美国Bio-rad伯乐Trans-Blot SD 半干转印槽使用手册
Trans-Blot?SD Semi-Dry Electrophoretic Transfer Cell Instruction
Manual
Catalog Number
170-3940
Note
To insure the best performance from the Trans-Blot SD semi-dry electrophoretic transfer cell, become fully acquainted with these operating instructions before using the cell to transfer samples. Bio-Rad recommends that you first read these instructions carefully. Then assemble and disassemble the cell completely without transferring sample. After these preliminary steps, you should be ready to transfer a sample.
Bio-Rad also recommends that all Trans-Blot SD cell components and accessories be cleaned with a suitable laboratory cleaner (such as Bio-Rad Cleaning Concentrate, catalog number 161-0722) and rinsed thoroughly with distilled water, before use.
Model___________________________________
Catalog Number__________________________
Date of Delivery___________________________
Warranty Period__________________________
Serial Number____________________________
Invoice Number___________________________
Purchase Order Number____________________
Warranty
Bio-Rad Laboratories warrants the Trans-Blot SD semi-dry electrophoretic transfer cell against defects in materials and workmanship for 1 year. If any defects occur in the instrument during this warranty period, Bio-Rad Laboratories will repair or replace the defective parts free. The following defects, however, are specifically excluded:
1.Defects caused by improper operation.
2.Repair or modification done by anyone other than Bio-Rad Laboratories or an authorized
agent.
https://www.sodocs.net/doc/49201779.html,e of fittings or other spare parts supplied by anyone other than Bio-Rad Laboratories.
4.Damage caused by accident or misuse.
5.Damage caused by disaster.
6.Corrosion due to use of improper solvent or sample.
This warranty does not apply to parts listed below:
1.Platinum plate electrode.
For any inquiry or request for repair service, contact Bio-Rad Laboratories after con-firming the model and serial number of your instrument.
T able of Contents
Page Section 1 Introduction (1)
1.1 Specifications (1)
Section 2 Equipment and Reagents (2)
2.1 Equipment and Accessories (2)
Instruments (4)
2.2 Related
Reagents (4)
2.3 Chemical
Section 3 Safety Instructions (5)
Section 4 Trans-Blot SD Assembly (6)
4.1 Preparation for Blotting (6)
4.2 Assembly of the Unit for Standard Transfers (7)
4.3 Assembly of the Unit for Acidic Transfers (10)
Section 5 Buffer Formulation (10)
Section 6 Examples of Specific Protocols (11)
Blotting (11)
6.1 SDS-Protein
6.2 DNA Blotting (For acrylamide gels with DNA 250 bp to ~1 kb) (12)
6.3 DNA & RNA Blotting (For agarose gels with DNA up to 23 kb,
RNA up to 3.5 kb) (12)
Section 7 Properties of Protein Blotting Media (12)
Section 8 Troubleshooting Guide (13)
8.1 Poor
Transfer (13)
8.2 Poor Binding to Nitrocellulose Membrane (14)
8.3 High Background After Incubation with Antibody Probes; Nonspecific
or Nonquantitative Detection (14)
8.4 Poor Detection Sensitivity or No Reactivity (15)
Section 9 References (15)
Section 1
Introduction
Blotting was first performed by Southern1in 1975 with the transfer of DNA from agarose gels to nitrocellulose membranes. Blotting has subsequently been applied to RNA2-4and protein5,6from both agarose and polyacrylamide gels. Membrane materials have been expanded to include PVDF for improved protein binding capacity. To overcome the inefficiency of capillary transfers, electric current has been adopted for eluting proteins from polyacrylamide gels, as first described by Towbin et al.7in 1979. Since that time, electrophoretic transfer has also been used for DNA and RNA blotting.8-14
For blotting PCR fragments, plasmid and vector DNA, and RNA with the SD cell, use the Trans-Blot SD DNA blotting kit. DNA or RNA can be blotted from agarose gel to Zeta-Probe?GT membrane in only 10 minutes, without any gel pretreatments. The kit comes complete with DNA/RNA blotting accessories and a detailed instruction manual.
Semi-dry blotting was first reported by Kyhse-Andersen in 1984.15Blotting was performed with plate electrodes in a horizontal configuration. The gel and nitrocellulose membrane were sandwiched between sheets of buffer-soaked filter paper, which served as the ion reservoir and replaced the buffer tank. The plate electrodes, separated only by the filter paper stack, provided high field strength (V/cm) across the gel, and very efficient, rapid transfers.
The Trans-Blot semi-dry transfer cell incorporates the original concepts of semi-dry blotting along with innovative features for quick set-up and ease of use. The platinum-coated titanium and stainless steel electrode pair provides efficient, background-free blotting with trouble-free service.
1.1 Specifications
Construction
Trans-Blot SD body Molded polycarbonate
Anode Platinum-coated titanium
Cathode Stainless steel
Anode platform Precision machined acrylic
Overall size37 cm x 24 cm x 11 cm
Maximum gel size25 cm x 18.5 cm
Cleaning Do not immerse the unit in liquid. Use special care
when cleaning the anode plate to avoid scratching
or marring the platinum. Do not use abrasives or
strong detergents. The cathode plate (stainless
steel) can be cleaned with a mild abrasive to
remove salt that may deposit during normal opera-
tion. The entire unit can also be periodically disas-
sembled and cleaned with water to remove salt
deposits.
Chemical compatibility The semi-dry blotter components are not compati-
ble with chlorinated hydrocarbons (e.g., chloro-
form), aromatic hydrocarbons (e.g., toluene,
benzene), or acetone. Use of organic solvents
voids all warranties.
4.Lengthy transfer times are not recommended.Do not leave this instrument unattended.
Joule heat can be generated rapidly during semi-dry blotting. Transferring longer than
2 hours can damage the unit.
5.Power supply requirements. The Trans-Blot SD cell should only be used with the
microprocessor-controlled Model 200/2.0 power supply (catalog numbers 165-4761 and
165-4762), or the Model 1000/500 power supply (catalog numbers 165-4710 and
165-4711). Do not use the Model 250/2.5 power supply with this apparatus. The low
voltage, high current operating conditions of the Trans-Blot SD cell are not compatible
with the Model 250/2.5 power supply, and will cause the power supply to blow a fuse.
