总酚的测定

样本和咀嚼片总酚（total phenols，TP）的测定

一、测定意义：

酚类物质具有清除自由基，抗氧化衰老的作用，具有较高的营养价值和医疗保健作用，被广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。

二、测定原理：

在碱性条件下，酚类物质能将钨钼酸还原，产生蓝色化合物，在760nm处有特征吸收峰，测760nm处的吸光值，即可得样品总酚含量。

三、试剂盒组成及配置：

提取液：60%乙醇

试剂一：液体6ml??1瓶

试剂二：液体15ml??1瓶

四、实验仪器：

电子天平，烘箱，量筒，试管，分光光度计

五、实验步骤：

1、提取液的配置

取30ml无水乙醇加20ml蒸馏水配置60%的乙醇提取液。

2、总酚的提取

称取0.1g研碎的试样，加入2.5ml提取液，涡旋混匀10min，静止，取上清液，用提取液定容至2.5ml，待测。

六、总酚含量计算公式：

总酚含量（mg／g）＝0.178??（A760?0.0012）??2.5??20?样品质量＝8.905??A760?样品质量

试剂一对皮肤具有一定刺激性，请操作时注意做好防护措施。

总黄酮、多酚含量的测定

燕麦总黄酮含量的测定 一、仪器 紫外-可见分光光度计、分析天平、低速离心机、超声波提取器、恒温水浴锅、粉碎机、pH计、10mL容量瓶15个、10mL具塞试管、100mL烧瓶、10mL离心管10个、试管架2个 二、药品 芦丁标准品40mg、无水乙醇1000mL、亚硝酸钠500g、硝酸铝500g、NaOH 500g 三、实验步骤 （一）、样品处理及总黄酮的提取 1. 将样品籽粒分别称取 2.5 g置于小信封里，80℃烘干24 h。 2. 研成粉末，称取500±2 mg样品于10 mL离心管中，使样品位于试管底部（重复3次）。 3. 每管加4 mL 60％乙醇，放水浴锅60℃浸提2 h。6000 r/min离心10 min，离心后取上清液于10 mL容量瓶中。 4. 再向离心管中加4 mL的60％乙醇，放水浴锅60℃浸提1 h。6000 r/min离心10 min，离心后取上清液于相应的10 mL容量瓶中。60％乙醇定容至10 mL，待测。 （二）、标准曲线绘制 1. 精确量取浓度200 μg/mL芦丁标准溶液0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、 2.0 mL 分别置于10 mL容量瓶中。 2. 向容量瓶中分别加60％乙醇5、4.8、4.6、4.2、 3.8、3.4、3.0 mL。 3. 然后加5％亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，静置6 min。 4. 再加10％硝酸铝0.3 mL，摇匀，静置6 min。 5. 加4％氢氧化钠4.0 mL，用60%的乙醇定容至刻度，摇匀，静置12 min。 6. 于510 nm波长下测定吸光度，并以芦丁标准浓度值为纵坐标，以吸光度为横坐标，绘制标准曲线。 （三）、样品提取液总黄酮含量的测定 准确吸取总黄酮提取液2.0 mL于10 mL容量瓶中，按二的方法测定吸光度，

挥发酚的测定 国标法

水质挥发酚得测定 4-氨基安替比林分光光度法 警告:乙醚为低沸点、易燃与具麻醉作用得有机溶剂,使用时周围应无明火,并在通 风柜内操作,室温较高时,样品与乙醚宜先置冰水浴中降温后,再尽快进行萃取操作;三氯甲烷为具麻醉作用与刺激性得有机溶剂,吸入蒸气有害,操作时应配戴防毒面具并在通风处使用。 1 适用范围 本标准规定了测定地表水、地下水、饮用水、工业废水与生活污水中挥发酚得4-氨基 安替比林分光光度法。 地表水、地下水与饮用水宜用萃取分光光度法测定,检出限为0、0003 mg/L,测定下限 为0、001 mg/L,测定上限为0、04 mg/L。 工业废水与生活污水宜用直接分光光度法测定,检出限为0、01 mg/L,测定下限为0、04 mg/L,测定上限为2、50 mg/L。 对于浓度高于标准测定上限得样品,可适当稀释后进行测定。 定义挥发酚 volatile phenolic pounds 随水蒸汽蒸馏出并能与4-氨基安替比林反应生成有色化合物得挥发性酚类化合物,结 果以苯酚计。 方法1 萃取分光光度法 4 方法原理 用蒸馏法使挥发性酚类化合物蒸馏出,并与干扰物质与固定剂分离。由于酚类化合物得 挥发速度就是随馏出液体积而变化,因此,馏出液体积必须与试样体积相等。 被蒸馏出得酚类化合物,于pH 10、0±0、2介质中,在铁氰化钾存在下,与4-氨基安替比 林反应生成橙红色得安替比林染料,用三氯甲烷萃取后,在460 nm波长下测定吸光度。 5 干扰及消除 氧化剂、油类、硫化物、有机或无机还原性物质与苯胺类干扰酚得测定。 5、1 氧化剂(如游离氯)得消除 样品滴于淀粉－碘化钾试纸(6、23)上出现蓝色,说明存在氧化剂,可加入过量得硫酸 亚铁(6、2)去除。 5、2 硫化物得消除 当样品中有黑色沉淀时,可取一滴样品放在乙酸铅试纸(6、24)上,若试纸变黑色,说 明有硫化物存在。此时样品继续加磷酸酸化,置通风柜内进行搅拌曝气,直至生成得硫化氢完全逸出。 5、3 甲醛、亚硫酸盐等有机或无机还原性物质得消除 可分取适量样品于分液漏斗中,加硫酸溶液(6、11)使呈酸性,分次加入50 mL、30 mL、 30 mL乙醚(6、5)以萃取酚,合并乙醚层于另一分液漏斗,分次加入4 mL、3 mL、3 mL氢氧化钠溶液(6、12)进行反萃取,使酚类转入氢氧化钠溶液中。合并碱萃取液,移入烧杯中, 置水浴上加温,以除去残余乙醚,然后用水(6、1)将碱萃取液稀释到原分取样品得体积。同时应以水(6、1)作空白试验。 5、4 油类得消除 样品静置分离出浮油后,按照5、3操作步骤进行。 5、5 苯胺类得消除 苯胺类可与4-氨基安替比林发生显色反应而干扰酚得测定,一般在酸性(pH＜0、5)条

