附子汤中单酯型生物碱含量测定及指纹图谱研究-张强
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第19卷 第9期 2017 年 9 月
辽宁中医药大学学报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 19 No. 9 Sep .，2017
附子汤首见于张仲景《伤寒论·辨少阴病脉证并治篇》[1]
，由附子、茯苓、人参、白术、芍药组成，具有温经助阳、祛寒除湿之功效，主治阳虚寒湿内侵证，具有抗炎镇痛的药理作用，并能显著改善心功能[2]
。附子的主要成分为二萜类生物碱，分为双酯型生物碱、单酯型生物碱和醇胺型生物碱，为附子汤抗炎、镇痛的主要化学成分。其中双酯型生物碱的活性最强，但毒性也最大，单酯型生物碱毒性显著降低，活性较强，而醇胺型生物碱毒性最小，活性也最小[3]。附子汤中所用附子为炮附子，其毒性显著降低，而主要药理作用未改变，仍具有显著的抗心力衰
竭、抗休克及镇痛作用[4]
。炮制后的附子所含双酯型生物碱被水解为单酯型生物碱[5]，因此本实验对附子汤中的单酯型生物碱进行了含量测定，为附子汤药理药效的研究提供依据。附子汤临床应用广泛，但与附子汤的物质基础和质量控制相关的报道较少。《中国药典》中收载了大部分应用较为广泛的中成药制剂，其中也包含了临床所用汤剂，如四逆
汤。指纹图谱作为国内外公认的控制中药质量均一
性和稳定性的最有效手段之一，能够综合评价中药质量，符合中医药整体观的基本理论，基于色谱分析法建立的附子汤指纹图谱，力求尽可能反映其整体化学成分，为中药复方质量控制提供参考，为规范其制剂标准奠定基础。
1 材料1.1?仪器
Agilent1260 型高效液相色谱仪（UV 检测器），FA/JA1004万分之一分析天平（上海天平仪器厂），AB-135S 十万分之一电子天平（METTLER 梅特勒集团），数显恒温水浴锅（金坛市杰瑞尔电器有限公司），旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂），戴安U3000型高效液相色谱仪（全自动进样，DAD 检测器），SKM 型数显恒温电热套（鄄城华鲁电热仪器有限公司）。
1.2?试药
附子汤药材（炮附子、茯苓、人参、白术、芍药），
附子汤中单酯型生物碱含量测定及指纹图谱研究
张强，巨博雅，韩素芹，王瑞
（山西中医学院，山西?晋中?030619）
摘 要：
目的：建立HPLC 法测定附子汤中苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱含量的方法，同时建立10批附子汤的指纹图谱。方法：应用高效液相色谱法，C18 色谱柱系统，采用梯度洗脱方法，对附子汤中单酯型生物碱进行了含量测定，同时建立了附子汤高效液相色谱指纹图谱方法。采用中国药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价软件，对10批附子汤样品的指纹图谱进行相似度评价。结果：在范围内，含量呈良好线性关系。指纹图谱相似度均在0.9以上。结论：建立的HPLC 法简便、可靠、准确，可用于附子汤中单酯型生物碱的含量测定和指纹图谱研究，为附子汤相关制剂的质量控制提供参考。
关键词：附子汤；高效液相色谱法；含量测定；指纹图谱
中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2017) 09- 0055- 05
收稿日期：2017-02-10
基金项目：山西省科技厅自然基金项目（2015011103）；山西中医学院博士基金项目作者简介：张强（1992-），男，山西大同人，硕士研究生，研究方向：中药化学成分分析研究。通讯作者：王瑞（1978-），女，河南驻马店人，副教授，硕士研究生导师，博士，研究方向：中药质量控制方法及体内过程研究。 E-mail：wrgreentea@https://www.sodocs.net/doc/be6141348.html,。
Study on Determination of Benzoylmesaconitine，Benzoylaconitine，
Benzoylhypaconitine and Fingerprints of Fuzi Decoction
ZHANG Qiang，JU Boya，HAN Suqin，WANG Rui
（Shanxi College of Traditional Chinese Medicine，Jinzhong 030619，Shanxi，China）
Abstract：Objective ：To develop an HPLC method for determining the concent of benzoylmesaconitine，
benzoylaconitin，benzoylhypaconitine and establish the fingerprint of Fuzi Decoction. Methods ：The HPLC separation was performed on C 18 column and gradient elution to determin monoester alkaloids and developed an HPLC fingerprint of Fuzi Decoction. The similarities were calculated with the help of the similarity calculation soft of traditional Chinese medicine. Results ：The contents displayed good liner relationships within the ranges and the similarities of 10 batches of Fuzi Decoction were proved to be higher than 0.9. Conclusion ：The method is suitable for the determination and the fingerprint of Fuzi Decoction，which can be used for quality control.
Keywords：Fuzi Decoction；HPLC；content determination；fingerprint DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2017.09.015
辽宁中医药大学学报 19卷
经山西中医学院裴香萍副教授鉴定为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx. 的子根的加工品。为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos (Schw.) Wolf 的干燥菌核。为五加科植物人参Panax ginseng C. A. Mey. 的干燥根和根茎。为菊科植物白术Atractylodes macrocephala Koidz. 的干燥根茎。为毛莨科植物芍药Paeonia lactiflora Pall. 的干燥根。供试方剂中全部药材来源见表1，均符合 2015版中国药典要求。苯甲酰乌头原碱（Lot：20120513）、苯甲酰新乌头原碱（Lot：20120509）、苯甲酰次乌头原碱（Lot：20120515）（均购自宝鸡市辰光生物科技有限公司，纯度均>98%）。乙腈（色谱纯，迪马科技有限公司)，娃哈哈纯净水，乙酸铵、盐酸、甲醇、冰醋酸、氯仿、氨水(均为分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)。
表1 不同来源的附子汤中全部药材
编号来源
S1北京同仁堂药店
S2万民药房
S3力东大药房
S4德生堂大药房
S5太原长城药店
S6仁和大药房
S7国大药房
S8荣华大药房
S9一心堂
S10益源大药房
2 含量测定的方法与结果
2.1?色谱条件
Waters XTerra MS C18色谱柱 （150 mm×4.6 mm，5 μm )，XTerra MS C18保护柱（20 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：乙腈（A）-0.1 mol·L-1乙酸铵溶液（pH=6.97）（B）；梯度洗脱；流速：1 mL·min-1；检测波长：235 nm；进样量：10 μL；检测温度：室温。梯度洗脱程序见表2。
表2 梯度洗脱程序
时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0595
153466
303763
326535
2.2?溶液的制备
2.2.1 对照品储备液的制备
分别精密称取苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱对照品各2.81、2.33、2.75 mg，加0.05 % 盐酸-甲醇（体积比，下同）分别制得0.562、0.466、0.550 g·L-1的苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱对照品储备液。
2.2.2 供试品溶液的制备
取炮附子25 g，精密称定，加10倍量水先煎0.5 h，分别取茯苓15 g、人参10 g、白术20 g、芍药15 g，精密称定，先加10倍量水浸渍0.5 h，与附子煎液合并煎煮，保持微沸0.5 h，双层纱布过滤，残渣加8倍量水再煎煮15 min，合并滤液，浓缩至一定体积，转移至250 mL容量瓶中并加水定容至刻度。精密移取25 mL至圆底烧瓶中，旋转蒸干。残渣精密加入20 mL氯仿，4 mL氨水，4 mL甲醇，加热回流2 h，放冷，滤过。残渣再用氯仿洗涤3次，与滤液合并，60 ℃水浴蒸干。残渣加0.05%盐酸-甲醇溶解，转移至10 mL容量瓶中，加0.05%的盐酸-甲醇定容至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。
2.2.3 阴性对照液的制备
取茯苓15 g、人参10 g、白术20 g、芍药15 g，精密称定，照“2.2.2”项下方法，自“先加10倍量水浸渍0.5 h，保持微沸0.5 h”起，至“加0.05%的盐酸-甲醇定容至刻度，摇匀”，即得阴性样品溶液。
2.3?方法学考察
2.3.1 线性关系考察
