香菇胞壁多糖的分子量测定及结构分析_林志超
香菇(Lentinus edodes )是口蘑科的食用真菌,其营养丰富,含有多种生物活性物质,如香菇多糖、香菇菌素、氨基酸等[1-3]。近年来研究发现,香菇多糖具有抗肿瘤、抗病毒等功效[4-8]。其药理学机理是刺激肌体免疫系统使肌体免疫功能得到恢复和提高,由肌体本身的抵抗力去抑制肿瘤细胞[9]。很多报道提出,多糖的分子量、单糖组成及结构与其功能活性具有明显的相关性[10-12];同时多糖分布于胞内、胞外和胞壁上,种类繁多,功能不一[3]。因此研究多糖分子量、单糖组成及结构很有必要。
香菇胞壁多糖(Lwp )是通过对香菇细胞壁进行拆分,获得的其中一种组分。此类多糖较少见于报道,具有较高的研究价值。本研究对分离纯化后Lwp 的纯度、分子量、单糖组成、糖链结构等理化性质进行研究,为进一步研究其生物活性及其在食品和医药领域中的广泛应用提供参考。
1材料与方法
1.1
材料
1.1.1供试样品
香菇胞壁多糖(色谱纯)来源于双孢蘑菇细胞壁的拆分,由漳州师范学院菌物产业工程技术中心自制(另文发表)。
1.1.2试剂Dextran T-500、T-110、T-70、T-40和T-10系列多糖分子量标准物(瑞典Pharmacia 公司);单糖标准样品鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖(国药集团化学试剂有限公司);其它试剂均为国产分析纯。1.1.3
仪器与设备
高速冷冻离心机centrifuge
5810R (德国艾本德);气相色谱仪CP-3800(美国瓦里安);液相色谱仪Agient 1200(美国安捷伦);蒸发光散射检测器Alltech ELSD 3300(美国Grace 公司)。
热带作物学报2013,34(11):2108-2111Chinese Journal of Tropical Crops
收稿日期2013-07-22修回日期2013-09-03基金项目福建省自然科学基金项目(No.2013J01149)。
作者简介林志超(1978年—),男,硕士,讲师;研究方向:天然产物提取分析。*通讯作者:潘裕添,E-mail :xmpyt@https://www.sodocs.net/doc/9f9443024.html, 。
香菇胞壁多糖的分子量测定及结构分析
林志超1,2,林娇芬1,2,苏毅1,黄家福1
欧一新1,庄远红1,2,潘裕添1*
1闽南师范大学菌物产业工程技术中心,福建漳州3630002闽南师范大学生物科学与技术系,福建漳州363000
摘要采用高效液相色谱、气相色谱和化学分析等方法对香菇胞壁多糖(Lwp )的纯度、分子量及基本结构进
行研究。结果表明:Lwp 分子量为245742u ,单糖组成为葡萄糖和极少量的甘露糖;Lwp 中1→4糖苷键残基比例为42.7％,1→6糖苷键残基比例为38.1％,1→3糖苷键残基比例为11.1％,1→2糖苷键残基比例为8.1％。关键词
香菇胞壁多糖;分子量;单糖组成;结构
中图分类号
TS255
文献标识码
A
Determination of Molecular Weight and Structure Analysis
of Polysaccharide from Lentinus edodes Cell Wall
LIN Zhichao 1,2,LIN Jiaofen 1,2,SU Yi 1,HUANG Jiafu 1
OU Yixin 1,ZHUANG Yuanhong 1,2,PAN Yutian 1
1Engineering Technological Center of Mushroom Industry,Minnan Normal University,Zhangzhou,Fujian 363000,China 2Department of Biological Science and Technology,Minnan Normal University,Zhangzhou,Fujian 363000,China
Abstract The molecular weight and structure of polysaccharide from Lentinus edodes cell wall (Lwp)were measured by the high performance liquid chromatography (HPLC),gas chromatography (GC)and chemistry analysis in this study.The results showed that Lwp was composed of glucose with few mannose,and molecular weight of Lwp was 245742u.Furthemore,Lwp had 1→4glucosidic bond (42.7%),1→6glucosidic bond (38.1%),1→3glucosidic bond (11.1%)and 1→2glucosidic bond (8.1%).
Key words Lentinus edodes cell wall polysaccharide;Molecular weight;Monosaccharide;Structure doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2013.11.006
网络出版时间：2013-11-27 11:03
网络出版地址：https://www.sodocs.net/doc/9f9443024.html,/kcms/detail/46.1019.S.20131127.1103.017.html
第11期采用HPLC 测定Lwp 分子量,Dextran T-10、T-40、T-70、T-110、T-500的色谱峰Rt 分别为4.228、4.36、4.46、4.494、4.68min ,以R t 对标准品M w 的对数值进行线性回归(图2),得回归方程为y =0.2689x +3.1435,R 2=0.9933,多糖分子量在10000~500000范围内与保留时间呈良好线性关系。Lwp 的R t 为4.593min ,代入方程求得Lwp 的相对分子量M w 为245742u 。2.2单糖组成分析
6种单糖标准物的糖腈乙酸酯衍生物经GC 后,
图1Lwp 的HPLC 色谱图
时间
/min
60050040030020010000
1.2方法
1.2.1纯度鉴定及分子量测定
(1)HPLC 测定条件。色谱柱:Zorbax GF-2507.5mm ×300mm ;柱温25℃;流动相为超纯水;流速0.3mL/min ;蒸发光散射检测器(ELSD )漂移管温度75℃;气体(N 2)流速2L/min ;气体压力3.9×105Pa 。
