2010_Korean freshwater fish by DNA barcode

Mol. Cells 30, 507-512, December 31, 2010

DOI/10.1007/s10059-010-0148-2

DNA Barcode-Based Molecular Identification System for Fish Species

Sungmin Kim1, Hae-Seok Eo2, Hyeyoung Koo3, Jun-Kil Choi3, and Won Kim1,4,*

In this study, we applied DNA barcoding to identify spe-cies using short DNA sequence analysis. We examined the utility of DNA barcoding by identifying 53 Korean freshwa-ter fish species, 233 other freshwater fish species, and 1339 saltwater fish species. We successfully developed a web-based molecular identification system for fish (MISF) using a profile hidden Markov model. MISF facilitates effi-cient and reliable species identification, overcoming the limitations of conventional taxonomic approaches. MISF is freely accessible at http://bioinfosys.snu.ac.kr:8080/MISF/ misf.jsp.

INTRODUCTION

DNA barcoding is a molecular diagnostic method that provides rapid and accurate species identification (Hebert and Gregory, 2005; Schindel and Miller, 2005). Since the late 1990s, DNA sequences have been used to infer evolutionary relationships among various biological species (Woese and Fox, 1997), and DNA-based taxonomic approaches are now arguably a neces-sity in biodiversity studies (Tautz et al., 2002). Analysis of varia-tions in short DNA sequences can accurately identify biological species (Hebert et al., 2003). Several studies have confirmed that a 648-bp segment of the 5′region of mitochondrial cyto-chrome c oxidase subunit I (COI) can be used as a DNA bar-code to identify most animal species (Hebert et al., 2003; Ward et al., 2009). DNA barcoding facilitates rapid (Hajibabaei et al., 2006) and credible identification of immature specimens (Stahls et al., 2009) and closely related species (Rock et al., 2008). Further, a combination of morphological and molecular identifi-cation methodologies provides a practical approach for the discovery of new species (Hebert and Gregory, 2005).

While the development of automated DNA barcode identifi-cation libraries has been important for ecosystem research and conservation, several problems arise during the construction of a successful DNA barcoding system. First, incorrect species identification can be caused by unbalanced taxonomic sam-pling from within and among populations (Lefebure et al., 2006), despite the fact that there are large assemblages of DNA bar-code sequences in the Barcode of Life Data Systems (BOLD, https://www.sodocs.net/doc/8816710143.html,) (Ratnasingham and Hebert, 2007) and the Korea Barcode of Life database (KBOL, https://www.sodocs.net/doc/8816710143.html,). To combat this problem, stringent statistical analyses should be performed to confirm species assignment (Nielsen and Matz, 2006). Second, complex evolutionary dis-tance models or likelihood methods can generate obscure spe-cies groupings, and these require considerable computation time (Nielsen and Matz, 2006). Finally, unclear statistical signify-cance values can be problematic when using the BOLD, TaxI, and BLAST systems (Ekrem et al., 2007; Steinke et al., 2005). In the present study, we adopted a machine learning ap-proach to resolve these problems (Baldi and Brunak, 2001). We applied this approach to biological datasets consisting of the sequences from 53 Korean freshwater fish species, 233 other freshwater fish species, and 1339 saltwater fish species. We developed a web-based Molecular Identification System for Fish (MISF) based on a profile hidden Markov model (HMM) that is suitable for modeling species-specific sequence patterns (Eddy, 1998). We conclude that the MISF can be used to cor-rectly identify fish species. Moreover, this is the first study in which a statistical HMM algorithm approach has been success-fully used to identify fish species.

MATERIALS AND METHODS

DNA sequence dataset

We collected 398 specimens from streams and rivers in South Korea. Genomic DNA was extracted from all fish using the Qiagen DNeasy Blood and Tissue kit, and the COI region was sequenced using PCR with the Folmer primer set (Folmer et al., 1994). All PCR reactions were performed using the following thermal cycling program: 1 min at 94°C followed by 35 cycles of 0.5 min at 94°C, 1 min at 50°C, and 1.5 min at 72°C, and a final extension for 10 min at 72°C. The 25 μl-PCR reaction mix con-sisted of 14.7 μl ultrapure water, 5 μl 5× PCR buffer, 1 μl of each primer (10 μM), 1 μl dNTP (10 mM), 0.3 μl Taq polymerase (5U), and 2 μl genomic DNA template. All sequences have been deposited in the Korea Barcode of Life (KBOL) database, along with specimen details, including date of collection, speci-men source, and specimen images. These data can be found in the “Korean freshwater fish 2007-2009” project, which can

Molecules

and

Cells

?2010 KSMCB

1Interdisciplinary Program in Bioinformatics, Seoul National University, Seoul 151-742, Korea, 2Information & Technology Laboratory, LG Electronics Inc., Seoul 137-130, Korea, 3Department of Biological Science, Sangji University, Wonju 220-702, Korea, 4School of Biological Sciences, Seoul National University, Seoul 151-742, Korea

*Correspondence: wonkim@plaza.snu.ac.kr

Received February 19, 2010; revised September 14, 2010; accepted September 15, 2010; published online November 23, 2010

Keywords: DNA barcoding, fish, hidden Markov model, molecular identification system for fish (MISF)

508 DNA Barcode-Based Molecular Identification System

be accessed via the Model ecosystems (KMOD) link on the KBOL website.

In addition, 7,972 COI sequences from 1,572 fish species were used for our analyses. These sequences were down-loaded from the 24 representative projects under the FishBOL category in the Barcode of Life Data System (BOLD). Se-quence divergence was quantified using the Kimura 2-para-meter (K2P) distance model (Kimura, 1980), and neighbor-joining (NJ) trees were generated using MEGA version 4.0.2 (Tamura et al., 2007).

Building profile hidden Markov models

Sequence variation within a species varies from species to species. Thus, we sorted sequences of each species according to sequence similarity scores as calculated by MUSCLE v3.8 software, a multiple alignment program (Edgar, 2004). If the number of different sequences within a species was less than four, we repeatedly generated the same sequences. Statistical models were constructed using the hmmbuild and hmmcali-brate programs from HMMER v2.3.2 software (Eddy, 1998; 2008). Emission and transition probabilities were calculated by averaging four candidate sequences for each species (Sup-plementary Table 3). The hmmpfam program applied to the above described libraries was used to identify species-specific patterns of unknown DNA barcode sequences. The blastall program was used to execute BLAST (Altschul et al., 1990) in order to achieve rapid sequence alignment of unknown query sequences and sequences from reference barcode databases. The results are listed in ascending order according to the match score and E-value (expectation value).

Optimum conditions and cutoff value

All steps were automatically processed by Perl scripts and con-trolled by cutoff values. Cutoff values indicate the standard deviation of HMMER bit scores when constructing a profile HMM. The HMMER bit scores indicate whether the sequence is a better match to the profile model or to the null model of non-homologous sequences as follows (Eddy, 2008):

S = , σ = , (1)

where N is the number of candidate sequences trained for building a profile HMM for each species, S is the HMMER bit score, and σ is the standard deviation value of the HMMER bit scores.

The cutoff value filters out candidate sequences that are used for multiple sequence alignments during the model-building process. Candidate sequences were repeatedly com-pared with other sequences in the same range (0.5-3.0, with an interval of 0.1) to determine the best conditions with minimum type I errors. We consequently found the best cutoff value (1.0, Fig. 2) and determined the best conditions (C) when building a model as follows:

N ≤ 3, Same sequences are randomly generated till

N = 4 C = N ≥ 4, N is increased uder cutoff value condition, 0 ≤ σ ≤ 1.0, (2)

where N is the number of sequences and σ is the standard deviation of the HMMER bit scores.

Validation and performance evaluation

We adopted K-fold and leave-one-out cross validation (LOOCV) approaches to evaluate the performance of profile HMMs. LOOCV requires more computation than K-fold cross valida-tion; however, LOOCV identifies all errors caused by imbal-anced training datasets (Meyer and Paulay, 2005). Under the LOOCV approach, a profile HMM is programmed by leaving out each individual sequence of the training set in each round. A true error rate, E, is computed as the average of the individ-ual error rates as follows: E = , (3)

where n is the number of iterations and E i is the individual error rates.

We used a variety of standard measurements to evaluate the quality of prediction performances, including sensitivity, speci-ficity, positive predictive value (PPV), negative predictive value (NPV), and accuracy (Eo et al., 2009).

Web-based molecular identification system for fish (MISF) MISF is a web-based identification system that uses both BLAST and profile HMM algorithms. We developed a web-based MISF that was constructed in Java-based JSP and op-erated on the Apache Tomcat web-server in Windows XP. The MISF is currently optimized for IE7 and ChromePlus v1.4.1.0 internet browsers. This molecular diagnostic method is freely available to all users at http://bioinfosys.snu.ac.kr:8080/MISF/ misf.jsp (Supplementary Fig. 3).

RESULTS

Sequence analysis of 1,625 fish species was implemented using large datasets, including 53 Korean freshwater fish (KFW), 233 other freshwater fish (FW), and 1339 saltwater fish (SW) (Sup-plementary Table 1).