分别精密移取苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱三种对照品储备液各10、20、40、60、80、100、200、300 μL于8个1 mL容量瓶中，加0.05 %盐酸-甲醇定容至刻度，分别得到苯甲酰新乌头原碱浓度为0.00562、0.01124、0.02284、0.03372、0.04496、0.05620、0.11240、0.16860 g·L-1，苯甲酰乌头原碱浓度分别为0.00466、0.00932、0.01864、0.02796、0.03728、0.04620、0.09320、0.13980 g·L-1，苯甲酰次乌头原碱浓度分别为0.00550、0.01100、0.02200、0.03300、0.04400、0.05500、0.11000、0.16500 g·L-1的混合对照品溶液，取上述混合对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪中，照“2.1”项下色谱条件测定，以苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程见表3。
表3 回归方程
对照品回归方程r线性范围苯甲酰新乌头原碱y=6609.2x-8.69510.99910.00562~0.16860
苯甲酰乌头原碱y=10481x-21.3240.99930.00466~0.13980
苯甲酰次乌头原碱y=5988.4x+8.06850.99920.0055~0.16500
2.3.2 精密度试验
取“2.2.2”项下供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，重复进样6次，计算苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱峰面积积分值的RSD分别是1.5%、1.9%、1.7%，结果表明该方法精密度良好。
2.3.3 稳定性试验
取“2.2.2”项下供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别在0、2、4、6、8、10、12 h进样分析，计算苯甲酰新乌头原碱，苯甲酰乌头原碱，苯甲酰次乌头原碱含量的RSD，分别为1.2%、1.7%、1.9%，结果表明样品中苯甲酰新乌头原碱，苯甲酰乌头原碱，苯甲酰次乌头原碱在12 h内稳定性较好。
2.3.4 重复性试验
精密称取炮附子25 g、茯苓15 g、人参10 g、白术20 g、芍药15 g，精密称定，照“2.2.2”项下方法制备至“转移至250 mL容量瓶中并加水定容至刻度”，取溶液6份，每份25 mL，至圆底烧瓶中，按照“2.2.2”项下方法自“旋转蒸干”起，至“0.45 μm微孔滤膜过滤”，即得重复性试验的样品溶液1、2、3、4、5、6。精密吸取上述溶液10 μL，依法测定，计算苯甲酰新乌头原碱，苯甲酰乌头原碱，苯甲酰次乌头原碱含量的RSD，分别为1.4%、1.6%、1.5%，结果表明该方法
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重复性良好。
2.3.5 加样回收率试验
按照“2.2.1”项下方法制得浓度为0.55、0.56、
0.55 g·L -1
的苯甲酰新乌头原碱，苯甲酰乌头原碱，苯甲酰次乌头原碱的对照品溶液。称取炮附子25 g、茯苓15 g、人参10 g、白术20 g、芍药15 g，精密称定，照“2.2.2”项下方法制备至“转移至250 mL 容量瓶中并加水定容至刻度”，取溶液9 份，每份12.5 mL，至圆底烧瓶中，每3份分别加入苯甲酰新乌头原碱421、843、1265 μL，苯甲酰乌头原碱46、93、139 μL，苯甲酰次乌头原碱69、139、209 μL，按照“2.2.2”项下方法自“旋转蒸干”起，至“0.45 μm 微孔滤膜过滤”，即得加样回收率试验的样品溶液1、2、3、4、5、6、7、8、9。精密吸取上述溶液10 μL，依法测定，计算苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的加样回收率和RSD，如表4~表6所示，结果表明方法的准确度良好。
表4 苯甲酰新乌头原碱的加样回收率（n =9）
样品号样品中的含量（mg）对照品加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD （%）10.463970.463970.463970.463970.231550.231550.231550.463650.687900.692800.695400.91660 96.71 98.83 99.95 97.62 98.49 1.67234 99.79 1.8850.463970.463650.93230101.0160.463970.463650.93100100.7370.463970.69575 1.16815101.21102.67
1.31
80.463970.69575 1.18659103.869
0.46397
0.69575
1.1801210
2.93表5 苯甲酰乌头原碱的加样回收率（n =9）
样品号样品中的含量（mg）对照品加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD （%）10.052200.052200.052200.052200.025760.025760.025760.052080.077600.076800.077100.1032098.6095.5096.6697.9396.92 1.6223498.05 1.5750.052200.052080.1025096.5860.052200.052080.1041099.6570.052200.077840.1291098.7997.08
1.55
80.052200.077840.1273096.489
0.052200.077840.12690
95.97
表6 苯甲酰次乌头原碱的加样回收率（n =9）样品号样品中的含量（mg）对照品加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD
（%）10.076700.037950.1132096.1897.23 1.2420.076700.037950.1135096.9730.076700.037950.1141098.5540.076700.076450.1489094.4495.79 1.5950.076700.076450.1497095.4960.076700.076450.1512097.4570.076700.114950.1895098.1398.10
2.00
80.076700.114950.1872096.139
0.07670
0.11495
0.19170 100.04
2.3.6 专属性试验
取阴性对照液10 μL，按照“2.1”项下色谱条件进行测定，结果表明在与苯甲酰新乌头原碱，苯甲酰乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱相应的保留时间附近无干扰峰出现。色谱图见图
1。
注：A.混合对照品，B.附子汤样品，C.阴性对照；1.苯
甲酰新乌头原碱，2.苯甲酰乌头原碱，3.苯甲酰次乌头原碱。
图1 附子汤HPLC 色谱
2.4?样品含量测定
取“2.2.2”项下供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，依法测定。将苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱峰面积积分值代入标准曲线方程，附子汤（炮附子25 g，茯苓15 g，人参10 g，白术20 g，白芍15 g）中3种单酯型生物碱的含量见表7。
表7 3种单酯型生物碱含量（n =3）
编号苯甲酰新乌头原碱（mg·g -1）苯甲酰乌头原碱（mg·g -1）苯甲酰次乌头原碱（mg·g -1）S1
0.114400.012280.01804S20.124400.010540.01462S30.113500.009750.01561S40.098800.010220.01620S50.105800.011920.01762S60.116200.011350.01522S70.097700.010660.01433S80.108500.009210.01492S90.106200.011580.01642S10
0.13110
0.01207
0.01761
3 附子汤指纹图谱的建立
3.1?供试品溶液的制备
称取附子汤方中各味药材：炮附子25 g，茯苓15 g，白术20 g，白芍15 g，人参10 g，加10倍水浸泡30 min，加热回流煎煮100 min，纱布过滤药液，水浴70 ℃ 浓缩至半干，0.05%盐酸甲醇定容到50 mL，过0.45 μm 滤头即得供试品溶液。
3.2?色谱条件
Waters XTerra MS C 18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相：乙腈（A）- 0.1 % 甲酸水（B）；梯度
洗脱；流速：1 mL·min -1
；检测波长：275 nm；进样量：15 μL；检测温度：22 ℃。梯度洗脱程序见表8。
表8 梯度洗脱程序
时间（min）
0.1%甲酸水（%）
乙腈（%）
0 97.5 2.525881245 831755 802070208073
20
80
3.3?方法学考察
3.3.1 精密度试验
取“3.1”项下供试品溶液，按“3.2”项下色谱
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条件，重复进样6次，记录指纹图谱，选定5号峰作为参照峰，考察各共有色谱峰的保留时间和峰面积的一致性。结果表明，各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值均不大于3.0%，符合指纹图谱要求。
3.3.2 重复性试验
按“3.1”项下方法，平行制备6份供试品，按“3.2”项下色谱条件，测定并记录指纹图谱，选定5号峰作为的参照峰，考察各共有色谱峰的保留时间和峰面积的一致性。结果表明，各色谱峰的相对保留时间和相对锋面积的RSD值均不大于3.0%，符合指纹图谱要求。
3.3.3 稳定性试验
取“3.1”项下供试品溶液，在0、2、4、8、16、24 h 进样分析，按“3.2”项下色谱条件，测定其色谱图，选定5号峰作为参照峰，考察各共有色谱峰的保留时间和峰面积的一致性。结果表明，各色谱峰的相对保留时间和相对锋面积的RSD值均不大于3.0%，24 h内稳定性良好，符合指纹图谱要求。