(2)标准曲线的制作。用Dextran T-10、T-40、T-70、T-110、T-500配制成0.1mg/mL 的标准样液,分别进行HPLC ,测得保留时间Rt 。以Rt 为横坐标,LgMw 归方程[14]。
(3)Lwp 的纯度,并测得1.2.2分析。
色谱条件:(30m ×φ0.53化室温度:300℃;气体30mL/min ;Air 为200mL/min [15]。
以鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖等为标准单糖作对照,同样糖腈乙酰化处理后进行GC 分析。
1.2.3糖苷键分析
采用高碘酸氧化及Smith 降解等化学方法分析[16-18]。Lwp 经高碘酸钠氧化后,在223nm 波长处测吸光度,根据高碘酸标准曲线计算出氧化前后每摩尔己糖残基高碘酸的消耗量,同时用0.01mol/L 氢氧化钠溶液滴定每摩尔己糖残基甲酸的释放量;Smith 降解产物糖腈乙酰化处理糖和甘露糖作对得出峰面积S 甘油、,液相图谱只出表明该样品为一图2分子量的标准曲线
时间/min
y =0.2689x +3.1435R 2=0.9933
4.84.74.64.54.44.34.24.14
4.2
4.4
4.6
4.85
5.2
5.4
5.6
5.8
林志超等院香菇胞壁多糖的分子量测定及结构分析2109--
第34卷
热带作物学报图4Lwp smith 降解产物的GC 图
A
5004003002001000
B
30025020015010050
0-25A 中)。
图36种单糖GC 标准谱图(A )与Lwp 的GC 谱图(B )
得图3-A 。可见,6种单糖获得了良好的分离,各单糖组分的R t 分别为:鼠李糖(3.958min )、阿拉伯糖(4.454min )、木糖(4.770min )、甘露糖(5.499min )、葡萄糖(5.997min )和半乳糖(7.174min )。
Lwp 的糖腈乙酸酯衍生物GC 图谱为图3-B 。通过图3-A 和图3-B 的对比,可以看出Lwp 有两个组分:甘露糖和葡萄糖。这是由于图3-B 中两个组分的Rt (5.492min 和5.991min )与图3-A 中葡萄糖和甘露糖的R t 基本一致。从图3-B 还可看出,Lwp 中主要的单糖为葡萄糖,还有极少量甘露糖,可以将其看 2.3糖链结构分析
543.6mg Lwp 经高碘酸氧化144h 后,在223nm 波长处检测吸光度达到稳定,说明多糖已经完全被氧化;此时pH 值为3.22,说明高碘酸没有被其他物质还原,没有超氧化[14]。144h 时样品的吸光度为0.2060,空白对照吸光度为0.5725。将两者之差代入高碘酸钠浓度回归方程y =0.0509x +0.0025,R 2=0.9999,可计算得每摩尔己糖残基消耗1.27mol 高碘酸,同时生成0.381mol 的甲酸,表明其中1→6糖苷键连接残基占38.1％。Lwp 经高碘酸氧
图4,根据峰面
2.52.01.51.00.50.0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
时间/min
2110--
第11期积归一法,得到降解产物结果分析表(表1)。由表1可见,产物中甘油占比为46.2％,赤藓醇占比为42.7％,葡萄糖和甘露糖占比为11.1％,可推知每摩尔己糖残基中1→4键为0.427moL ,1→6键和1→2键为0.462moL ,1→3键为0.111moL 。结合生成的甲酸量和降解产物比例,可推算出Lwp 中1→4糖苷键残基比例为42.7％,1→6糖苷键残基比例为38.1％,1→3糖苷键残基比例为11.1％,1→2糖苷键残基比例为8.1％。
3讨论与结论
Lwp 经HPLC 测定其分子量为245742u ;Lwp 单糖组成为葡萄糖和甘露糖,其中葡萄糖占绝大部分,甘露糖含量极少;通过高碘酸氧化和smith 降解可初步确定糖苷键连接方式,Lwp 中1→4糖苷键残基比例为42.7％,1→6糖苷键残基比例为38.1％,1→3糖苷键残基比例为11.1％,1→2糖苷键残基比例为8.1％;关于Lwp 结构的后续分析还可通过核磁共振谱等分析手段进行[19-21],但限于条件没有进行。
上述结果与其他文献相关报道[22-23]有所差别,这可能是由于香菇胞壁多糖具有独特性,它是从香菇细胞的细胞壁中拆分出来的,在分子量与结构上不同于其他香菇多糖。壁多糖在分子量与结构上的这种独特性,可能会使其具备一些不同于其他香菇多糖的生物活性,如促血管生成等,值得进一步研究。
参考文献
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州:华南理工大学,2010.表1
Lwp smith 降解产物结果分析
峰号名称保留时间/min 类型峰面积/(V*s )
峰面积/％1甘油
1.662VV 3318257246.16802赤藓醇
2.633VP
3071180042.73033葡萄糖 6.731VB 721702210.04134
甘露糖 6.142
VV
762144
1.0604
合计63930040
100.0000责任编辑:沈德发
林志超等院香菇胞壁多糖的分子量测定及结构分析
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香菇多糖提取工艺的研究进展
香菇多糖提取工艺的研究进展 香菇多糖提取工艺的研究进展 香菇Lentinusedodes 为担子菌纲伞形科真菌，是世界上第二大食用菌。香菇多糖是香菇中最重要的一种生物活性物质，具有抑制肿瘤、调节免疫、抗病毒和抗氧化等多方面的药理活性，且毒副作用小。香菇多糖的提取常用水提醇沉法、酸碱提取法，但存在提取工艺复杂、溶剂使用量大、时间长等缺点，而且容易造成多糖降解，生物活性降低。本文主要对近年来香菇多糖提取工艺优化研究方面的进展进行阐述。 1.超声波提取 超声波提取法是利用超声波特殊的物理性质，加速介质质点运动、空化作用、振动匀化等以增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，从而使药效物质加速融人溶剂提高有效成分的得率。 王恒等用超声波辅助法从香菇中提取香菇多糖，通过实验优化确定出香菇多糖最佳提取工艺为超声功率200W ，料液比 35：1，超声时间40min ，香菇多糖提取率为6.72 ％。王俊颖等采用超声法浸提香菇多糖通过正交试验设计确定的最佳工艺为料水比1 : 25，超声温度60° C超声时间30min , 超声功率300W ，多糖得率为8.72 ％。李宏睿等采用正交试验设计，对香菇多糖的提取条件进行优化，并与单纯的热水浸提进行比较。结果表明，在料水比 l：25 ，超声时间35min ，超声功率105W ，热水浸提温度 90 ％，浸提时间20min 的条件下，提取效果最好，多糖提取率为13.75 ％，比单纯热水浸提法提高6.22％。 2.微波提取 微波辅助提取技术主要是通过调节微波加热的参数，有效地加热物料中的目标成分，对目标成分进行选择性提取。刘小丽等研究微波辅助法提取香菇多糖采用单因素试验对固液比、微波辐射功率、辐射时