苯酚含量的测定

苯酚含量的测定 一、实训目的 1.掌握KBrO3-KBr标准溶液的配制方法。 2.掌握溴量法测定苯酚的原理与方法。 3.掌握本实验空白实验的实际意义与方法。 二、原理 KBrO3与KBr在酸性介质中反应,可产生相当量的Br2。Br2与苯酚发生取代反应,生成稳定的三溴苯酚,反应如下: KBrO3 + 5KBr + 6HCl = 3 Br2 + 6KCl + 3H2O 若加入过量的Br2与苯酚反应后,剩余的Br2用过量的KI还原,析出的I2可用 Na2S2O3标准滴定溶液滴定。 Br2 + 2KI = I2 + 2 KBr I2 + 2Na2S2O3 = Na2S4O6 +2NaI 三、试剂 1.苯酚试样。 2.固体KBrO3、KBr。 3.浓HCl。 4.KI溶液(100g/L)。 5.NaOH溶液(100g/L)。 6.Na2S2O3标准滴定溶液c(Na2S2O3)=0、1 mol/L。 7.淀粉指示液(5g/L)。 8.氯仿 四、实训内容 1.配制KBrO3-KBr标准溶液c(1/6 KBrO3)=0、1 mol/L:称取0、5g(准至0、1g) KBrO3与2、5gKBr,放于烧杯中,加少量水溶解,稀释至150mL,搅匀备用。 2、苯酚纯度的测定 准确称取苯酚试样0、2～0、3g(称准至0、0001g)放于盛有5mLNaOH溶液的250mL烧杯中,加入少量蒸馏水溶解。仔细将溶液转入250mL容量瓶中,用少量水洗涤烧杯数次,定量转入容量瓶中。以水稀释至刻度,充分摇匀。 用移液管移取试液25、00mL,放于碘量瓶中,用滴定管准确加入KBrO3-KBr标准溶液30、00～35、00mL,微开碘量瓶塞,加入10mL(1+1)HCl,立即盖紧瓶塞,振摇1～2min,用蒸馏水封好瓶口,与暗处放置15min。微启瓶塞,加入KI溶液10mL,盖紧瓶塞,充分摇匀后,加氯仿2mL,摇匀。打开瓶塞,冲洗瓶塞与瓶壁,立即用c(Na2S2O3)=0、1 mol/L Na2S2O3标准滴定溶液滴定,至溶液呈浅黄色时加淀粉指示剂3mL,继续滴定至蓝色恰好消失即为终点。记录消耗Na2S2O3标准滴定溶液的体积V 。

总黄酮、多酚含量的测定

总黄酮含量的测定 一、仪器 紫外-可见分光光度计、分析天平、低速离心机、超声波提取器、恒温水浴锅、粉碎机、pH计、10mL容量瓶15个、10mL具塞试管、100mL烧瓶、10mL离心管10个、试管架2个 二、药品 芦丁标准品40mg、无水乙醇1000mL、亚硝酸钠500g、硝酸铝500g、NaOH 500g 三、实验步骤 （一）、标准曲线绘制 1. 芦丁标准品40mg置于称量瓶中80℃烘干至恒重，取烘干后的20mg芦丁标准品用水定容至100mL,得200μg/mL芦丁标准贮备液，精确量取上述浓度芦丁标准贮备溶液0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、 2.0 mL分别置于10 mL具塞试管中。 2. 向具塞试管中分别加60％乙醇5、4.8、4.6、4.2、 3.8、3.4、3.0 mL。 3. 然后加5％亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，静置6 min。 4. 再加10％硝酸铝0.3 mL，摇匀，静置6 min。 5. 加4％氢氧化钠4.0 mL，用60%的乙醇定容至刻度，摇匀，静置12 min。 6. 于510 nm波长下测定吸光度，并以芦丁标准浓度值为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。研究表明芦丁标准品含量在0～0.5mg 范围内与吸光度具有良好的线性关系。 （二）、样品处理及总黄酮的提取（以60%乙醇提取为例） 1. 将样品在80℃烘干24 h，粉碎后过80目筛置于干燥器中备用。 2. 称取500±2 mg样品于25 mL具塞三角瓶中，使样品位于三角瓶底部（重复3次）。 3. 每瓶加4 mL 60％乙醇，放超声波提取器提取2 h。提取液转至10 mL具塞离心管中。 4. 再向具塞三角瓶中加4 mL的60％乙醇，放超声波提取器提取1 h，提取液转至相应10 mL具塞离心管中，6000 r/min离心10 min，离心后取上清液于相应

水质-挥发酚方法验证报告

水质挥发酚的测定4-氨基安替比林分光光度法方法验证报告参数：水质挥发酚的测定 检测标准：HJ503-2009 仪器设备：智能一体化蒸馏仪 自动液液萃取仪 设备型号： STEHDB-106-3RW STC-302B 仪器条件：智能一体化蒸馏仪：加热功率500W；设定量250mL；时间设定120min. 液液萃取仪：萃取强度10-20Hz;运行时间60s;停止时间30s；剩余次数2次 实验时间：2016年10月8日 一、方法验证步骤 1.1试剂配制：按HJ503-2009配制。 1.2标准曲线绘制：按HJ503-2009规定的操作步骤绘制。 1.3精密度实验：用水中挥发酚标准物质（标准物质生产单位为中国计量科学研究院，标准物质批次编号为16042）配制浓度高、中、低3个梯度的水样，各平行测定六次，计算各浓度6个样品的相对标准偏差。 1.4准确度实验：用水中挥发酚标准样品（标准样品生产单位为环境保护部标准样品研究所，标准物质批号为200349）进行试验。临用前小心打开安瓿瓶，用10mL干燥洁净移液管从安瓿瓶中准确量取10mL浓样至1000mL容量瓶中，用纯水稀释定容至刻度，混匀后立即使用。分别取稀释后标准样品溶液25mL配制成6个平行样品，按照HJ503-2009实验步骤进行实验。计算出标准样品浓度，并判定是否在误差允许范围内。 1.5样品测定：按HJ503-2009进行测定，具体步骤如下： 1.5.1取250mL样品移入500mL全玻璃蒸馏器中，加25mL水，加数粒玻璃珠以防爆沸，再加数滴甲基橙指示液，若试样未显橙红色，则需继续补加磷酸溶液。 1.5.2连接冷凝管，开启循环水，加热蒸馏，收集馏出液250mL至容量瓶中。 1.5.3将馏出液250mL移入液液萃取仪的分液漏斗中，加 2.0mL缓冲液，混匀(设置强度10-20Hz，运行时间60s，次数1次，以下混匀均如此)，pH值为10.0±0.2；加1.5mL4-氨基安替比林溶液，混匀；再加1.5mL铁氰化钾溶液，充分混匀后，密塞，放置10min。1.5.4在上述显色分液漏斗中准确加入10.0mL三氯甲烷，密塞，设置好萃取程序：萃取强度10-20Hz、运行时间60s、停止时间30s、剩余次数2次，萃取完成后，静置分层。用干脱脂棉或滤纸拭干分液漏斗颈管内壁，于颈管内塞一小团干脱脂棉或滤纸，将三氯甲烷层通过干脱脂棉或滤纸，弃去最初滤出的数滴萃取液后，将余下的三氯甲烷直接放入光程为20mm 的比色皿中。