3.3.4 指纹图谱相似度分析
按“3.1”项下方法，取10批附子汤样品并制备成供试品溶液，按“3.2”项下色谱条件，依次进样，记录指纹图谱。采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004A版)，计算附子汤样品指纹图谱的相似度。选择S1的指纹图谱为对照图谱，见图2。结果10批附子汤样品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均在0.90以上，见表9，HPLC指纹图谱见图
3。
t（min）
图2 附子汤HPLC
对照图谱
图3 HPLC指纹图谱相似度分析(275 nm)
表9 10批附子汤样品的相似度
编号S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10对照图谱S1 1.0000.9480.9530.8700.9590.8760.9700.9620.9720.9630.970 S20.948 1.0000.9990.9230.9640.8830.9700.9890.9660.9370.983 S30.9530.999 1.0000.9170.9680.8890.9750.9910.9700.9410.988 S40.8700.9230.917 1.0000.8940.8530.9010.9090.8910.8590.907 S50.9590.9640.9680.894 1.0000.9320.9840.9800.9900.9530.987 S60.8760.8830.8890.8530.932 1.0000.9170.9060.9170.8710.916 S70.9700.9700.9750.9010.9840.917 1.0000.9850.9910.9650.993 S80.9620.9890.9910.9090.9800.9060.985 1.0000.9830.9540.996 S90.9720.9660.9700.8910.9900.9170.9910.983 1.0000.9650.991 S100.9630.9370.9410.8590.9530.8710.9650.9540.965 1.0000.963对照图谱0.9700.9830.9880.9070.9870.9160.9930.9960.9910.963 1.000
4 讨论
实验结果表明，购自10个不同药店的10批附子汤药材指纹图谱的相似度均大于0.9，且其中的3种单酯型生物碱的含量也接近，说明市售的附子汤中的各药味质量比较稳定。
文献报道[6]测乌头汤中单酯型生物碱含量时，得到水煎液后加盐酸调pH约2，加乙醚萃取3次，每次50 mL，弃去乙醚液，酸水层加氨水调pH 9~10，加乙醚萃取3次，每次50 mL，合并乙醚液，于55 ℃蒸干，加0.01%盐酸-甲醇溶解并定容于5 mL 量瓶中来制备供试品溶液，操作过程较为繁琐。本实验得到水煎液后旋转蒸干，直接加试剂加热回流来提取生物碱，操作步骤简单，生物碱不易损失，所测得含量与文献中报道基本一致。
附子汤中的有效成分乌头类生物碱，也是其中的毒性成分，所以控制其含量成为该方剂关乎安全性和有效性的首要指标。实验中所用附子为炮附子，其所含的多数双酯型生物碱已水解为单酯型生物碱，且附子经过先煎0.5 h，双酯型生物碱的含量已经很少。附子配伍参术芍苓后能减轻附子累积用药所致毒性效应，其作用机理也与双酯型生物碱含量的减少有关，所以本实验选择测定单酯型生物碱含量[7-8]。根据含量测定结果，我们认为经炮制处理的市售药材在依法煎煮后制得的附子汤方剂安全有效。
供试品溶液制备时，曾先用甲醇溶解样品，后又改用0.05%的盐酸-甲醇定容，因单酯型生物碱所含酯键易水解为醇胺型生物碱，所以加入盐酸防止酯键水解，并更为准确的测定供试品中有效物质含量。实验中考察了样品在12 h内较为稳定，说明用盐酸甲醇溶解样品较好。
含量测定色谱条件的选择：实验初一个分析周期为45 min，色谱图中30 min后没有色谱峰出现，故改为32 min一个分析周期，在此条件下3种单酯型生物碱成分在17 min内得到完全分离。
指纹图谱流动相的选择：通过乙腈-20 mmol·L-1乙酸铵水溶液与乙腈- 0.1 % 甲酸水溶液2种流动相对比，乙腈- 0.1 % 甲酸水溶液效果较好。其图谱
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JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 19 No. 9 Sep .，2017
竹茹不同炮制方法多糖及黄酮含量变化研究
李诗慧，赵容，赵思慧，邢艳萍，陈萍
（辽宁中医药大学，辽宁?大连?116600）
摘 要：
目的：比较竹茹不同炮制品中多糖和总黄酮含量。方法：采用紫外分光光度法（UV）测定竹茹不同炮制品中多糖含量，检测波长为491 nm。采用高效液相色谱法（HPLC）测定竹茹不同炮制品中总黄酮含量，流动相甲醇-水（32∶68）为流动相，流速为1 mL/min，检测波长为254 nm。结果：生竹茹中总黄酮含量为0.251 mg/mL，多糖含量为0.0196 mg/mL；姜竹茹中总黄酮含量为0.81 mg/mL，多糖含量为0.2288 mg/mL；玫瑰制竹茹中总黄酮含量为0.79 mg/mL，多糖含量为0.2605 mg/mL；枳壳制竹茹中总黄酮含量为2.34 mg/mL，多糖含量为0.0265 mg/mL；枳实制竹茹中总黄酮含量为1.47 mg/mL，多糖含量为0.1213 mg/mL。结论：竹茹经枳壳汁炮制后能增加竹茹中总黄酮的含量，经玫瑰汁炮制后能增加竹茹中多糖的含量。
关键词：竹茹；炮制；多糖；黄酮
中图分类号：284.1 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2017) 09- 0059- 04
收稿日期：2017-02-05
基金项目：大学生创新创业训练项目（201510162000060）作者简介：李诗慧（1995-），女，辽宁抚顺人，本科学生，研究方向：中药学。通讯作者：赵容（1985-），女，黑龙江齐齐哈尔人，博士，讲师，研究方向：分子生药学。
Research of Polysaccharide and Flavonoids Content in Bamboo
Shavings by Different Processing Methods
LI Shihui，ZHAO Rong，ZHAO Sihui，XING Yanping，CHEN Ping
（Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，Liaoning，China）
Abstract：Objective ：To compare the different processed products of bamboo shavings of polysaccharides
上各个色谱峰的分离度较好，保留时间适中，因此
选此乙腈-0.1%甲酸水溶液流动相进行指纹图谱检测。
指纹图谱色谱柱的选择：依次选用Agilent Zorbax SB-C 18（4.6 mm ×250 mm，5 μm），Dikama C 18（4.6 mm×250 mm，5 μm），Waters XTerra MS C 18（4.6 mm×150 mm，5 μm）色谱柱进行指纹图谱分析，对比结果Waters XTerra MS C18色谱柱分离度较好，保留时间适中。
指纹图谱检测波长的选择：本实验对在检测范围内扫描所得的色谱图进行分析比较，选择波长为235、245、275 nm 的色谱图进行比较，结果表明，275 nm 下出峰最多，基线平稳，峰形较好。
中药复方制剂成分复杂，利用指纹图谱整体性、模糊性的特点对其进行质量控制是目前相对完善的方法。从整体的角度出发，综合进行宏观的、规律的分析之后建立的指纹图谱，通过辨认完整图谱的面貌可以判断样品的真实性，使质控指标从单一成分的含量测定提高到对附子汤的内在品质控制，可实现对附子汤内在质量的综合评价，以及其中所含整体物质的全面控制。对指纹图谱的分析，可以从量上判断出附子汤全方中所含药材的质量稳定性，进而确保其临床应用时准确发挥疗效，也提示我们要加强不同成分药理药效的研究，进一步指导中药的合理使用。对于分析过程中发现的样品的某些信号峰重叠，检测限度低，
可能是由于中药复方成分复杂，不同产区所含成
分含量差异大[9]，方剂中的不同成分之间由于化学性质等的影响导致[10-12]。◆
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DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2017.09.016
经方 芍药甘草汤
经方芍药甘草汤 糖尿病的老Z高兴地告诉我，他烦人的夜间小腿抽筋消失了，方子很简单，就是芍药甘草汤：白芍药50克、生甘草5克。他说当天晚上服药后，这么近月来再没有发过。他连连说：这方真是神了！芍药甘草汤治疗脚抽筋是张仲景的经验。《伤寒论》上就说芍药甘草汤治疗“脚挛急”，而且起效快，说服药后“其脚即伸”。后世沿用，屡有验证。所以《朱氏集验方》竟改芍药甘草汤方名为“去杖汤”！ 脚抽筋是俗称，医学术语为腓肠肌痉挛。这不仅仅是局部的病变，往往也是全身性疾病的局部表现。我曾发现一些肝病患者可以出现严重的脚抽筋，用芍药甘草汤及其加味方后，脚抽筋好转，肝病也得到控制。此外，有些糖尿病、支气管哮喘、坐骨神经痛、腰椎间盘突出、肾结石急性发作、肺动脉高压、高粘血症等患者，也有类似情况。患者不仅有脚抽筋，还有下肢发凉、走路疼痛、局部皮肤发暗浮肿、脚底开裂等。临床上也将脚抽筋及其附带下肢的症状作为使用芍药的一个指证。芍药甘草汤治疗脚挛急，其实也不仅是下肢肌肉的拘急痉挛，患者的腹肌也会表现的紧张。用手按压腹部，常常感到肌肉发硬。日本古方家吉益东洞的经验是：“腹皮挛急按之不弛”。即腹直肌挛急，或腹壁虽弛缓，腹