(完整版)粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1) 1. 原理 分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。 2. 适用范围 参照AOAC方法。适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。 3.仪器 （1）分光光度计 （2）离心机 （3）旋转混匀器 （4）恒温水浴锅 4.试剂 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 （1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。 （2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。溶液可贮存2周。 （4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。 （5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。 （7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。 （8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。 （9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。 粗多糖的测定方法(2) 5. 操作方法 5.1 样品处理 （1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。 （2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。 （3）沉淀葡聚糖：上述残渣用水溶解，并定容至50ml （V3），混匀后过滤，弃初始滤液后，取滤液2.0ml （V4），加入2.5mol/L NaOH 2.0ml，Cu应用溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2mim，冷却后以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用洗涤液洗涤3次，残渣供测定葡聚糖之用。 （4）测定葡聚糖：上述残渣用2.0mL 1.8mol/L H2SO4溶解，用水定容至100mL（V5）。准确吸取2.0ml（V6），置于25ml比色管中，加入1.0ml苯酚溶液，10ml浓硫酸，沸水浴煮沸2分钟，冷却比色。从标准曲线上查得相应含量，计算粗多糖含量。 5.2 标准曲线制备：
超声波法提取香菇多糖实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除超声波法提取香菇多糖实验报告 篇一：超声波提取香菇多糖汇报 项目名称： 超声波提取香菇多糖 【工作汇报】 超声波提取香菇多糖 操作者姓名：王岚 班级技术102 专业生物技术 前言 1、实训的背景、目的和意义： 实训背景： 香菇(Lentinulaedodes)是侧耳科的 担子菌,味道鲜美,药食两用,具有较好的保健作用。香菇多糖是香菇中的重要营 养成分和有效药用组分,具有抗病毒、抗 肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能,香菇还
原糖对于人体糖分的补充也起着重要作用 测定蛋白质的方法可分为两大类：一类是利用蛋白质的物理化学性质来推算，如密度、折射率、紫外吸收、荧光性等；另一类是利用化学方法来计算，如定氮、双缩脲反应、染料结合反应、酚试剂反应等 主要测定方法有：双缩脲法、染料结合法、酚试剂法、紫外分光光度法、水扬酸比色法、折光法、旋光法、近红外光谱法. 目前蛋白质测定最常用的方法是凯氏定氮法，是通过测总氮量来确定蛋白质含量的方法。 实训目的及意义： 1、 2、 2、实训要解决的问题： 掌握微量凯氏定氮仪测定蛋白质含量的原理。熟练掌握微量凯氏定氮仪测定蛋白质含量的操作技术。 1、微量凯氏定氮法与常量法的同点？ 2、根据08年国标，样品消化完全一小时之后，需要冷却后加20ml水，为什么会有晶体析出，成分是什么，为什么会析出？ 3、香菇多糖的主要成分是什么？如何脱蛋白？ 3、实训操作关键技能
1．在蒸馏过程中，切勿关闭电炉，否则会引起硼酸液的倒吸。 2．环境中氨气的含量要低。 3．定氮仪各连接处绝对不能漏气。 4．所用橡皮塞、管用前均需处理。其方法是：浸在10％氢氧化钠溶液中煮沸约10min，再经水洗和水煮10min，最后冲洗数次。 材料及方法 1、实训材料及配制、预处理技术 干香菇，蒸馏水； 电热恒温鼓风干燥箱 组织粉碎机 圆底烧瓶，铁架台，温度计 超声波发生器（带加热功能） 真空泵，漏斗，滤纸，滤布，烧杯，量筒，玻璃棒等 微量凯氏定氮蒸馏装置一套、三角烧瓶、酸式滴定管、容量瓶溶液的配制 1．浓硫酸：分析纯，95.5% 2．80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。 3．6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。（每次测定均需现配）
香菇多糖提取工艺
香菇多糖提取工艺的研究 1引言 多糖类物质是所有生命有机体的重要组成部分，广泛存在于动物、植物和微生物细胞壁中,是生物体内除核酸和蛋白质以外的又一类重要的生物分子,尤其是一类重要的信息分子[1]。到目前为止，已有近300种的多糖化合物从天然产物中分离出来，其中植物提取水溶性多糖最为重要。从植物中提取多糖主要根据不同溶解度来选择溶剂进行。香菇多糖的提取一般有热水提取法、酸提取法、碱提取法、酶提取法和微波助提法等方法[2]，本文进行了浸提香菇多糖的工艺条件研究，以期获得香菇多糖的最佳提取条件，为其产业化生产提供有效的方法和技术参数。本实验采用各种溶剂和酶的处理,提取香菇多糖,保持多糖的生物活性，效果是明显的。 1.1香菇多糖的组成与药理价值 香菇多糖(LentinanLNT) 是一种β—1,3—葡聚糖，系从担子菌纲伞菌科真菌香菇子实体中提取分离纯化获得的均一组分的多糖。多糖以甘露糖为主，含少量的葡萄糖、微量的岩藻糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖等；肽链由天冬氨酸、组氨酸、丝氨酸、赖氨酸、谷氨酸等18种氨基酸组成。LNT的化学结构是一种以β—D—[1~3]葡萄糖残基为主链，侧链为(1—6)葡萄糖残基的葡聚糖，平均分子量约为50万道尔顿[3]。 香菇多糖1969年在日本首先发现，自此，国内外学者对LNT作了许多深人的研究。近年来，LNT广泛药理作用研究取得了很大进展。主要的药理价值有：免疫调节作用；抗肿瘤作用[4]；抗病毒作用；对寄生虫、霉菌、细菌等感染均有治疗作用；有抗衰老、抗辐射作用，还具有预防实验性高脂血症和高血糖作用。在临床上LNT还用于治疗小儿反复呼吸道感染，糖尿病，寻常型银屑病，硬皮病，面部扁平，尖锐湿疹等。此外，硫酸化香菇多糖具有显著抗HIV作用，香菇多糖在治疗胃
