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预染低分子量蛋白质Marker(14.4kD-97.4kD)使用说明

预染低分子量蛋白质Marker(14.4kD-97.4kD)使用说明
预染低分子量蛋白质Marker(14.4kD-97.4kD)使用说明

预染低分子量蛋白质Marker(14.4kD-97.4kD)使用说明

货号:PR1600

保存:-20℃保存,有效期1年。避免反复冻融,建议分装冻存。

规格:20T(200μ1)

产品简介:

预染低分子量蛋白质Marker包含6种预染的已知分子量的标准蛋白质,每种含量约为40ug,原分子量范围为14.4kD-97.4kD,预染后分子量会稍有变化。可以用于直接观察蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot的转膜效果。经SDS-PAGE凝胶电泳后转移到PVDF或NC膜上可得到清晰的6条蓝色为的蛋白条带。

使用说明:

1.开封后,加入200μl的1×蛋白上样缓冲液,于沸水浴加热3-5分钟,根据需要进行小量分装,每管10μl,-20℃贮存,每次取一管使用。

2.如长期贮存后使用,使用前最好取分装后的小管沸水浴预热3-5分钟后再上样电泳。

3.建议分离胶浓度为12%。

成分原分子量(kDa)预染后分子量(kDa)

兔磷酸化酶B97.499.0

牛血清白蛋白66.270.0

兔肌动蛋白43.043.0

牛碳酸酐31.031.0

人生长激素22.024.0

鸡蛋清溶菌酶14.415.0

注意:蛋白Marker95℃加热是必需的,否则电泳后一些蛋白会沉积在分离胶的上沿,出现一条蛋白质杂带。

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彩虹130广谱蛋白marker说明书

彩虹130广谱蛋白marker说明书 货号:PR1950 规格:20T(100μL)/50T(250μL)/100T(250μL×2)/500T(250μL×10) 保存:-20℃保存,有效期至少2年。 产品特点: ●三色预染,颜色鲜亮,条带整齐,便于观察。 ●用量少,节约成本,仅5ul即可完美呈现(1.5mm,10孔梳)。 ●广谱多带,一支即可满足多种实验需求。 产品简介: 本产品包含9种彩色预染的已知分子量标准蛋白,分子量范围为15kD-130kD,每种蛋白含量约为 0.2-0.4mg/ml。预染marker可以用于直接观察蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot的转膜效果。经SDS-PAGE凝胶电泳或转移到PVDF或NC膜上可得到清晰的9条彩色蛋白条带,其中70kD条带为红色,25kD条带为绿色,其余条带为蓝色。 使用说明: 1.本产品是即用型液体,可直接上样电泳。上样前无需加热,稀释或添加还原剂。 2.上样5ul,SDS-PAGE电泳过程及转膜后可看见清晰的彩虹条带。 3.建议分离胶浓度为15%。 电泳示意图说明: 第1页,共2页

第2页,共2 页注意事项: 1.本产品含有较高浓度甘油,常规-20℃保存为液体状态,可直接使用。若冰箱温度不稳,导致结冰,可 适当分装后置于4℃保存,至少稳定6个月。 2.Marker分离效果与PAGE胶浓度相关,若分离胶浓度低于15%,25kD以下条带不易分离,但不影响绿色 (25KD)及以上条带。如果目的条带小于25KD,建议分离胶浓度大于或等于15%。 3.转膜效果与转膜时间有关,需根据客户目的条带大小而定,如果转膜后较大分子量条带有部分未转膜 成功,属于正常现象。

SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量实验报告

SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量 一、前言 聚丙烯酰胺凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳,简称PAGE,是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成,聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种:化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵(APS)为催化剂,以四甲基乙二胺(TEMED)为加速剂。在聚合过程中,TEMED催化过硫酸铵产生自由基,后者引发丙烯酰胺单体聚合,同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联,从而形成三维网状结构。 PAGE根据其有无浓缩效应,分为连续系统和不连续系统两大类,连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同,带电颗粒在电场作用下,主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成分,pH,凝胶浓度及电位梯度的不连续性,带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应,分子筛效应,还具有浓缩效应,因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶,凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HCl。分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶,凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HCl。电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性,这是样品浓缩的主要因素。

SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇,二硫糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。 SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统,与连续缓冲系统相比,能够有较高的分辨率。 浓缩胶的作用是有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCl缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后,HCl解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷,因此一起向正极移动,其中氯离子最快,甘氨酸根离子最慢,蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大,超过蛋白,因此在后面形成低电导区,而电场强度与低电导区成反比,因而产生较高的电场强度,使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动,形成一稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。 此鉴定方法中,蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量,而与所带电荷和分子形状无关。 聚丙烯酰胺凝胶电泳作用原理 聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应。它有两种形式:

考马斯亮蓝染色套装使用说明

考马斯亮蓝染色套装使用说明 货号:P1305 保存:室温保存,至少一年有效。 规格:100ml+500ml 产品简介: 本考马斯亮蓝染色套装(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的 考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝G-250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western 转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。 产品内容: 考马斯亮蓝染色液100ml 考马斯亮蓝脱色液500ml 说明书1份 使用方法: 1、电泳结束后,取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中(至少5倍胶体积),确保染色液可以充分覆盖凝胶。 2、将凝胶置于摇床上缓慢摇动,室温染色至少2小时,低丰度蛋白染 色需4小时以上。 3、染色结束后移除染色液,染色液通常可重复利用2-3次,但染色效

果会略有影响。 4、将凝胶浸泡于和染色液等量体积的脱色液中,摇床上脱色4-8小时,期间更换3-5次脱色液。 注意事项: 1.染色时间4小时以上效果最佳。 2.脱色可根据目的蛋白丰度和脱色效果随时终止,或延长脱色时间。 3.脱色越彻底,检测的蛋白量越低,脱色24小时一般可以检测出0.1ug蛋白量。 4.脱色后,将凝胶保存在水中,拍照或扫描保存图像。或制成干胶保存。 相关试剂: P1300-500考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液 PC0020BCA蛋白浓度测定试剂盒 PR1400低分子量蛋白MARKER PR1700预染次高分子量蛋白MARKER I1020IPTG溶液(50mg/ml) A101030%丙烯酰胺(29:1) T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 P1300SDS-PAGE凝胶制备试剂盒

蛋白质含量测定方法及其比较资料2

蛋白质含量测定法(一) 蛋白质含量测定法,是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法,即定氮法,双缩脲法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法,即考马斯亮蓝法(Bradford法)。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高,比紫外吸收法灵敏10~20倍,比Biuret法灵敏100倍以上。定氮法虽然比较复杂,但较准确,往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。 五种蛋白质测定方法比较

值得注意的是,这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质,因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定,有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的,都有其优缺点。在选择方法时应考虑:①实验对测定所要求的灵敏度和精确度;②蛋白质的性质;③溶液中存在的干扰物质;④测定所要花费的时间。 考马斯亮蓝法(Bradford法),由于其突出的优点,正得到越来越广泛的应用。 一、微量凯氏(Kjeldahl)定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨(消化),氨又与硫酸作用,变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例,其反应式如下: NH2CH2COOH+3H2SO4——2CO2+3SO2+4H2O+NH3 (1) 2NH3+H2SO4——(NH4)2SO4 (2) (NH4)2SO4+2NaOH——2H2O+Na2SO4+2NH3 (3) 反应(1)、(2)在凯氏瓶内完成,反应(3)在凯氏蒸馏装置中进行。 为了加速消化,可以加入CuSO4作催化剂,K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液,滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。 计算所得结果为样品总氮量,如欲求得样品中蛋白含量,应将总氮量减去非蛋白 氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量,即用样品中蛋白氮乘以6.25即得。 二、双缩脲法(Biuret法) (一)实验原理 双缩脲(NH3CONHCONH3)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能过一个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应。 紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有:硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速,但并不需要十分精确的蛋白质测定。 (二)试剂与器材

彩虹245广谱蛋白marker使用说明

彩虹245广谱蛋白marker使用说明 货号:PR1920 规格:20T(100μ1)/50T(250μ1)/100T(250μ1×2)/500T(250μ1×10) 保存:-20℃保存,有效期至少2年。 产品特点: ●三色预染,颜色鲜亮,条带整齐,便于观察。 ●稳定性能突出,经检测4℃放置两年无明显降解。 ●用量少,节约成本,仅5ul即可完美呈现(1.5mm,10孔梳)。 ●广谱多带,一支即可满足多种实验需求。 产品简介: 彩虹245广谱蛋白marker包含12种彩色预染的已知分子量标准蛋白,分子量范围为 11kD-245kD,每种蛋白含量约为0.2-0.4mg/ml。预染marker可以用于直接观察蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot的转膜效果。经SDS-PAGE凝胶电泳或转移到PVDF或NC膜上可得到清晰的12条彩色蛋白条带,其中25kD为绿色条带,75kD为红色条带,其余10条是蓝色条带。 使用说明: 1.彩虹245广谱蛋白marker是即用型液体,可直接上样电泳。上样前无需加热,稀释或添加还原剂。 2.上样5ul,SDS-PAGE电泳过程及转膜后可看见清晰的彩虹条带。 3.建议分离胶浓度为15%。 电泳示意图说明:

彩虹245广谱蛋白marker经15%浓度的SDS-PAGE凝胶电泳后,转移至PVDF膜上。 注意事项: 1,本产品含有较高浓度甘油,常规-20℃保存为液体状态,可直接使用。若冰箱温度不稳,导致结冰,可适当分装后置于4℃保存,至少稳定6个月。 2,Marker分离效果与PAGE胶浓度相关,若分离胶浓度低于15%,25kD以下条带不易分离,但不影响绿色(25KD)及以上条带。如果目的条带小于25KD,建议分离胶浓度大于或等于15%。3,转膜效果与转膜时间有关,需根据客户目的条带大小而定,如果转膜后较大分子量条带有部分未转膜成功,属于正常现象。 相关试剂: P10154×蛋白上样缓冲液(含DTT) P1300-1SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 D106010×电泳转移缓冲液 PR1910彩虹180广谱蛋白marker

