说出细胞工程在遗传育种、生产药品、食品等方面的应用。 一、细胞工程的发展 1．1907年，哈里森采用____________培养蛙胚神经组织细胞，开创了动物____________的先河。 2．1937年，高特里特等人培养了____________，首次成功进行____________________。 3．1972年，卡尔逊用____________作为促融合因子，成功的将两个不同种的烟草细胞____________融合，获得了第一个____________________。 4．1997年伊恩·维尔穆特利用成年芬兰白面母羊________________与黑面母羊的____________首次克隆出绵羊“多利”。 二、细胞工程的基本技术 1．细胞工程的概念：以__________为基本单位，在体外________条件下进行培养、繁殖或利用__________、________等技术，使细胞某些____________按照人们的意愿发生改变，从而改良____________、创造新品种和加速繁育生物个体，以及获得某些有用的________________的技术。 2．分类 (1)根据研究对象的不同：分为__________________、________________和微生物细胞工程。 (2)根据所用技术的不同：分为植物______________、____________、____________、____________等。 3．细胞工程的基本技术 (1)植物细胞与组织培养技术：是在______条件下分离植物____________，将其放在适当的培养基上，给予必要的生长条件，使它们在体外继续____________________，形成新的____________________的技术。 (2)细胞融合技术：采用________________的方法使____________不同细胞融合为____________的技术。融合方法有________、________和________。 (3)细胞核移植技术：是将一个细胞的________转移到另一个去除细胞核的细胞中去，从而使受体细胞获得________________，产生新的生命现象的技术。 (4)染色体工程：是人们按照一定的设计，有计划地____________________同种或异种染色体，从而达到____________________和选育新品种的一种技术。 三、细胞工程的应用及与其他生物工程的关系 1．细胞工程的应用：(1)快速培养花卉及____________。(2)获得________作物。(3)开发____________，减少环境污染。(4)繁殖______________及__________。 2．细胞工程与其他生物工程的关系 (1)细胞工程利用基因工程中的________________实现转基因植物和动物的培养；(2)细胞工程中获得的新细胞株可用于____________生产______________；(3)细胞工程还为____________提供了稳定的培养对象，以完成生物制品的规模化生产。 知识点一细胞工程和细胞工程的发展 1．下列技术中，一般不属于细胞工程的是( ) A．1907年哈里森进行的蛙胚神经组织培养

细胞生物学综述

细胞生物学综述 摘要： 细胞生物学是以细胞为研究对象，从细胞的整体水平、亚显微水平、分子水平等三个层次，以动态的观点，研究细胞和细胞器的结构和功能、细胞的生活史和各种生命活动规律的学科。本文以细胞生物学简史为起点，接着介绍经济时代细胞生物学的特点，最后结合我国情况介绍了我国细胞生物学的发展战略。 关键词：细胞生物学简史特点发展战略 正文： 细胞生物学是以细胞为研究对象，从细胞的整体水平、亚显微水平、分子水平等三个层次，以动态的观点，研究细胞和细胞器的结构和功能、细胞的生活史和各种生命活动规律的学科。细胞生物学是现代生命科学的前沿分支学科之一，主要是从细胞的不同结构层次来研究细胞的生命活动的基本规律。从生命结构层次看，细胞生物学位于分子生物学与发育生物学之间，同它们相互衔接，互相渗透。 细胞生物学简史 细胞生物学虽说是一个比较年轻的学科，从学术思想上却可以追溯到较早的年代。1883年德国胚胎学家W.鲁就阐述过关于遗传和发育的设想。他假定受精卵中包含着所有的遗传物质，后者在卵裂时不是平均地分配到子细胞中，这种不同质的分裂决定子细胞及其后代的命运。德国动物学家魏斯曼发展了这种想法，提出了种质学说，认为裂球的不均等分裂导致了细胞的分化。虽然这些见解都已证明是错误的，但是可以看出细胞生物学所要解决的问题在那时已被提出来了。以后E.B.威尔逊1927年在他的《细胞──在发育和遗传中》的巨著中明确指出：细胞是生命活动的基本单位，发育和遗传这些生命现象应当在细胞上研究。1934年，美国遗传学家和胚胎学家T.H.摩尔根在遗传学取得巨大成就之后，在企图融合发育与遗传的《胚胎学与遗传学》一书中写道：“可以设想，各原生质区域在开始时的差异会影响基因的活动，然后基因又反转过来影响原生质，后者就开始一系列新的、相应的反应。这样，我们可以勾画出胚胎各部分的逐步建立和分化。”但在摩尔根的年代，由于细胞学和其他相邻学科还未发生密切的联系，或者说其他学科尚未能在细胞水平上开展关于发育和遗传的研究，所以细胞生物学只能在50年代之后，各方面的条件逐渐成熟了，才得以蓬勃发展。 经济时代下细胞生物学的特点： 一、生物产业推动产业革命，创造新的经济生长点。生物芯片已广泛应用于科研、医疗、农业、食品、环境保护、司法鉴定等领域，将会成为与微电子芯片一样重要的产业；转基因动植物的市场前景广阔，2004 年全球转基因作物的种植面积已经达到8100万公顷。 二、推动医学革命，延长人类寿命。20世纪初人类平均寿命约为40多岁左右，抗生素和疫苗的应用、医疗技术的提高和公共卫生观念的提出使人类摆脱了传染病的威胁，人类平均寿命逐渐提高，20世纪末人类平均寿命达到70多岁。