挥发酚的测定 国标法

水质挥发酚的测定 4-氨基安替比林分光光度法 警告：乙醚为低沸点、易燃和具麻醉作用的有机溶剂，使用时周围应无明火，并在通 风柜内操作，室温较高时，样品和乙醚宜先置冰水浴中降温后，再尽快进行萃取操作；三氯甲烷为具麻醉作用和刺激性的有机溶剂，吸入蒸气有害，操作时应配戴防毒面具并在通风处使用。 1 适用范围 本标准规定了测定地表水、地下水、饮用水、工业废水和生活污水中挥发酚的4-氨基 安替比林分光光度法。 地表水、地下水和饮用水宜用萃取分光光度法测定，检出限为0.0003 mg/L，测定下限 为0.001 mg/L，测定上限为0.04 mg/L。 工业废水和生活污水宜用直接分光光度法测定，检出限为0.01 mg/L，测定下限为0.04 mg/L，测定上限为2.50 mg/L。 对于浓度高于标准测定上限的样品，可适当稀释后进行测定。 定义挥发酚 volatile phenolic compounds 随水蒸汽蒸馏出并能和4-氨基安替比林反应生成有色化合物的挥发性酚类化合物，结 果以苯酚计。 方法1 萃取分光光度法 4 方法原理 用蒸馏法使挥发性酚类化合物蒸馏出，并与干扰物质和固定剂分离。由于酚类化合物的 挥发速度是随馏出液体积而变化，因此，馏出液体积必须与试样体积相等。 被蒸馏出的酚类化合物，于pH 10.0±0.2介质中，在铁氰化钾存在下，与4-氨基安替比 林反应生成橙红色的安替比林染料，用三氯甲烷萃取后，在460 nm波长下测定吸光度。 5 干扰及消除 氧化剂、油类、硫化物、有机或无机还原性物质和苯胺类干扰酚的测定。 5.1 氧化剂（如游离氯）的消除 样品滴于淀粉－碘化钾试纸（6.23）上出现蓝色，说明存在氧化剂，可加入过量的硫酸 亚铁（6.2）去除。 5.2 硫化物的消除 当样品中有黑色沉淀时，可取一滴样品放在乙酸铅试纸（6.24）上，若试纸变黑色，说 明有硫化物存在。此时样品继续加磷酸酸化，置通风柜内进行搅拌曝气，直至生成的硫化氢完全逸出。 5.3 甲醛、亚硫酸盐等有机或无机还原性物质的消除 可分取适量样品于分液漏斗中，加硫酸溶液（6.11）使呈酸性，分次加入50 mL、30 mL、30 mL乙醚（6.5）以萃取酚，合并乙醚层于另一分液漏斗，分次加入4 mL、3 mL、3 mL氢氧化钠溶液（6.12）进行反萃取，使酚类转入氢氧化钠溶液中。合并碱萃取液，移入烧杯中，置水浴上加温，以除去残余乙醚，然后用水（6.1)将碱萃取液稀释到原分取样品的体积。同时应以水（6.1）作空白试验。 5.4 油类的消除 样品静置分离出浮油后，按照5.3操作步骤进行。 5.5 苯胺类的消除

茶多酚的含量测定

茶多酚的含量测定高锰酸钾直接滴定法 目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作 原理 茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。根据 消耗 1、 容至4~6h， 2、 30.630%草 的浓硫酸10mL 1 100mL， ，开动磁 五、结果计算 式中：X—茶多酚的含量，% ，B—空白消耗的高锰酸钾毫升数，mL A—样品消耗的高锰酸钾毫升数，mL ω--高锰酸钾的浓度，% ，m—样品的质量g，V1—测定用供测试液的体积，mL ，V2--供测试液的体积，mL 酒石酸铁比色法 原理： 茶叶中多酚类物质占茶嫩梢干重的20％～35％，由约30种以上的酚类物质所组成，通称茶多酚。按其化学结构分为四类：（1）儿茶素类，属黄烷醇类；（2）黄酮及黄酮醇类；（3）花白素及花青素，即羟基-［4］-黄烷醇及其钾盐；（4）醋酸及缩酚酸类。其中以黄烷醇类化合物最重要（占多酚的80％左右）。

纯儿茶素一般为白色无定形粉末，在空气中极易氧化成棕色物，能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂中。茶多酚能溶于水、乙醇、 甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂。对热、酸较稳定，2%的溶液加热至120 ℃并保持30min， 无明显变化。在碱性条件下易氧化变质。 酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物，络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。因此可以用比色方法测定。该法可避免高锰酸钾滴定法所产生的人为视觉误差。 茶多酚的测定方法有高锰酸钾直接滴定法和酒石酸铁比色法，由于高锰酸钾直接滴定法操作比较复杂，且靠肉眼观察颜色判断终点，如果样品溶液颜色较深时，可能影响测定结果。本实验将应用酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量。 仪器与试剂 （l 540nm 1、、磷酸盐缓冲液在常温下容易生长霉菌，放冰箱中保存或临用时现配。 2、样品溶液制备中的注意事项： （1）较透明的样液，如果味茶饮料，将样液充分摇匀后，直接取样测定 （2）较浑浊的样液，如果汁茶饮料、奶茶饮料等，称取充分混匀的样液25mL于50mL容量瓶中，加95%的乙醇15mL充分混匀，放置15min，用水定容至刻度，过滤。 （3）含有碳酸气的样液，如农夫汽茶，量取充分混匀的样液100mL于250mL的烧杯中，称取其总量，于电炉上加热至沸，在微沸状态下加热10min，以将二氧化碳排除，放冷，用水补足原来的质量，摇匀，