底肌肉却呈拘急之状。如《建殊录》记载：“云州医生祝求马，年可二十，一日，忽苦跟痛如锥刺，如刀刮，不可触近，众医莫能处方者。有一疡医，一位当有脓，刀辟之，亦无效矣。于是迎先生，诊之，腹皮挛急，按之不弛，为芍药甘草汤饮之，一服，痛即已”。腹皮挛急，是指腹肌比较紧张。而腹肌的紧张，也往往提示其他肌肉也容易紧张甚至痉挛。含有芍药甘草汤的小建中汤，就专治腹中痛，《苏沈良方》说此方“治腹痛如神”。这种腹痛有何特点？仲景说的“腹时痛”“急痛”，也就是那种痉挛性的腹痛。所以，许多不明原因的脐腹部的腹痛，就可以用芍药甘草汤或小建中汤。我治疗过敏性紫癜，常常用小建中汤，原因就是患者常有腹痛，而且是痉挛性腹痛。芍药甘草汤原方的用量是芍药甘草各四两，后世医家则常根据临床调整比例，如《朱氏集验方》调整为6:1，《伤寒论方解》调整为5:2至2:1，我常用3:1或6:1，老Z有糖尿病，顾虑甜食，所以甘草仅用5克，居然也有效。芍药甘草汤方小，但效果非常好，当然，前提是方证相应。可惜的是，此方在医院处方中已经很少见到了，原因就是方小。真是当今怪事！ 当她走进诊室的时候，我差点没有认出她来。她脸色红润，丰满的脸庞上洋溢着喜悦，与一年半前相比判若两人。她，71岁，名x小妹，是个典型的农村妇女。2010年4月，因为肝硬化反复呕血、贫血来门诊。我根据她消瘦、大便干
附子中3种双酯型生物碱含量测定方法建立
2 附子研究概况 附子为亚门毛茛科(Ranunculaceae)植物乌头(AconitumcarmichaeliDebx．)侧根(子根)的加工品，其性大热、辛、甘，归心、肾，生品极毒。中医认为附子具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛、逐风通痹、温阳行水等功效。附子始载于《神农本草经》，主风寒咳逆邪气，温中，金疮，破症坚积聚，血瘕，寒湿，拘挛膝痛，不能行步[1]。 2.1 附子化学成分研究 国内外学者对附子化学成分的研究表明，附子的化学成分分为生物碱类物质、脂类物质和多糖类物质三大类。其中生物碱类物质为其主要成分，包括脂溶性生物碱：乌头碱（aconitine），中乌头碱（新乌头碱mesaconitine），次乌头碱（下乌头碱、海帕乌头碱hypaconitine），塔拉乌头胺（talatisamine），和乌胺（higeramine）棍掌碱氯化物（coryneine chloride）[2]，异飞燕草碱（isodelphinine），苯甲酰中乌头碱（benzoyl mesaconitine），新乌宁碱（neoline），北乌头碱（beiwutine），多根乌头碱（karakoline），去氧乌头碱（deoxyaconitine），准葛尔乌头碱（songorine）；水溶性生物碱：江油乌头碱（jiangyouaconitine），新江油乌头碱（neojiangyouaconitine）、尿嘧啶(Uracil)[3]、附子亭碱（fuzitine）、消旋去甲基衡州乌药碱（demethylcoclaurine）[4]、、附子宁碱（fuziline）、去甲猪毛菜碱（salsolinol）[5]等。其中双酯型生物碱乌头碱（aconitine），中乌头碱（mesaconitine），次乌头碱（hypaconitine）为其主要成分，约占0.4%-0.8%，易溶于氯仿、苯、无水乙醇和乙醚，难溶于水，微溶于石油醚，既是附子的药效成分，又是毒性成分。三者易水解成为毒性较小的单酯型生物碱：苯甲酰乌头碱（乌头次碱Benzoylaconine)、苯甲酰中乌头碱(Banzoylmesaconine)、苯甲酰次乌头碱(Benzoylhypaconine)[6]。其毒性仅为双酯型生物碱的1/1000。单酯型生物碱如果进一步水解则变为毒性更小或无毒的醇胺类生物碱：乌头胺(乌头原碱Aconine)、中乌头胺(Mesaconine)、次乌头胺(Hypaco-nine)。其毒性仅为乌头碱的1/2000左右[7]。此外，附子还含有棉子油、蓖麻油、附子脂酸等脂类物质和乌头多糖。 2.2附子主要药理作用 2.2.1 对心血管系统的作用 研究表明，附子对心血管系统的用主要体现在以下几个方面。首先是强心作用，附子的强心机理是附子中的强心成分致β受体兴奋，释放儿茶酚产生强心作用。已经被证明的具有强心作用的成分有去甲乌药碱、去甲猪毛菜碱、氯化甲基多巴胺、尿嘧啶以及附子苷，其中去甲乌药碱活性很强，对体内心脏、离体心脏和功能衰竭的心脏均有较强的强心作用，在稀释至10-9时仍表现出强心作用。秦永刚[8]等用离体蛙心，对不同蒸煮时间的附子进行了强心作用及心脏毒性的初步
经方芍药甘草汤有神效
经方芍药甘草汤有神效 13、芍药甘草附子汤方闲品落花13、芍药甘草附子汤方。13、芍药甘草附子汤方方剂组成：芍药三两甘草三两（炙）附子一枚（炮去皮，破八片）右三味，以水五升，煮取一升五合，去滓，分温三服。原文指征：发汗，病不解，反恶寒者，以虚故也。芍药甘草附子汤主之。 芍药甘草汤堪称治痛第一方海洋暖流芍药甘草汤堪称治痛第一方芍药甘草汤堪称治痛第一方芍药甘草汤堪称治痛第一方2010年12月30日星期四 18:10.无论人体上下内外诸般痛症，均可用此方为主，随证加味。头痛加川芎、白芷；项背痛加葛根；上肢痛加羌活、桂枝、桑枝；腰腿痛加桑寄生、杜仲、续断、当归、鸡血藤；气虚合补中益气汤方；血虚合四物汤方；阳虚合附子汤； 芍药甘草汤治愈打嗝一例lc1231芍药甘草汤治愈打嗝一例最近我的一个朋友，男，四十二岁，身体壮实，着凉后得了打嗝症，七八天了，老是不停的打嗝，用了很多的方法不见效，才找我开了两味药，吃了不大一会就好了，就是中药芍药甘草汤，白芍40克。 芍药甘草汤之用往赢芍药甘草汤之用。同学袁某.久患下肢静脉曲张.多方治疗.曾打过一针一千多号称包治的针也毫无作用.后来为减轻其痛苦和恐惧曾给用过芍药.甘草各一百克.加水煮开喝三天.用过 四帖效果显着.邻居张某.骑车路上手臂摔伤未伤骨头.几个月来上 肢一直酸痛难受.睡眠会酸痛得醒过来.芍药.甘草各30克.制附片10克.5帖.愈.邻居陆某.因家务事与嫂子闹矛盾争吵.引起胃部疼痛难
受不堪.芍药.甘草各30克.制附片10克.1帖.第一次喝药后即明显 缓解.第二天再用一帖药减制附片.愈. 芍药甘草附子汤雨后观山静...芍药甘草附子汤芍药甘草附子汤 【来源】《伤寒论》。【组成】芍药甘草(炙)各9克附子3克(炮， 去皮，破八片) 【用法】上三味，用水1升，煮取300毫升，去滓，分温三服。【主治】体虚外感，发汗后病不解，反增恶寒者。【类别】名方。 便秘验方在水一方2便秘验方便秘验方。白芍30 生甘草20 枳实15适用老年、久病体弱在内的老年患者，但孕妇慎用。经用20多例，效优此为芍药甘草汤之加味方，当然有效。芍药甘草汤治疗胃脘痛，甘草与芍药之比：3/2！此量不足为奇。 芍药甘草附子汤传播中医书馆...芍药甘草附子汤芍药甘草附子汤(方组、临证参考用量)芍药9g 炙甘草9g 制附子9g 上3味，以水1000ml，煮取300ml，去滓，分3次温服。(功效)扶阳益阴，阴阳两调。(临证加减) l．本方芍药、附子、甘草、再加桂枝、大枣治汗 后亡阳。6．本方加大黄，治寒腹中拘急，恶寒甚，腰脚挛痛，睾丸胀痛，二便不利者，名芍药甘草附子大黄汤。 芍药甘草汤治疗跌打损伤诗仙之家芍药甘草汤治疗跌打损伤白芍30，赤芍30，炙甘草20，怀牛膝15 木瓜10（单位：克）。 芍药甘草加减治疗shanlieng芍药甘草加减治疗。 芍药甘草汤治肛裂刀客的棍芍药甘草汤治肛裂急性肛裂：表现为大 便干燥，每次便后均感肛门剧痛及有少量鲜血。白芍50克，甘草12克，水煎服。也可加火麻仁24克以增强润便作用。
附子生物碱提取影响因素的实验探讨
附子生物碱提取影响因素的实验探讨 梁春妹3,严汝庆 (广西贺州市人民医院药剂科,广西贺州542800) [摘要] 目的:探讨附子生物碱提取的影响因素,确定适宜的提取条件。方法:以药典法测定提取物收率,以分光光度法测定生物碱含量,采用单因素试验法,对可能影响附子生物碱提取的因素分别进行考察。结果:提取溶剂以85%乙醇为宜,采用药材中粉作为提取原料,加10倍量的提取溶剂提取2次,每次1.75h。以此条件制得的提取物收率为1.21%,生物碱含量为0.33%。结论:单因素试验所确定的提取条件稳定可行。 [关键词] 附子;生物碱;提取 [中图分类号]R283 [文献标识码]A [文章编号]100125302(2004)0320222203 附子是常用的中药,具有回阳救逆、补火助阳之功。在许多经方如四逆汤、附子汤、参附汤、真武汤等中均有应用。其主要有效成分为生物碱类,其中有乌头碱、次乌头碱、新乌头碱等。临床上附子大多使用炮制品熟附片、黑附片、黄附片等,主要是因为生附子毒性较大,经炮制加工后其中酯型生物碱被部分除去或水解,而毒性低的乌头原碱含量则增加。本笔以临床上常用的黑附片为药材样品,对其提取生物碱的工艺中常见的影响因素进行实验探讨。 1 材料、仪器 1.1 材料 黑附片(贺州市药材公司,经严汝庆鉴定为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaili Debx.的子根的炮制加工品),乌头碱对照品(中国药品生物制品检定所)。其余试剂为市售分析纯。 1.2 仪器 UV-751型分光光度计(上海第三分析仪器厂);pHs-2C型精密酸度计(上海雷磁仪器厂)。 2 方法 2.1 样品中生物碱的含量测定[1] 2.1.1 乌头碱对照品溶液配制 精密称取乌头碱6mg,置25m L量瓶中,加0.01m ol?L-1盐酸溶液,并添加至刻度,摇匀,即得0.24g?L-1的乌头碱对照品溶液。 2.1.2 pH缓冲溶液(pH 3.05) 精密称取无水乙 [收稿日期] 2002202210 [通讯作者] 3梁春妹酸钠0.3g,加适量水溶解,加冰醋酸11.2m L,再加水至1000m L。混匀。用pH计测定该溶液的pH值为3.05。 2.1.3 0.1%溴甲酚绿溶液 精密称取溴甲酚绿200mg,用0.05m ol?L-1NaOH溶液 3.5m L研磨,加水溶解至200m L,滤过,以氯仿除去脂溶性杂质。 2.1.4 标准曲线制备 精密量取乌头碱标准溶液0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2m L,分别置干燥分液漏斗中,加乙酸钠缓冲液5.0m L与溴甲酚绿指示液2.0m L,加蒸馏水使总体积达到10.0m L,摇匀。再精密加入氯仿10.0m L,充分振摇3min,静置1h 后,分取氯仿层,用干燥滤纸过滤,弃去初滤液,收集续滤液至已放入0.5g无水硫酸钠的试管中,放置0.5h。用751型紫外分光光度计,于416nm处测定吸收度。回归方程:A=0.00312C-0.03568,r= 0.9985。乌头碱含量在48～288μg具有良好的线性关系。 2.1.5 样品测定方法 取各样品溶液10m L,置分液滤斗中,用浓氨水调pH10～11。用氯仿萃取5次(每次10m L),收集氯仿液,水浴蒸干。残渣用0.01 m ol?L-1HCl溶解并定容于10m L量瓶中,混匀。取此样品供试液2m L,按标准曲线方法操作,测定总生物碱含量。 2.2 样品提取物收率的测定 参照药典法[2],取各样品溶液10m L,置已恒重的蒸发皿中水浴蒸干,105℃下干燥3h,取出置干燥器中放冷30min,称重。按下式计算提取物收率(%):收率(%)=[(W2-W1)/W]×100%。式中, ? 2 2 2 ?