细胞色素C的制备及鉴定

细胞色素C的制备及提取 一、实验目的 (1 ) 了解细胞色素C的理化性质。 (2）通过细胞色素C的制备，了解制备蛋白质制品的一般原理和步骤 （3）掌握制备细胞色素C的操作 二、实验原理 细胞色素是一类含有铁啉基团的电子传递蛋白，只存在于需氧细胞中。细胞色素在线粒体内膜上起传递电子的作用。细胞色C (cytochrome c) 是细胞色素一种。它在线粒体呼吸链上位于细胞色素B 和细胞色素氧化酶之间，是呼吸链的一个重要组成部分，细胞色素C 的作用是在生物氧化过程中传递电子。每分子细胞色素C含有一个血红素和一条多肽链。细胞色素C分子中含赖氨酸较高，所以等电点偏碱，为PH10.8，易溶于水及酸性溶液，且较稳定，不易变形，用酸性水溶液即能从细胞中浸提出来。细胞色素C在心肌组织和酵母中含量丰富，猪心细胞色素C相对分子质量为12200，酵母细胞色素C相对分子质量为13000左右。 细胞色素C分为氧化型和还原型两种，因为还原型较稳定并且易于保存，一般都将细胞色素C制成还原型的，氧化型细胞色素C在408nm、530nm有最大吸收峰，还原型细胞色素C的最大吸收峰为415nm、520nm、550nm，这一特性可用于细胞色素C的含量测定。 通常外源性的细胞色素C不能进入健康细胞的，但在缺氧时，细胞膜的通透性增加，细胞色素C可能进入细胞及线粒体内，增强细胞氧化，提高氧的急救和辅助治疗。细胞色素C可作为细胞呼吸激活剂，常用于组织缺氧的急救和辅助用药，适用于治疗由脑缺氧、心肌缺氧和其他组织缺氧引起的一系列症状。 细胞色素C注射液为细胞色素C的灭菌水溶液，内含物的稳定剂双甘氨肽和抗氧化剂亚硫酸氢钠，为橙红色的澄明液体。注射液细胞色素C系用细胞色素C加适宜的赋形剂和抗氧剂，用经冷冻干燥制得的无菌制品，为桃红色冻干块状物，易溶于水。本实验以猪心为材料，经过酸溶液提取、人造沸石吸附、硫酸铵溶液洗脱、三氯醋酸沉淀等步骤制备细胞色素C，并测定其含量。 三、实验试剂、仪器与材料 1、材料：冰冻猪心、人造沸石、纱布、阳离子交换树脂AmberliteIRC-50 2、试剂：硫酸、氨水、氯化钠、硫酸铵、氢氧化钠、三氯醋酸、亚硫酸氢钠、双甘肽。 3、仪器：绞肉机、磁力搅拌器、色谱柱、酸度计、电子天平、烧杯、量筒、透析袋。 四、实验步骤 1、材料处理 取冰冻猪心，除去脂肪和韧带，用水洗去积血，将猪心切碎，放入绞肉机中绞碎。 2、提取、压滤 称取绞碎猪心肌肉，加1.5倍蒸馏水，搅拌均匀，用2mol/l的H2SO4调PH至4.0（此时溶液呈暗紫色），在温室条件下搅拌提取2h，提取过程中，使抽提液的PH值保持在4.0左右。用八层普通纱布压挤过滤，收集滤液，用1mol/l氨水(NH4OH)调PH至6.2离心，分离取清夜。滤渣加入等量蒸馏水，再按上述条件提取一次，两次提取液合并。 猪心__绞碎__碎肉__加入H2SO4,提取，压滤__滤液__NH3.H2O,PH6.2,分离__提取液 3、中和 将上述提取液用2mol/lNH4OH调至PH7.2，在水浴中静置沉淀蛋白质（此时，等电点接近7.2的一些杂蛋白溶解度小，从溶液中沉淀下来），30—40min后过滤，所得滤液准备通过人

天然色素概论(第一版)

天然色素讲座 大家好！本讲座内容部分来自于网络和相关书籍，部分是个人长期实践的一些经验，希望对大家会有所帮助，由于个人知识有限，错误和纰漏在所难免，借此机会向大家学习，补充自己的不足。 第一章简单的色彩常识 第一节简单的色彩理论(基础) 色彩理论包含多种定义，概念以及设计应用，如果罗列所有的资料那可能将会是一本百科全书，做为引言，这里只讲几个基本概念。 色轮 彩圈，基于红、黄、蓝，是在传统的艺术领域。1666年科学家牛顿首次研制圆形色圈，自此科学家和艺术家的研究和设计在此概念上不断发展，各种观点层出不穷，事实上，任何色圈或色轮的形成逻辑都是按照颜色的阴暗进行顺序排列。 原色 红色,黄色和蓝色