6.Do not operate this instrument in ambient temperatures exceeding 50 °C.
Important
This Bio-Rad instrument is designed and certified to meet IEC 1010-1* safety standards.
Certified products are safe to use when operated in accordance with the instructtion
manual. This instrument should not be modified in any way. Alteration of this instrument
will:
?Void the manufacturer's warranty
?Void the IEC1010-1 safety certification
?Create a potential safety hazard
Bio-Rad is not responsible for any injury or damage caused by the use of this instrument
for purposes other than for which it is intended or by modifications of the instrument not
performed by Bio-Rad or an authorized agent.
*IEC 1010-1 is an internationally accepted electical safety standard for laboratory instruments.
Section 4
Trans-Blot SD Assembly
To determine the optimum conditions for a particular sample, a time course of transfer should be performed. Since many factors affect transfer e.g.molecular weight, pI, and porosity of the gel, transferring for the full suggested time may not be necessary.
4.1 Preparation for Blotting
1.Prepare the transfer buffer. See Section 5 for buffer formulation.
Note:Buffer preparation is extremely important. Do not adjust transfer buffer pH by
addition of acid or base unless specifically indicated in the instructions. Improperly
prepared buffer will cause excess heat generation and safety https://www.sodocs.net/doc/49201779.html,e only high
quality, reagent grade methanol. Contaminated methanol can result in increased transfer
buffer conductivity, as well as poor transfer of macromolecules.
2.Following electrophoresis, equilibrate the gels in transfer buffer. Equilibration facilitates
the removal of electrophoresis buffer salts and detergents. If the salts are not removed, they
will increase the conductivity of the transfer buffer and the amount of heat generated
during the transfer. Also, low percentage gels (<12% acrylamide) will shrink in methanol-
containing buffers. Equilibration allows the gel to adjust to its final size prior to
electrophoretic transfer. The length of time required for equilibration is dependent on the
gel thickness. For example, 15 minutes for a 0.75 mm SDS-PAGE gel.
Low molecular weight macromolecules (10,000 daltons) may diffuse out of gels more readily. One can allow adequate gel pre-equilibration by changing the pre-equilibration buffer several times during a relatively short pre-equilibration period. This will help to limit diffusion of low molecular weight macromolecules while providing efficient salt reduction.
3.Cut the membrane to the dimensions of the gel. Wet the membrane by slowly sliding it
at a 45° angle into transfer buffer and allowing it to soak for 15–30 minutes. Complete wetting of the membrane is important to insure proper binding. Abrupt wetting can lead to entrapment of air bubbles in the matrix. These air bubbles can block transfer of molecules. To avoid membrane contamination, always use forceps or wear gloves when handling membranes.
4.Cut filter paper to the dimensions of the gel. Two pieces of extra thick filter paper (or
four pieces of thick or six pieces of thin filter paper) per gel are needed for each gel/mem-brane sandwich. Completely saturate the filter paper by soaking in transfer buffer.
5.If more than one full-size gel is to be transferred at one time, cut a piece of dialysis
membrane with the appropriate molecular weight cutoff to the dimensions of the gel.
Completely wet the dialysis membrane in transfer buffer. Spectr/Por? dialysis membrane is recommended for this use.
4.2 Assembly of the Unit for Standard Transfers
Wear gloves for this procedure to avoid contamination of membranes.
1.Remove the safety cover and the stainless steel cathode assembly.
2.Place a pre-soaked sheet of extra thick filter paper onto the platinum anode. Roll a pipet
or test tube over the surface of the filter paper (like a rolling pin) to exclude all air bubbles. If thick or thin filter paper is used, repeat with one or two more sheets of buffer-soaked filter paper.
3.Place the pre-wetted blotting media on top of the filter paper. Roll out all air bubbles.
4.Carefully place the equilibrated gel on top of the transfer membrane, aligning the gel on
the center of the membrane. Transfer will be incomplete if any portion of the gel is outside the blotting media. Roll out all air bubbles.
5.Place the other sheet of pre-soaked filter paper on top of the gel, carefully removing air
bubbles from between the gel and filter paper. If thick filter paper is used, place two sheets on top of the gel, and remove bubbles from between each layer. If thin filter paper is used, place three sheets on top of the gel, and remove bubbles from between each layer.
6.If more than one full-size gel is to be transferred, place a sheet of pre-soaked dialysis
membrane on top of the filter paper stack. Repeat the procedure from step 2. Up to four mini gels can be transferred at the same time by placing them side-by-side on the anode platform.
7.Carefully place the cathode onto the stack. Press to engage the latches with the guide
posts without disturbing the filter paper stack.
8.Place the safety cover on the unit. Plug the unit into the power supply. Normal transfer
polarity is cathode to anode, i.e., red wire to red outlet and black wire to black outlet on the power supply.
Caution:Do not reverse polarity. This will result in damage to the stainless steel cathode.
9.Turn on the power supply. Transfer mini gels for 15–30 minutes at 10–15 V. Large gels
can be transferred for 30 minutes to 1 hour at 15–25 V. Do not exceed 25V with this instrument. A current limit (3 mA/cm2for large gels; 5.5 mA/cm2for mini gels) is recommended to prevent excessive heating during the run. Under the strong fields developed by this apparatus, transfers may not always be quantitative. A certain quantity of protein may be transferred through the membrane and onto the filter paper below.
The Model 200/2.0 power supply is capable of a 200 watt output. This means that unless
a current limit is set, uncontrolled conductivity changes may result in full power being
delivered to the Trans-Blot SD cell. In this situation, the gel sandwich and electrodes will be exposed to excessive heat. This may result in a safety hazard. It is advisable to monitor resistance, power, and current during the run. Refer to the Model 200/2.0 Instruction Manual for setting current limits and run times, and monitoring these parameters.