多糖含量的测定
多糖含量的测定 1.原理 分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。 2.适用范围 参照AOAC方法。适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。3.仪器 （1）分光光度计 （2）离心机 （3）旋转混匀器 （4）恒温水浴锅 4.试剂 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 （1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。 （2）2.5mol/LNaOH溶液：100gNaOH加蒸馏水稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和。 （3）铜贮存液：称取3.0gCuSO4·5H 2 O，30.0g柠檬酸钠加水溶解至1 L。溶液可贮存2周。 （4）铜应用溶液：取铜贮存液50ml，加水50ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。 （5）洗涤液：取水50ml，加入10ml铜应用溶液，10ml2.5mol/LNaOH溶液，混匀。 （6）1.8mol/LH 2SO 4 ：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。 （7）20g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0mg/ml。 （9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。 5.操作方法 5.1样品处理 （1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml（V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。 （2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml（V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。 （3）沉淀葡聚糖：上述残渣用水溶解，并定容至50ml（V3），混匀后过滤，弃初始滤液后，取滤液2.0ml （V4），加入2.5mol/LNaOH2.0ml，Cu应用溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2mim，冷却后以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用洗涤液洗涤3次，残渣供测定葡聚糖之用。 （4）测定葡聚糖：上述残渣用2.0mL1.8mol/LH 2SO 4 溶解，用水定容至100mL（V5）。 准确吸取2.0ml（V6），置于25ml比色管中，加入1.0ml苯酚溶液，10ml浓硫酸，
香菇多糖的提取纯化方法
香菇多糖的提取纯化方法 吕红常秀莲* （烟台大学生命科学院，烟台264005） 摘要：香菇多糖是香菇中分离出的一种重要的具有生理活性的物质，具有抗病毒、抗肿瘤、增强人体免疫力等多种功能，在保健食品和药品开发方面具有广阔的应用前景。概括介绍当前常用的热水浸提法、酶解法、微波提取法和深层发酵培养法等6种香菇多糖的提取方法。并简单比较香菇多糖提取的这几种方法并介绍了超滤-渗滤法和活性炭联合陶瓷膜超滤法这两种香菇多糖的纯化方法。 关键词：香菇多糖; 提取; 纯化; 抗癌;抗病毒 Extraction and purification of Lentinan Lvhong changxiulian* (Yantai university life academy of sciences, Yantai 26005) Abstract: Lentinan was isolated from mushrooms with an important physiological activity of substances with anti-virus, anti-cancer, enhance immunity and other functions. It has broad application prospect s in health food and drug’s development. Give overview of the current formulation used in hot water, enzymatic method, microwave extraction and deep fermentation method 6 kinds of mushroom polysaccharides method, And Introduced the Ultrafiltration-filtration method and the Activated carbon ceramic membrane joint ultrafiltration method of Lentinan purification. Keywords: Mushroom polysaccharide ; Separation ; cancer ; antiviral 1引言 香菇多糖(Lentinan) 是一种β-1,3-葡聚糖, 是从担子菌纲伞菌科真菌香菇子实体中提取分离纯化获得的均一组分的多糖，能治疗癌症, 抗恶性肿瘤, 抗病毒, 抗感染, 提高人体免疫力等多种生理功能。目前国内对香菇多糖的分离有了很大发展，主要采用的方法有传统热水提取法、酸提取法、碱提取法、这些方法都有其优点，也有其难以克服的不足之处。与传统方法相比微波辅助提取法具有设备简单，快速，高效，安全等特点。 2香菇多糖的提取方法 2.1 热水浸提法 这是最早采用的一种传统方法：香菇多糖溶于水，热水浸提时，香菇组织细胞膨胀破裂，多糖成分浸出。 热水浸提香菇多糖，浸提时的料液比、温度、时间、pH、醇析时的乙醇添加倍数及提取次数是影响多糖得率的主要因素。 对料液比而言，若加水太少，提取不彻底；加水太多，容易降低提取液的固形物含量，不利于以后的分离，且加重了工业生产中的后续工艺，一般为1：20左右。对温度来说，随着提取温度的升高，粗多糖得率逐渐升高，在80%一95%时达到高峰，再提高温度时，粗多糖得率升高趋势趋于平缓，考虑到高温会破坏多糖的结构，影响其生物活性，同时高温提取对工业化生产的设备要求更严格。所以，提取温度一般以80 ℃一95 ℃为宜。 随着提取时间的延长，粗多糖得率逐渐增加，0.5 h一3 h之间趋势明显，继续延长提取时间，多糖得率加趋势逐渐趋于平缓，一般浸提时间为8 h一12 h。热水浸提时的pH为自然pH值，大约在6-8之间。而对醇析时提取液的乙醇浓度来说，随着其逐渐升高，多糖得率亦