苯酚含量测定

1 溴酸钾法 KBrO 3是强氧化剂，在酸性溶液中，半反应如下： BrO3- + 6H + + 6e - = Br- + 3H 2O E q = 1.44V KBrO 3容易提纯，在453K ( 180 C)烘干后，可以直接配制成标准溶液。也 可以配成近似浓度后，用碘量法标定。在酸性溶液中，一定量的KBrO 3与过量KI作用，析出12，反应如下： BrO3- + 6I - + 6H + = Br- + 3I 2 + 3H 2O 析出的|2，用Na2S2O3标准溶液来滴定。 溴酸钾法可用于测定Sb3+。在酸性溶液中，以甲基橙作指示剂，可用溴酸钾标准溶液直接滴定 Sb3+： 3Sb3+ + BrO 3- + 6H+ = 3Sb5+ + Br- + 3H2O 过量一滴 KBrO 3溶液，即将指示剂氧化，使甲基橙褪色，从而指示终点的到达。此法也可直接滴定 AsO 33-及TI+等。 在酸性溶液中， KBrO3-KBr 标准溶液发生以下反应： BrO3- + 5Br- + 6H+ = 3Br2 + 3H2O 生成的Br2与待测物(如苯酚)作用，剩余的 Br2用KI还原

Br 2 + 21 - 2Br- + I 2 析出的I2可用Na2S2O3标准溶液滴定。溴酸钾-碘量法主要用于苯酚的测定。通常在KBrO3的标准溶液中加入过量的 KBr，将溶液酸化。 2溴酸钾碘量法 在酸性溶液中KBrO3-KBr标准溶液发生反应，生成一定量的 B"。 KBrO3 + 5KBr + 6HCI = 3Br 2 + 6KCI + 3H 20 Br2与苯酚反应，生成三溴苯酚 过量的Br2与三溴苯酚继续反应，生成溴化三溴苯酚 过量的Br2、溴化三溴苯酚均与KI反应，生成12 0H +2H+ + 2I- OEr

植物总多酚常用的含量测定方法有Folin

植物总多酚常用的含量测定方法有Folin- Ciocalteu 法, 酒石酸亚铁法, 普鲁士蓝法和高锰酸钾法等。 1.福林试液的配制： 取钨酸钠10g与钼酸钠2.5g，加水70ml、85％磷酸5ml与盐酸10ml,置200ml 烧瓶中,缓缓加热回流10小时，放冷，再加硫酸锂15g、水5ml与溴滴定液1滴煮沸约15分钟，至溴除尽，放冷至室温，加水使成100ml。滤过,滤液作为贮备液。置棕色瓶中,于冰箱中保存。临用前，取贮备液 2.5ml，加水稀释至10ml，摇匀，即得。 用10mL乙醇溶液溶解0.5000g没食子酸，定容至100mL，分别移取3.0mL 到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容。加入福林－薛卡多（Folin-Ciocalteu）试剂显色，在765nm波长下测定吸光度。每个浓度做三个平行试验，取平均值，根据标准曲线。 取样品溶液1mL，按照上述的制作方法，测定其吸光度，每个样品做三个平行试验，取平均值，计算样品中的多酚含量。 反应原理为酚类化合物在碱性条件下可以将钨钼酸还原，生成蓝色的化合物，颜色的深浅与酚类化合物含量呈正相关，在波长760 nm左右有最大吸收。 2. 酒石酸亚铁比色法。 其测定原理是茶多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物。用分光光度法测定其含量。 茶多酚标准溶液的配制称取提取纯品0.2500g,加水溶解定容至250mL,混匀,即为每毫升含1mg提取纯品的标准溶液(mg/mL) 。 茶多酚的含量。茶多酚标准曲线的绘制。分别吸取茶多酚标准溶液1. 0mL、2. 0mL、3. 0mL、4. 0mL 于4 个50mL 容量瓶中,各加水至10mL,再加酒石酸亚铁溶液10mL,加入pH为7. 5的磷酸缓冲液至刻度,混匀后用1㎝比色皿,以空白试剂作参比,于波长540nm处测定吸光度(A) ,绘制出标准曲线。

水中挥发酚测定注意事项

《生活饮用水卫生规范》中挥发酚的测定方法是4-氨基安替比林（4-AAP ）分光光度法，样 品处理需经过蒸馏，蒸馏样品量大，费时费电，而且显色后用氯仿萃取，氯仿毒性大，操作 繁锁［1 ］用乙醚萃取，4-氨基安替比林直接分光光度法测定挥发酚，检出限完全满足生活 饮用水卫生标准要求，而且操作简便快速，适用于日常检测工作的需要。 1材料与方法 1.1仪器与试剂 1.1.1仪器分光光度计。 1.1.2试剂酚标准溶液：1000mg/L （苯酚计）,购买国家标准物质中心生产的酚标准溶液；酚标准应用溶液为临用前用无酚水稀释成 1.00卩g/ml;氢氧化钠溶液（2mol/L ）;4-氨基安替比林溶液（20g/L ），临用新配；铁氰化钾溶液（80g/L ），临用新配；氨水-氯化铵缓冲溶液（pH9.8 ）:20g氯化铵，溶于100ml氨水中。 1.2方法 1.2.1标准曲线绘制取8个500ml分液漏斗，每个分液漏斗中加入纯水250ml，然后分 别加入酚标准应用溶液0.00、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00ml，加入5ml 硫酸 （1+1 ）溶液混匀，分别以30、10、10ml乙醚萃取，合并乙醚液于100ml分液漏斗中，分别以2.0ml、2.0ml、2.0ml氢氧化钠溶液（2mol/L ）进行反提取，合并氢氧化钠于25ml 比色管中，用硫酸溶液中和至中性后供测定。 1.2.2测定于标准及样品提取液（提取方法同标准品提取法）中各加入1.0ml氨水-氯化铵缓冲溶液（pH9.8 ）摇匀。加入1.0ml4-AAP溶液，摇匀.最后加入1.0ml铁氰化钾溶液，摇匀。用纯水稀释至10.0ml，混匀。放置10min，于510nm波长处，用2cm比色皿，空白管作参比，测量吸光度值A。以吸光度值A为纵坐标，酚标准含量值M （卩g）为横坐标作线性回归。 1.2.3结果计算 X=M V X为水中挥发酚的含量（mg/L）;M为标准曲线上查得样品中挥发酚的含量（卩g）;V