10.Following transfer, turn the power supply off, and disconnect the unit from the power
supply. Remove the safety cover and the cathode assembly. Discard the filter paper (and dialysis membrane, if used). The transfer efficiency can be monitored by staining the gel with Coomassie blue R-250 protein stain or with Bio-Rad's Silver Stain Kit. Alternatively, prestained molecular weight standards can be used, or a portion of the membrane can be stained for total protein with colloidal gold, Biotin Blot Total Protein Stain, or an anionic dye such as Amido Black. Zeta-Probe membrane can be stained with the Biotin-Blot Total Protein Stain.
4.3 Assembly of the Unit for Acidic Transfers
If an acidic transfer buffer is used, the transfer direction will be from the anode to the
cathode.
1.Remove the safety cover and the stainless steel cathode assembly.
2.Place a pre-soaked sheet of extra thick filter paper onto the platinum anode. Roll out all
air bubbles. If thin filter paper is used, repeat with two more sheets of buffer-soaked
filter paper. If thick filter paper is used, repeat with one more sheet of buffer soaked
filter paper.
3.Carefully place equilibrated gel on top of the filter paper, aligning the gel on the center of
the membrane. Roll out all air bubbles.
4.Place the pre-wetted blotting media on top of the gel. Roll out all air bubbles.
5.Place another sheet of pre-soaked extra thick filter paper on top of the blotting membrane,
carefully removing all air bubbles. If thin filter paper is used, place three sheets on top of the
membrane, or if thick filter paper is used, place two sheets on top of the membrane.
6.If more than one gel is to be transferred, place a sheet of pre-soaked dialysis membrane
on top of the filter paper stack. Repeat the procedure from step 2.
7.Carefully place the cathode assembly onto the stack. Press to engage the latches with the
guide posts, without disturbing the filter paper stack.
8.Place the safety cover on the unit. Plug the unit into the power supply, red wire to red
outlet and black wire to black outlet.
Caution:Do not reverse polarity. This will damage the stainless steel cathode.
9.Turn on the power supply. Transfer mini gels for 15–30 minutes at 10–15 V. Large gels
can be transferred for 30 minutes to 1 hour at 15–25 V. Do not exceed 25 V with this
instrument. A current limit (3 mA/cm 2for large gels; 5.5 mA/cm 2for mini gels) is
recommended to prevent excessive heating during the run.
Section 5
Buffer Formulation
The following buffers are recommended for use with the Trans-Blot SD cell. For protein
transfers, the single buffer system of Bjerrum and Schafer-Nielsen 16provides more efficient
elution than the original isotachophoretic system of Khyse-Andersen, which requires the use
of three different buffers.15A carbonate buffer has also been shown to produce high
efficiency transfers with improved antibody recognition.
1.Bjerrum and Schafer-Nielsen transfer buffer for SDS-proteins using nitrocellulose (with
methanol) or Zeta-Probe membrane (without methanol):16
48 mM Tris, 39 mM glycine, (20% methanol) pH 9.2
Dissolve 5.82 g Tris and 2.93 g glycine [and 0.375 g SDS or 3.75 ml of 10% SDS] in dd
H 2O (add 200 ml of methanol); adjust volume to 1 liter with dd H 2O.
DO NOT ADD ACID OR BASE TO ADJUST pH.The buffer will range from pH 9.0
to 9.4, depending on the quality of the Tris, glycine, dd H 2O, and methanol. Methanol
should be analytical reagent grade, because metallic contaminants in low grade methanol will plate on the electrodes.
Note:Some pH electrodes will not perform a proper measurement for the pH of Tris
buffers. If the pH of the buffer is not correct, check the electrode to be sure it is designed
to function with Tris buffers. If the pH electrode works properly with Tris buffers, and the
pH is below 9.0, remake the buffer.
2.SDS may be added to Buffer 1 to increase protein elution from the gel:
48 mM Tris, 39 mM glycine, (20% methanol), 1.3 mM SDS (0.0375%), pH 9.2
Dissolve 5.82 g Tris and 2.93 g glycine, and 0.0375 g SDS or 3.75 ml of 10% SDS in dd
H 2O (add 200 ml of methanol); adjust the volume to 1 liter with dd H 2O.
DO NOT ADD ACID OR BASE TO ADJUST pH.
3.Towbin transfer buffer for SDS-proteins using nitrocellulose (with methanol) or Zeta-
Probe membrane (without methanol):7
25 mM Tris, 192 mM glycine (20% methanol), pH 8.3
Dissolve 3.03 g Tris and 14.4 g glycine in dd H 2O (add 200 ml of methanol); adjust
volume to 1 liter with dd H 2O.
DO NOT ADD ACID OR BASE TO ADJUST pH.
4.Dunn carbonate transfer buffer for SDS-proteins using nitrocellulose (with methanol) or
Zeta-Probe membrane (without methanol):17
10 mM NaCHO 3, 3 mM Na 2CO 3(20% methanol), pH 9.9
Dissolve 0.84 g NaHCO 3and 0.318 g Na 2CO 3(anhydrous) in dd H 2O (add 200 ml of
methanol); adjust volume to 1 liter with dd H 2O.
DO NOT ADD ACID OR BASE TO ADJUST pH.
5.DNA transfer buffer for use with Zeta-Probe membrane:18
5x TBE stock solution (0.5 M Tris, 0.5 M boric acid, 10 mM EDTA in dd H 2O; adjust
volume to 1 liter with dd H 2O. Dilute to 0.5x TBE with dd H 2O for the working solution.
DO NOT ADD ACID OR BASE TO ADJUST pH.
6.5x dye buffer (20% Ficoll, 20 mM EDTA, 1% SDS, 0.2% bromophenol blue)
Section 6
Examples of Specific Protocols
Note:In order to determine the optimum conditions for a particular sample, a time course
of transfer should be performed. Since many factors affect transfer, e.g., molecular weight,
pI, porosity of the gel, it may not be necessary to transfer for the full time or to use high
field intensity transfer conditions. Final transfer conditions for any protein should be
determined empirically.
6.1 SDS-Protein Blotting
Standard Blot to Nitrocellulose
1. Equilibrate the gel in 500 ml of Towbin buffer (Section 5) for 15 minutes.
2. Pre-chill buffer prior to transfer.
3. Assemble the sandwich as described in Section
4.2.