香菇多糖质量标准
正式名：香菇多糖汉语拼音：Xianggu 标准号：WS-291（X-256）-97 拉丁文或英文：Lentinan 主要活性成分：香菇[Lentinus edodes（Berk）sing]子实体提取、精制的多糖。按干燥品计算，含香菇多糖应不得少于%。 性状：类白色或浅黄色粉末；无味，有引湿性。在水、甲醇、乙醇或丙酮中几乎不溶；在L氢氧化钠中溶解。 比旋度取本品，置五氧化二磷干燥器中，减压干燥至恒重，精密称取适量，加L氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含10mg的溶液，依法测定（中国药典），范围在+2～+15之间。 鉴别：（1）取含量测定项下的溶液2ml，加蒽酮溶液（取蒽酮35mg置100ml量瓶中加硫酸溶解，并用硫酸稀释至刻度，即得，临用配制）5ml，振摇混匀，置水浴中加热，应显蓝绿色。 （2）取本品约10mg，滴加水少许研磨，再加水制成每1ml中含的溶液，置匀浆器中制成匀浆液，取10ml，加高碘酸钠溶液[取高碘酸钠（NaIO4）4.28g，加L硫酸溶液。溶解并稀释至1000ml]1ml，摇匀，立即取反应液4ml，以水为空白对照，照分光光度法（中国药典1995年版二部附录ⅣA），在295nm的波长处测定吸收度（A1），剩余的反应液置避光容器中。于3O℃连续搅拌6小时后，取出，测定吸收度（A2）。两次吸收度之差（A1-A2）应为～。 （3）红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致，在89Ocm-1上附近有弱吸收峰。 检查：酸碱度取本品，加水制成%的匀浆液，依法测定（中国药典1995年版二部附录Ⅵ H），pH值应为～。 特性粘数取本品，置五氧化二磷干燥器中，减压干燥至恒重，精密称取适量，加L 氢氧化钠溶液数滴，使充分溶胀，研磨均匀，在25～30℃放置6～8小时，使完全溶解，制成每1ml中含的溶液，摇匀，依法测定（中国药典1995年版二部附录ⅥG第三法），特
高分子相对分子量的测定
高分子分子量的主要测定方法 用途 高聚物的分子量及分子量分布，是研究聚合物及高分子材料性能的最基本数据之一。它涉及到高分子材料及其制品的力学性能，高聚物的流变性质，聚合物加工性能和加工条件的选择。也是在高分子化学、高分子物理领域对具体聚合反应，具体聚合物的结构研究所需的基本数据之一。 表征方法及原理 1.粘度法测相对分子量（粘均分子量Mη） 用乌式粘度计，测高分子稀释溶液的特性粘数[η]，根据Mark-Houwink公式[η]＝kMα，从文献或有关手册查出k、α值，计算出高分子的分子量。其中，k、α值因所用溶剂的不同及实验温度的不同而具有不同数值。 2.小角激光光散射法测重均分子量（Mw） 当入射光电磁波通过介质时，使介质中的小粒子（如高分子）中的电子产生强迫振动，从而产生二次波源向各方向发射与振荡电场（入射光电磁波）同样频率的散射光波。这种散射波的强弱和小粒子（高分子）中的偶极子数量相关，即和该高分子的质量或摩尔质量有关。根据上述原理，使用激光光散射仪对高分子稀溶液测定和入射光呈小角度（2℃－7℃）时的散射光强度，从而计算出稀溶液中高分子的绝对重均分子量（MW）值。采用动态光散射的测定可以测定粒子（高分子）的流体力学半径的分布，进而计算得到高分子分子量的分布曲线。 3.体积排除色谱法（SES）（也称凝胶渗透色谱法（GPC）） 当高分子溶液通过填充有特种多孔性填料的柱子时，溶液中高分子因其分子量的不同，而呈现不同大小的流体力学体积。柱子的填充料表面和内部存在着各种大小不同的孔洞和通道，当被检测的高分子溶液随着淋洗液引入柱子后，高分子溶质即向填料内部孔洞渗透，渗透的程度和高分子体积的大小有关。大于填料孔洞直径的高分子只能穿行于填料的颗粒之间，因此将首先被淋洗液带出柱子，而其他分子体积小于填料孔洞的高分子，则可以在填料孔洞内滞留，分子体积越小，则在填料内可滞留的孔洞越多，因此被淋洗出来的时间越长。按此原理，用相关凝胶渗透色谱仪，可以得到聚合物中分子量分布曲线。配合不同组分高分子的质谱分析，可得到不同组分高分子的绝对分子量。用已知分子量的高分子对上述分子量分布曲线进行分子量标定，可得到各组分的相对分子量。由于不同高分子在溶剂中的溶解温度不同，有时需在较高温度下才能制成高分子溶液，这时GPC柱子需在较高温度下工作。 4.质谱法 质谱法是精确测定物质分子量的一种方法，质谱测定的分子量给出的是分子质量m对电荷数Z之比，即质荷比（m/Z）过去的质谱难于测定高分子的分子量，但近20余年由于我的离子化技术的发展，使得质谱可用于测定分子量高达百万的高分子化合物。这些新的离子化技术包括场解吸技术（FD），快离子或原子轰击技术（FIB或FAB）,基质辅助激光解吸技术（MALDI-TOF MS）和电喷雾离子化技术（ESI-MS）。由激光解吸电离技术和离子化飞行时间质谱相结合而构成的仪器称为“基质辅助激光解吸－离子化飞行时间质谱”（MALDI-TOF MS 激光质谱）可测量分子量分布比较窄的高分子的重均分子量（Mw）。由电喷雾电离技术和离子阱质谱相结合而构成的仪器称为“电喷雾离子阱质谱”（ESI- ITMS 电喷雾质谱）。可测量高分子的重均分子量（Mw）。
香菇多糖提取作业
香菇多糖提取 提取法： 用物理提取的方法生产精细化学品，即通过将某一种物质按一定的要求从混合物中提取出来从而获得产品的方法。 张杨杨 精化1122 1、认识香菇多糖 (1)香菇多糖结构式 分子式：〔C42H72O36〕n 分子量：〔1152.9995〕n
(2)香菇多糖性质 香菇多糖（l e n t i n a n;L N T）是从香菇中分离纯化的一种葡聚糖，是以增强T细胞和巨噬细胞功能为主的免疫增强剂。 密度：1.88g/c m3；沸点：1472℃a t760m m H g。 溶于碱溶液或甲酸，微溶于热水或二甲亚砜，不溶于冷水、醇、乙醚、氯仿、吡啶或六甲基磷酰胺。对硫酸和盐酸稳定。 (3)香菇多糖的功能 香菇多糖具有激活细胞免疫、调节多种体液免疫因子、诱导α-干扰素生成，调节机体免疫应答反应，诱导白细胞对肿瘤浸润，导致肿瘤部位血管扩张、出血、坏死，阻止病毒与宿主细胞的结合，提高S O D〔超氧化物歧化酶〕活性，抑制M D A〔丙二醛〕生成，抗脂质氧化，降低胆固醇，调节糖代谢、改善糖耐量、扩张胃肠道产生饱腹感而减轻食欲，降低血糖等功能。 【丙二醛】 英文名：M a l o n d i a l d e h y d e;m a l o n i c d i a l d e h y d e;P r o p a n e d i a l 简称：M D A 分子式O H C-C H2-C H O 分子量72.0634 无色针状晶体，熔点72～74℃，一般含两个结晶水，60℃下真空干燥可得无水物，易潮解，纯的丙二醛在中性条件下稳定，但在酸性条件下不稳定。 由乙醛和甲酸乙酯在碱作用下缩合而得，可在高真空下升华精制，主要用于医药中间体、感光色素的原料。与蛋白质不相容，有潜在的致癌性。