总酚含量测定

7总酚含量测定参考韩富根的方法，略有改动， 欧阳学文 7.1样品处理：取鲜叶0.5g，加3ml 95%乙醇研磨成匀浆状，再加5ml 95%乙醇过滤，用95%乙醇定容至25ml。以儿茶酚作标准曲线。 7.2样品测定：取2 ml待测液于10ml离心管中，再加入2 ml福林试剂，摇匀，3min后加入10%碳酸钠2 ml振荡。静置1 h后700 nm处比色测定，以2ml蒸馏水代替待测液作为空白。根据标准曲线计算总酚含量。【七种与小麦近缘的野生植物对禾谷缢管蚜抗性的生化机制】 7.3试剂配制 ①福林试剂：将钨酸钠25g、磷钼酸5g，磷酸12．5ml同 蒸馏水188ml一道回流煮沸2h，冷却后用蒸馏水定容至1L。 ②10%碳酸钠溶液：用无水碳酸钠配制，冬季气温低时 会析出碳酸钠结晶，可在温水浴上加热溶解后使用。 ③酚标准溶液：先配制成100ml含儿茶酚60mg的溶液，再依次配制成100ml中含儿茶酚不同浓度0.5 1.0 1.5 2.0mg (临用时再配)。10mg/100ml为母液 标准系列的配置

8 ①干样品去除杂质，将样品粉碎并全部通过1.0mm孔径的筛网。 ②精确称取试样1g于100ml三角瓶中，加75%二甲基甲酰胺溶液50ml，加塞，室温振荡提取60min，双层滤纸过滤，滤液备用。 ③准确吸取1.0ml提取液于试管中，准确加入6.0ml水、 1.0ml8g/L（35ml/L）氨溶液，摇匀，自加氨溶液后计时，10min后以525nm为测定波长，水作空白测定样液的吸光度值。 ④准确吸取1.0ml提取液于试管中，准确加入5.0ml水、 1.0ml(3.5g/L)柠檬酸铁铵溶液、1.0ml氨溶液，摇匀，自加氨溶液后计时，10min后，以525nm为测定波长，水作空白，测定样液的吸光度值。两次测得吸光度值之差为样品中单宁的吸光度值。 ⑤配制单宁酸含量为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml 标准系列，分别吸取标准溶液1.0ml，准确加入5.0m水、1.0ml 柠檬酸铁铵溶液、1.0ml氨溶液，摇匀，自加氨溶液后计时，10min 后以525nm 为测定波长，水作空白测定标准溶液的吸光度值 9 可溶性蛋白质的测定 9.1样品处理：小麦分蘖初期，称取各供试品种剪碎叶片0．5g，加入2ml蒸馏水研磨后倒入10ml离心管中，再向残渣中加入6ml蒸馏水分两次冲洗，洗涤液转入离心管，放置半小时，摇匀悬浮后离心20分钟，取上清液，然后定容10ml容量瓶。

总酚与单宁的测定

一、单宁 红葡萄酒颜色的稳定很大程度上取决于单宁荷花色素苷发生的缩合反应，由于这种物质的存在，葡萄酒成熟过程中的颜色趋于稳定。单宁也是呈味物质，它与多糖和肽缩合，使酒更为柔和。有氧时缩合为浅黄色，有收敛性;无氧时为棕红色，无收敛性。 1、高锰酸钾氧化法 ①原理：利用酒中的单宁色素和其他非挥发性还原物质，在酸性条件下，能被高锰酸钾所氧化，而酒中的单宁色素又能被活性炭吸附除掉，据此测出酒中单宁色素的含量。 ②试剂 a.0.1mol/L高锰酸钾（1/5KMnO4）标准溶液：称取3.3g高锰酸钾，溶于100mL水中，缓缓煮沸15min，冷却后用水稀释至1000mL，置于暗处保存一周。以4号玻璃漏斗过滤于干燥的棕色瓶中。 标定：准确称取0.2g（准确至0.0002g）于105～110℃烘至恒重的基准草酸钠置入250mL三角瓶中，加100mL（8+92）硫酸溶液溶解，加热至60～70℃，趁热用高锰酸钾溶液滴定至溶液呈粉红色。同时做空白试验。 计算公式如下： 高锰酸钾浓度（1/5KMnO4，mol/L）=m/((V-V0)*0.06700) 式中m-----草酸钠的质量，g V-----测定时消耗高锰酸钾溶液的体积，mL V0----空白试验消耗高锰酸钾溶液的体积，mL 0.06700-----消耗1mL 1mol/L高锰酸钾（1/5KMnO4）标准溶液相当于草酸钠的质量，g/mmol b.0.05mol/L高锰酸钾（1/5KMnO4）溶液：将0.1mol/L高锰酸钾（1/5KMnO4）标准溶液稀释至原浓度的1/2 c.靛红纸试剂（靛蓝二黄酸钠，靛胭脂）：称取靛红1.5g，溶于50mL硫酸中，用水稀释至1000mL。 d.粉末活性炭 ③测定步骤 用容量瓶取酒样100mL，倾入蒸发皿中，置于沸水浴中，除去挥发物（一般蒸发掉一半溶液即可），然后取下冷却至室温，返回原容量瓶中，洗涤蒸发皿3～4次，将洗涤液并入容量瓶中，定容摇匀，得处理液Ⅰ取上述处理后的酒样50mL于100mL烧杯中，加入2g左右粉末活性炭用玻璃棒搅匀，静置5分钟，过滤。滤液收集于50mL容量瓶中，用水定容至刻度，得处理液Ⅱ。要求滤液无色透明。 吸取10mL处理液Ⅰ，置于1000mL三角瓶中，加入水500mL及10mL靛红指示剂，以0.05mol/L(1/5KMnO4）高锰酸钾标准溶液滴定至金黄色即为终点。记下消耗高锰酸钾标准溶液的毫升数V1。 同样取处理液Ⅱ10mL，同上操作，记下消耗的高锰酸钾标准溶液毫升数V2。 ④计算 单宁含量（以没食子单宁酸计，g/L）=（V1-V2）*c*0.04157*（1/V）*1000 式中：V1-----滴定处理液Ⅰ时高锰酸钾标准溶液的体积，mL; V2-----滴定处理液Ⅱ时高锰酸钾标准溶液的体积，mL; c------高锰酸钾（1/5 KMnO4）标准溶液的浓度，mol/L; V-----取样量，mL 0.04157-----消耗1mL1mol/L高锰酸钾（1/5 KMnO4）标准溶液相当于没食子单宁酸的质量，g/mmol ⑤讨论 a.本方法测定为单宁色素的含量，也可称为“高锰酸钾氧化值”。 b.活性炭用量随酒样颜色的深浅适量增减 c.滴定速度不要太快（每秒钟一滴），但要连续，间断滴定会影响反应终点。 d.正在发酵的红葡萄酒需经过过滤后再测定，样品太浑浊会影响终点的判定。