Sequence recoverability and NUMTs in the KFW dataset Three hundred and ninety-eight novel COI barcodes were gen-erated from the 53 species. These barcodes represented 24.9% of the 213 Korean freshwater fish species. When PCR conditions were optimized, all samples were easily amplified. The mitochondrial COI region had a high overall rate of recov-ery (93.87%, Table 1). During initial barcode amplification at-tempts, nuclear copies of mitochondrial DNA (NUMTs) were occasionally co-amplified. Nuclear co-amplification can interfere with COI barcode analysis (France and Hoover, 2002). Thus, it was necessary to filter the COI barcodes by careful examina-tion of sequence characteristics, such as indels and in-frame stop codons (Bensasson et al., 2001; Song et al., 2008). The protocol outlined in Supplementary Fig. 1 describes how to avoid and identify NUMTs. As shown in Table 1, 21 NUMTs, including in-frame stop codons (n = 19) and deletions (n = 2), were discovered and excluded from the dataset. We also per-formed credible species identification for 28 immature speci-mens and were able to correct 22 cases of species misidentifi-cation caused by morphologically ambiguous traits.

Intraspecific and interspecific variation in fish species

The sequence analysis data from the three datasets were used to assess the efficiency of COI barcodes in species identifica-tion (Supplementary Table 2). Both intraspecific and interspeci-fic distances were assessed using K2P. Maximum variations within species COI sequences were on average 0.48%, 0.38%,

)|(log 2HMM seq P N S S ∑?2)(?

?

?

??

∑≡n

i i E n 1

1

Sungmin Kim et al. 509

Table 1. Summary of sample information

Successfully sequenced samples

NUMTs* Low-quality sequences Samples reidentified by

DNA barcoding

Immature specimens (larvae and eggs)

No. of samples/total 398/424

21/424 5/424 22/398

28/398

percentage (%)

93.87

4.95

1.18

5.53

8.42

NUMTs*: COI nuclear mitochondrial pseudogenes

A B

and 0.37%, whereas minimum variations among species aver-aged 13.96%, 7.89%, and 9.75% for the datasets KFW, FW, and SW, respectively. Under a stricter statistical criterion pro-posed by Hebert (Hebert et al., 2004), we determined that the differences between maximum intraspecific and minimum inter-specific variation in the three datasets were 28.78, 20.59, and 26.07 times, respectively (Fig. 1A). These differences indicate that there is considerable genetic variation among species. There were, however, some notable erroneous cases: mini-mum interspecific variation was zero in 69 (4.25%, n = 6 in FW and n = 63 in SW) of the 1,625 species and overlap was ob-served in 96 (5.90%, n = 11 in FW and n = 85 in SW) of the 1,625 species. However, most COI barcodes were observed below the 1:1 line representing a species with a barcode gap, suggesting that with the exception of 28 cases (6 species in FW and 22 species in SW), the barcodes are highly suitable for species identification (Fig. 1B).

Optimal cutoff value and HMMs

Cutoff values are critical when constructing a statistical library since the proposed cutoff value provides an alternative criterion for screening candidate sequences. We assessed the false-positive error rates of the test datasets and concluded that the optimal cutoff value is 1.0 (Fig. 2). The profile HMMs based on the KFW were validated under LOOCV testing conditions, whereas two other profile HMMs, based on FW and SW, were evaluated with three-fold cross validation because of their large sample size. The profile HMMs constructed from KFW achieved the best accuracy, and a zero standard error rate was calcu-lated at both genus and species levels (Table 2). This result was corroborated by analysis of the negative dataset from the Barcoding of Canadian Freshwater fishes project (BCF; Hubert et al., 2008, BOLD system). The remaining two models also displayed good prediction accuracy at the genus level (> 97%) and at the species level (> 93%) (Table 3). False positives can result from the absence of a barcode gap and unbalanced sampling as opposed to methodological limitations, as illus-trated by the 28 exceptional cases shown in Fig. 1B. Although the number of sequences within species varies (Supplementary

Fig. 2. To select an optimal cutoff value, false-positive error rates were calculated in each step of the range between 0.5 and 3.0. False positive error rates remained at zero until a cutoff value of 1.0, were sustained at 1.18 for cutoff values of 1.1 to 2.3, and then gradually increased at a cutoff value of 2.4 and above.

Table 3), sampling using the best cutoff value and a strategy using the HMM showed that the statistical library can provide clear species differentiation without over- or underestimation. A verification procedure for barcode sequences and the applica-tion of these sequences is illustrated in Supplementary Fig. 1.

Character-based discrimination of closely related species Species identity was wrongly assigned to some individuals using HMM searches (Table 3) and the NJ tree method (Sup-plementary Fig. 2). Some were categorized as closely related species with no barcode gap (Fig. 1B). In addition, a coales-cent-based statistical method was applied to differentiate the species with a considerable number of fixed nucleotide substi-tutions (Tavares and Baker, 2008). The results were obtained using the randomForest package of R programming language (Breiman, 2001; Ihaka and Gentleman, 1996). This type of analysis showed that unique patterns of nucleotide composition exist among species. Among the monophyletic clusters, 21

Fig. 1. (A) Box plots depicting the substantial dif-ference between minimum interspecific variation and maximum intraspecific variation using K2P distance modeling of sequence divergence. (B)DNA barcode gap. Minimum interspecific and maximum intraspecific sequence divergence val-ues were calculated to evaluate COI as a DNA barcode for species determination. Most species fall below the 1:1 line (red line), indicating that COI is a highly suitable barcode.

510 DNA Barcode-Based Molecular Identification System

Table 2. Performance comparisons for models defined in a range of threshold values for each HMM. Each model was evaluated using the same test set consisting of 398 positive and 1338 negative freshwater fish sequences.

HMM cutoff

value

True

positive

False

positive

True

negative

False

negative Sensitivity Specificity PPV

1NPV2Accuracy (%)

0 ≤ σ ≤ 1.0 398 0 1338 0 1 1.0000 1.0000 1 100.0000

1.1 ≤ σ ≤

2.4 382 16 1338 0 1 0.9882 0.9598 1 99.0783

2.5 ≤ σ ≤ 2.7 377 21 1338 0 1 0.9845 0.9472 1 98.7903 2.8 ≤ σ ≤

3.0 376 22 1338 0 1 0.9838 0.9447 1 98.7327 1Positive predictive value

2Negative predictive value

Table 3. Typical datasets from HMMs and performance levels

Dataset No. of individuals No. of species No. of genera Accuracy

at genus level (%)

Accuracy

at species level (%)

KFW1398 53 41 100 100 FW21575 233 111 99.11 95.68 SW36397 1339 702 97.56 93.79 1KFW, Korean freshwater fish

2FW, World-wide freshwater fish

3SW, World-wide saltwater fish

Table 4. Estimated results using the R package randomForest

Dataset Genus No. of

individuals

No. of

species

No. of parsimony-

informative sites

No. of variables tried

at each split

OOB* estimate of

error rate (%)

Monophyletic Bramocharax51 2 19 7 0 groups Catostomus38 4 85 9 0 Ichthyomyzon9 2 33 5 0

Oncorhynchus49 7 119 10 0

Rhinichthys43 6 84 9 0

Amblyraja39 4 26 5 2.56

Notropis104 14 182 13 2.73

Atlantoraja58 3 59 7 3.45

Platycephalus40 9 201 14 5

Raja255 11 167 12 10.98

Carcharhinus269 23 141 11 11.15

Rajella23 6 167 9 17.39

Hippocampus56 23 173 13 25

Paraphyletic groups 23 genus groups including

6 species in FW and 22

species in SW (no barcode gap)

1239 147 273 16 12.19

KFW 41 genus groups 398 53 280 16 1.51 FW 111 genus groups 1575 233 285 16 3.68 SW 702 genus groups 6397 1339 315 17 11.7 OOB* (Out-of-bag data): This is used to obtain a running unbiased estimation of classification error as trees are added to the forest.

species of five genera (Bramocharax, Catostomus, Ichthyomy-zon, Oncorhynchus, and Rhinichthys) were perfectly classified (Table 4). Low error rates were observed in Amblyraja, Notropis, Atlantoraja, and Platycephalus, although these genera have many parsimony-informative sites. Unacceptably high DNA barcode error rates were observed in the remaining four genera (Raja, Carcharhinus, Rajella, and Hippocampus). Twenty-three genera, including 28 species that have no barcode gap, also generated considerable error rates (Table 4). We also analyzed three large datasets using the same methods and obtained better results, although numerous species groups and overlap-ping parsimony-informative sites were still observed (Table 4).