香菇多糖提取实验汇报
超声波法提取香菇多糖 研究背景： 香菇多糖的性质：香菇多糖以β~1，3葡聚糖为主，含有少量的木糖和甘露糖，具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能 用途：抗肿瘤药。为化、放疗辅助药。主要用于胃癌、肺癌、乳腺癌。 生产技术状况：因为香菇多糖的用途广泛，提取比较方便，越来越多的人投身于这方面的研究，是的提取技术方面的大幅度提升。状况良好。 操作过程： 方案设计：香菇多糖的提取 香菇预先烘干→称取干香菇15克→粉碎→圆底烧瓶→200ml热水70℃→超声波发生器（水预热在60℃左右）→提取45min（中间停顿2次，每次5min）→过滤→滤渣→等滤液体积热水70℃→提取30min（中间超声波停2次，每次5min）→过滤→合并滤液→抽滤→滤液→量体积标识贮藏备用 香菇多糖的测定：1.首先去掉香菇多糖溶液中的的蛋白质：采用氯化钙法：将溶液PH 调节至8---9，加热到85℃，加入氯化钙使浓度达5% (w/v)，搅拌，冷却至室温，过滤，得脱蛋白多糖液。 2.制作标准曲线：准确吸取1mg/ ml 葡萄糖标准溶液1.0 、2.0 、 3.0 、 4.0 、 5.0ml 置于50ml 容量瓶定容，准确吸取该系列溶液各2ml ，然后加入6%苯酚1.0ml 及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。 3. 样品的测定：取去完蛋白的样液2ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度。将吸光度控制在0.2-0.8 人员分工：我们分成两组来完成实验，因为有两组待测夜要进行测定。然后标准溶液是由第一大组完成。由于操作比较简单，我们就一起完成。1人对溶液进行去蛋白，2人制作待测液，1人对待测液进行测定，并记录数据。 实验现象：配置待测液时，加入浓硫酸后溶液变成橙黄色。从而可来额定吸光度。（附照片）总结分析
香菇中糖类物质离与测定
香菇中糖类物质离与测定
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香菇中糖类物质的分离与测定 摘要：本实验采用热水浸提和乙醇醇沉的方法提取香菇多糖（Lentinan，LNT），利用正交法得出最佳提取粗多糖的方案，得到的粗多糖回收率为14.05﹪，再对得到的粗多糖进行定性、定量分析。用苯酚—硫酸法测定已提取出的粗多糖中单寡糖与多糖的含量为35.9%；经过薄层层析和纸层析法分析单糖的组成，其中组成多糖的单糖多属于葡萄糖和阿拉伯糖；用 Sepharsose CL—6B柱层析法测定多糖的相对分子量约为5597.58道尔顿。气象色谱分析单糖含的结果是香菇多糖中的单糖种类有半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、岩藻糖等，其中含量较多的半乳糖和葡萄糖。 关键字：香菇多糖回收率含量组成相对分子量 Separation and Determination of carbohydrates in Lentinus edodes Abstract：This experiment extracts of lentinan (Lentinan LNT) by using hot water extraction and ethanol alcohol precipitation method. The orthogonal method to get the optimum extraction of polysaccharides is the best program, resulting polysaccharides recovery of 14.05%, and then to get crude polysaccharide qualitative and quantitative analysis. By using Phenol-sulfuric acid method, extracted polysaccharides single oligosaccharides and polysaccharides content was 35.9%; TLC and paper chromatography analysis monosaccharide composition, the monosaccharide composes mostly of glucose and arabinose; Relative molecular weight of polysaccharide determined by Sepharsose CL-6B column chromatography is about 5597.58 daltons. The results of gas chromatographic analysis of a monosaccharide is galactose, glucose, arabinose, fucose, sugar, and other types of monosaccharides in the lentinan. galactose and glucose are much more among them. Key words： Lentinan; Recoveries; Content; Composition; Relative molecular weight 0 引言： 糖类化合物是中药的重要成分，随着现代生物化学与分子生物学的不断发展与进步，人们对糖的了解越来越多。而糖生物学研究对揭示生命本质，实现中药现代化，深入开发中药资源有着重要的意义。但是,目前多糖的研究主要以陆生植物为主, 有些源于名贵中药,这不
实验二氧化碳分子量的测定
实验二氧化碳分子量的 测定 TTA standardization office【TTA 5AB- TTAK 08- TTA 2C】