植物总酚检测试剂盒(比色法)

植物总酚检测试剂盒(比色法) 简介： 植物组织或果实中存在花青素、叶绿素、类胡萝卜素、类黄酮、酚类等物质，这些物质与果实等样品衰老过程密切相关，对其加工性能、存储、营养价值等都有重要影响。植物酚类物质具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有较高的营养价值和医疗保健作用而广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。 Leagene 植物总酚检测试剂盒(比色法)检测原理是总酚(Total Phenol)溶于有机溶剂，以有机溶剂粗提总酚，根据提取液的吸收光谱特性，可利用分光光度计在特定波长处测定其吸光度，通过与标准曲线比较，计算出总酚含量。该试剂盒主要用于植物组织或果实中总酚的提取以及定量检测总酚含量。该试盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、实验材料：桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织 2、研钵或匀浆器 3、离心管 4、滤纸或纱布 5、比色杯 6、分光光度计 操作步骤(仅供参考)： 1、总酚提取： ①取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品，置于预冷的研钵或匀浆器。②加入预冷的TP Assay buffer，充分研磨或匀浆后转入离心管中。用TP Assay buffer 冲洗研钵或匀浆器并转移至离心管中，补加TP Assay buffer。 ③避光静置，期间摇动次，然后过滤至离心管中，滤液即为总酚粗提液。2、稀释总酚标准溶液：取适量的总酚标准(1mg/ml)，按下表进行稀释： 编号 名称 TP112350T Storage 试剂(A):总酚标准(1mg/ml)5ml 4℃避光试剂(B):TP Assay buffer 500ml RT 避光使用说明书 1份

以没食子酸为对照品 ( FC酚法)总酚的含量测定方法

Folin－ Cioealteu 比色法( FC酚法） 一、仪器 UV- 2401 PC 型紫外分光光度计; 超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司KQ- 2508型) ; 恒温水浴锅 二、试剂 没食子酸标准品; 钨酸钠,磷钼酸, 85%磷酸, Na2 CO3, 以上试剂均为分析纯; 水为蒸馏水。 1.3 福林试剂的配制 在250mL的圆底烧瓶内加入20g 钨酸钠、5g 钼酸钠、140mL 蒸馏水，85%的浓磷酸10mL 及浓盐酸20mL，充分混匀，以小火回流10h，再加入3g 硫酸锂及15mL 双氧水，开口继续煮沸15min，待双氧水完全挥发，呈亮黄色。冷却后移入250mL 容量瓶中，定容置于棕色试剂瓶中，放入冰箱中备用。 1.4 溶液的配制 称取40gNa CO3, 溶于200mL 蒸馏水中, 即为20%的溶液。 二、方法与结果 1.对照品溶液的制备并绘标准曲线 精密称取没食子酸标准品0.0110g，用蒸馏水溶解并定容至100mL，得浓度为0.11mg /mL 的标准液。准确吸取0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mL 置于25mL 的棕色容量瓶中，加蒸馏水至6.0mL，然后分别加入FC 试剂0.5mL，混匀，在0.5～8min内加入1.5mL20% 的Na2CO3溶液，充分混合后定容，30℃避光放置0.5h，以不加标准液的6.0mL 蒸馏水为空白对照，760nm 下测定吸光值，每个样品平行测定三次。 2、供试品溶液的制备 样品溶液总酚含量的测定: 准确量取制备好的乙醇粗提液0.5mL 于50mL 容量瓶中，加入9.5mL 蒸馏水，摇匀，再加入0.5mL 福林试剂，混匀，在0.5 ～8min 内加入1.5mL 20%的Na2CO3溶液，充分混合后定容， 30℃避光放置0.5h，以没食子

苯酚含量测定

1溴酸钾法 KBrO3是强氧化剂，在酸性溶液中，半反应如下： BrO3- + 6H+ + 6e- = Br- + 3H2O E q = 1.44V KBrO3容易提纯，在453K（180℃）烘干后，可以直接配制成标准溶液。也可以配成近似浓度后，用碘量法标定。在酸性溶液中，一定量的KBrO3与过量KI作用，析出I2，反应如下： BrO3- + 6I- + 6H+ = Br- + 3I2 + 3H2O 析出的I2，用Na2S2O3标准溶液来滴定。 溴酸钾法可用于测定Sb3+。在酸性溶液中，以甲基橙作指示剂，可用溴酸钾标准溶液直接滴定Sb3+： 3Sb3+ + BrO3- + 6H+ = 3Sb5+ + Br- + 3H2O 过量一滴KBrO3溶液，即将指示剂氧化，使甲基橙褪色，从而指示终点的到达。此法也可直接滴定AsO33-及Tl+等。 在酸性溶液中，KBrO3-KBr 标准溶液发生以下反应： BrO3- + 5Br- + 6H+ = 3Br2 + 3H2O 生成的Br2与待测物（如苯酚）作用，剩余的Br2用KI还原

析出的I2可用Na2S2O3标准溶液滴定。溴酸钾-碘量法主要用于苯酚的测定。通常在KBrO3的标准溶液中加入过量的KBr，将溶液酸化。 2溴酸钾碘量法 在酸性溶液中KBrO3-KBr标准溶液发生反应，生成一定量的Br2。 KBrO3 + 5KBr + 6HCl = 3Br2 + 6KCl + 3H2O Br2与苯酚反应，生成三溴苯酚 过量的Br2与三溴苯酚继续反应，生成溴化三溴苯酚 过量的Br2、溴化三溴苯酚均与KI反应，生成I2