4. Refer to Section 4.2, step 9 for transfer conditions with either large or small gels.
6.2 DNA Blotting
(For acrylamide gels with DNA 250 bp to ~1 kb)
Electrophoresis Run on a Polyacrylamide Gel
1.Prepare the stock electrophoresis 5x TBE buffer (Section 5). Dilute the stock to 1x.
2.Mix 10–15 μl of the sample with 5 μl of 5x dye buffer, heat to 65 °C for 5 min and load
on a gel.
3. A 5% PAGE gel can separate DNAs from about 250 to 1,000 bp.
4.Run the gel in 1x TBE buffer at 100 V for 1–2 hours.
Standard Blot to Zeta-Probe
1.From the 5x TBE electrophoretic buffer, dilute the stock to 0.5x (Section 5) and pre-chill
1 L of the buffer.
2.Equilibrate the gel, extra thick blot paper, and Zeta-Probe membrane in 0.5x TBE buffer
for at least 15 minutes.
Note: Zeta-Probe membrane will bind non-denatured nucleic acids. Therefore, denaturing
is not mandatory before transferring. If non-denatured nucleic acids are transferred, the
blotted Zeta-Probe membrane must be treated with NaOH prior to hybridization. Refer to
the Zeta-Probe membrane instruction manual.
3.Assemble the sandwich as described in Section
4.2.
4.Run the transfer at 400 mA for 1 hour (voltage should not exceed 25 volts).
5.After transfer, separate the membrane from the gel, and rinse the membrane briefly in
0.5x TBE buffer.
6.Fix the DNA to the membrane by placing the membrane on several pieces of blot paper
saturated with 0.4 N NaOH for 10 minutes.
7.Rinse the membrane in 2 x SSC for 10 minutes and bake at 80 °C for 1 hour (this is
optional if probing immediately). The membrane is now ready for hybridization. Refer to
the hybridization procedure in the Zeta-Probe blotting membrane instruction manual.
6.3 DNA & RNA Blotting
(For agarose gels with DNA up to 23 kb, RNA up to 3.5 kb) Refer to the Trans-Blot SD DNA blotting kit instruction manual for transfer protocol and conditions. DNA or RNA cannot be blotted from agarose gels without the use of the Trans-Blot SD DNA blotting kit.
Section 7
Properties of Protein Blotting Media
PVDF membrane is suitable for presenting transferred proteins for immuno detection (Immun-Blot PVDF) or analysis by Edman. It is resistant to tearing and chemicals. Immun-Blot PVDF is optimized for immunodevelopment with high protein binding capacity (160μg/cm2), but low nonspecific protein binding. This membrane material will resist tearing even when used in repeated stripping and reprobing applications. Sequi-blot PVDF has the highest protein binding capacity (170–200 μg/cm2) and gives outstanding performance in protein sequencing applications.
Nitrocellulose membranes have been used extensively for protein binding and detec-tion.7,19-22They can easily be stained for total protein by a dye stain (Amido Black, Coomassie?blue, Ponceau S, Fast Green FCF, etc.22), or the more sensitive Colloidal Gold Total Protein
Stain, and also allow either RIA, FIA, or EIA.7Nitrocellulose has a high binding capacity of 80–100 μg/cm2. Nonspecific protein binding sites are easily and rapidly blocked, avoiding
subsequent background problems. Low molecular weight proteins (esp. < 20,000 daltons) may be lost during post transfer washes, thus limiting detection sensitivity.21However, use of
glutaraldehyde fixation and a smaller pore size nitrocellulose membrane (0.2 μm) have been shown to be effective in eliminating this loss.22Large proteins (>100,000 daltons) denatured
by SDS may transfer poorly with the addition of alcohol to the transfer buffer. Alcohol increases
binding of SDS-proteins to nitrocellulose, but decreases pore sizes in the gel. Elimination of
alcohol from SDS-protein transfers also results in considerably diminished binding to nitrocellulose. Under high field strengths of the Trans-Blot cell, proteins may be transferred through nitrocellulose without binding.The efficiency of binding can be increased by employing a smaller pore size nitrocellulose.23
Zeta-Probe positively charged nylon membrane allows binding of SDS-protein complexes in the absence of alcohol.24,25This membrane binds proteins very tightly and is stable to post transfer washes. The binding capacity of Zeta-Probe membrane is ~480 μg/cm2.
Reprobing, after stripping of prior probes, may be performed without significant loss of primary bound protein. Even small proteins appear to bind stably. Zeta-Probe membrane cannot be dye-stained, as destaining is impossible. Instead, the Biotin-Blot Total Protein Stain should be used on Zeta-Probe membrane. This assay uses NHS-Biotin (N-hydroxysuccin-imide-biotinate) to biotinylate all the proteins on the membrane surface, and a combination of
an avidin-horseradish peroxidase or avidin-alkaline phosphatase and a color development reagent to detect these biotinylated proteins.26,27The large capacity for molecules (480 μg/cm2) allows sensitive detection of small amounts of proteins in a complex mixture. This high capacity requires more stringent blocking conditions than nitrocellulose.25Zeta-Probe membranes can be effectively and economically blocked using a 5% solution of BLOTTO
(non-fat dry milk)3,18,28
Section 8
Troubleshooting Guide
8.1 Poor Transfer
A. Molecules remain in the gel matrix (as detected by Coomassie blue or
silver staining the gel)
1.Transfer time is too short. Increase time of transfer.
2.Charge to mass ratio is incorrect. Proteins near their isoelectric point at the pH of the
buffer will transfer poorly. Try a more basic or acidic transfer buffer to increase protein
mobility.
3.Filter paper is too dry; insufficient buffer soaking the filter paper. Buffer is depleted early
in the transfer. The filter paper should be fully saturated with buffer prior to transfer.
Increase the number of sheets of filter paper, or use thicker filter paper.
4.Power supply circuit tripped. Check the fuse.
5.Gel percentage is too high. Reduce %T (total monomer) or %C(crosslinker). A 5% C
(with bis as the crosslinker) will produce the smallest pore size gel. Decreasing from this
concentration will increase pore size and increase transfer efficiency.
6.Methanol in the transfer buffer is restricting elution of proteins from the gel. Elimination
of methanol results in increased transfer efficiency, but it also diminishes binding to nitrocellulose. Use PVDF.