实验二氧化碳相对分子量的测定 实验目的 1、学习气体相对密度法测定分子量的原理、加深理解理想气体状态方程式和阿佛加德罗定律。 2、掌握二氧化碳分子量的测定和计算方法 3、进一步练习使用启普气体发生器和电子天平称量的操作。 实验原理 1、阿佛加得罗定律：同温、同压、同体积的气体含有相同的分子数，即摩尔数相同。根据阿佛加德罗定 律，只要在同温、同压下，比较同体积的两种气体(设其中之一的分子量为巳知)的质量，即可测定气态 物质的分子量。 本实验是把同体积的二氧化碳气体与空气(其平均分子量为相比，此时有： m空气/ M空气 = m CO2 / M CO2, 即 M CO2＝ m CO2·M空气/ m空气其中， M空气＝ 2、理想气体状态方程 PV=n R T 3、制备二氧化碳 反应方程式： CaCO3+2HCl=CaCl2+CO2+H2O 因为大理石中含有硫，所以在气体发生过程中有硫化氢、酸雾、水汽产生。此时可通过硫酸铜溶液，碳酸氢钠溶液以及无水氯化钙除去硫化氢，酸雾和水汽。 实验内容 1、二氧化碳的制取、收集和净化 2、第一次称量 取一个洁净而干燥的锥形瓶，选一个合适的瓶塞塞入瓶口，并在塞子上做一记号，以固定塞子塞入瓶口的位置，在电子天平上称量质量m A：m A=m空气+m锥形瓶+m瓶塞 3、收集二氧化碳 在启普发生器中产生二氧化碳气体，经过净化、干燥后导入锥形瓶中。由于二氧化碳气体略重于空气，所以必须把导管伸入瓶底。收集满气体后，轻轻取出导气管，用塞子塞住瓶口(应与原来塞入瓶 口的位置相同)。 4、第二次称量： 在电子天平上称量二氧化碳、锥形瓶、瓶塞总质量m1： m1=m co2+m锥形瓶+m瓶塞 5、平行称量重复3、4步操作，得m2 m2=m co2+m锥形瓶+m瓶塞 6、将4、5的称量值即m1、m2求平均值m B。 m B＝ m co2平均+m锥形瓶+m瓶塞 7、在锥形瓶内装满水，塞好瓶塞，注意橡皮塞进入的高度与记号相齐。 8、第四次称量 在台秤上称取水+锥形瓶+瓶塞的质量为 m c： m c＝m水+m锥形瓶+m瓶塞 数据处理 根据阿佛加得罗定律： m空气/ M空气 = m CO2 / M CO2, 即 M CO2＝m CO2·M空气/ m空气 其中， M空气＝ 即 M CO2＝ .m CO2/ m空气 (1) 那么， m空气＝？
香菇多糖的提取纯化及其理化性质的研究_张欣
香菇多糖的提取纯化及其理化性质的研究3 张 欣 吕作舟 (华中农业大学 武汉 430070) 摘要 本研究以香菇菌盖、菌柄、菌丝体为试材,采用水浸法、碱浸法提取香菇多糖。并且,从香菇菌盖中提取纯化得到两种新多糖:香菇多糖A(水浸物)和香菇多糖B(碱浸物)。 关键词 香菇 菌盖 多糖 提取 纯化 理化性质 香菇(Lentinula edodes)不仅是一种美味佳肴,也是一种著名的药用菌。我国历代的医药学家对香菇的药性及功能均有著述,如《日用本草》认为香菇“益气、不饥、治风、破血”〔1〕。现代研究结果表明,香菇中含有能降低血浆胆固醇的香菇嘌呤〔2〕,含有诱生干扰素的双链核糖核酸〔3〕,且含有抗肿瘤活性物质———香菇多糖及香菇糖肽〔4,5〕。 1970年G oro Chihara首先从香菇子实体中浸提出6种香菇多糖,并证明其中一种具有明显的抗肿瘤作用,定名为Lentinan〔5〕。自此,世界各地掀起了一股从大型真菌中寻找抗肿瘤药物的热潮。有关香菇多糖的研究尤其活跃,包括提取工艺及分离纯化研究,香菇多糖理化性质及药用价值研究〔6,7,8〕。但对多糖理化性质、结构、药效、药理等方面仍无定论,仍须继续深入研究。 本研究以香菇的菌盖、菌柄、菌丝体为试材,分别采用水浸法、碱浸法提取香菇多糖,检测分析了粗多糖、多糖、蛋白质与原材料之间量的关系,并且,从香菇菌盖中提纯了两种新多糖,对其理化性质和结构进行了初步研究,为进一步对香菇多糖的结构分析、药效、药理实验提供参考。 本研究主要结果如下: 11以香菇菌盖、菌柄、菌丝体为试材,采用水浸法、碱浸法提取香菇多糖。粗多糖、多糖得率都以菌盖的水浸物为最高,而以菌丝体的碱浸物为最低。蛋白质得率以菌柄水浸物为最高,以菌丝体的碱浸物为最低。 21氨基酸自动分析仪的分析结果表明:香菇菌盖水浸物、碱浸物中氨基酸含量丰富,其中包括人体必需氨基酸。水浸物主要含天门冬氨酸、谷氨酸;碱浸物主要含天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸。 31采用水浸法、碱浸法从香菇菌盖中提取粗多糖,然后经乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白、CT AB (十六烷基三甲基溴化铵)络合沉淀、氨化钠溶液溶解、透析,得到两种多糖:香菇多糖A(水浸物)和香菇多糖B(碱浸物)〔9〕。这种纯化方法具有简便、经济的特点。 41多糖的纸层析结果表明:多糖A、多糖B均仅为一个斑点,R f值分别为0152,0120。多糖的PAGE电泳结果表明:多糖A,B均为紫红色的单一谱带,R f值分别为0151,0162;它们均从负极向正极移动,表明它们是酸性多糖。紫外光谱分析结果表明:多糖A、多糖B均未发现核酸(260nm)和蛋白质(280nm)特征吸收峰〔10〕。组分含量分析表明:多糖A、多糖B均无含氮物质存在,但含少量灰分和水分。以上对多糖的鉴定结果表明:多糖A、多糖B均一性高,多糖A的纯度为7911%,多糖B的纯度为8312%,符合化学定性定量标准;它们是酸性多糖。 51多糖A,B均为灰白色粉未。多糖B不溶于稀酸。多糖A,B均溶于水、稀碱,尤易溶于热水,不溶于乙醇、丙酮、乙醚、乙酸乙酯等有机溶剂,其水溶液透明粘稠状,可被5%CT AB络合沉淀。旋光计测得多糖A的旋光率为〔α〕D25℃+ 4311°(水),多糖B的旋光率为〔α〕D25℃+2513°(水)。采用改良型膜渗透压法测得香菇多糖A的数均分量为8131×104,香菇多糖B为9140×104。 61红外光谱分析结果表明,多糖A、多糖B具类似结构,但不属同一种物质。两种多糖在890cm-1均具吸收峰,在840cm-1均无吸收峰,表明它们为β-糖苷〔11〕;多糖A,B都含有-C OO-基团。因此,香菇多糖A、香菇多糖B均是β-酸性异多糖。 71纸层析结果表明:多糖A,B均由葡萄糖(G lc)、半乳糖(G al)、阿拉伯糖(Ara)、木糖(X yl)、鼠李糖(Rha)构成。用正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)为展开剂,以葡萄糖的R f值为1100,则它们的R f值之比为,G lc∶G al∶Ara∶X yl∶Rha= 1100∶1117∶1152∶1176∶2117。气相色谱检测多糖的单糖组成及摩尔比,多糖A为Ara∶Rha∶X yl∶G al∶G lc= 4136∶2103∶1100∶5164∶13180;多糖B为Ara∶Rha∶X yl∶G al∶G lc=9137∶1100∶1164∶7119∶23136。 3 湖北省重点科技计划项目。收稿日期 1999—07—20 43中国食用菌 E DI BLE FUNGI OF CHI NA V ol118,N o16
多糖的分子量测定