在中性或弱酸性溶液中，Na2S2O3标准溶液滴定生成的I2 I2 + 2S2O32- = 2I- + S4O62- 3测定过程中发生的反应及相应条件； 相关的计算公式： (1) 苯酚，Br2，S2O32-之间的摩尔比； (2) 硫代硫酸钠溶液浓度的计算公式； (3) 每升试样中苯酚含量(C6H5OH)(g·L-1) 的计算公式。 四．40.016g mol·L-1 KBrO3-KBr 标准溶液的配制 准确称取0.7g已干燥的KBrO3在100mL烧杯中，加2.5g KBr，以少量水溶解后定量转移到250mL容量瓶中，用纯水稀释至刻度，摇匀。 苯酚含量的测定。 (1) 吸取25.00mL待测苯酚液两份，分别放入锥形瓶中，加入25.00mL KBrO3-KBr 标准液。加10mL 1:1HCl酸化，迅速将瓶塞塞紧，充分摇匀后，放置5～10min（在放置过程中也应充分摇荡 1～2min），再加入15mL100g·L-1KI溶液，迅速塞紧瓶塞后充分摇匀，放置5min。小心吹洗瓶塞、瓶壁，立即用Na2S2O3标准溶液滴定至溶液呈淡黄色，加2ml5g·L-1淀粉溶液，然后继续滴定至蓝色消失。滴定用去Na2S2O3标准溶液体积为V1。 (2) 另取两份25mL纯水代替苯酚试样，分别置于锥形瓶中进行空白测定

紫外分光光度法测定水中总酚的含量

紫外分光光度法测定水中总酚的含量 苯酚是工业废水中一种有害物质，如果流入江河，会使水质受到污染，因此在检验饮用水的卫生质量时，需对水中酚含量进行测定。 一、实验目的 1．掌握紫外分光光度法测定酚的原理和方法。 2．熟悉紫外分光光度计的基本操作技术。 二、方法原理 具有苯环结构的化合物在紫外光区均有较强的特征吸收峰，在苯环上的第一类取代基(致活基团)使吸收更强，而苯酚在270nm处有特征吸收峰，其吸收程度与苯酚的含量成正比，因此可用紫外分光光度法，根据Lambert—Beer定律直接测定水中总酚的含量。 三、仪器与试剂 1．紫外分光光度计； 2．苯酚标准溶液，250mg/L：准确称0.0250g苯酚于250 mL烧杯中，加去离子水20 mL使之溶解，移入100mL容量瓶，用去离子水稀释至刻度，摇匀。 四、内容与步骤 1、标准系列溶液的配置 取5支25ml比色管，分别加入1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 mL苯酚标准溶液，用去离子水稀释至刻度摇匀待测。 2．吸收曲线的测量 取上述标推系列溶液中任一溶液，用1cm石英比色皿，以溶剂空白作参比，在220～350 nm波长范围内，每5nm测量一次吸光度。 3．标准曲线的测量 在苯酚的最大吸收波长(λmax)下, 用1cm石英比色皿，以溶剂空白作参比，测量标准系列溶液的吸光度。 4．水样的测定

与测量标准系列溶液的相同条件下，测量水样的吸光度 五、数据记录与处理 1．列表记录不同波长下同一标准溶液的吸光度值，以吸光度为纵坐标，波长为横坐标绘制吸收曲线，找出λmax，计算其 max。 2．列表记录标冶系列溶液与水样的吸光度，以吸光度为纵坐标，标准系列溶液浓度为纵坐标，绘制标推曲线；根据水样的吸光度查找出其相当的标准溶液的浓度并算出水样中苯酚的含量(g／L)。 六、问题与讨论 1．紫外分光光度法与可见分光光度法有何异同?部件有何异同?

挥发酚的测定国标法

水质挥发酚的测定 4 ?氨基安替比林分光光度法 瞥告：乙醒为低沸点、易燃和具麻醉作用的有机溶剂，使用时周围应无明火，并在通风柜内操作，室温较高时，样品和乙醒宜先置冰水浴中降温后，再尽快进行萃取操作；三氯甲烷为具麻醉作用和刺激性的有机溶剂，吸入蒸气有害，操作时应配戴防毒面具并在通风处使用。 1适用范围 本标准规定了测定地表水、地下水、饮用水、工业废水和生活污水中挥发酚的4-氨基 安替比林分光光度法。 地表水、地下水和饮用水宜用萃取分光光度法测定，检出限为0.0003 mg/L,测定下限 为0.001 mg/L,测定上限为0.04 mg/L。 工业废水和生活污水宜用直接分光光度法测定，检出限为0.01 mg/L,测定下限为0.04 mg/L,测定上限为2.50 mg/L0 对于浓度高于标准测定上限的样品，可适当稀释后进行测定。 定义挥发酚volatile phenolic compounds 随水蒸汽蒸爆出并能和4-氨基安替比林反应生成有色化合物的挥发性酚类化合物，结果以苯酚计。 方法1萃取分光光度法 4方法原理 用蒸僧法使挥发性酚类化合物蒸馅出，并与干扰物质和固定剂分离。由于酚类化合物的挥发速度是随僧出液体积而变化，因此，儒出液体积必须与试样体积相等。 被蒸僧出的酚类化合物，于pH 10.0±0.2介质中，在铁钮化钾存在下，与4-氨基安替比林反应生成橙红色的安替比林染料，用三氯甲烷萃取后，在460 nm波长下测定吸光度。 5干扰及消除 氧化剂、油类、硫化物、有机或无机还原性物质和苯胺类干扰酚的测定。 5.1氧化剂（如游离氯）的消除 样品滴于淀粉一碘化钾试纸（6.23）上出现蓝色，说明存在氧化剂，可加入过量的硫酸亚铁（6.2）去除。 5.2硫化物的消除 当样品中有黑色沉淀时，可取一滴样品放在乙酸铅试纸（6.24）上，若试纸变黑色，说明有硫化物存在。此时样品继续加磷酸酸化，置通风柜内进行搅拌曝气，直至生成的硫化氢完全逸出。 5.3甲醛、亚硫酸盐等有机或无机还原性物质的消除 可分取适量样品于分液漏斗中，加硫酸溶液（6.11）使呈酸性，分次加入50mL、30 mL、 30mL乙醒（6.5）以萃取酚，合并乙魅层于另一分液漏斗，分次加入4 mL、3 mL、3 mL氢 氧 化钠溶液（6.12）进行反萃取，使酚类转入狙氧化钠溶液中。合并碱莘取液，移入烧杯中，置水浴上加温，以除去残余乙醒，然后用水（6.1）将碱莘取液稀释到原分取样品的体积。同时应以水（6.1）作空白试验。 5.4油类的消除 样品静置分离出浮油后，按照5.3操作步骤进行。 5.5苯胺类的消除