Sungmin Kim et al. 511

DISCUSSION

Use of HMM for breaking unbalanced sampling and measurement errors

MISF is the first species identification approach that utilizes profile HMMs. The profile HMMs were developed using the same criteria to avoid errors caused by unbalanced taxonomic sampling from within and among populations (Lefebure et al., 2006). The search performance showed that a significant num-ber of false positives can be reduced by employing an optimal cutoff value (Table 2). MISF was highly accurate at both spe-cies and genus levels (Table 3). We showed that credible spe-cies models can be developed using HMM compared with other methods that rely on sequence similarity, such as BLAST, or distance models, such as TaxI software (Nielsen and Matz, 2006; Steinke et al., 2005). MISF provides clear statistical sig-nificance rather than potential erroneous probabilities gener-ated by BOLD (Ekrem et al., 2007) and BLAST (Steinke et al., 2005). It is clear via cross validation that MISF allows for high statistical significance (Baldi and Brunak, 2001). By sequence analysis, we found that the ratio of no overlap between mini-mum interspecific and maximum intraspecific distance to the total number of sequences was 95.27% and 93.65% for FW and SW, respectively. However, we obtained a higher accuracy at the species level (Table 3). All in all, MISF is fast, easy to use, and will be very useful in the fields of systematics, evolutionary biology, and ecology.

Diagnostic approach for closely related species Currently, several approaches are used to discriminate be-tween closely related species. Character-based approaches in particular have suggested that the COI barcode is useful for species determination (Tavares and Baker, 2008). Diagnostic characters resulting in species clusters have some advantages. Fixed nucleotide substitutions from COI sequences can be extracted without recourse to evolution models or consideration of a significant cutoff value (Waugh, 2007). By employing a strict threshold (Fig. 1B), we discovered that there was no bar-code gap or zero minimum interspecific variation between closely related species (Supplementary Table 2). In a previous study, individual character states were not evaluated using statistical analyses (Rach et al., 2008; Tavares and Baker, 2008). In the present study, we evaluated priority rankings for charac-ter placement in tree branches (Supplementary Fig. 4). This character-based diagnostic approach can be used as an alter-native approach for differentiating closely related species; how-ever, there is a degree of error associated with this method (Table 4). DNA barcoding based on only a single gene (COI) is somewhat controversial in the taxonomy community. Some erroneous results have emphasized the limitations of single gene COI barcoding as opposed to bioinformatics and biologi-cal approaches (see Results, Baker et al., 2009).

Future direction of MISF

Our study shows that MISF is an attractive system for identify-ing fish species. This approach will be extensively applied to the KBOL database system, which comprises a collection of biodi-versity data along with DNA barcodes. The molecular identifica-tion system will definitely leverage researchers to directly link DNA barcodes and biodiversity information and to undertake conservation activities, including monitoring and detection of specific organisms. Future species models are likely to be more elaborate and powerful because mtDNA barcoding will be sup-plemented with nuclear barcoding to facilitate greater reliability (Austerlitz et al., 2009). Moreover, taxonomic approaches that integrate DNA sequencing, morphology, and ecological studies will achieve maximum species identification efficiency. The automated identification system MISF will certainly facilitate fast and reliable species identification to promote the integration of a variety of biological information.

Note: Supplementary information is available on the Molecules and Cells website (https://www.sodocs.net/doc/8816710143.html,). ACKNOWLEDGMENTS

This work was supported by a grant from the Eco-Technopia 21 Project, which is funded by the Ministry of Environment of Ko-rea (2008-05002-0065-0); the second stage of the Brain Korea 21 Project in 2009; and a 2008-2009 Sangji University Sabbati-cal Leave Grant.

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左卡尼汀在治疗慢性心力衰竭中的作用

左卡尼汀在治疗慢性心力衰竭中的作用 发表时间：2016-04-29T16:22:04.340Z 来源：《徐州医学院学报》2015年11月第35卷总第21期作者：孙又辉[导读] 江苏省沛县人民医院重症医学科左卡尼汀是有效治疗心力衰竭的药物，可以更有效地改善心功能，缓解临床症状. 江苏省沛县人民医院重症医学科 221600 【摘要】目的:观察左卡尼汀治疗中、重度慢性收缩性心力衰竭(CHF)的疗效。方法:将50例CHF患者随机分为2组，对照组给予ACEI类、利尿剂、小剂量倍他乐克片(心功能IV级者心力衰竭控制后开始口服)、小剂量地高辛片等常规治疗左心衰竭；观察组在对照组治疗基础上加用左卡尼汀，14 d时观察比较2组治疗效果。结果：左卡尼汀组临床症状、体征明显改善，总有效率达95%，心功能各指标改善均明显优于常规治疗组(P<0.05)。结论：左卡尼汀是有效治疗心力衰竭的药物，可以更有效地改善心功能，缓解临床症状，提高左室射血分数，且安全性好。 【关键词】左卡尼汀；心力衰竭；射血分数 一般中、重度慢性心力衰竭(CHF)常规治疗方案为：去除心力衰竭诱因和病因，使用ACEI类、利尿剂、β-受体阻滞剂、洋地黄类等。本研究在常规西药治疗基础上，加用左卡尼汀治疗中、重度CHF取得较好效果，现报告如下。 1 资料与方法 1.1 入选标准 (1)均符合CHF的诊断标准，以收缩性心力衰竭为主，LVEF＜50%,心功能III～IV级(按NYHA分级)；(2)原发病为冠心病、高血压性心脏病、风湿性心脏瓣膜病(以瓣膜关闭不全为主，瓣膜狭窄不显著)或扩张型心肌病；(3)入院前未服中药，已服中药者，停服中药1周后进入观察治疗；(4)排除急性心力衰竭、心动过缓、恶性心律失常、病态窦房结综合征、高度房室传导阻滞、合并肝肾肺脑功能衰竭、洋地黄中毒、严重感染等；(5)尚未规范使用ACEI类、利尿剂、β 受体阻滞剂、洋地黄类等。 1.2 一般资料 2013年5月—2015年5月,本研究入选难治性心力衰竭患者50例,其中男37例,女13例;年龄56-82岁；病程4-10年。心功能分级4级5例，3级17例，2级28例。随机均分为左卡尼汀组和常规治疗组各25例，左卡尼汀组中，男18例，女7例；年龄（66.16±10.8）岁，高血压10例，其中收缩压平均为13 2.36mmHg、舒张压81.43mmHg；糖尿病6例，其中空腹血糖（5.46±1.81）mmol.L-1；WBC: (7.36±2.24)×109/L。对照组中，男20例，女5例；年龄（65.62±10.54）岁，高血压8例，其中收缩压平均为129.87mmHg、舒张压80.79mmHg；糖尿病5例，其中空腹血糖（5.23±1.68）mmol.L-1；WBC:(7.51±2.26)×109/L。两组患者一般资料比较，差异无显著性（P>0.05），均具可比性。 1.3方法 左卡尼汀组在常规抗心力衰竭如血管紧张素转换酶抑制剂、利尿剂、β受体拮抗剂、洋地黄等基础上，加用左卡尼汀, 12ml/d,分两次静滴，共14 d。常规治疗组仅给予常规抗心力衰竭治疗。均以14 d为1个疗程。 1.5 统计学方法 计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较使用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。 2结果 常规治疗组患者，在治疗前的LVEF水平为（24.8 ±10.6）%，治疗后为（43.5 ±15.5)%；左卡尼汀组治疗前为（25.3 ±12.6）%，治疗后为（27.4 ±16.6）%。两组治疗前比较，差异无显著性（t=0.1708，P=0.7862），治疗后比较，有显著性差异（t=12.2384，P=0.0001） 3讨论 慢性心力衰竭已经成为心血管医生所面临的重大难题。而心肌能量代谢失调是慢性充血性心力衰竭的病理机制之一。减少过度的心肌能量消耗和改善心肌能量代谢可改善心衰预后。左卡尼汀是一种广泛存在于机体组织内的特殊氨基酸，为脂肪代谢所需[1]。其主要功能是促进脂类代谢,将长链脂肪酸带进线粒体基质,并促进其氧化分解为细胞提供能量。正常心肌能量供应60%-80%来自脂肪代谢。左卡尼汀是肌肉细胞尤其是心肌细胞的主要能量来源。能提高丙酮酸脱氢酶、细胞色素C还原酶、细胞色素氧化酶的活性，加速ATP的产生，有效地为心肌提供能量[2]。其治疗心衰主要是通过改善心肌细胞的能量代谢，减少心肌细胞因缺血缺氧而造成的坏死和纤维化的程度，修复受损心肌细胞，从而恢复心脏的正常功能。 本结果显示，左卡尼汀能显著提高老年心衰患者临床症状的改善及LVEF和二尖瓣血流最大流速E峰和A峰比值，有效改善老年心衰患者的左室射血功能，从而更有效地提高患者的生活质量及降低住院率，因此，在慢性心力衰竭治疗中,采用常规药物加左卡尼汀是一种有效的方法，为老年性难治性心衰提供了新的研究方向。 参考文献： [1]韦春望,陈孝治.左卡尼汀[J].中国新药杂志,2002,11(3):245-246. [2]张义平，韩跃刚，维东亮，等.左卡尼汀治疗慢性心力衰竭疗效观察[J].河南职工医学院学报，2006，18(2)：101.