7.Protein is precipitating in the gel. Try using SDS in the transfer buffer. SDS can increase
transfer efficiency, but can also reduce binding efficiency to nitrocellulose and affect reactivity of some proteins with antibodies.
B. Swirls or missing patterns on blot; diffuse transfers
1.Contact between blot membrane and gel is poor. Air bubbles or excess moisture remain
between the blot and gel. Use a test tube or pipet to roll over the membrane carefully in both directions until excess moisture and air bubbles are removed from between gel and membrane and complete contact is established. Use thicker filter paper in the gel/membrane sandwich.
Make sure that there are no air bubbles trapped between the filter paper and the gel.
2.The gel is not completely equilibrated in transfer buffer. Gel must be properly washed in
transfer buffer to avoid shrinking or swelling during transfer. Increase time or number of washes.
3.If multiple gels are being transferred simultaneously, cross-contamination may be
occurring. Use a smaller size pore dialysis membrane to separate gel/membrane sandwiches. Use PVDF to more completely bind small pieces.
4.Power conditions are too high. Reduce the voltage. Check the buffer conductivity; improp-
erly prepared buffer will result in excessive power delivered to the cell.
8.2 Poor Binding to Nitrocellulose Membrane
1.Proteins separated by SDS-PAGE require 20% methanol in the transfer buffer for
optimal protein binding. Make sure the buffer contains the proper amount of methanol.
2.Proteins may be transferring through the nitrocellulose, driven by the high field strength
of the plate electrodes. Use Zeta-Probe membrane (higher binding capacity) or 0.2 micron nitrocellulose (smaller pore size). Transfer using the Trans-Blot cell or the Mini Trans-Blot cell with standard platinum wire electrodes.
3.Protein >15,000 daltons may show diminished binding to 0.45 micron nitrocellulose, or
may be washed from the membrane during assays. Use Zeta-Probe membrane or
0.2 micron nitrocellulose. To increase stability of binding, proteins can be cross-linked to
nitrocellulose with glutaraldehyde.22
4.Proteins can be removed from nitrocellulose by SDS, NP-40, and several other
detergents. Use Tween-20 detergent in wash and antibody incubation steps. Reduce or eliminate detergents from buffers. Try glutaraldehyde fixation.
5.SDS in the transfer buffer will reduce binding efficiency of proteins. Use 20% methanol
in the transfer buffer and equilibrate the gel in methanol buffer prior to transfer.
8.3 High Background After Incubation with Antibody Probes; Nonspecific or Nonquantitative Detection
For a complete troubleshooting guide to Immun-Blot assays, consult the Immun-Blot assay kit manual or the Zeta-Probe instruction manual. If using other detection kit, consult manual or contact manufacturer.
8.4 Poor Detection Sensitivity or No Reactivity
1.Consult detection kit manual.
2.Antigen binding is incomplete. See Troubleshooting Sections 8.1–8.
3.
3.Antibody reaction times are insufficient. Increase reaction times.
4.Sample load is insufficient. Increase the protein concentration applied to the gel.
5.Antigen may require specific temperature regulation during transfer to prevent
denaturation. Use the Trans-Blot cell with the super cooling coil to transfer heat-sensitive
proteins.
6.Monoclonal antibodies might not recognize a denatured antigen. Assess binding of other
monoclonals or polyclonal antibodies. Blot native proteins.
Section 9
References
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18.Bio-Rad Laboratories, Zeta-Probe Instruction Manual (1986).
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20.Howe, J. G. and Hershey, J. W. B., J. Biol.Chem., 256, 12836 (1981).
21.Erickson, P. F., Minier, L. N. and Lasher, P. S., J. Immun. Meth., 51, 241 (1982).
22.Polvino, W. J., Saravis, C. A., Sampson, C. E. and Cook, R. B., Electrophoresis, 4, 368 (1983).
23.Tovey, E. and Baldo, B. A., Electrophoresis, 8, 384 (1987).
24.Gershoni, J. M. and Palade, G. E., Anal, Biochem., 131, 1 (1983).
25.Gershoni, J. M. and Palade, G. E., Anal. Biochem., 124, 396 (1982).
26.Bio-Rad Laboratories, Biotin-Blot Total Protein Stain Instruction Manual (1985).
https://www.sodocs.net/doc/49201779.html,Rochelle, W. J. and Froehner, S. C., J. Immun. Meth., 92, 65 (1986).
28.Johnson, D. A., Gautsch, J. W., Sportsman, J. R. and Elder, J. H., Gene Anal. Tech., 1, 3 (1984).
*Spectr/Por is a trademark of Spectrum Medical Industries.
*Coomassie is a trademark of I C I Organics, Inc.