实验二 紫外-可见分光光度法测定水中苯酚含量

实验二紫外-可见分光光度法测定水中苯酚含量 苯酚是工业废水中一种有害污染物质，需对水中酚含量控制。苯酚在270-295nm波长处有特征吸收峰，其吸光度与苯酚的含量成正比，应用Lambert－Beer定律可直接测定水中总酚的含量。 一、实验目的 1．学会使用Cary50型紫外-可见分光光度计 2．掌握紫外-可见分光光度计的定量分析方法 二、原理简介 紫外-可见吸收光谱是由分子外层电子能级跃迁产生，同时伴随着分子的振动能级和转动能级的跃迁，因此吸收光谱具有带宽。紫外-可见吸收光谱的定量分析采用朗伯-比尔定律，被测物质的紫外吸收的峰强与其浓度成正比，即： 其中A是吸光度，I、分别为透过样品后光的强度和测试光的强度，为摩尔吸光系数，b为样品厚度。 由于苯酚在酸、碱溶液中吸收波长不一致（见下式），实验选择在碱性中测试，选择测试的波长为288nm左右，取紫外-可见光谱仪波长扫描后的最大吸收波长。 Cary50是瓦里安公司的单光束紫外-可见分光光度计。仪器原理是光源发出光谱，经单色器分光，然后单色光通过样品池，达到检测器，把光信号转变成电信号，再经过信号放大、模/数转换，数据传输给计算机，由计算机软件处理。 三、仪器与溶液准备 1、Cary50型紫外-可见分光光度计 2、1cm石英比色皿一套 3、25 ml容量瓶5只，100 ml容量瓶1只，10ml移液管二支

配置250 mg/L苯酚的标准溶液：准确称取0.0250 g苯酚于250 mL烧杯中，加入去离子水20 mL使之溶解，加入0.1M NaOH 2mL，混合均匀，移入100 mL容量瓶，用去离子水稀释至刻度，摇匀。 取5只25 mL容量瓶，分别加入1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL苯酚标准溶液，用去离子水稀释至刻度摇匀，作为标准溶液系列。 将溶剂，标准溶液，待测水样依此装入石英比色皿。按测试程序的提示，依次放入样品室中进行测试。 四、测试过程 1、确认样品室内无样品 2、开电脑进入Window 系统 3、点击进入Cary50 主菜单 4、双击Cary-WinUV图标 5、在Win-UV 主显示窗口下，双击所选图标“SCAN”以扫描测定吸收曲线：取上述标准系列任一溶液装进1cm石英比色皿至4/5，以装有蒸馏水的1cm石英比色皿作为空白参比，设定在220－350 nm波长范围内扫描，获得波长-吸收曲线，读取最大吸收的波长数据。 6、在Win-UV 主显示窗口下，双击图标“Concentration”进入定量分析主菜单 7、设定测试分析步骤: （l）单击Setup功能键，进入参数设置页面。在Wavelength处填入由步骤5获取的波长数据。 （2）按Cary Control 、Standards、Options、Samples、Reports、Auto store顺序，分别设置好菜单中每页的参数。按OK回到“Concentration”界面主菜单。 （3）单击View莱单，选择需要显示的内容。 例如基本选项Toolbar，buttons，Graphics，Report。 （4）单击Zero，提示“Load blank press OK to read” (放空白按OK读)，放入空白蒸馏水到样品室内，按OK测试，测完取出样品。 （5）单击Start, 出现标准／样品选择页。选Selected for Analysis（选择分析的标准和样品）。此框的内容为准备分析的标准和样品。 （6）按OK进行分析测试。 依Presentstdl的提示：放入标准1然后按OK键进行读数。放标准2按OK进行读数。直到全部标准读完。 （7）出现“Present Samplel Press OK to read”提示框，根据提示，放入样品1按OK开始读样品，直到样品测完。 （8）可点击Save Method AS保存此方法，以后可以从Open Method调用此方法。从标准曲线读出水样中苯酚的含量（g／L），测试数据采用点击Save Data AS 保存。

FC酚法测定总酚

王华. 葡萄与葡萄酒实验技术操作规范.陕西：西安地图出版社，1999 单宁的测定也是参考王华，1999 以没食子酸为对照品（FC酚法）总酚的含量测定方法 Folin-Ciocalteu 比色法( FC酚法） 一、仪器 UV- 2401 PC 型紫外分光光度计; 超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司KQ- 2508型) 恒温水浴锅 二、试剂 没食子酸标准品; 钨酸钠,磷钼酸, 85%磷酸, Na2 CO3, 以上试剂均为分析纯; 水为蒸馏水。1.3 福林试剂的配制 在250mL的圆底烧瓶内加入20g 钨酸钠、5g 钼酸钠、140mL 蒸馏水，85%的浓磷酸10mL 及浓盐酸20mL，充分混匀，以小火回流10h，再加入3g 硫酸锂及15mL 双氧水，开口继续煮沸15min，待双氧水完全挥发，呈亮黄色。冷却后移入250mL 容量瓶中，定容置于棕色试剂瓶中，放入冰箱中备用。 1.4 Na2CO3溶液的配制 称取40g Na2CO3，溶于200mL 蒸馏水中, 即为20%（g/L）的Na2CO3溶液。 二、方法与结果 1.对照品溶液的制备并绘标准曲线 精密称取没食子酸标准品0.0110g，用蒸馏水溶解并定容至100mL，得浓度为0.11mg /mL 的标准液。准确吸取0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mL 置于25mL 的棕色容量瓶中，加蒸馏水至6.0mL，然后分别加入FC 试剂0.5mL，混匀，在0.5～8min内加入1.5mL 20% 的Na2CO3溶液，充分混合后定容，30℃避光放置0.5h，以不加标准液的6.0mL 蒸馏水为空白对照，760nm 下测定吸光值，每个样品平行测定三次。 2、供试品溶液的制备 样品溶液总酚含量的测定: 准确量取制备好的乙醇粗提液0.5mL 于50mL 容量瓶中，加入9.5mL 蒸馏水，摇匀，再加入0.5mL 福林试剂，混匀，在0.5 ～8min 内加入1.5mL 20%的Na2CO3溶液，充分混合后定容，30℃避光放置0.5h，以没食子酸标准液为空白对照，760nm 下测定吸光值，每个样品平行测定6 次(A为6次平行测得的吸光度）。 3以没食子酸为标准品的总酚的标准曲线：Co=0.0110mg/ml