多糖的分子量测定 常用的是凝胶滤过法。将充分膨胀好的SephadexG-200、G-150或G-75湿法装柱，用一定离子强度的氯化钠水溶液进行平衡，然后将各种不同的已知分子量的多糖分别相继上柱，同一离子强度的氯化钠水溶液洗脱，分步收集，苯酚-硫酸法监测，分别求得洗脱体积Ve，然后再将兰葡聚糖（M V>200万）上同一条柱，求出柱的空体积V o，根据V e/V o与logM之间存在着线性关系，可绘制标准曲线。最后，将待测样品按上述不变的条件上柱，求得待测多糖的V e。通过标准曲线上的V e/V o，查得待测多糖的分子量对数，便可求出M。 对于黏度大的多糖，可采用黏度法求得。亦有用蒸汽压渗透法（VPO，基本原理是根据理想溶液的拉乌尔定律，参考文献：崔锡红, 等. 蒸汽压渗透法分析异丁烯的数均分子量. 河南化工. 2001, 1: 32. 骆传环. 蒸气压渗透计测定多糖分子量. 现代科学仪器, 1994, 4:11.）、超速离心法（骆传环, 等. 香姑多糖的分子量测定. 科学技术与工程. 2006, 6(8): 1058~1060）、光散射法（LS，光散射法测定高分子量基于高分子溶液的瑞利散射，垂直偏振光通过溶液产生的不同角度散射光的强度与溶质分子的大小即分子量成正比。参考文献：魏立平, 姜雄平. 光散射法在医学分子生物学中的应用. 国外医学分子生物学分册. 2000, 22(2): 123.）、玻璃纤维纸电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳（原理：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：lgM W=k-bX，式中：M W为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。应用如，将标准相对分子量蛋白质与样品进行SDS-PAGE凝胶电泳，以标准蛋白质的迁移率为纵坐标，lgM为横坐标，绘制相对分子质量曲线。根据样品迁移率得出相对分子质量。）测分子量，黏度法及超滤法估计分子量。利用不同方法测定多糖分子量可以从不同角度对多糖分子量进行确证，同时也是对多糖纯度的考察。在测定过程中要注意标准品的选择，尽量使用与被测多糖结构相似的标准品，因为不同结构的标准品虽然其绝对分子量相同而在一定条件下所表现的分子量会有所不同。
微波辅助法提取香菇多糖的工艺
香菇是我国传统的药食两用食品，含有多种有效药用成分。尤其是香菇多糖,是一种宿主免疫增强剂,具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能。医学研究证明,它是通过刺激机体的免疫系统使机体的免疫功能得到恢复和提高,由机体本身的抵抗力去杀死肿瘤细胞。它的作用是间接的，毒副作用小,在临床上具有很好的应用前景[1-2]。香菇多糖在日本已生产并外销。但因工艺复杂,收率低,成本高,普通肿瘤病人无法接受。为此,我们对香菇多糖的提取工艺进行研究,初步探讨出较为理想的浸提工艺,希望为其工业化生产提供一定的理论参考。 1材料与方法 1.1材料与试剂 香菇：购自西安市农贸市场；D318型阴离子交换树脂,LX-200型阴离子交换树脂，D201×7型阴离子交换树脂，LX-67型阴离子交换树脂：均购自西安蓝深公司;葡萄糖,苯酚,浓硫酸,无水乙醇,考马斯亮蓝G-205等均为分析纯。 1.2主要仪器设备 752型紫外可见分光光度计：上海光谱仪器有限公司；WP700TL23-K5微波炉：格兰仕电器有限公司；电热恒温水浴锅：北京长源实验设备厂；80-2B台式低速离心机：湖南星科科学仪器有限公司；Delta320pH 计：梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司。 1.3提取工艺[3-4] 干香菇→粉碎→加水浸泡20min→微波辐射→热水浸提30min→离心取上清液→浓缩→加乙醇沉淀多糖→离心分离多糖→多糖粗品制成溶液→上树脂柱去除杂蛋白→流出液真空干燥得香菇多糖产物试验中均以1g干香菇粉为提取对象。 1.4检测方法 香菇多糖含量测定：采用苯酚硫酸法[5]。测得标准 微波辅助法提取香菇多糖的工艺 刘小丽，黄晋杰 （长安大学环境科学与工程学院，陕西西安710054） 摘要：研究微波辅助法提取香菇多糖并用离子交换树脂去除杂质蛋白的工艺方法。采用单因素试验对固液比、微波辐射功率、辐射时间、乙醇用量以及杂蛋白的去除条件分别进行了考察。试验结果表明最佳提取工艺条件为:固液比1g∶20mL,微波辐射功率为280W，辐射时间5min，乙醇与多糖提取液体积比为4∶1，香菇多糖提取率可达到9.46%； 采用LX-67阴离子交换树脂在料液pH9时可有效去除蛋白质杂质，多糖纯度可达到85%。 关键词：香菇多糖；微波；离子交换树脂 Study on Microwave-assisted Extraction of Lentinan from Mushroom LIU Xiao-li，HUANG Jin-jie （College of Environmental Science and Engineering，Chang＇an University，Xi'an710054,Sh a anxi，China）Abstract:The methods of extracting lentinan from mushroom with micowave assisting were studied.The ratio of solid to water（g/mL）,microwave power,microwave extraction time,the usage of ethanol,and the remove of protein were studied respectively by the single factor test.The results showed that the optimum conditions of extraction were as follows:the ratio of material to liquid of1g∶20mL,microwave radiation power of280W,the radiation time for5min,the volume ratio of ethanol to liquor of4∶1,under this conditions the extraction rate of polysaccharide can get9.46%.The LX-67negative ion exchange resins were used to remove protein from the rude lentinan with the liquor at pH9,and the purity of lentinan can get85%. Key words:lentinan；microwave；ion exchange resins 作者简介：刘小丽（1975—），女（汉），讲师，在读博士，研究方向：食 品和药物中有用成分提取与分离。