轨枕技术标准

铁路枕木 一、枕木的分类 材料属性分类：木制枕木；钢筋混凝土枕木；复合材料枕木。 用途分类：铁路枕木；专用轨道枕木；架设枕木。 铁路枕木分类： 普通枕木，用于铁路正线线路的普通枕木； 道岔枕木，用于铁路交汇处道岔区域； 桥梁枕木，用于铁路钢结构桥梁设备的桥面线路铺设； 铁路防腐木枕型号分类（按中国标准）： 二、常用枕木的规格 目前，我国的标准铁路轨距为1435mm。 标准的枕木规格如下： 1、普通枕木：宽度220mm；厚度160mm；长度2500mm； 2、道岔枕木（普通）：宽度220mm；厚度160mm；长度2600~4850mm，以150mm进位，共计16个长度规格； 3、道岔枕木（标准）：宽度240mm；厚度160mm；长度2600~4800mm，以200mm进位，共计12个长度规格； 4、桥梁枕木：宽度220mm；厚度240、260、280、300mm；长度3000mm；枕木尺寸 普通木枕：标准长度为2500mm，其断面形状分为I、Ⅱ两类，用于不同等级的线路上。 I类：宽度220mm，厚度160mm； Ⅱ类：宽度200mm，厚度145mm；

道岔木枕：断面尺寸为两种标准； 75型标准为：宽度220mm，厚度160mm；长度从2600mm至4850mm，每种长度相差150mm，共16个长度规格。 92型标准为：宽度240mm，厚度160mm；长度从2600mm至4800mm，每种长度相差200mm，共12个长度规格。 桥梁木枕：其截面尺寸因主梁（或纵梁）中心间距的大小而异。 单线桥梁：长度3000mm，宽度200、220，高度220、240、260、280、300mm； 三、木制轨枕 1、技术条件 树种：落叶松、马尾松、红松等。 2、枕木的尺寸见表1 表1 类别类型长度(㎝)厚度(cm)宽度(cm)备注 普枕Ⅰ2501622 普枕Ⅱ25020 岔枕15进位260-4851622 岔枕20进位260-4801624 桥枕3002024 3、尺寸公差应符合表2的规定 表2(单位：cm) 类别公差 断面形状及尺寸种类限度 普通枕木长度±

左卡尼汀的临床作用

左卡尼汀的临床作用 摘要 左旋卡尼汀是一种水溶性氨基酸，其主要功用是运载长链脂肪酸进入线粒体参与反响，同时以腺什三磷酸盐(ATP)的方式提供能量。维持性血液透析患者由于摄食缺乏，恶心呕吐，消化吸收不良，合成减少及透析中丧失，可呈现左卡尼汀缺乏，其乏可影响线粒体对游离脂肪酸的氧化，致使脂类在胞浆中汇集，不能进入三梭酸循环，惹起能量缺乏，同时由于乙酞辅酶A在线粒体集聚，对细胞产生毒性作用。MHD患者若左卡尼汀缺乏临床上可呈现骨骼肌病、心肌病、心律失常、血脂异常、肌肉痉挛、营养不良及透析低血压等，使透析耐受性降低，严重地影响了患者生活质量和生存率。

目录 摘要 (1) 第一章、左卡尼汀的药理作用 (3) 第二章、临床实验 (3) 2.1心血管疾病 (3) 2.1.1心绞痛 (3) 2.1.2心肌梗死 (4) 2.1.3心力衰竭 (4) 致谢 (5) 参考文献 (6)

第一章、左卡尼汀的药理作用 左卡尼汀的主要功用是促进脂类代谢，在低氧、缺血时，脂酞-CoA堆积，线粒体内的长链脂酞卡尼汀也堆积，游离卡尼汀因大量耗费而减低。缺血低氧招致ATP程度降落，细胞膜和亚细胞膜通透性升高，堆积的脂酞-CoA可致膜构造改变，膜相崩解而招致细胞死亡。另外，低氧时以糖无氧酵解为主，脂肪酸等堆积招致酸中毒，离子紊乱，细胞自溶死亡。足够量的游离卡尼汀可使堆积的脂酞-CoA进入线粒体内，减少其对腺嘌吟核昔酸转位酶的抑止，使氧化磷酸化得以顺利停止。左卡尼汀是肌肉细胞特别是心肌细胞的主要能量来源，脑、’肾等许多组织器官亦主要靠脂肪酸氧化供能。卡尼汀还能增加NADH细胞色素C复原酶、细胞色素氧化酶的活性、加速ATP的产生，参与某些药物的解毒作用。关于各种组织缺血低氧，左卡尼汀经过增加能量产生而进步组织器官的供能。左卡尼汀的其他功用有:中等长链脂肪酸的氧化作用;脂肪酸过氧化物酶的氧化作用; 对分离的辅酶A和游离辅酶A二者比率的缓冲作用，从酮类物质、丙酮酸、氨基酸(包括支链氨基酸)中产生能量，去除过高辅酶A的毒性，调节血中氨浓度。当缺乏卡尼汀时，临床上可呈现肌张力减退、肌溶解、肌痉挛、胰岛素抵御、心律失常等。 第二章、临床实验 2.1心血管疾病 人类心肌细胞所需能量60%~80%来自于脂肪代谢。因此，补充左卡尼汀可促进心肌细胞内脂肪酸的氧化合成，为心脏提供更充足的能量，具有心肌维护作用。左卡尼汀还具有直接正性肌力、扩张冠脉、改善血活动力学等作用，能够改善心功用，减少心绞痛发作，降低急性心肌梗死患者病死率，增强缺血一再灌注心肌中糖的有氧氧化，促进再灌注心肌恢复从脂肪酸氧化获取能量，降低自在基含量，减轻再灌注损伤。 2.1.1心绞痛 将92例不稳定性心绞痛患者随机分为两组，治疗组48例，对照组44例。两组常规应用硝酸酷类、日受体阻滞剂、肠溶阿司匹林、钙拮抗剂、低分子肝素等。

我国高速铁路与普速铁路线路关键技术和标准对比分析

我国高速铁路与普速铁路线路关键技术和标准 对比分析 运输1010 李响施宇 10255008 摘要：高速铁路是指营运速率达每小时200公里或250公里的铁路系统。由于运行速度的不同，使得高速铁路和普速铁路在关键技术和标准方面存在着一定的差异。本文从铁路线路的角度出发，研究分析了高速铁路与普速铁路线路标准和线路关键技术的差异。 关键词：高速铁路普速铁路线路关键技术标准对比分析 1、高速铁路与普速铁路概念 高速铁路，简称“高铁”，是指通过改造原有线路（直线化、轨距标准化），使最高营运速率达到不小于每小时200公里，或者专门修建新的“高速新线”，使营运速率达到每小时至少250公里的铁路系统。高速铁路除了在列车在营运达到一定速度标准外，车辆、路轨、操作都需要配合提升。而普速铁路通常指运营速率在150km/h左右的铁路系统 主要是由于运行速率的不同，使得高速铁路和普速铁路在关键技术和标准方面都存在着一定的差异。接下来，本文从铁路线路角度出发，研究分析了高速铁路与普速铁路线路标准和线路关键技术的差异。 2、高速铁路与普速铁路线路标准对比 2.1 普速铁路线路标准总则 1、为统一铁路线路设计技术标准，使铁路线路设计符合安全适用、技术先进、经济合理的要求，制定本规范。 2、本规范适用于铁路网中客货列车共线运行、旅客列车设计行车速度等于或小

于160km/h，货物列车设计行车速度等于或小于120km/h的1、2级标准轨距铁路的设计.3、4级铁路按照相应设计规范执行。 3、铁路的设计年度应分为近期和远期。近期为交付运营后第10年，远期为交付运营后第20年，近远期运量均采用预测运量。 铁路线下基础设施和不易改扩建的建筑物和设备，应按远期运量和运输性质设计，并适应长远发展的要求，对于易改扩建的建筑物和设备，宜按近期运量和运输性质设计，并预留远期发展条件。 随运输需求变化增减的机车车辆等运营设备，可按交付运营后第3年或第5年的运量进行设计。 4、新建和改建铁路或区段的等级，应根据其在铁路网中的作用性质旅客列车设计行车速度和客货运量按规定确定。 5、设计线的旅客列车设计行车速度应根据运输需求、铁路等级地形条件并考虑远期发展条件等因素综合比选确定。 6、各级铁路的下列主要技术标准，应根据远期运量或国家要求的年输送能力客车对数和确定的铁路等级在设计中经综合比选确定：正线数目、牵引种类、机车类型、牵引质量、限制坡度、最小曲线半径、机车交路、到发线有效长度、闭塞类型。 7、新建铁路近期年客货运量分别大于或等于35mt的平原、工程建设标准全文信息系统丘陵地区和大于或等于30mt的山区，宜一次修建双线。 8、牵引种类应根据路网与牵引动力规划线路特征和沿线自然条件以及动力资源分布情况，结合机车类型合理选定并应优先采用电力牵引。 9、机车类型应根据牵引种类牵引质量列车设计行车速度等运输需求，按照与线路平面纵断面技术标准相协调的原则，结合车站分布经技术经济比选确定。10、牵引质量应根据运输需求限制坡度及机车类型等因素，经技术经济比选确定，并宜与相邻线牵引质量相协调。 11、机车交路应采用长交路，并应根据牵引种类、机车类型、车流特点、乘务制度、线路条件，结合路网规划及机务设备布局，经技术经济比选确定。 12、区间通过能力应预留一定的储备。单双线铁路的储备能力在扣除综合维修天窗时间后，应分别采用20%和15%，并应考虑客货运量的波动性。 13、货物列车到发线有效长度应根据运输需求和货物列车长度确定，且宜与邻接线路的货物列车到发线有效长度相协调，并应采用1050、850、750、650m等系列值。改建既有线和增建第二线的货物列车到发线有效长度采用上述系列值引起较大工程时，可根据实际需要计算确定。 14、单双线铁路的闭塞类型宜分别采用半自动闭塞和自动闭塞。当旅客列车设计行车速度大于120km/h时，双线区段应采用速差式自动闭塞，单线区段宜采用自动闭塞或自动站间闭塞，一个区段内应采用同一种闭塞类型。 15、旅客列车设计行车速度120km/h及以上的路段，铁路两侧应设置隔离栅栏 16、铁路线路安全保护区、铁路线路安全保护标志及警示标志的设置，应符合