中国在美国上市公司一览表
中国美国上市公司一览表 一、纽约证券交易所（NYSE） 纽约证券交易所( New York Stock Exchange，NYSE)，是上市公司总市值第一，IPO数量及市值第一，交易量第二的交易所，有大约2,800间公司在此上市，全球市值15万亿美元。至2004年7月，三十间处于道琼斯工业平均指数中的公司除了英特尔和微软之外都在NYSE上市。2005年4月末，NYSE和全电子证券交易所（Archipelago）合并，成为一个盈利性机构。纽约证券交易所有限公司的总部位于美国纽约州纽约市百老汇大街11号，在华尔街的拐角南侧。纽约证券交易所有大约2,800间公司在此上市，全球市值15万亿美元。至2004年7月，三十间处于道琼斯工业平均指数中的公司除了英特尔和微软之外都在NYSE上市。2006年6月1日，纽约证券交易所宣布与泛欧证券交易所合并组成纽约泛欧证交所(NYSE Euronext)。
按地域美国纽交所中国上市企业分布情况如下:
42% 16% 6% 其他 按行业美国纽交所中国上市企业分布情况如下 : 医药互联网13% 3% 3%3%其他 二、 美国纳斯达克证券交易所(NASDAQ) 纳斯达克始建于1971年，是一个完全采用电子交易、为新兴产业提供竞争舞台、自我监管、面向全球的股票市场。纳斯达克是全美也是世界最大的股票电子交易市场。纳斯达克（NASDAQ ）股票市场是世界上主要的股票市场中成长速度最快的市场，而且它是首家电子化的股票市场。每天在美国市场上换手的股票中有超过半数的交易在纳斯达克上进行的，将近有5400家公司的证券在这个市场上挂牌。
企业在国内与国外上市的比较
企业在国内与国外上市的比较 一、国内上市的标准要求 (2) 二、海外上市的标准要求 (3) （一）香港交易所上市的标准要求 (3) （二）美国纳斯达克上市的标准 (4) （三）纽约交易所上市的要求 (4) （四）伦敦交易所上市的标准 (5) 三、国内企业在国外上市的利弊分析 (5) 四、目前国内企业在海外上市的情况分析 (6) （一）、全球IPO遭遇“滑铁卢” (6) （二）、国内企业海外上市发展趋势 (6) （三）、存在的困难 (7) 五、目前国内企业在境内上市情况分析 (7) （一）、从2006-2011年前三季度VC/PE支持中国企业境内外上市数量 (7) （二）、2006-2011年前三季度VE/PE支持中国企业境内外上市账面回报 (8) （三）、2011年前三季度VE/PE支持中国企业境内外上市账面回报 (9)
一、国内上市要求： （一）、主板、中小板和创业板 条件主板、中小板创业板 主体资格依法设立且合法存续的股份有限公司依法设立且持续经营三年以上的股份有限公 司 经营年限持续经营时间应当在3年 以上(有限公司按原账面净资产值折股整体变更 为股份公司可连续计算) 持续经营时间应当在3年以上(有限公司按原账面净资产值折股整体变更为股份公司可连续计算) 盈利要求（1）最近3个会计年度净利润均为正数且累计 超过人民币3,000万元，净利润以扣除非经常性 损益前后较低者为计算依据；最近两年连续盈利，最近两年净利润累计不少于1000万元，且持续增长； （2）最近3个会计年度经营活动产生的现金流量净 额累计超过人民币5,000万元；或者最近3个会计年度营业收入累计超过人民币3亿元；或者最近一年盈利，且净利润不少于500万元，最近一年营业收入不少于5000万元，最近两年营业收入增长率均不低于30％； （3）最近一期不存在未弥补亏损；净利润以扣除非经常性损益前后孰低者为计 算依据。（注：上述要求为选择性标准，符合 其中一条即可） 资产要求最近一期末无形资产(扣除土地使用权、水面养 殖权和采矿权等后)占净资产的比例不高于20% 近一期末净资产不少于两千万元 股本要求发行前股本总额不少于人民币3,000万元企业发行后的股本总额不少于3,000万元 主营业务要求最近3年内主营业务没有发生重大变化发行人应当主营业务突出。同时，要求募集资 金只能用于发展主营业务 创业板其他要求无1、发行人的经营成果对税收优惠不存在严重 依赖； 2、在公司治理方面参照主板上市公司从严要 求，要求董事会下设审计委员会，并强化独立 董事履职和控 股股东责任； 3、要求保荐人对公司成长性、自主创新能力 作尽职调查和审慎判断，并出具专项意见； 4、要求发行人的控股股东对招股说明书签署 确认意见； 5、要求发行人在招股说明书显要位置做出风 险提示，内容为“本次股票发行后拟在创业板 市场上市，该市场具有较高的投资风险。创业 板公司具有业绩不稳定、经营风险高等特点， 投资者面临较大的市场波动风险，投资者应充 分了解创业板市场的投资风险及本公司所披 露的风险因素，审慎作出投资决定” 6、不要求发行人编制招股说明书摘要。
中国已在美上市企业名单
中国已在美上市企业名单HRCT.OB 上海海科 SGZI.OB 松仔国际 CKGT.OB 中国康大 AOB 美东生物 ADY 飞鹤乳业 UTVG.OB 旅程天下 TCM 同济堂 XFML 新华财经 EESC.OB 亿丰生态 WUHN.OB 武汉鼓风机厂 ILVL.OB i-level媒体集团 CPBY.OB 深圳永泰 CFSG.OB 首安工业消防 CEUCW.OB 双威通讯 ASHI.OB 河北任远 CHAS.OB 大连润泽 CIWT.OB 大连东泰 PCLP.OB 吉林东升 TSTC 东方信联 SEED 北京奥瑞金 CSWT.OB 恒泰丰科技 CVDT.OB 银泉科技 CHRN.OB 吉林华人 BEIC 北仓钢铁 SYUP.OB 上海玉同药业 CAXG.OB 河北奥星 SGUS 美国世明 CWCE 索昂科技 CSIQ 江苏阿特斯 COFI 三八妇乐 GOLS 常安实业 TSL 天合光能 SOLF 林洋新能源 FFHL 富维薄膜 HKRS.OB 汉鑫科技 AIDA 爱大制药 DPPT 利宝生态 CCGY.OB 福建中德 CHLN.OB 中华地产 CRFU 新阳高科