乌拉尔甘草的UPLC指纹图谱研究
乌拉尔甘草的UPLC指纹图谱研究 目的：建立乌拉尔甘草的超高效液相色谱（UPLC）指纹图谱。方法：采用UPLC法。色谱柱为Waters CORTECS UPLC C18，流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液（梯度洗脱），流速为0.3 mL/min，检测波长为254 nm，柱温为30 ℃，进样量为1 μL。以甘草酸为参照，测定27批药材样品的UPLC图谱，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2004 A版）进行相似度评价，确定共有峰，并对27批药材样品进行聚类分析。结果：27批药材样品的UPLC图谱有20个共有峰；除S2、S4、S19、S21、S22、S24药材样品的相似度小于0.90外，其余21批药材样品相似度均大于0.90；经验证，该21批药材样品UPLC图谱与对照图谱具有较好的一致性。27批药材样品可聚为3类，S24为Ⅰ类，S2、S4、S12、S19、S21、S22为Ⅱ类，其余为Ⅲ类。结论：该研究所建指纹图谱可为甘草的质量评价提供参考。 ABSTRACT OBJECTIVE：To establish UPLC fingerprint of Glycyrrhiza uralensis. METHODS：UPLC method was adopted. The determination was performed on Waters CORTECS UPLC C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.1% formic acid （gradient elution）at the flow rate of 0.3 mL/min. The detection wavelength was set at 254 nm，and column temperature was 30 ℃. The sample size was 1 μL. Using glycyrrhizic acid as control，UPLC chromatograms of 27 batches of sample were determined. Similarity evaluation was conducted by using TCM Chromatogram Fingerprint Similarity Evaluation System （2004 A edition）to determine common peak and conduct cluster analysis of 27 batches of samples. RESULTS：There were 20 common peaks in UPLC chromatograms of 27 batches of samples. The similarity degree of S2，S4，S19，S21，S22，S24 were less than 0.90，the others samples were more than 0.90. After validation，UPLC chromatograms of 21 batches of batches of samples were in good agreement with control fingerprint. 27 batches of samples were clustered into 3 categories，in which S24 was categoryⅠ；S2，S4，S12，S19，S21，S22 were categoryⅡ；other were categoryⅢ. CONCLUSIONS：Established fingerprint can provide reference for quality evaluation of G. uralensis. KEYWORDS Glycyrrhiza uralensis；UPLC；Fingerprint；Cluster analysis；Quality control 甘草始载于《神农本草经》，被列为上品。2015年版《中国药典》（一部）规定甘草为豆科植物甘草（又称乌拉尔甘草，Glycyrrhiza uralensis Fisch.）、胀果甘草（G. inflata Bat.）或光果甘草（G. glabra L.）的干燥根和根茎[1]，具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药之功效。甘草是最常用的中药之一，据报道60%的中药复方中含有甘草，有关甘草药材的化学成分研究前期已较深入，近几年又从其中分离得到了新的化学成分[2-4]。虽然2015年版《中国药典》（一部）规定甘草的药材来源有3种，但据笔者调研所知，目前市场上流通的药材品种主要是乌拉尔甘草（也是栽培面积最大的一个品种），其他两种药
附子二萜生物碱成分研究
科类农学学号2011311854 本科生毕业论文 附子二萜生物碱成分研究 Composition of Diterpenoid Alkaloids from Aconitum carmichaeli Debx 谢成 指导教师：张丽梅职称副教授 云南农业大学昆明黑龙潭 650201 学院：农学与生物技术学院 专业：中草药栽培与鉴定年级： 2011 论文提交日期： 2015年5月10日答辩日期： 2015年5月17日 答辩委员会主任：郭华春 云南农业大学 2015年5月
附子二萜生物碱成分研究 谢成 云南农业大学农学与生物技术学院，昆明 650201 摘要 【研究目的】对毛茛科乌头属植物附子（Aconitum carmichaeli Debx.）根进行化学成分研究。【方法】采用不同的色谱技术进行分离,根据化合物的理化性质和光谱数据分析（1H-NMR，13C-NMR，MS）鉴定化合物的结构。【结果】从总碱中分离鉴定了11个二萜生物碱类化合物，分别为：江油附子碱甲（jiangyoufuzine A，1），江油附子碱乙（jiangyoufuzine B，2），苯甲酰下乌头原碱（benzoylhypaconine，3），下乌头碱（hypaconitine，4），中乌头碱（mesaconitine，5），苯甲酰中乌头原碱( benzoylmesaconine，6)，乌头碱（aconitine，7），附子灵（fuziline，8），卡拉可林（karakoline，9），尼奥灵（neoline，10），松果灵(songorine,11)。【结论】化合物1～2为首次从附子中分离得到。 关键词：附子；毛茛科；二萜生物碱 Composition of Diterpenoid Alkaloids from Aconitum carmichaeli Debx XIE Cheng College of Agronomy and Biotechnology, Yunnan Agricultural University Kunming 650201 China ABSTRACT
紫菀药材的高效液相色谱指纹图谱与定量分析讲解