4×蛋白上样缓冲液(含DTT)使用说明

4×蛋白上样缓冲液(含DTT)使用说明 货号:P1015 规格:10ml 保存:-20℃保存,建议分装冻存,避免反复冻融,自发货之日起至少12个月有效。 产品简介: 4×蛋白上样缓冲液(含DTT)适用于SDS-PAGE(SDS-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。其主要成份为SDS,DTT,溴酚蓝,缓冲盐溶液等。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。溴酚蓝用作电泳时的指示剂,可大概指示电泳结束的时间。 使用说明: 1、请按每30微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例(4倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高,可用双蒸水稀释。 2、混匀后,100℃水浴加热5-10分钟,使蛋白变性。 3、冷却至室温后,10000-14000rpm离心2-5分钟,取上清直接上样电泳即可。 注意事项: 4、聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右,胶浓度为12%时,约在20kd左右,胶浓度为15%时,大概在10kd。请根据自己目的条带来判断电泳时间。 5、本试剂因含DTT,有一定的毒性,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

6、蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂,PH值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液可能会呈现深棕色,不影响产品使用。 相关试剂: P10182×蛋白上样缓冲液(含DTT) P10174×非变性蛋白上样缓冲液 P001210×丽春红染色液 P1300-500考马斯亮蓝快速染色液 P1300SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 PR1700预染次高分子量蛋白MARKER

PH0302-超低分子量蛋白Marker II (3.4-100kD)使用手册

PH0302|超低分子量蛋白Marker II(3.4-100kD) Ultra Low Molecular Weight Protein Marker 货号:PH0302规格:?10T(50ul)保存:Store@-20℃ ◆产品简介 本产品包含5种多肽和3种低分子量蛋白质组成,分子量范围为3.4kD-100kD。可以用来判断SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。 ◆使用说明 第一次收到该产品,室温融化后,彻底混匀,离心快甩将溶液完全收集到管底,根据需要适量分装成小管,-20℃贮存,每次取一小管使用;本产品为即用型,融化后既能使用,不能95℃加热处理。 一.制胶: I配制分离胶 1.按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(19:1)、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。 2.加入10%APS和TEMED,立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。 3.在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液,然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的水层,使凝胶表面保持平整。4.静置30-60分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。 表一(一块0.75mm mini胶用量) 分离胶浓缩胶 18%T,5%C/6.0ml5%T,3.3%C/2ml 40%PAA(19:1) 2.7ml/ 40%PAA(29:1)/0.25ml 4×凝胶缓冲液 1.5ml0.5ml 乙二醇(电泳级) 1.8ml/ ddH2O/ 1.25ml 10%APS50-65μl20μl TEMED6μl2μl 注:如非必须,不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶,尽量使用厚度0.75mm的凝胶,这样会减少电泳后染色和脱色的时间。 II配制浓缩胶 去除覆盖在分离胶上的水层,用滤纸将残留的水吸去。 1.按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(29:1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。

蛋白质分子量测定:凝胶过滤层析法

蛋白质分子量测定:凝胶过滤层析法 一、目的: (1)初步掌握利用凝胶层析法测定蛋白质分子量的原理。 (2)学习用标准蛋白质混合液制作Ve,Kav对1gMr的“选择曲线”以及测定未知蛋白质样品分子量的方法。 二、原理: 凝胶层析法(即凝胶过滤法,gel filtration)是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法,又叫做分子筛层析法(molecular sieve chromatography),排阻层析法(exclusion chromatography)。凝胶本身是一种分子筛,它可以把分子按大小不同进行分离,好象过筛可以把大颗粒与小颗粒分开一样。但这种“过筛”与普通的过筛不一样。将凝胶颗粒在适宜溶剂中浸泡,使充分吸液膨胀,然后装入层析柱中,加入欲分离的混合物后,再以同一溶剂洗脱,在洗脱过程中,大分子不能进入凝胶内部而沿凝胶颗粒间的空隙最先流出柱外,而小分子可以进入凝胶内部,流速缓慢,以致最后流出柱外,从而使样品中分子大小不同的物质得到分离。分离过程中的示意见图17-1。 凝胶是由胶体溶液凝结而成的固体物质,不论是天然凝胶还是人工合成凝胶,它们的内部都具有很微细的多孔网状结构。凝胶层析法常用的天然凝胶是琼脂糖凝胶(agarose gel,商品名Sepharose),人工合成凝胶是聚丙烯酰胺凝胶(商品名为Bio-gel-P)和葡聚糖(dextran)凝胶,后者的商品名称为Sephadex型的各种交联葡聚糖凝胶,它是个有不同孔隙度的立体网状结构的凝胶,不溶于水,其化学结构式如图17-2所示。 这种聚合物的立体网状结构,其孔隙大小与被分离物质分子的大小有相应的数量级。在凝胶充分溶胀后,交联度高的,孔隙小,只有相应的小分子可以通过,适于分离小分子物质。相反,交联度低的孔隙大,适于分离大分子物质。利用这种性质可分离不同分子量的物质。 为了说明凝胶层析的原理,将凝胶装柱后,柱床体积称为“总体积”,以Vt(total volume)表示。实际上Vt是由Vo,Vi与Vg三部分组成,即: Vt=Vo+Vi+Vg Vo称为“孔隙体积”或“外体积”(outer volume)又称“外水体积”,即存在于柱床内凝胶颗粒外面空隙之间的水相体积,相应于一般层析法中柱内流动相的体积;Vi为内体 积(inner volume),又称“内水体积”,即凝胶颗粒内部所含水相的体积,相应于一般层析法中的固定相的体积,它可从干凝胶颗粒重量和吸水后的重量求得;Vg为凝胶本身的体积,因此Vt—Vo等于Vi+Vg 。它们之间的关系可用图17-3表示。洗脱体积(Ve,elution Volume)与Vo及Vi之间的关系可用下式表示: Ve=Vo+KdVi 式中Ve为洗脱体积,自加入样品时算起,到组分最大浓度(峰)出现时所流出的体积;Kd为样品组分在二相间的分配系数,也可以说Kd是分子量不同的溶质在凝胶内部和外部的分配系数。 它只与被分离物质分子的大小和凝胶颗粒孔隙的大小分布有关,而与柱的长短粗细无关,也就是说它对每一物质为常数,与柱的物理条件无关。Kd可通过实验求得,上式可改写成: 上式中Ve为实际测得的洗脱体积;Vo可用不被凝胶滞留的大分子物质的溶液(最好有颜色以便于观察,如血红蛋白,印度黑墨水,分子量约200万的蓝色葡聚糖-2000等)通过实际测量求出;Vi可由g·WR求得(g为干凝胶重,单位为克;WR为凝胶的“吸水量”,以毫升/克表示)。因此,对一层析柱凝胶床来说,只要通过实验得知某一物质的洗脱体积Ve,就可算出它的