在传统色彩理论,这3中颜色不能形成任何组合，或混合成其他颜色。然后其他所有的颜色正都是由这3种颜色派生的。 第二级色彩 绿色、紫色、橙色 专色（改为：第三级色彩） 黄橙、红橙色、红紫色、蓝紫色、蓝绿色、黄绿色。 这些颜色形成了原始的和初级的颜色，这也是为什么这些色调是两个颜色字组成的颜色。如蓝绿色、红紫色、黄橙色。 第二节色彩的和谐,色彩调和（COLOR HARMONY） 和谐可以理解为把整体里的部分合理的安排，无论是音乐、诗歌、颜色、甚至是冰淇淋，在视觉效果里，就是一些东西让人看得觉得非常舒适，愉快。它使观察者从内心里有一种秩序感以及平衡的视觉效果。当一些东西并不和谐的时候，就会觉得它混乱并且沉闷。一个极端的视觉效果就是观察者觉得一切都很平常，很普通，人类大脑就不会受这些信息的刺激，另一个极端就是视觉刺激过了头，让人觉得非常混乱，甚至无法忍受。人类大脑也不知道什么不能排斥，什么不能

细胞色素C的制备测定及SDS—PAGE纯度鉴定

细胞色素C的制备测定及SDS—PAGE纯度鉴定 摘要：本文研究细胞色素C的制备及测定方法和SDS-PAGE测定蛋白质分子质量及纯度鉴定，以猪心未原料，采用离心、透析、抽提、抽滤、沉淀等技术，制备出细胞色素C，然后用消光法，紫外吸收法测得细胞色素C的产量，蛋白质的总含量。再运用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术测定细胞色素C的分子质量。实验结果细胞色素C的产量为8.84mg，产率为60.86mg/kg,蛋白质浓度为0.722mg/ml,纯度为38.04%，细胞色素C的分子质量为12417，相对误差为0.14%。 关键词：细胞色素C 离心抽提抽滤透析消光法紫外吸收法 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法纯度 前言：细胞色素C是一种细胞色素C(Cytochrome C)是以一种铁卟啉为辅基的呼吸酶,是呼吸链中的一个基本成分,广泛存在于所有的需氧组织中。一般说来,组织的细胞色素C的含量与它们的呼吸活性大致成平行关系,在心肌与其它作剧烈运动的肌肉中含量最为丰富。在细胞内细胞色素C位于线粒体的蛋白质—脂质络合物中,是线粒体电子传递链中重要成员,在生物氧化过程中起着重要作用。细胞色素C是一种细胞呼吸激活剂,早期研究发现在临床上细胞呼吸障碍引起的一系列缺氧状态,在使用细胞色素C后就可以纠正其物质的代谢,使细胞恢复正常呼吸,病情得到缓解或痊愈目前在临床上虽非特效药物，但可用于缺氧急救、解毒及其辅助治疗，是治疗组织缺氧及由缺氧所引起的一系列症状的重要生物药品。本实验以猪心为原料，向心肌中加入三氯乙酸溶液中，一起进行匀浆，大部分的蛋白质都沉淀下来，细胞色素C则存留在三氯乙酸溶液中。将硫酸氨粉末加入到三氯乙酸抽提液中，硫酸铵与抽提液中的肌红蛋白，血红蛋白等一起沉淀下来，细胞色素C则仍留于溶液中。进一步用三氯乙酸酸化此溶液，细胞色素C就沉淀出来，然后透析并鉴定之。鉴定及测定细胞色素C用消光法。在550毫微米波长下，细胞色素C的克分子消光值为：氧化型细胞色素C：K1=0.9*10^4/克分子/厘米，还原型细胞色素C：K2=2.77*10^4/克分子/厘米，样品较纯时，从氧化型转变为还原型或者还原型转变为氧化型，消光值的情况相同。由于在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶中加入了离子去污剂和强还原剂，使SDS蛋白质络合物所带的负电荷大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，消除了不同分子之间原有的电荷差别，其电泳迁移率主要取决于亚基分子质量的大小。当蛋白质的分子质量在15KD到200KD之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系。 正文： 1.材料与方法 1.1原料：农贸市场购买的猪心 1.2仪器：PHILIPS 组织捣碎机 SHZ-D（Ⅲ）循环式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司） LXJ-ⅡB 离心机（上海安亭科学仪器制造厂） 透析袋 MD44 V-2100 紫外分光光度计（尤尼柯（上海）仪器有限公司） 721分光光度计（上海第二仪器制造厂） JB-3型定时恒温磁力搅拌器（上海雷磁新泾仪器有限公司）