WATG.OB 锦州电机HMIN 如家酒店 EDU 新东方 EFUT 富基旋风 MR 深圳迈瑞 NAGM.OB 西安金园RHGP.OB 仁皇药业EGO ELDORDO金业NTE 南太电子 JFC JF中国 CRGI 鑫达玩具 INTN 英泰国际 DSWL 冠宏电子 CHDX 美中互利 ASTT ASAT芯片PACT 太平洋商网SGAT.OB 盛大科技CBPC.OB 浙江天元TBYH.OB 上海嘉阳GCIH.OB 大中华控股DGNG.OB 深圳帝光GFRP.OB 交大保赛VCDY 银发资源PAYI.OB 重庆雅狐FSIN.OB 大连傅氏双SORL 温州瑞立 CBAK 深圳比克 GRRF 国人通讯CHFR.OB 中国果业CYXI.OB 英霞实业CHIF.OB 大陆农业CSOF.OB 宁波彬彬文具NTHH.OB 山西金海煤业ZHNP.OB 河南众品KWBT.OB 康坦生物MSMT.OB 媒体网络CHMD.OB 千年发展CHDT.OB 直接贸易CHBP.OB 南京科源CHCG.OB 3C集团CPDV.OB 陕西嘉汇
中国公司境外上市一览表
中国公司境外上市一览表 （截至到： 2007 年 3 月 10 日共747家中国企业在境外上市）出处:美国世界企业上市融资集团有限公司北京代表处 一、NYSE—纽约证交所（共25家中国企业） 1、中芯国际（交易代码：SMI；地域：上海；行业：电子） 2、兖州煤业（交易代码：YZC；地域：山东；行业：煤炭采选） 3、广深铁路（交易代码：GSH；地域：广东行业：港口交通） 4、华能国际（交易代码：HNP；地域：北京；行业：电力热力） 5、中海油（交易代码：CEO；地域：北京；行业：石油化工） 6、上海石化（交易代码：SHI；地域：上海；行业：石油化工） 7、中国人寿（交易代码：LFC；地域：北京；行业：金融） 8、东方航空（交易代码：CEA；地域：北京；行业：港口交通）
9、南方航空（交易代码：ZNH；地域：广东；行业：港口交通） 10、中石化（交易代码：SNP；地域：北京；行业：石油化工） 11、中国联通（交易代码：CHU；地域：北京；行业：通讯设备） 12、中国电信（交易代码：CHA；地域：北京；行业：通讯设备） 13、中国网通（交易代码：CN；地域：北京；行业：通讯设备） 14、中国移动（交易代码：CHL；地域：北京；行业：通讯设备） 15、华晨汽车（交易代码：CBA；地域：辽宁；行业：汽车制造） 16、中国石油（交易代码：PTR；地域：北京；行业：石油化工） 17、中国资金（交易代码：CHN；地域：北京；行业：金融） 18、玉柴国际（交易代码：CYD；地域：广西；行业：汽车及配件）
19、中国铝业（交易代码：ACH；地域：北京；行业：金属） 20、飞鹤乳业（交易代码：ADY；地域：黑龙江；行业：生活消费品） 21、亚太卫星（交易代码：ATS；地域：北京；行业：通讯设备） 22、亚洲卫星（交易代码：SAT；地域：北京；行业：通讯设备） 23、无锡尚德（交易代码：STP；地域：江苏；行业：电力热力） 24、新东方（交易代码：EDU；地域：北京；行业：教育） 25、深圳迈瑞（交易代码：MR；地域：广西；行业：医疗器械） 二.美国证交所——AMEX（共6家中国企业） 1、中国科兴（交易代码：SVA；地域：北京；行业：医药） 2、海南金盘（交易代码：JST；地域：海南；行业：机械材料） 3、天狮国际（交易代码：TBV；地域：北京；行业：医药）
海外中国上市公司财务造假案例
海外集体诉讼警示录：14%的在美上市公司被诉 集体诉讼漩涡 海外上市（尤其在美国上市）的中国概念股，正在面临一波集体诉讼的汹涌浪潮。2005年春节前后，即有两家明星公司——前程无忧和新浪，被美国律师事务所告上了法庭。 在新浪一案中，美国人似乎是太吹毛求疵了。他们对新浪主要有三点指控：1、没有主动及时的披露中国移动MMS服务条款变化和启用新的MMS服务结算平台对新浪业务的影响，或披露不完全。2、没有披露公司为达到业绩目标，而日益对“算命”、“星象”、“情色”短信息服务产生的收入依赖。3、没有预计到政府打击在线、短信算命服务对新浪现金流的影响。（详见《“中国概念股”海外集体诉讼备忘录》） 中国观察者一般认为，政府行为以及中国移动公司的政策调整，新浪均难以掌握。 与新浪的遭遇相似，各领一时风骚的中国明星公司，纷纷被卷入了集体诉讼的法律旋涡。 自从2001年6月29日，中华网被告上美国法庭以来，先后有网易、中国人寿、UT斯达康、中航油、新浪、前程无忧等7家公司遭遇了集体诉讼。除了网易与投资者达成庭外和解之外，其余6家尚未结案。 《新财经》发现，2004年以来，遭遇海外集体诉讼的中国公司数量，有一种迅速放大的趋势。 集体诉讼进入高峰期，同时意味着海外IPO的黄金时代过去了。自1993年首家H股青岛啤酒上市以来，海外资本市场的“中国概念股”数量已经多达百家。 如果说，2004年之前，到美国上市还象征着一个财富、荣耀、梦想、国际化的故事；之后，赴美上市难度增大，对已经上市的公司则意味着更多锤炼和考验。 坏苗头已经出现了。迫于美国严格的监管法律压力，多家中国公司望而却步。2004年12月，中国国际航空公司取消了在纽约上市的计划，转往伦敦证券交易所。原本计划在香港、美国同时上市的中国外运公司，最后也取消了在美上市计划。
在美国上市的中国公司名单汇总
在美国上市的中国公司名单汇总： ◎门户网站类◎ ASIA 亚信科技控股有限公司 TOMO https://www.sodocs.net/doc/49201779.html, SINA https://www.sodocs.net/doc/49201779.html, SOHU https://www.sodocs.net/doc/49201779.html, CHINA https://www.sodocs.net/doc/49201779.html, ◎游戏类◎ SNDA 盛大互动娱乐 NTES 网易 NCTY 9城 WZEN Webzen公司(中国概念) ◎短信增值服务◎ LTON 掌上灵通 HRAY HURRAY HOLDING CO LTD,华友世纪KONG Kongzhong, 空中网 ◎通信◎ UTSI UTstarcom CNTF 德信无线 CHA 中国电信 CNC 网通 CHU 联通 CHL 中国移动通信 GRRF 国人通讯 TSTC 东方信联 ◎客户服务网站◎ CTRP 携程 LONG E龙 JRJC 金融界 JOBS https://www.sodocs.net/doc/49201779.html, BIDU 百度 FMCN 分众传媒 APYM Asia Payment Systems HMIN 如家连锁酒店 JOBS 51JOB－前程无忧 XFML 新华财经媒体 EFUT 富基软件