次高分子量蛋白质 Marker (43kD-200kD)使用说明

次高分子量蛋白质Marker(43kD-200kD)使用说明 货号:PR1500 规格:10T 保存:-20℃可保存至少六个月。避免反复冻融,建议分装保存。 产品简介: 次高分子量蛋白质Marker包含5种蛋白质混合物,分子量范围为43kD-200kD,每种蛋白的含量约为20ug。经SDS-PAGE电泳,用考马斯亮蓝染色后可以得到分布均匀密度相近的5条带。可以用来判断SDS-PAGE电泳后蛋白质的分子量。 本产品配有一支蛋白上样缓冲液(150ul)。 使用说明: 将两支试剂开启,取110ul蛋白上样缓冲液加入蛋白Marker干粉中,混匀,取出液体,置于 1.5ml离心管中,100℃沸水浴加热5分钟,冷却后根据需要分装成小管,建议每管分装10μl,-20℃贮存,每次取一管使用。 注:如长期贮存后使用,使用前最好取分装后的小管99℃预热3分钟后再上样电泳。 用考马斯亮蓝G-250染色后可见5条蛋白带(见下示意图)。

注意事项: 1.建议分离胶浓度7%,浓缩胶浓度4%,制胶时先配制分离胶,聚合后再配制浓缩胶。电泳时,80v电压大约跑1小时后,待指示剂沿到达分离胶上沿时,将电压调至120v,直到电泳结束。整个电泳过程大约需3-4个小时。 2.电泳之后可将胶进行染色观察,如果使用配方进行染色时效果不好或考虑其毒性,可以选择考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液,具有染色快,无毒,灵敏性高等特点,是常规染色液的替代品。 相关试剂: P10154×蛋白上样缓冲液(含DTT) T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 P1300-1SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 P1300-500考马斯亮蓝快速染色液

BCA微量蛋白浓度测定试剂盒使用说明

BCA微量蛋白浓度测定试剂盒 货号:PC0050 规格:500微孔(500T)/1000微孔(1000T)/2000微孔(2000T) 保质期:本试剂盒自订购之日起一年内有效。 产品内容: 包装500微孔1000微孔2000微孔保存 BCA试剂100ml2×100ml4×100ml室温 Cu试剂3ml6ml12ml室温 PBS稀释液30ml60ml120ml室温 BSA蛋白标准 0.3ml0.5ml1ml-20℃ (5mg/ml BSA) 产品简介: 碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+,Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂SDS,Triton X-100,Tween不影响检测结果,但受螯合剂(EDTA,EGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。实验中,若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高,可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。 操作说明: 一.微孔酶标仪法 1.配制工作液:根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂(50:1)配制成BCA工作液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)。BCA工