管理学原理与方法周三多第六版

第一篇 第一章管理与管理学 第一节人类的管理活动 一：人类活动的特点(目的性、依存性、知识性) 二：管理的必要性 三：管理的概念 第二节管理的职能与性质 一：管理的职能（计划、组织、领导、控制、创新） 二：管理的自然属性 三：管理的社会属性 第三节管理者的角色与职能 一：管理者的角色（人际角色、信息角色、决策角色） 二：管理者的职能 罗伯特卡次的研究，管理者必须具备三种技能：（技术技能、人际技能、概念机能）第四节管理学的对象与方法 一：管理学的研究对象 二：管理学的研究方法 （一）归纳法（二）试验法（三）演绎法 第二章管理思想的发展 第一节中国传统管理思想 一：中国传统思想形成的社会文化背景 二：中国传统管理思想的要点 第二节西方传统管理思想 一：西方早期管理思想的产生 1：亚当斯密《国富论》1776（英国） 2：查理巴贝奇（英国） 3：罗伯特。欧文（英国的空想主义家） 二：科学管理理论的产生和发展（19世纪末20世纪初） （一）“泰罗”的科学管理理论——科学管理之父 亨利。甘特：布雷斯及他的妻子： （二）对“泰罗制”的评价 （三）法约尔的“组织管理理论” 第三节西方现代管理思想的发展 一：行为科学学派 霍桑试验： 1：需求层次理论——马斯洛 2：双因素理论——赫茨伯格 3：X、Y理论 4：Z理论——威廉。大内 二：“管理科学”学派 三：“决策理论”学派 四：对现代管理理论的思考 五：新经济时代管理思想的变革

（一）管理思想的创新 （二）管理原则的创新 （三）经营目标创新 （四）经营战略创新 （五）生产系统创新 （六）企业组织创新 第三节中国现代管理思想的发展 一：中国现代管理思想形成的历史背景 （一）中国官僚资本企业和民族资本企业的管理 （二）我国革命根据地公营企业的管理 （三）全面学习西方的管理模式 （四）探索中国现在管理模式 二：社会主义经济管理体制改革 （一）由国内管理向国际化管理转化 （二）由科学管理向信息化管理转化 （三）由首长管理向人性化管理转化 （四）由政府管理向民营化管理转化 （五）由封闭式实体管理向开放式虚拟管理转化 第三章管理的基本原理 第四章第一节管理原理的特征 第五章一：管理原理的主要特征 第六章二：研究管理原理的意义 第七章第二节系统原理 第八章一：系统的概念 第九章二：系统的特征 第十章三：系统原理要点 第十一章第三节人本原理 第十二章一：职工是企业的主体 第十三章二：有效管理的关键是职工参与 第十四章三：现代管理的核心是使人性得到最完美的发展 第十五章四：管理是为人服务的 第十六章第四节责任原理 第十七章一：明确每个人的职责 第十八章二：职位设计和权限委任要合理 第十九章三：奖惩要分明，公正而及时 第二十章第五节效益原理 第二十一章一：效益的概念 第二十二章二：效益的评价 第二十三章三：效益的追求 第四章信息化管理 第一节信息与信息化 一、信息的含义 二、信息化的内涵 三、信息化的影响

FISH技术在白血病中的应用~

FISH技术在白血病中的应用 目前荧光原位杂交技术已被广泛用于遗传性疾病、肿瘤研究及临床诊断和治疗监测。在临床应用中，荧光原位杂交技术凭借其较高的灵敏度和特异度，已在产前诊断、实体瘤（乳腺癌、膀胱癌、宫颈癌、肺癌）以及血液系统肿瘤的诊断和治疗检测中得到了迅速的发展。 血液系统肿瘤是我国十大高发肿瘤之一，随着对疾病发病机制的深入研究，发现细胞遗传学对肿瘤分型、诊断、治疗和预测预后都具有重要的意义。但常规的细胞遗传学分析（CC）方法只能分析中期染色体，而对间期细胞、复杂核型细胞和染色体微缺失无法进行诊断。而FISH技术弥补了CC在这方面的不足，因此被广泛用于血液肿瘤的研究、诊断等方面。 在临床上对血液肿瘤的FISH检测主要集中在以下几个方面： ①染色体异位形成的融合基因检测 如慢性粒细胞白血病（chronic myelogenous leukemia，CML）的BCR-ABL融合基因检测，急性粒细胞白血病（acute myelocytic leukemia，AML）M3中的PML-RARA融合基因检测和M2b中的AML1-ETO融合基因检测。对融合基因的检测不但有助于对疾病的诊断，还能帮助我们估计患者预后情况以及选择有效的治疗方案。 ②基因缺失的检测 一些关键基因的缺失有助于我们对肿瘤进行诊断以及预后判断。但是目前的染色体显带技术分辨率低，只有大于4.5 Mb的缺失才能检测到，而FISH分辨率高，可以弥补染色体显带技术用于检测微小缺失的不足。在临床应用中，如通过荧光原位杂交发现慢性淋巴细胞性白血病患者的P53基因缺失提示患者的预后很差，疾病进展较早，且对联合化疗不敏感，多数生存期仅为3个月。而同样在慢性淋巴细胞性白血病患者中，如检测到13q单一缺失则提示患者预后较好，中位生存期可达到133个月。 ③对异性间造血干细胞移植的植入状态监测 目前异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem celtransplantation，allo-HSCT)是治疗血液系统恶性和非恶性疾病的有效手段。移植后动态监测供／受者混合性嵌合体比例变化判定移植是否成功，对指导移植后治疗和预测复发具有十分重要的意义。FISH技术具有操作简便、快速及结果敏感可靠等优点，通过性染色体计数探针动态监测供／受者混合性嵌合体比例变化对异性异基因造血干细胞移植后植入状态进行检测。 ④微小残留病灶（minima residual disease，MRD）的检测 白血病患者经化疗缓解后，体内的白血病细胞并未完全清除，仍残留一定数目的白血病细胞，这些残留的白血病细胞是导致复发的根源。通过对肿瘤细胞特异的染色体异常进行跟踪监测，可间接了解体内白血病细胞负荷，便于预测疾病进展和有无复发迹象。 下面我们介绍CLL、MDS、MM相关的FISH探针。

左卡尼汀在心血管疾病二级预防中的作用--译

系统阐述和综合分析左卡尼汀（L-Carnitine）在心血 管疾病二级预防中的作用 摘要： 目的：采用安慰剂和对照法对比评估左卡尼汀在心肌梗死的治疗中的应用，观察其对发病率和死亡率的影响。 方法：通过系统阐述和综合分析13个对照组实验，旨在评估左卡尼汀在治疗室性心律失常、心绞痛、心力衰竭和心肌梗死中，和安慰剂组、对照组相比的有效性。这些实验数据主要来源于Ovid MEDLINE,PubMed, and Excerpta Medica (Embase)数据库收录的2012年3月1日到2012年8月31日之间的数据。 结果：和安慰剂组、对照组相比，左卡尼汀使死亡率显著减少27％（优势比,0.73; 95%置信区间,0.54-0.99;P=.05;风险率(RR)：0.78; 95%可信区间,0.60-1.00; P=.05），室性心律失常显著减少65％（RR：0.35；95%置信区间，0.21-0.58;P <0.0001），心绞痛显著减少40％（RR：0.35；95%置信区间，0.21-0.58;P <0.00001），心力衰竭的发展（RR:0.85;95%置信区间,0.67-1.09；P=.21）和心肌梗死（RR：0.78；95%可信区间，0.41-1.48；P=.45）没有减少 结论：和安慰剂组、对照组比，左卡尼汀可以使死亡率显著减少27％，室性心律失常减少％65，心绞痛减少40％。在现代采用大规模的随机对照实验深入研究经济、安全的治疗方法是非常必要的。 治疗急性冠状动脉综合征的方法，包括经皮冠状动脉注射、抗血小板治疗、阻断剂、他汀类药物, 血管紧张素转换酶抑制剂(ACEIs), ω- 3脂肪酸,心脏康复等，虽然这些都显著提高了临床治疗效果，但是心血管不良反应仍旧频繁发生。使用左卡尼汀来提高游离脂肪酸水平和葡萄糖氧化水平来改善心肌梗死的发病率和死亡率，从而提高心脏健康。 左卡尼汀是一种季胺类化合物，能够将自由脂肪酸运输到线粒体，提高氧化磷酸化水平，为心肌供应能量。而且，