生长在同一地段而致误采。其二是三脉叶马兰生长范围较广而且量多，某些药农见利忘义有意伪充。 ４．２ 药材切成饮片后，形状上较难分辩，但二者的 头状花序较易区分，刘寄奴的呈椭圆形，白色似米粒，小花全为管状花，其叶脉羽状，无离基三出脉。药材具芳香气，味淡。而三脉叶马兰头状花序呈半球形，较大，小花有舌状花和管状花，其叶有离基三出脉和羽状脉。气微，苦、辛。４．３ 二者的显微特征差别较大，刘寄奴药材表面 具“Ｔ”字形非腺毛，腺毛顶面观呈鞋底形；叶主脉底部钝圆略呈圆锥形，上表面稍突起，且中央微凹。叶 图６三脉叶马兰的粉末显微特征 １．非腺毛２．草酸钙针晶３．方晶４．腺毛５．簇晶６．花粉粒７．叶下表皮及气孔 肉组织与茎髓薄壁细胞中有草酸钙簇晶散在。三脉叶马蓝无“Ｔ”字形非腺毛，叶主脉上下面突起明显，底部钝圆呈半圆形。髓部薄壁细胞内含多数短小的草酸钙针晶。二者花粉粒的形态和大小，表面特征差异也较明显。 参 １ 处理２０ｍｉｎ，过滤，取滤液加９５％乙醇稀释至适量浓度。于岛律ＵＶ２４５０型紫外分光度计上，在２００— ４００ ｎｍ波长范围内测定其紫外光谱。结果：刘寄奴 考 文献 在３３０ｎｍ波长处有一最大吸收峰，在３００ｎｍ波长处有肩峰；而三脉叶马兰仅在３２９ｎｍ波长处有一最大吸收峰。 ４４．１ 中国医学科学院药用植物资源开发研究所，中国医学科学院药物研究所等．中药志．第四册．ｊＥ京：人民卫生 出版，１９８８：４３ 讨论 刘寄奴的混杂原因可能有二：其一是二者均 ２ 李时珍．本草纲目（校点本，上册）．北京人民出版社，
１９９ｌ：９５９ 来源于菊科植物，在开花之前茎叶的形状和色泽均有相似之处，其生长环境与习性相似，且二者常混杂 （２００３一１１—２６收稿） 紫菀药材的高效液相色谱指纹图谱与定量分析 周军辉１伍蔚萍１谢子民２孙文基ｈ （１．西北大学陕西省生物医药重点实验室，西安７１００６９；２．西安市药品检验所，西安７１００６８） 摘要目的：建立紫菀药材的反相液相色谱定性和定量鉴别分析方法。方法：Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ ＯＤＳ Ｃ。。色谱柱（２５０ ｍｍ×４．６ｍｍ，５斗ｍ），流动相为甲醇－乙腈（１：２）－０．４％磷酸梯度洗脱，流速为１．０ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长为３６０ｎｍ，柱温为２５℃。紫菀药材经８０％甲醇超声处理，进行指纹图谱分析，并对紫菀药材中的主要成分槲皮素进行含量测定。结果ｉ在该色谱条件下，６份不同紫菀药材的ＲＰ－ＨＰＬＣ指纹图谱中可检出１０个共有峰作为定性鉴别；紫菀药材中槲皮素的含量在０．１３５％一０．２４６％之间。结论：本方法样品处理简便，准确性好，可用于紫菀药材的质量控制。 关键词 紫菀槲皮素反相高效液相色谱法 紫菀为菊科植物Ａｓｔｅｒ ｔａｔａｒｉｃｕｓ Ｌ￡的干燥根 在我们制定的紫菀指纹图谱中，含有分离较好的槲皮素色谱峰，这样，既可以得到指纹图谱提供的紫菀化学成分组成信息，又可测定槲皮素有效成分的含量。１ 及根茎，有润肺下气、消痰止咳的功能，用于痰多喘咳，新久咳嗽，劳嗽咳血，是许多常用的止咳平喘复方中药制剂中的重要药物之一。槲皮素（ｑｕｅｒｃｅ．ｔｉｎ）为紫菀中已知的有效成份之一，现代药理研究表明，它具有较好的祛痰、止咳和一定的平喘作用。 －５６２? 仪器与试药 ＢｅｃｋｍａｎＧｏｌｄ Ｓｙｓｔｅｍ高效液相色谱仪，包括
高效液相色谱法在中药指纹图谱中的应用现状及分析(一)
高效液相色谱法在中药指纹图谱中的应用现状及分析(一) 【关键词】高效液相色谱法 摘要：综述了高效液相色谱(HPLC)法指纹图谱在中药质量控制方面的应用，并通过供试品的制备、标准品的选择、结果分析方法来阐述中药指纹图谱的应用现状，指出高效液相色谱法应用于中药指纹图谱中现有不足之处和未来的发展方向。 关键词：高效液相色谱；中药指纹图谱ApplicationandAnalysisofFingerprintinTraditionalChineseMedicinebyHPLC Abstract:ThispapersummarizedtheapplicationoffingerprintoftraditionalChinesemedicinebyHPLCto thequalitycontrol.ItalsoreviewedtheactualityoffingerprintintraditionalChinesemedicinethroughth epreparationforsample,thechoiceforstandardsample,andthemethodofresultanalysis.Thenpointed outthemainproblemsatpresentandtheprospectivefutureinapplicationoffingerprintoftraditionalChi nesemedicinebyHPLC. Keywords:HPLC;FingerprintofTraditionalChinesemedicine 当前，中药指纹图谱技术在国内外已成为一种发展趋势。首先是美国食品与药品管理局(FDA)允许草药保健品申报资料可以提供色谱指纹图。世界卫生组织(WHO)在1996年草药评价指导原则中也规定：如果草药的活性成分不明，可以提供指纹图谱以证明产品质量的一致。欧共体也将指纹图谱监控技术应用于植物药质量控制〔1〕。我国自200008国家药品监督管理局颁发《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》(国药管注〔2000〕348号)以来，中药指纹图谱的研究成为中药研究的热点。国家药品监督管理局要求到2002年末，所有申报的中药注射剂均应有相关的指纹图谱资料，包括中药原料、提取物、产品3种图谱，3种图谱的峰形必须有较大的相关性，否则不予受理〔2〕。 1中药指纹图谱 中药指纹图谱是一种综合的、宏观的和可量化的鉴别手段，用以对中药材和中成药进行鉴别真伪，评价原料药材、半成品和成品质量的均一性和稳定性。其基本属性是“整体性”和“模糊性”。“整体性”是指完整地比较色谱的特征“面貌”；“模糊性”强调的是对照品与待测样品指纹图谱的相似性〔3〕。指纹图谱一般包含两层含义：1.必须反映出该药材(或成药)有别于其他任何物质；2.对于中药材，指纹特征还能反应出产地和采收期不同而造成的差异；对于中成药，则能反映出同一产品不同批次间的质量差异，差异越小说明药材(或成药)的稳定性越好〔4〕。 2HPLC用于中药指纹图谱的情况 文献分布表明，对中药指纹图谱的研究始于1993年，从1993～1999年共发表11篇〔5〕，指纹图谱的研究基本处于未开发状态。而从2000年开始，研究中药指纹图谱的文献呈直线上升趋势，尤以近2年发展最快，与指纹图谱相关的文献报道就有上百篇，其中又以高效液相色谱法研究的指纹图谱居多，高效液相色谱以其应用的广泛性，检测的精确性成为控制中药质量最主要的检测方法。至今已有50种中药材，21种中成药运用HPLC法测定其指纹图谱并发表。 据文献统计，目前已对下列中药材运用HPLC进行了指纹图谱研究：枸杞、柴胡、新疆雪莲、夏天无、延胡索、白芍、白鲜皮、板蓝根、补骨脂、黄芩、赤芍、川东獐牙菜、川芎、刺五加、大黄、丹参、当归、地黄、茯苓、麻黄、甘草、葛根、马甲、红车轴草、红花、厚朴、怀牛膝、鸡血藤、金银花、绿衣枳实、密花石斛、牛膝、秦艽、人参、西洋参、忍冬、山银花、山楂、芍药、水蔓菁、乌拉尔甘草、五味子、石斛、仙茅、旋覆花、淫羊藿、三七、泽泻、栀子、西红花。中成药中采用HPLC进行指纹图谱研究的有：咳必安胶囊、灯盏花素注射液、白屈菜注射液、板蓝根颗粒、补肾方、川芎制剂、丹参注射液、丹参葡萄糖注射液、复方丹参片、参麦注射液、红花注射液、红景天注射剂、黄连解毒汤、脉络宁注射液、人参
芍药甘草汤