作液室温24小时内稳定。 2.稀释标准品:先用PBS将BSA标准品稀释至终浓度为0.8mg/ml备用。再依次稀释至80、40、20、10、5、2.5ug/ml.。 3.高浓度蛋白可将样品作适当稀释(最好多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。 4.各孔加入200微升BCA工作液和40ul稀释后的蛋白或标准品溶液,对照孔加入PBS稀释液。37℃放置4小时。用酶标仪测定A562nm,根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时,应注意防止因水分蒸发影响检测结果。 二.分光光度计法 如没有酶标仪,在离心管中混匀样品后加入比色皿,用分光光度计比色。 采用分光光度计测定蛋白浓度方法与酶标仪法相似,只需要按照分光光度计比色皿容量要求按照比例配置相应的BCA工作液和标准品溶液。 常规比色皿用量为200ul有样本加入1mlBCA工作液或400ul样本加入2mlBCA工作液。微量比色皿用量为20样本加入100ul BCA工作液。或根据仪器情况自行调整。 附:样本及标准品稀释示意图 样本管号A B C D E PBS稀释液用量180100100100…… 标准品用量20(原液) 100 (从A管吸出) 100 (从B管吸出) 100 (从C管吸出) …… 终浓度(ug/ml)80402010…… 注意事项:

蛋白标准品(Marker)知识汇总

蛋白Marker可分为:一、未预染的Marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。 在western blot 过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个Western Blot 参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量精确无误了,实验结果才有说服力,除此之外,蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用,所以选择正确的蛋白Marker也是western blot实验成功的必要条件之一。 总体来说,蛋白分子量标准可以分成未染蛋白分子量标准、预染蛋白分子量标准二个级别。以下是关于蛋白分子量标准的小叙: 一. 未染色(pre mixed)蛋白分子量标准 未染色的蛋白分子量标准是最简单,也是最准确的一种。由于没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,是精确判断蛋白大小必须的。现在的Marker多数都选用预混和的Marker,方便不同大小的蛋白比较。预混的Marker通常有几条带加倍浓度作为指示,因为混合的条带越多,越不好记,谁知道哪条是那条!数到眼都花了。所以当看到特别浓的那几条标志带就记得是哪里了。不过要记得,小带通常都不那么容易看清楚的。在选择上来说,当然是选择其中至少有一条条带和自己的目的蛋白大小相近的最好,越近越好。如果你的蛋白不幸在两条跨度较大Marker条带之间,选别的Marker吧。预混的Marker 使用上不如预染Marker(pre-stained)好用,因为电泳过程中完全看不到,要和目标蛋白一起等到最后染色才―开蛊‖,无法对实验起预示参照作用。完全属于―后知后觉‖型的,当然还是比―不知不觉‖不做对照的要好。 ①宽分子量蛋白标准

蛋白质相对分子质量的测定(SDS法)

蛋白质相对分子质量的测定 (SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法) 一、实验原理 蛋白质在十二烷基硫酸钠(SDS)和巯基乙醇的作用下,分子中的二硫键还原,氢键等打开,形成按1.4gSDS/1g蛋白质比例的SDS-蛋白质多肽复合物,该复合物带负电,故可在聚丙烯酰胺凝胶电泳中向正极迁移,且主要由于凝胶的分子筛作用,迁移速率与蛋白质的分子量大小有关,因此可以浓缩和分离蛋白质多肽。 聚丙烯酰凝胶电泳分离蛋白质多数采用一种不连续的缓冲系统,主要分为较低浓度的成层胶和较高浓度的分离胶,配制凝胶的缓冲液,其pH值和离子强度也相应不同,故电泳时,样品中的SDS-多肽复合物沿移动的界面移动,在分离胶表面形成了一个极薄的层面,大大浓缩了样品的体积,即SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩效应。 二、仪器及器材 垂直电泳槽及附件、直流稳压稳流电泳仪、移液器等。 三、试剂 1、凝胶贮备液:称取30g 丙烯酰胺(Acr)和0.8g 甲叉-双丙烯酰胺(Bis),蒸馏水溶解后定容至100mL,滤纸过滤贮存。 2、10% SDS:称取SDS 10g 加蒸馏水至100ml。 3、10%过硫酸胺(AP),用时现配。 4、N,N,N’,N’四甲基乙二胺(TEMED)。 5、电极缓冲液:3.03g Tris、14.14g甘氨酸、1.0g SDS溶于水,混匀后用HCL调节pH至8.3,加蒸馏水至1 000ml。 6、样品溶解(缓冲)液:0.6gTris、5mL甘油(丙三醇)1.0g SDS溶于水,混匀后用HCL调节pH至8.0,再加0.1g溴酚蓝、2.5mL巯基乙醇,定容至100mL。 7、下层胶(分离胶)缓冲液:18.17g Tris、0.4gSDS溶于水,混匀后用1mol/L HCL 调节pH至8.8,加蒸馏水至100ml。 8、上层胶(浓缩胶)缓冲液:6.06g Tris、0.4gSDS溶于水,混匀后用1mol/L HCL 调节pH至6.8,加蒸馏水至100ml。 9、固定液:25%异丙醇,10%乙酸。 10、染色液:0.125g考马斯亮蓝R-250加固定液250ml。 11、脱色液:冰乙酸75ml、甲醇50ml,加水定容至1000ml。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量