第三代试管Fish技术与A-CGH技术的区别

选择第三代试管婴儿，到底选择什么样的技术合适，选择什么样的技术成功率更高， 具体的需要根据每个人的年龄，身体情况，还有需求来选择，在泰国，做第三代试管 婴儿，用的最多的是FISH技术，还有A-CGH技术。 PGS-FISH早在1990年就已经作为胚胎染色体检查的一种手段，一开始，科学家相信 通过FISH筛选出正常染色体的胚胎可能会增加试管婴儿的成功率。他们在胚胎初期，即胚胎在试管培育过程中的第三天，从已经发育到6-8个细胞的胚胎中抽出1个细胞，从而检测5种染色体以检查出胚胎的性别。但这项技术在技术上使不完善的，只能筛 查部分的染色体，所以对于有其他染色体异常或有遗传病的患者则没有办法真正解决 问题。 另一种更完善的基因检测PGD-aCGH，即囊胚移植前基因检测，则披世多年，而且被 广泛用在美国的试管婴儿医院。因为用aCGH这种检测方法，我们可以检测到更精确 的数据，从而可以知道人体/胚胎全部的24种染色体是否全部正常，因此更能提高试 管婴儿的成功率。 aCGH是胚胎在试管中培养到第5天到第6天时，对已经发育成的囊胚进行46条（22对+X+Y）染色体进行全部检测，只要有一根染色体有问题，就不再被移植，做这个 检测的淘汰率较高，但剩下的都是精英。被移植的精英囊胚着床率及生育率极高，从 而大大降低了胎停及流产风险。说实话，做试管成着床但停育的人非常多，包括现在 35岁以上的女性自然怀孕的流产率也高，就是因为高龄产妇的胚胎染色体更容易发生变异，因此，aCGH应该被以下人群强烈考虑： 1）想追求更高的试管婴儿着床率及生育率 2）习惯性流产的人群 3）纯粹是为了下一代优生考虑

4）做性别选择 5）高龄女性 泰嘉运刘顾问(weixin：laney8）总结：由于国内最近去国外寻求性别选择的越来越多，我从实际经验中也总结到，成功率最高是做aCGH，而第二则是没有做性别选择，直接移植囊胚的，最后一名则是做FISH性别选择的。究其原因，主要原因是做FISH是第 三天胚胎还未长成囊胚时，被生生抽出一个细胞，对还未发育完善成囊胚的胚胎多少 有点伤害，而如果是培育到囊胚阶段的胚胎，生长的潜力是比较强的，移植着床率也 更高。 PGD-aCGH的时间表示例： 1/1 月经的第2-5天，开始打促排针 1/11 取卵（如果要做子宫镜检查的，可以这一天做） 1/12 受精情况D1报告（看你取的卵实际受精了多少个胚胎） 1/16 囊胚情况D5天报告（看第5天出了多少囊胚，没长到囊胚的则再培养到第6天）1/17 囊胚情况D6天报告 (胚胎在试管中只能长到这一天，不能到第7天。这一天还没发展到囊胚，则不可再用) 1/25-30 左右出aCGH报告，可看出哪些胚胎染色体在哪一条是不正常的，不正常的胚胎是不可以用的，因为会导致流产或者其他异常结果。正常的胚胎则着床率非常高。

管理学原理与方法课后习题答案11905

第一章 1.人类活动的特点是什么？为什么管理实践与人类历史同样悠久？ 答：三个基本特点：目的性、依存性、知识性。这三个特点为人类的管理实践提供了客观条件，所以管理实践与人类历史同样悠久。 2．何谓管理？管理的基本特征是什么？ 答：管理是管理者为了有效地实现组织目标、个人发展和社会责任，运用管理职能进行协调的过程。特征：1、管理是人类有意识有目的的活动2、管理应当是有效的3、管理的本质是协调4、协调是运用各种管理职能的过程。 3. 管理活动具有哪些基本职能？它们之间的关系是什么？ 答：基本职能有：计划、组织、领导、控制、创新。每一项管理工作一般都是从计划开始，经过组织、领导到控制结束。各职能之间同时相互交叉渗透，控制的结果可能又导致新的计划，开始又一轮新的管理循环。创新在这管理循环之中处于轴心的地位，成为推动管理循环的原动力。 4.分析管理二重性的基本内容。 答：管理的自然属性，管理的出现是由人类活动的特点决定的，管理性质并不以人的意志为转移，也不因社会制度意识形态的不同而有所改变。管理的社会属性，管理是为了达到预期目的而进行的具有特殊职能的活动，是为了使人与人之间的关系以及国家、集体和个人的关系更加和谐。 5.一个有效的管理者需要扮演哪些角色？需要具备哪些技能？ 答：有人际角色、信息角色、决策角色。技能：技术技能、人际技能、概念技能。 6.分析管理学的研究对象及其方法目标。 答：各种管理工作中普遍适用的原理和方法。方法：归纳法、实验法、演绎法。 第二章 1.理解中国古代管理思想要点的主要内容，并思考对现代企业经营有何启示。比如，中国古代法制思想的基本原则是什么？ 答：顺“道”、重人、人和、守信、利器、求实、对策、节俭、法治。现代企业做到这几点才能在企业中得人心，每个人都积极做好自己的工作，企业工作效率才会提高。“明法、一法”明法是法律公布于世。一法是在法律面前人人平等。 2.请综合分析斯密与巴贝奇关于劳动分工的研究。 答：斯密认为日用必需品供应情况的好坏，决定于两个因素：一是这个国家的人民的劳动熟练程度、劳动技巧和判断力的高低；二是从事游泳劳动的人数和从事无用劳动人数的比例。巴贝奇提出了“边际熟练”原则认为分工可以减少支付工资这一好处。 3.科学管理理论为什么会在19世纪末的美国产生？泰罗为什么要研究并提出科学管理理论？其理论的实质是什么？其理论的主要内容是什么？并谈谈科学管理理论对目前我国企业管理的启发。 答：因为当时随着生产的发展，科学技术的进步，自由竞争的资本主义也逐步走向垄断的资本主义。单凭经验进行生产和管理已经不能适应这种剧烈争夺的局面了。泰罗认为单凭经验进行管理的方法是不科学的，必须加以改变。实质是谋求最高工作效率。内容：1.对工人提出科学的操作方法，以便合理利用工时，提高工效。2.在工资制度上实行差别计件制。3.对工人进行科学的选择、培训和提高。4.制定科学的工艺规程，并用文件形式固定下来以利推广。5.使管理和劳动分离，把管理工作称为计划职能，工人的劳动称为执行职能。

荧光原位杂交技术FISH技术在疾病分型诊断中的应用

荧光原位杂交技术(FISH)技术在疾病分型诊断中的应用.txt铁饭碗的真实含义不是在一个地方吃一辈子饭，而是一辈子到哪儿都有饭吃。就算是一坨屎，也有遇见屎壳郎的那天。所以你大可不必为今天的自己有太多担忧。荧光原位杂交技术（FISH）技术在疾病分型诊断中的应用 生命科学的发展，生物技术的进步使我们对疾病本质的认识不断地深入，也使我们拥有更多新的治疗方法和药物应对疾病的威胁。如何准确有效地利用这些新的治疗方法和药物治愈疾病是我们迫切需要研究的内容。如何对疾病进行正确的分型和诊断却是上述工作的基础。只有全面地把握病情，并在此基础上进行准确的判断和分析，才能为病患制定及时有效的治疗方案。因此我们要求疾病的诊断工作能提供更为准确和及时的结果。而古老的“望、闻、问、切”和传统的常规手段已远远无法满足我们对疾病诊断的要求，迫切需要将新的技术引入疾病诊断领域。 荧光原位杂交技术(Florescence In-Situ Hybridization简称FISH)是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。自20世纪80年代末，Pinkel和Heiles将FISH技术引入染色体检测领域后，FISH技术就在临床诊断及科研工作中得到了广泛的运用，显示出与一些传统技术相比的明显优势。 与传统的免疫组织化学法（IHC）相比，FISH具有良好的稳定性和可重复性。目前免疫组织化学法正广泛应用于肿瘤等多个领域的临床诊断。免疫组化的检测对象是疾病相关的蛋白。由于蛋白的表达和本身的构象受各种因素的影响很大（例如酸、碱和变性剂），检测条件的稳定性对检测结果至关重要。此外，免疫组化检测结果的判断依赖于检测者对显色结果的主观判断，对于一些弱阳性的结果，不同的检测者容易产生分歧。上述的因素都可能影响医生对病情的最终诊断。荧光原位杂交技术检测的对象是细胞中的DNA，致密的双螺旋结构使DNA可以历经千百万年而依然保持良好，其结构稳定，不易被环境条件影响，为荧光原位杂交技术的稳定提供了良好的基础。此外，荧光原位杂交结果的判定借助于对荧光的颜色判断和信号计数，客观地量化了检测地结果。如果借助于相应的FISH操作系统（例如Abbott-Vysis公司的Hybrit杂交仪和VP2000样本预处理系统）和染色体成像系统（例如AI公司的CytoVision）就能实现整个FISH操作的自动化，最大限度的降低操作者和检测者的主观因素，确保结果的准确性。 PCR由于灵敏度高，操作简便快捷是近年来应用比较多的基因诊断技术，但PCR诊断技术的假阴性和假阳性的比例较高，对同一样本也只能作一次分析，不能重复实验结果。随着探针技术的不断发展，FISH目前的灵敏度已经接近或达到PCR的水