芍药甘草汤 作者：王付发布时间：2012-02-20 新闻来源：浏览次数：3894 【方药歌诀】芍药甘草能舒筋，筋脉疼痛或挛急， 酸甘养阴能益肝，胃阴不足更相宜。 【学用导读】运用芍药甘草汤，一要重视因病证变化而调整方药用量，二 要重视随证加味用药。 【中医辨证】气血不足筋急证：筋脉拘急，肌肉疼痛或跳动，筋脉或关节屈伸不利，或关节活动疼痛，两目干涩，手足心热，或倦怠乏力，舌红，脉细弱。 用方思路：正确使用芍药甘草汤，以主治气血不足筋急证为基础方，以主治胃气阴虚证（胃脘隐痛，或挛急疼痛，口干舌燥，大便干结，小便短少，饮食不佳，纳谷无味，舌红，少苔，脉细或弦细）为临床扩大应用。 病变证机：气血亏虚，经筋脉络挛急，以此而演变为气血不足筋急病理病证。 审证要点：根据筋脉拘急，或肌肉疼痛，或胃脘隐痛，舌质红，苔薄，脉细 为用方审证要点。 【西医辨病】萎缩性胃炎，胃及十二指肠溃疡，胃扭转，胃痉挛，慢性肝炎，过敏性肠炎，肠粘连，急性水肿性胰腺炎，胆石症等。 【衷中参西】合理运用芍药甘草汤指导中医辨证与西医辨病，无论是治疗消化疾病，还是治疗血管及神经疾病等，都必须符合芍药甘草汤主治病变证机与审证要点，以此才能取得治疗效果。临证选用芍药甘草汤治疗西医疾病还可用于： 1、运动、神经疾病：不宁腿综合征，腓肠肌痉挛，颜面抽搐痉挛，脑中风 后肢体痉挛，先天性或萎缩性肌强直等。 2、血管及血液疾病：血栓闭塞性脉管炎，血管平滑肌痉挛，血小板减少性 或过敏性紫癜等。 3、呼吸疾病：支气管炎，支气管哮喘等。 4、泌尿疾病：特发性肾出血，慢性肾盂肾炎等。 5、骨伤疾病：关节损伤，骨质增生，骨头炎，腰扭伤等。 6、妇科疾病：急性乳腺炎，慢性盆腔炎，急性附件炎等。 7、其他疾病：荨麻疹，类风湿性关节炎，高睾酮血症，高泌乳素血症性阳 痿等。 【中医治法】益气养血舒筋。 【方药西用】具有对胃酸分泌呈双向调节、抑制胃排空、抑制肠管收缩、解痉、镇痛、降低血中睾酮浓度、改善排卵状态、抗炎、保护肠胃黏膜组胺水平、 抑制子宫平滑肌细胞中PGE 2、PGF 2a 及6-ketoPGF 1a 的生成释放、抗肿瘤等作用。 【处方用药】芍药四两（12ｇ）甘草炙，四两（12ｇ）随证加减用药：若阴虚者，加麦冬、石斛，以滋补阴津；若脘腹疼痛者，加石斛、延胡索、川楝子，以益阴行气活血；若大便干者，加生地、玄参，以滋阴 通便等。 【煎服方法】上二味，以水三升，煮取一升五合，去滓，分温再服。 【方证研究】气血虚不能滋养筋脉，则筋脉拘急，或肌肉疼痛，或跳动，筋脉或关节屈伸不利，或关节活动疼痛；气血虚不能上荣，则两目干涩；阴虚生热，则手足心热；舌红，脉细均为气血虚之征。其治当益气养血舒筋。 方中芍药补血益营，养阴柔筋。甘草益气和中，缓急舒筋。方药酸甘化阴而养血，柔筋缓急而舒筋，善治筋脉拘急挛紧。 【使用禁忌】湿热肆虐证，慎用本方。
芍药甘草汤
芍药甘草汤 要想充分了解芍药甘草汤，就必须先了解下芍药和甘草。从宏观方面讲，芍药和甘草都是植物的一种，而且各自都不一样;不仅外形不一样，所属科种也是不同的。芍药通常说的是一种花，开放的时候异常美丽，但是从另一方面来说芍药还具有一定的药用价值;而甘草则是草本植物的一种，同样也有一定的药用价值。 就是因为芍药和甘草有一定的药用价值，才会把这两种不同的植物放在一起做成了芍药甘草汤，来供一些病患的服用。芍药和甘草单独成药的话能够治疗的病情也是很多的。那么，下面就来详细介绍下芍药甘草汤这种汤药。 芍药的根鲜脆多汁，可供药用。根据分析，芍药根含有芍药甙和安息香酸，用途因种而异。中医认为：中药里的白芍主要是指芍药的根，它具有镇痉、镇痛、通经作用。对妇女的腹痛、胃痉挛、眩晕、痛风、利尿等病症有效。 甘草是一种补益中草药。对人体很好的一种药，药用部位是根及根茎，药材性状根呈圆柱形，长25～l00cm，直径0.6～3.5cm。外皮松紧不一，表面红棕色或灰棕色。根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。气微，味甜而特殊。功能主治清热解毒，祛痰止咳、脘腹等。 本方主治津液受损，阴血不足，筋脉失濡所致诸证。方中芍药酸寒，养血敛阴，柔肝止痛;甘草甘温，健脾益气，缓急止痛。二药相伍，酸甘化阴，调和肝脾，有柔筋止痛之效。
【组成】芍药12克甘草12克 【用法】上二味，用水600毫升，煮取300毫升，去滓，分温再服。 【功用】调和肝脾，缓急止痛。 【主治】伤寒伤阴，筋脉失濡，腿脚挛急，心烦，微恶寒，肝脾不和，脘腹疼痛。现用于血虚津伤所致的腓肠肌痉挛、肋间神经痛、胃痉挛、胃痛、腹痛、坐骨神经痛、妇科炎性腹痛、痛经;以及十二指肠溃疡、萎缩性胃炎、胃肠神经官能症、急性乳腺炎、颈椎综合征等属阴血亏虚，肝脾失调者。 实验研究 解痉、止痛、抗炎作用安徽医学院《急腹症资料》1977：74，本方对病变异常兴奋状态有强力的抑制、镇静作用。其中芍药对疼痛中枢和脊髓性反射弓的兴奋有镇静作用，故能治疗中枢性或末梢性的筋系挛急，以及因挛急而引起的疼痛。芍药、甘草中的成分有镇静、镇痛、解热、抗炎、松弛平滑肌的作用，二药合用后，这些作用确能显着增强。 芍药甘草汤的棘突做法步骤如下： 配方：芍药30克、甘草10克、白糖30克 制作： 1.将甘草、芍药润透切片;放入锅内，加水1000毫升。 2.将锅置中火上，煎煮20分钟，滤去渣，在药汁内加入白糖拌匀即成。 食法：代茶饮用。 功效：温补中阳。
经方十首3、芍药甘草汤
经方十首3、芍药甘草汤 [组成用法] 白芍20～60g、炙甘草10～30g。水煎服，分二次服。 [方证] 1．四肢骨骼肌表现为“抽筋感”的拘急、痉挛。 2．脏平滑肌紧导致的阵发性、痉挛性疼痛。 [现代应用] 1．以骨骼肌、韧带的痉挛、抽掣样疼痛为特征的疾病。如腓肠肌痉挛，肌肉痛性痉挛综合征、阴道痉挛、强中（阴茎持续勃起不软）、喉痉挛、缩阴症、全身抽搐、中风后遗症的肌肉僵硬、疼痛、麻木、肩周炎、肌强直症，急性腰扭伤，脊椎骨质增生症、外伤性头痛眩晕症、阴茎抽痛。 2．以脏平滑肌绞痛、剧烈痉挛等为特征的疾病。如胆绞痛、肾绞痛、胃痉挛、胃扭转、肠粘连、胃及十二指肠溃疡、
萎缩性胃炎、支气管哮喘、百日咳及顽固性咳嗽、溃疡性结肠炎、晚期肝癌疼痛、痛经。对于子宫收缩导致的先兆流产，本方可缓解子宫痉挛，对避免流产有显效。 3．骨与关节疼痛性疾病。如风湿性关节炎、足跟痛、颈椎综合征、股骨头缺血性坏死、骨质增生症、椎间盘突出症。 4．神经性疼痛。如三叉神经痛、带状疱疹引起的肋间神经痛、糖尿病神经病变所致的疼痛与麻木、坐骨神经痛、牙痛。 5．不自主性、异常兴奋性疾病。如顽固性呃逆、不安腿综合征、小儿睡中磨牙症、颜面肌抽搐、眼睑痉挛、帕金森病、书写震颤症、小舞蹈病、心房颤动、小肠咳（咳而矢气）、小儿夜啼、小儿遗尿症、马钱子中毒。 6．血证。如血小板减少性紫癜、过敏性紫癜、上消化道出血、支气管扩咯血、鼻衄。 7．一些功能衰弱性疾病。如血睾丸酮血症之不育症、不孕症、下肢软弱无力及步行艰难、高泌乳素血症性阳痿、重症肌无力。
8．其他方面。如病毒性肝炎、糖尿病、急性乳腺炎、细菌性痢疾、习惯性便秘、肛裂，乳溢症、冠心病；老人便秘、梅核气、多毛症、激素停用后综合征（如关节疼痛不适）。 [经验参考] 芍药甘草汤治疗疼痛性、痉挛性疾病。骨骼肌的痉挛主要表现在四肢肌肉的抽筋疼痛，且以阵发性、痉挛性、历时短为特征，尤其在负重的下肢更为明显，此即仲景所谓“脚挛急”。下肢疼痛多有行走障碍，比如经方家曹颖甫以此方治疗数例足病不能行走者（《经方实验录》）。尿失禁与膀胱括约肌痉挛有关者，也可用本方治疗。如亦人教授治一少女小便频数失禁，西医诊断为神经性尿频，历用各种固涩方药均无效。氏断为膀胱急迫，用本方舒筋缓急，服药一周即效，二周痊愈（中医药大学学报，1996；1：3）。芍药甘草汤对于血管痉挛性头痛（即血管收缩性头痛）也有使用的机会，但对血管扩性头痛则无效。前者因血管收缩而面色苍白，后者则四血管扩而面色多泛红。 有报道本方对咳喘有较好疗效，如王兆奎治一55岁男性，咳嗽少痰，郁郁微烦一年余，舌尖边红赤少苔，多方治之不
附子总生物碱含量测定方法比较