实验六报告: SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量 1.研究背景及目的 根据自然界中普遍存在的电泳现象,以及实践应用的需求,科学家不断完善了电泳技术,从移界电泳法、垂直管型盘状电泳、垂直板型电泳、垂直柱型盘状电泳到水平板型电泳。电泳技术广泛地应用于样品的分析鉴定。蛋白质分子量的测定在理论和实践中具有很重要的意义,比如临床中对于尿液中蛋白质分子量的测定可以监测人体内的某些疾病(肾小管损坏、多发性骨髓瘤等)。这种需要促进了相关技术的发明。具体过程见原理。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。从活性电泳到变性电泳经过了很多思考。从活性如果加入一种试剂使电荷因素及分子的形状消除,那电泳迁移率就取决于分子的大小,就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。 1967年,Shapiro等发现阴离子去污剂十二烷基硫酸钠(SDS)具有这种作用[1] 。 通过向样品中添加入巯基乙醇和过量SDS,使蛋白质变性解聚,并让SDS与蛋白质结合成 带强负电荷的复合物,掩盖了蛋白质之间原有电荷的差异。SDS与蛋白质分子结合,不仅 使蛋白质分子带上大量的负电荷,而且使蛋白质分子的形状都变成短棒状,从而消除了蛋白质分子之间原有的电荷差异和分子形状的差异。因此蛋白质在SDS-PAGE中的时迁移率 主要取于其分子大小。由于SDS与蛋白质的结合,电泳迁移率在外界条件固定的情况下,只取决于蛋白质分子量大小这一因素,使得SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳具有分辨率高、重复性好等特性,因此广泛应用于未知蛋白质分子量测定。通过本次实验,学习和掌握垂直板型聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理和方法,进一步学习和应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量。 2.原理 由于技术的发展,理论上可以通过测序测出蛋白质分子量的真值,但是实际操作过于繁琐,且生物大分子的数量级是KDa,实际中往往不需要特别精确。所以转向寻求其它方法,如果两种性质具有相关性,就会有相关理论基础和技术,发现分子量与迁移速率有关,于是寻找相关方面的技术。通过沉降平衡法测定分子量,但是需要很大的转速,且要考虑安全性和造价,于是舍弃;分子筛层析主要以分子量差异进行分离,可以用来测定分子量,但是需要很长的分离柱,分离速度较慢,还要测定OD值,操作麻烦,浪费时间,而且带 来的经济效益也不是很大;与此同时,电泳技术也发展起来,电泳相对时间较短,造价低,可操作性强。电泳与分子量、分子形状以及所带电荷量有关,其中含有分子量,理论上就可行了,于是用电泳测定分子量。首要矛盾是消除电荷差异和分子形状差异,从数学上彻底消除电荷效应是不可能的,使带电量相同也不可能实现,只有使分子带上非常大的电荷量从而使分子间的电荷差异可以忽略。想到通过引入外来物形成复合物,定量引入,定量结合,且结合后分子间差异并未发生改变。关于引入负电还是引入正电的问题,蛋白大多为球状,若结合后仍未球状,静电结合不稳定;双亲性物质彻底结合后破坏空间结构,所以引入负电,结合稳定。于是开始筛选阴离子去污剂,在众多的物质试验中,发现十二烷基硫酸钠(SDS)具有很好的效果。SDS通常与蛋白质以1.4:1的重量比结合,所引入净电 荷量约为蛋白质本身静电荷 10倍的静电荷,从而形成具有均一电荷密度和相同荷质比的SDS-蛋白质复合物,该复合物所带的电荷远远超过蛋白质原有的净电荷,从而消除或大大降低不同蛋白质之间所带净电荷

低分子量蛋白质Marker(14.4kD-97.4kD)使用说明

低分子量蛋白质Marker(14.4kD-97.4kD)使用说明 货号:PR1400 规格:20T 保存:-20℃可保存至少一年。避免反复冻融,建议分装保存。 产品简介: 低分子量蛋白质Marker包含6种蛋白质混合物的冻干粉,分子量范围为14.4kD-97.4kD,每种蛋白的含量约为20-30μg。经过SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶)电泳后,用考马斯亮蓝染色可以得到分布均匀密度相近的6条带。可以用来判断SDS-PAGE电泳后蛋白质的分子量。 使用说明: 1.开封后,溶于400μL体积的1×蛋白上样缓冲液(含巯基还原剂),于沸水浴中加热5分钟,冷却后可根据需要进行小量分装,每管20μL,-20℃贮存,每次取一管使用。 2.如长期贮存后使用,使用前最好取分装后的小管沸水浴预热3-5分钟后再上样电泳,用考马斯亮蓝G-250染色后可见6条蛋白带(见下示意图)。 注意事项: 1.建议分离胶浓度12%,浓缩胶浓度5%,制胶时先配制分离胶,聚合后再配制浓缩胶。电泳时,80v电压大约跑1小时后,待指示剂沿到达分离胶上沿时,将电压调至120v,直到电泳结

束。整个电泳过程大约需3-4个小时。 2.电泳之后可将胶进行染色观察,如果使用配方进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液,该试剂具有染色快,无毒,灵敏性高等特点,是常规染色液的替代品。 相关试剂: P10154×蛋白上样缓冲液(含DTT) P10164×蛋白上样缓冲液(含巯基还原剂) T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 P1300-1SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 P1300-500考马斯亮蓝快速染色液