左卡尼汀治疗心力衰竭----效果假设

左卡尼汀治疗心力衰竭的临床疗效分析 【摘要】目的：探讨使用左卡尼汀治疗慢性心力衰竭的疗效。方法：选取98例心力衰竭患者为研究对象，随机分成观察组与对照组各48例，对照使用常规利尿、强心药物治疗，观察组在常规治疗的基础上加用左卡尼汀药物。治疗前后后，通过6min步行实验来观察患者左心室收缩末期（LVESV）、左心室舒张末容积（LVEDV）以及步行距离，对两组药物疗效进行观察。结果：治疗前，两组患者LVESV、LVEDV以及步行距离均无明显变化，而在治疗结束后，观察组各项指标均优于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；观察组治疗总有效率明显高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：使用左卡尼汀治疗心力衰竭能够显著提升临床疗效，改善患者心功能。 【关键词】左卡尼汀；心力衰竭；临床疗效 随着生活及工作压力的不断上升，心力衰竭逐渐成为威胁人类健康的临床病症。心理衰竭的发病原因目前已经确定，心肌损伤、心肌结构变化以及血流动力学负荷过重都会导致心室泵血[1]。根据心力衰竭病情的延展，可分为急性与慢性两种，且慢性心力衰竭比较常见。在心力衰竭的临床治疗中，使用强心、利尿以及血管扩充等方法，能够改善患者的病情，随着医药水平的不断发展，左卡尼汀在治疗心力衰竭中发挥着重要作用。为了进一步研究左卡尼汀药物治疗心力衰竭的疗效，本研究选取了96例心力衰竭患者，现将实验结果报告如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 本次研究选取了我院于2015年6月至2016年7月收治的96例心力衰竭患者为研究对象，所有患者均符合心力衰竭临床诊断标准，将患者随机分成观察组与对照组。观察组48例，男28例，女20例，年龄48～81岁，平均年龄（65.2±4.5）岁，其中冠心病25例，心肌病12例，高血压合并心脏病11例。对照组48例，男27例，女21例，年龄47～83岁，平均年龄（66.2±4.1）岁，其中冠心病24例，心肌病12例，高血压合并心脏病12例。对比两组患者在年龄、性别、病症类型等一般资料上差异无统计学意义（P＞0.05），有可比性。 1.2 排除与纳入标准 （1）患者纳入标准：所有患者均为成年心力衰竭者；所有患者均自愿接受本次研究，并签署知情同意书[2]。（2）排除标准：患者之前服用过其他药物的患者；合并有严重脏器损伤以及脏器功能缺失的患者；严重肝肾功能障碍、低血压、心率异常、精神障碍患者。 1.3 方法 两组患者在入组前均使用常规检查方法对患者的并发程度、病情类别进行分析。对照组治疗方法上使用现代化的心理衰竭治疗手段，包括对患者进行合理的用药，如对病情较轻以及中等病情的患者使用利尿剂、肾素、洋地黄制剂等药物，缓解患者心力衰竭的情况，对于部分重症患者，则应用多巴胺以及多巴酚丁胺等提升肌力的药物来提升患者的生命体征[3]。观察组患者则在对照组常规治疗药物的基础上，加用左卡尼汀3.0g，将药物与0.9%氯化钠溶液100ml混合，为患者建立静脉通道，采取静脉滴注的给药方法，药物的用量为1次/d，为患者连续用药7d。两组在治疗过程中，均严密监测患者的生命体征，包括心电图、心率、血压等情况，根据患者治疗情况适当调整药物的用量。 1.4 观察指标及疗效评价标准 （1）在患者治疗前与治疗后，对使用心脏彩超对患者进行检查，测试患者6min步行后左心室收缩末期（LVESV）、左心室舒张末容积（LVEDV）以及步行距离。（2）对患者治疗后

设计管理的基本原理与方法

第三章设计管理的基本原理与方法 设计管理是一个过程，在这个过程中，企业的各种设计活动，包括产品设计、环境设计、视觉传达设计等，被合理化和组织化。另外，设计管理还要负责处理设计与其它管理功能的关系，并负责有效地使用设计师。 在设计管理的过程中，设计管理者扮演了组织者、协作者、整合者、同中求异者、传达沟通者及媒介者等诸多角色。本章在管理学的基础上，总结归纳出设计管理的基本原理与方法。 第1节设计管理的基本原理 原理是指某种客观事物的实质及其运动的基本规律。设计管理原理是对设计管理工作的实质内容进行科学分析总结而形成的基本原理，除具有管理原理的基本特征外，还具有自己的独特特点。 一、系统原理是指将产品创新设计的整个过程视为一个开放式系统，运用系统理论和系统方法，对设计要素、设计组织、设计过程进行系统分析，旨在优化设计管理系统的最优功能，以实现企业产品的整体优化和产品创新的总体目的。 在一项产品创新设计过程中，管理工作的内部存在着错综复杂、相互制约的关系，而且还表现在这一管理工作与其他管理工作之间也存在着这种错综复杂、相互制约的关系。任何一种关系处理不好，任何一个环节出现问题，都会对设计管理系统的正常活动带来不利的影响。因此，这就要求设计管理者必须坚持系统理论和方法论，通盘考虑，全面权衡，综合处理它们之间的各种问题。 产品创新设计系统内诸要素都不是孤立地存在的，其性质必然满足系统存在的一切条件。一方面，系统的整体目标规定着要素的根本性质及其存在和发展；另一方面，要素又随着管理系统是开放而同外部环境以及其它系统发生着各种形式的“输入和输出”，表现为一种相互制约、相互促进的动态相关图景。设计管理强调运用系统理论和方法，在确定和不确定的条件下，对管理对象诸要素及其相互关系进行充分的系统管理和综合，以实现设计管理的最优化目标。 为了正确贯彻设计管理系统的原理，必须掌握它的三个主要观点： 1、目的性观点 设计管理意义上的“目的”一词，是指设计管理系统存在的依据和最终目标。没有目的的设计管理系统是毫无意义和价值的系统；目的不明确或混淆了不同的目的，都必然会造成设计管理系统的紊乱。一般讲，设计管理对象在未经管理之前呈无序状态。设计管理的任务就在于：通

荧光原位杂交技术FISH

荧光原位杂交技术FISH 1 目的 通过FISH实验检测两条Brd2基因cRNA探针的效价。 2材料与仪器 2.1材料 件为：95℃预变性3 min；95℃变性30 s；50℃退火45 s；72℃延伸45 s；循环30次； 72℃再延伸8 min。 2) 将所有PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测，采用凝胶回收试剂盒回收并纯化PCR产 物，并用微量分光光度计测定其浓度。 3) 进行体外转录反应合成Brd2 cRNA探针，20 μL体外转录反应体系如下：RNase