附子总生物碱含量测定方法比较 何 军1,2,祝 林1,奉建芳1 (1.上海医药工业研究院药物制剂部,上海200437;2.四川大学华西药学院,四川成都610041) 摘要:目的 比较滴定法和紫外分光光度(UV )法在测定附子总生物碱中差异,探讨适宜附子总生物碱的含量测定方法。方法 用两种方法测定相同样品,比较测定结果差异,并考察操作步骤对测定结果的影响。结果 两种不同的测定方法对附子总生物碱含量测定结果有较大的影响,滴定法的加样回收率为97.7%,而 UV 法为75.6%,滴定法测定结果更准确。水分及萃取静置时间对UV 法测定结果有一定影响。结论 附子 总生物碱含量测定以滴定法(药典法)为宜,紫外分光光度法用于其测定有待于进一步改进。 关键词:附子;附子总生物碱;含量测定 中图分类号:R 284.2 文献标识码:A 文章编号:100422199(2003)0620020203 中药川乌、草乌、附子等其主要有效成分为总生物碱,虽然含量较低[1],但因药理作用强、有一定的毒性,常作为中药的制剂质量控制的指标。2000版中国药典中有关总生物碱的含量测定方法为滴定法[2],文献中多采用紫外分光光度法[3,4],但哪一种方法更灵敏、准确和具有更好的重现性,文献中并未见报道。本文以附子提取物作为样品,对这两种方法用于测定附子总生物碱的含量进行比较研究,为含该类成分的中药制剂的质量控制提供实验依据。1 仪器、材料与试剂 仪器:7512G W 分光光度计(安捷伦科技上海分 析仪器有限公司)。 材料:乌头碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号:072029807)。制附子(上海雷允上中药饮片厂)。所用试剂均为分析纯。2 实验方法与结果2.1 样品溶液制备 取制附子药材适量,粉碎成中粉,加85%的乙醇溶液加热回流2次。醇提液经回收乙醇、浓缩、调pH 、 过滤后得提取液。提取液经大孔吸附树脂分离纯化,收集80%醇洗脱液,经减压浓缩与药材量相当后所得溶液作为样品溶液。 2.2 滴定(药典)法测定附子总生物碱含量精密量 取样品液20.0m l 蒸干,残渣以少量水溶解,置分液漏斗中,以氨水调pH =10～11,氯仿萃取5次(10,10,10,8,8m l ),合并氯仿液,回收氯仿,水浴挥干,残渣用乙醇5.0m l 溶解,精密加入硫酸滴定液(0.01m o l L )15m l 、水15m l 与甲基红指示液3滴,用氢氧化钠滴定液(0.02m o l L )滴定至黄色, 读取消耗的N aO H 溶液的量,计算总生物碱的含量 [每1m l 硫酸滴定液(0.01m o l L )相当于12.9m g 的乌头碱(C 34H 47NO 11)]。 2.2 紫外分光光度(U V )法测定附子总生物碱含量[4] 2.2.1 对照品溶液制备 精密称取12.0m g 乌头 碱对照品于50m l 的容量瓶中,加1m o l L 盐酸溶液数滴,溶解,加等量1m o l L N aO H 溶液,用蒸馏水定容至刻度,摇匀,即得浓度为0.24m g m l 的对照品溶液。 2.2.2 标准曲线的制备 精密量取乌头碱对照品 液0、0.35、0.40、0.50、0.80、1.00m l ,分别置于分液漏斗中,各加蒸馏水3.00、2.65、2.60、2.50、2.20、2.00m l ,加溴麝香草酚蓝指示液2.0m l ,邻苯 二甲酸氢钾2氢氧化钠(pH =6)缓冲液5.0m l ,加氯仿10m l ,振摇3m in ,静置1h ,分取氯仿液,并加入 0.5g 无水硫酸钠,放置0.5h ,以第一份为空白,于410nm 处测定吸收度,计算回归方程,A =0.0035 M -0.0869,r =0.9999,乌头碱含量在84～240Λg 范围内线性关系良好。 2.2.3 样品测定方法 取上柱洗脱液5.0m l 蒸 干,残渣以少量水溶解,置分液漏斗中,以氨水调pH =10～11,氯仿萃取5次(10,10,10,8,8m l ),合并氯仿液,回收氯仿,水浴挥干,残渣用少量1m o l L 盐酸溶解后,加入等量的1m o l LN aO H 溶液,用蒸馏水定容至25m l ,摇匀。精密吸取2.00m l ,按标准曲线项下测定总生物碱含量。结果见表2。2.3 两种测定方法含量测定结果的比较 取同一样品溶液,分别用上述两种测定方法各 — 02—现代中药研究与实践2003年第17卷第6期R esearch and P ractice of Ch inese M edicines
蜂蜜高效液相色谱指纹图谱的研究进展
摘要：指纹图谱技术在食品的质量控制中起着重要的作用。本文主要介绍了高效液相色谱指纹图谱在蜂蜜研究中的应用，以期为蜂蜜的鉴定、质量控制及标准的制定等方面工作奠定基础。 关键词：蜂蜜高效液相色谱指纹图谱 蜂蜜是一种传统的天然保健食品。它是由蜜蜂采集植物的甜味分泌物，通过蜂蜜自身的消化，转化作用及蜜蜂通过气流干燥作用，使水分从花蜜中含６０％以上降低到２０％以下。一般蜜蜂从采集花蜜到酿制为成熟蜜，正常情况下需要３～５ｄ时间［１］［２］。 糖类是蜂蜜的主要的成分，其中有单糖、双糖、低聚糖和多糖，单糖中的葡萄糖和果糖占蜂蜜总糖的５５％～７５％，而双糖和三糖的含量因蜜源种类的不同而变化。此外，蜂蜜还含有多种蛋白质、氨基酸、脂肪酸、维生素及人体所必须的矿物质及微量元素，营养十分丰富［２］［３］。多年来的科学研究与医学临床都证明，蜂蜜具有促进食欲、改善肠胃功能、促进消化吸收、镇静安神、提高肌体免疫能力，促进儿童生长发育等功效；它不仅对婴幼儿、运动员、老人及体弱多病者、重体力劳动者、高强度脑力工作者来说是一种直接有效的营养补充来源，而且对治疗烧伤、烫伤、溃疡愈合、促进伤口愈合及心血管病的辅助治疗等方面来说有很好的疗效［４］｛５］。 蜂蜜作为一种营养丰富、易被人体吸收的天然食品在国内外市场上深受消费者欢迎。为规范蜂蜜市场，保证消费者的利益，我国于１９８２年和２００２年分别颁布了蜂蜜行业标准和推荐性国家标准；但是目前就蜂蜜质量来说，全国各地在蜂蜜生产、流通中仍存在很多不规范的环节，更甚的是出现许多人为掺杂假使的行为，而当前的国家标准不能满足快速、准确的检测需要。 高效液相色谱指纹图谱技术已经广泛的应用于食品行业，特别是药物化学中的中药指纹图谱已经取得了重大的进展。在蜂蜜市场较为混乱且没有准确、快捷的检测方法的情况下，期望建立蜂蜜的高效液相色谱指纹图谱成为必然的趋势。 １．指纹图谱的含义 “指纹（Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ）”识别技术起源于１９世纪末２０世纪初的犯罪学和法医学。作为一种综合、宏观的和可量化的鉴别手段的指纹图谱，是指经过适当的处理后，采用一定的分析手段如光谱或图谱，得到能够标示该样品特征的色谱或光谱的谱图或图象。在完整地呈现出色谱的特征“面貌”的前提下，表达了对照品与待测样品指纹图谱的相似性，用以产品真伪鉴别，评价其质量的均一性和稳定性。 蜜源植物的花蜜是蜂蜜的主要来源，由于同种蜜源植物具有整体的遗传相似性，因此，同一种类的单一花蜜在成分上也具有相似性。同时，经采集、酿造后的成熟蜂蜜其成分除糖类的含量有明显变化外，来源于蜜源植物的次生代谢物质等微量活性成分一般不会发生较大的变化，这使指纹图谱技术应用于蜂蜜种类和真伪鉴别成为可能。借助于现代分析技术对蜂蜜中主要特征功效成分信息以图形（图像）的方式进行表征并加以描述，这就是蜂蜜指纹图谱的内涵［１８］。 ２．指纹图谱的种类 指纹图谱已广泛的应用于食品品种和质量的鉴别，其根据测定方法的不同，大体分为色谱指纹图谱、光谱指纹图谱和ＤＮＡ指纹图谱。其中，以高效液相色谱指纹图谱应用最为广泛。 ２．１色谱指纹图谱 色谱技术种类繁多，是获得指纹图谱的最常用的方法。其中，高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）是应用最多的一种方法，６０％～７０％的有机物均可应用，具有高压、高速、高效、高灵敏度等特点，是所有光谱色谱分析中最适合绘制指纹图谱的方法。近２０多年来，随着仪器和柱技术、样品预处理技术的发展成熟及仪器的日益普及，ＨＰＬＣ作为食品中的营养成分、功能因子、食品添加剂及污染物的一种快速、准确、易于自动化的检测手段，在食品分析中的应用发展很快；高效液相色谱－质谱（ＭＳ）联用，能够将未知成分的各峰进行归属；当前，高效液相色谱已经用于蜂蜜某些糖分的定量与定性的常规分析；反相液相色谱在类黄酮成分分析方面也有很多的报道［６］。 薄层色谱（ＴＬＣ）法出现于１９５６年，具有操作简单，展开剂组成灵活多样，色谱后衍生方便，可以提供色彩斑斓 蜂蜜高效液相色谱指纹图谱的研究进展 西南大学食品学院王文静