高等生化实验报告:蛋白质分子量的测定

实验一蛋白质分子量的测定—凝胶层析法 一、原理 凝胶层析法也称分子筛层析法,是利用具有一定孔径大小的多孔凝胶作固定相的层析技术。当混合物随流动相经过凝胶层析柱时,其中各组分按其分子大小不同而被分离的技术。该法设备简单、操作方便、重复性好、样品回收率高。 凝胶是一种不带电的具有三维空间的多孔网状结构、呈珠状颗粒的物质,每个颗粒的细微结构及筛孔的直径均匀一致,像筛子,小的分子可以进入凝胶网孔,而大的分子则排阻于颗粒之外。当含有分子大小不一的蛋白质混合物样品加到用此类凝胶颗粒装填而成的层析柱上时,这些物质即随洗脱液的流动而发生移动。大分子物质沿凝胶颗粒间隙随洗脱液移动,流程短,移动速率快,先被洗出层析柱;而小分子物质可通过凝胶网孔进入颗粒内部,然后再扩散出来,故流程长,移动速度慢,最后被洗出层析柱,从而使样品中不同大小的分子彼此获得分离。若分子大小介于上述完全排阻或完全渗入凝胶的物质,则居二者之间从柱中流出。总之,各种不同相对分子质量的蛋白质分子,最终由于它们被排阻和扩散的程度不同,在凝胶柱中所经过的路程和时间也不同,从而彼此可以分离开来。 将凝胶装在柱后,柱床体积称为“总体积”,以Vt表示。实质上Vt是由Vo,Vi与Vg三部分组成,Vo称为“孔隙体积”或“外水体

积”,即存在于柱床内凝胶颗粒外面空隙之间的水相体积,相应于一般层析法中柱内流动相的体积;Vi为内体积,即凝胶颗粒内部所含水相的体积。Vg为凝胶本身的体积。洗脱体积(Ve)与Vo与Vi之间的关系可用下式表示:Ve=Vo+KdVi。 式中Ve为洗脱体积,自加入样品时算起,到组分最大浓度(峰)出现时所流出的体积;Kd为样品组分在二相间的分配系数,也可以说Kd是分子量不同的溶质在凝胶内部与外部的分配系数。它只与被分离的物质分子的大小和凝胶颗粒孔隙的大小分布有关,而与柱的长度粗细无关,也就是说它对每一物质为常数,与柱的物理条件无关。Kd可通过实验求得,上式可以改写为:Kd=(Ve-Vo)/Vi。 上式中Ve为实际测得的洗脱体积;Vo可用不被凝胶滞留的大分子物质的溶液(最好是有颜色以便于观察,如血红蛋白,印度黑墨水,分子量约200万的蓝色葡聚糖-2000等)通过实际测量求得;Vi可由g×Wr求得(g为干胶重量,单位为克;Wr为凝胶的“吸水量”,以毫升每克表示)。因此,对一层析柱胶床来说,只要通过实际实验得知某一物质的洗脱体积就可算出它的Kd值。 如果假定蛋白质分子近于球形,同时没有显著的水合作用,则不同大小分子量的蛋白质,在洗脱时峰的位置和该物质相对分子质量有直接的定量的关系。在一根凝胶柱中,凝胶颗粒间空隙所含水相体积为外水体积Vo,不能进入凝胶孔径的那些大分子,当洗脱体积为Vo 时,出现洗脱峰。 凝胶颗粒内部孔穴的总体积为内水体积Vi,能全部渗入凝胶的那

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定蛋白质分子量

实验七SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定蛋白质分 子量 实验数据: 标准蛋白质条带第一条第二条第三条第四条第五条 溴酚蓝前沿距离/cm 4.70 距离/cm 0.50 0.95 1.60 2.10 3.95 相对迁移率mr 0.11 0.20 0.34 0.45 0.84 分子量Mr 97400 66200 43000 31000 14400 LgMr 4.99 4.82 4.63 4.49 4.16 样品 1 2 3 溴酚蓝前沿/cm 4.90 4.80 4.60 样品迁移距离/cm 4.20 1.20 1.70 相对迁移率mr 0.86 0.25 0.37 标准曲线: y=5.05-1.10x