inhibitor 1μL，10×NTP dig labeling mixture 2μL，10×transcription buffer 2μL，Template DNA 13μL，RNA polymerase 2μL。 4) 37℃水浴孵育2 h，取0.5μL于1%琼脂糖凝胶电泳检测。 5) 加入2μL无RNase污染的Dnase I 37℃水浴孵育15 min来消化模板DNA。 6) 加入EDTA 0.8μL，加入5.6μL NH4Oac终止反应，再加入56μL无水乙醇并混匀，于 -80℃放置20 min。 7) 15000 r/min,4℃离心15 min，弃上清，加入700μL 80%的无水乙醇混匀，15000 r/min,4℃ 离心10 min沉淀RNA。 8) 干燥后用DEPC处理的水50μL溶解RNA。合成的两条探针经1%琼脂糖凝胶电泳鉴 定并用微量分光光度计测定探针浓度，于-80℃保存备用。 3.2荧光原位杂交实验检测探针的效果 1) 正常C57BL/6小鼠用1%戊巴比妥钠深麻后，依次以30 mL 0.01 mol/L DEPC-PBS和 100 mL含4%多聚甲醛的磷酸缓冲液（PB）行左心室灌注，小心剥离脑组织，于4℃环境下用上述相同固定液进行后固定过夜，后将组织转移浸没于含30%蔗糖的PB溶液中脱水至沉底。 2) 最后取出组织用OTC包埋，冰冻切片机连续切片至需要的层面，切片厚度30 μm。 3) 选取上述脑组织切片于室温条件下经含有2%H2O2的0.1 mol/L DEPC-PB处理10 min 以阻断内源性过氧化物酶，再用0.1mol/L DEPC-PB室温漂洗10 min，接着用含 0.3%Triton X-100的0.1 mol/L DEPC-PB处理20 min，在用乙酰化液处理10 min，后 于0.1mol/L DEPC-PB中清洗2次，每次10 min，后加入预杂交液，60℃预杂交1 h 以封闭非特异结合位点。 4) 分别于两组切片中加入探针并使探针终浓度为1 μg/mL。于60℃杂交炉中恒温孵育 16-20 h，同时设立省略探针的空白对照，以上操作严格在无RNA酶环境下进行。 5) 杂交后组织切片置于wash buffer中60℃浸洗2次，每次20 min，接着切片在RNase buffer中室温孵育5 min，后加入终浓度为20 μg/mL的RNase，37℃作用30 min以消化未结合的cRNA探针。 6) 接下来恒温37℃条件下依次用2×SSC，0. 2×SSC溶液各浸洗切片2次，每次20 min， 再在TS7.5溶液中室温孵育5 min，后置于TBS溶液中室温封闭1 h，加入地高辛抗体（POD-anti-DIG,1:100）室温孵育过夜。

混凝土轨枕的质量标准和标准

附件 9 混凝土轨枕的质量标准和要求

混凝土轨枕的质量标准和要求 1. 无碴轨道双块式轨枕技术条件 以B355型（Rheda 2000）为例，说明考虑并比较了相关的中国和欧洲/德国标准的双块式轨枕的技术条件。 2. 制定本文件时依据铁道部与Rail.One技术转让中下列相关文件： ?Specification of concrete for the production of Rheda 2000 Bi-block sleepers [28.03.06] Rheda2000双块式轨枕生产的混凝土规[2006年3月28日] ?Inspection & Testing plan (ITP) [Doc 992 Bi block CN], [992 Turnout CN], [993 Bi block CN], [993 Turnout CN], [526 CN ITP general] 检查和测试计划（ITP）[文件992 双块式轨枕], [992 岔枕], [993 双块式轨枕], [993 岔枕], [526 CN ITP 概述] ?Definition of acceptable / non-acceptable surface conditions on Rheda2000 Bi-block sleepers [Doc 1353] Rheda2000双块式轨枕表面状况合格/不合格的定义 ?Handling with rejected sleepers [Doc 1227] 不合格轨枕的处理 ?Qualification for the production of Rheda2000 sleepers [29.06.2006] Rheda2000轨枕生产的资格条件

浅谈左卡尼汀在泌尿内科疾病治疗中的临床应用

浅谈左卡尼汀在泌尿内科疾病治疗中的临床应用 发表时间：2016-05-18T14:12:49.093Z 来源：《健康前沿》2016年1月作者：韩琨琳王丹 [导读] 左卡尼汀又称为左旋肉毒碱，其为人体可合成的内源性物质，分子量约为161.2，成人体内约有20g左右，主要分布在心肌、骨骼肌中。 韩琨琳大连医科大学 116044 王丹大连市第五人民医院 116021 左卡尼汀（L-carnitine,LC）,又称为左旋肉毒碱，其为人体可合成的内源性物质，分子量约为161.2，成人体内约有20g左右，主要分布在心肌、骨骼肌中。由于其改善心肌代谢、心肌能量供应的作用，主要应用于心血管系统疾病的治疗中。随着人们对LC研究的深入，人们发现其应用范围可扩大至泌尿系统、内分泌系统、男性、消化系统等的疾病治疗过程中。在泌尿内科疾病的治疗过程中有着十分重要的作用。本文就近年来左卡尼汀在泌尿内科疾病治疗中的临床应用的研究进展作浅要的综述。 1.LC在泌尿内科的临床应用 1.1肾性贫血 由于慢性肾脏疾病或其他肾脏疾病导致的肾脏功能异常。引起促红细胞生成素（EPO）减少，红细胞代谢加快、不稳定性增高。应用LC可以提高红细胞的膜稳定性，抑制红细胞的周期缩短【1】，此为用于治疗肾性贫血的主要机制。并且LC的使用可降低常规用药重组人促红细胞生成素（rHuEPO）的用量，提高效益【2】，其机制为降低促红细胞生成素的抵抗作用【3】。 1.2血液透析并发症 对于急性肾损伤、慢性肾衰竭，肾脏替代治疗是最直接且有效的方法，主要包括血液透析、腹膜透析和肾移植。其中以血液透析应用最为广泛和常见，但血液透析也常会伴发一些并发症，临床上予以对应的预防和治疗，其中就包括LC的使用。 1.2.1血液透析性贫血 在透析过程中，由于仪器等的原因，可能会发生少量红细胞膜的破裂溶血，并且由于LC分子量为较小，透析过程中从血液中大量流失。应用LC可以提高红细胞膜的稳定性【1】.补充流失的LC，缓解血液透析引起的贫血加重。 1.2.2血液透析低血压 由于血液透析将血液中的毒素等分子清除，渗透压发生改变，会表现出不同程度的低血压，会降低透析治疗的效果。LC可以改善血压的降低，维持血压的稳定，付文静等【4】，通过对照试验，显示LC有利于心血管的稳定，保持血压的稳定。 1.2.3血液透析营养不良 对于血液透析出现的营养不良，张海燕等【5】对使用LC患者的研究发现血白蛋白（P＜0.05）和血红蛋白（P＜0.01）显著升高，血浆丙二醛（MDA）相对下降（P＜0.01），由于其可抑制氧自由基的产生，因此谷胱甘肽、过氧化物酶（GSHPx）、氧化物歧化酶平均值显著上升（P＜0.01）。同时，LC本身的缺乏也会导致营养不良，可能与其氧自由基产生增加有关。 1.2.4血脂异常 近一半的透析患者会出现不同程度血脂异常。LC可降低血中甘油三酯和脂蛋白a，可能与其生理作用有关，将长链脂肪酸携入线粒体，促其氧化分解，后将产生的短链脂酰基携出。因此，缓解脂肪代谢紊乱。但在临床使用过程中应尽量选用注射剂，有研究提示，口服LC后，LC可在肠道菌群作用下，使TMAO水平升高，TMAO与动脉粥样硬化密切相关，可能会增加心血管疾病的风险。 1.2.5微炎症 透析出现微炎症的患者，可以利用其抑制氧自由基产生的抗氧化作用，减少细胞的损伤与炎性反应，喻业安等【7】通过研究发现LC 可降低透析患者多种炎症因子，改善微炎症。 1.3肾结石 结石的形成会造成肾小管上皮细胞的损伤，氧自由基也可对其造成损伤。利用LC抑制氧自由基的作用，可以减小结石、氧自由基对其的损伤，其次LC改善肾的代谢与功能可以抑制结石的进一步形成。 1.4急性肾脏衰竭 急性肾损伤患者的血肌酐和尿素氮会进行性升高，血钾升高，PH值和碳酸氢钙降低，龙涛【9】研究发现使用LC的急性肾损伤患者，其血肌酐、尿素氮均可得到改善，有利于肾功能的好转。 1.5慢性肾脏疾病 近年国宏伟，在LC与疏血通合用中，观察组患者血肌酐、尿素氮、超敏C反应蛋白水平较对照组显著降低（P＜0.05），提示能够有效改善肾功不全患者的肾功能。或与前列地尔合用，观察组C反应蛋白下降水平较对照组低（P＜0.05），观察组治疗前、后，24小时尿蛋白、血肌酐、尿素氮均较前降低（P＜0.05）。提示临床上可进一步推广使用。 1.6心肾综合征 对于慢性心衰导致的心肾综合征患者，治疗时联合左卡尼汀，能够通过改善心肌、脏器的代谢，进一步改善心肾功能，降低心衰指数BNP浓度，降低肾小球滤过率功能指数CysC浓度。提示LC可以用于心肾综合征治疗时的联合用药。 1.7周围神经病变 周围神经病变可能是由于尿毒症患者毒性物质积蓄导致周围神经损伤造成。血中LC浓度升高可以使蓄积的脂酰辅酶进入线粒体内，降低腺嘌呤核苷酸转换酶的抑制作用，改善神经细胞代谢和能量供应，进一步恢复其正常功能。 参考文献： 1.路明，游茂翔.左卡尼汀联合重组人促红细胞生成素治疗慢性贫血[J].中国当代医学，2011，18（3）：15 2.易湛苗，董淑杰，翟所迪，等.左卡尼汀及其衍生物临床应用的循证证据及评价[J].中国药物应用与监测，2013，10（2）：71-74. 3.付文静，张沛，邓英辉，等.老年维持性血液透析合并低血压患者的治疗观察[J].山东医药，2011，51（40）：97-98.