结果: 样品 1 2 3 Mr 12706 59566 43954 mr 4.104 4.775 4.643 一. 实验目的和要求 1 学习SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理。 2 掌握垂直板电泳的操作方法。 3 运用SDS-PAGE测定蛋白质分子量及染色鉴定。 二 .实验原理 带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移动,这种现象称为电泳。 区带电泳是在半固相或胶状介质上加一个点或一薄层样品溶液,然后加电场,分子在支持介质上或支持介质中迁移。支持介质的作用主要是为了防止机械干扰和由于温度变化以及大分子溶液的高密度而产生的对流。 区带电泳使用不同的支持介质,早期有滤纸、玻璃珠、淀粉粒、纤维素粉、海砂、海绵、聚氯乙烯树脂;以后有淀粉凝胶、琼脂凝胶、醋酸纤维素膜,现在则多用聚丙烯酰胺(PAGE)和琼脂糖凝胶。 PAGE根据其有无浓缩效应,分为连续系统和不连续系统两大类,连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同,带电颗粒在电场作用下,主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成分,pH,凝胶浓度及电位梯度的不连续性,带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应,分子筛效应,还具有浓缩效应,因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基磺酸钠), SDS能断裂分子内和分子间氢键,破坏蛋白质的二级和三级结构,强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂,蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中,与SDS分子按比例结合,形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物,这种复合物由于结合大量的SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块,从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异,由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的,因此在进行电泳时,蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。当分子量在15KD到200KD之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式:logMW=K-bX,式中:MW为分子量,X为迁移率,k、b均为常数,若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 SDS电泳的成功关键之一是电泳过程中,待别是样品制备过程中蛋白质与SDS的结合程度。影响它们结合的因素主要有三个: 1) 溶液中SDS单体的浓度,当单体浓度大于1mmol/L时大多数蛋白质与SDS结合的重量比为1:1.4,如果单休浓度降到0.5 mmol/L以下时,两者的结合比仅为1: 0.4这样就不能消除蛋白质原有的电荷差别,为保证蛋白质与SDS的充分结合,它们的重量比应该为1:4或1:3 2) 样品缓冲液的离子强度。SDS电泳的样品缓冲液离子强度较低,通常是10~ 100mmol/L 3) 二硫键是否完全被还原

Bradford蛋白浓度测定试剂盒使用说明

Bradford蛋白浓度测定试剂盒使用说明 货号:PC0010 规格:2500T 保存:开封使用后请密封保存,本试剂盒自订购之日起九个月内有效。 产品内容: 组成包装(2500微孔)保存 5×G250染色液100ml2-8℃ PBS稀释液30ml2-8℃ 蛋白标准(5mg/ml BSA)1ml-20℃产品简介: 考马斯亮蓝G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(Imax),由465nm变为595nm,在一定的浓度范围内,测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM,但受略高浓度的去垢剂影响,需确保SDS的浓度低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween20,60,80低于0.06%。 操作说明: 一.微孔酶标仪法 1.完全溶解蛋白标准品,取10ul,稀释至250ul,使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,也可以用0.9%NaCl 或PBS稀释标准品。

2.5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取1ml5×G250染色液,加入4ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。 3.将标准品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中,加PBS稀释液补足到20微升。 4.将样品作适当稀释(最好多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。 5.各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液,室温放置3-5分钟。 6.用酶标仪测定A595,或560-610nm之间的其它波长的吸光度。 7.根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。 二.分光光度计法 如无酶标仪,染色反应可在离心管中进行,反应液混匀后加入比色皿中,使用分光光度计测定吸光值。 步骤如下: 1.取八支(或者更多)干净的10ml离心管,标记上号。 2.取100ulBSA加入PBS2.4ml稀释至终浓度为0.2mg/ml。 3.5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取10ml5×G250染色液,加入40ml 双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。 4.按下表加入试剂(以每孔5ml计,多余的用来清洗比色皿)

碱基与蛋白换算

碱基与蛋白换算 创建者: zizip 最后修改: 2010-6-4 23:05:47 状态: 公开 核酸数据 (Nucleic Acid Data) Kd是kilodaltons的缩写,既千道尔顿。是氨基酸的分子量单位。 Kbs是千碱基对的意思,是核酸的单位名称。 1个脱氧核糖核酸碱基的平均分子量为333 Daltons(道尔顿) 1个核糖核酸碱基的平均分子量为340 Daltons(道尔顿) DNA与表达蛋白之间分子量换算: 1 kb DNA = 333 amino acid ≈3.7 × 104 Da(道尔顿) 10,000 Da Protein ≈ 270 bp DNA 30,000 Da Protein≈ 810 bp DNA 50,000 Da Protein ≈1350 bp DNA 100,000 Da Protein ≈ 27 kb DNA 一个DNA碱基对(钠盐)的平均分子量= 650 道尔顿 1.0 A260 unit ds DNA = 50 μg/ml = 0.15 mM (in nucleotides) 1.0 A260 unit ss DNA = 33 μg/ml = 0.10 mM (in nucleotides) 1.0 A260 unit ss RNA = 40 μg/ml = 0.11 mM (in nucleotides) 双链DNA分子的分子量(道尔顿) = 碱基对数目×650 双链DNA分子的末端摩尔数= 2 ×DNA质量(克)/ DNA分子量(道尔顿)限制性内切酶酶切后的DNA末端摩尔数: a) 环状DNA分子: 2 × DNA摩尔数×位点数 b) 线性DNA分子: 2 × DNA摩尔数×位点数+ 2 × DNA摩尔数 1 μg 1000 bp DNA = 1.5 2 pmol = 9.1 × 1011 molecules 1 μg pUC18/19 DNA (2686 bp) = 0.57 pmol = 3.4 × 1011 molecules

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