◎生物科技◎ SVA Sinovac Biotech BBC 博迪森农业肥料 YHGG 亚盛 AOB 东方生物科技 ADY American Dairy CKGT 康太生物科技 AXJ 沈阳生化AXM Pharma Inc CMED 中国医药 TCM 同济堂制药 SSRX 三生制药 SCR 先声药业 SYUT 圣元国际 ◎能源◎ YZC 兖州煤矿 SHI 上海石化 JCC 吉林石化 PTR 中石油 SNP 中石化 HNP 华能 CEO 中国海洋石油总公司CESV China Energy Saving STP 无锡尚德 YGE 天威英利 CSIQ 阿特斯太阳能 JASO 晶澳太阳能 TSL 常州天合 SOLF 林洋新能 TSL 天合光能 CSUN 中电光伏 LDK 江西赛维 ◎运输◎ ZNH 南方航空 CEA 东方航空 GSH 广深铁路 HIHO Highway控股有限公司
中国企业美国上市的历史
从1992年起，中国公司开始在美国上市，与中国企业在香港证券市场的变动周期类似，中国企业在美国证券市场上市经历了极大的起伏，其大致经历4个阶段。 第一阶段二十世纪九十年代初期的首次中国热 二十世纪九十年代初期中国公司在美国上市有两类形式，一类是在香港上市的国企H股以美国存托凭证方式（ADR）在美国纽约证券交易所上市，如青岛啤酒、上海石化、马鞍山钢铁等8家公司，另一类为外资或中资的公司以境外的公司收购收购中国国内的资产，境外公司直接在美国上市，如华晨金杯汽车、中国中策轮胎和正大易初摩托。华晨金杯汽车是首家在美国发行股票上市的中国公司，于1992年10月9日在纽约证券交易所上市。首批在美国上市的中国公司几乎都是制造业公司。二十世纪九十年代初期，是中国经济刚开始对外资开放，中国经济的增长速度强劲吸引了国际投资者。中国股票在美国上市后，受到市场的热烈追捧。青岛啤酒在美国发行获得200多倍的超额认购，而华晨金杯汽车在上市后的一个多月内，股价从发行价的16美元上涨至33美元。 第一次中资股热潮从1992年持续到1994年即开始消退，中资股股价大幅下跌。此轮下跌一方面是受到墨西哥的金融危机引发的新兴市场信心危机的影响，另一方面是中国上市公司本身的原因。上市公司在上市后暴露出公司运作的不透明、信息披露不及时等的管理缺陷，而中国的宏观调控政策又使公司的经营出现很大的困境。公司在上市后公布的中报和年报业绩与公司管理层在上市推荐时所做的预测有很大出入，国际投资者大量抛售中国股票，形成了中资股的第一次低潮。 第二阶段 1997年的H股基建航空板块和红筹股热潮 1997年上半年，香港市场开始复苏，中资股迎来第二次上市高潮，此轮上市的主体主要为两类，一类是航空及铁路、公路、电力等基础设施领域的H股公司，如华能电力国际、中国东航、南方航空、大唐发电等，另一类为红筹股公司，主要是从事垄断业务的公司，如中国移动（0941，前称中国电信），以及地方政府背景的北京控股（0392）、上海实业（0363）等。这些公司在香港上市的同时，在美国以ADR 方式上市或在OTC市场挂牌交易，出于对中国基础设施增长潜力及对上市公司政府背景和垄断业务的乐观预期，这些公司在美国市场受到投资者青睐。但1997年8月起，亚洲金融危机全面爆发，随后引发经济萧条使股市价格全面暴跌，而1998年10月的广信清盘事件极大打击了海外投资者对中国企业的信心，随后1年半时间内，中资企业在海外市场的融资基本停止。 第三阶段1999年起的第一波网络股Nasdaq上市热潮 与前两次中国热不同，此轮受追捧的是在Nasdaq上市的科技股，这也是中国企业开始大规模地Nasdaq上市。二十世纪九十年代末期，全球科技股泡沫兴起，Nasdaq市场的科技类上市公司成为全球的投资热点。 1999年2月17日，中国最大的电话机生产商-侨兴环球在美国纳斯达克市场上市，因而成为我国第一家境外上市的民营企业。由于受到中美签署入世协议利好因素刺激，其股票当日升幅达268%，成交也创下天量。至1999年12月31日，股价飙升至28美元。引发了新一轮的中国企业热潮。而随后的网络股热潮，又使中国的互联网板块在美国市场兴起。 1999年7月4日，以中国业务为主的香港网络公司中华网在Nasdaq上市，集资1亿美元，在上市的当日，股价由20美元飙升到67.2美元，上涨235%，当日市值超过13亿美元，集资1亿美元。至2000年1月11日，收盘价高达82美元（一拆二后），创造了互联网企业的传奇示范效应。2000年，中国的三大门户网络，新浪、搜狐和网易相继在Nasdaq上市，在Nasdaq形成了中国的网络股板块的热潮。但随着网络股泡沫的破灭，这些公司的业绩不可避免地大幅下滑，至2002年，这些公司的股票均下跌至1美元左右，面临被摘牌的边缘。 第四阶段 2004年起的第二波网络股Nasdaq上市热潮 在经历了互联网业务跌宕起伏后，生存下来的互联网公司一般具有现实的赢利模式和较强的竞争力，在行业中处领导地位。2003年底，从事网上宾馆机票预定业务的电子商务公司携程的上市，标志着中国互联网业务公司在Nasdaq上市的第二次高潮的开始。2004年全年，有Tom 在线、掌上灵通、盛大娱乐等9家公司在期间上市，在Nasdaq上市的中国互联网板块的总市
中国公司境外上市一览表
中国公司境外上市一览表（截至到： 2007 年 3 月 10 日共747家中国企业在境外上市） 出处:美国世界企业上市融资集团有限公司北京代表处 一、NYSE—纽约证交所（共25家中国企业） 1、中芯国际（交易代码：SMI；地域：上海；行业：电子） 2、兖州煤业（交易代码：YZC；地域：山东；行业：煤炭采选） 3、广深铁路（交易代码：GSH；地域：广东行业：港口交通） 4、华能国际（交易代码：HNP；地域：北京；行业：电力热力） 5、中海油（交易代码：CEO；地域：北京；行业：石油化工） 6、上海石化（交易代码：SHI；地域：上海；行业：石油化工） 7、中国人寿（交易代码：LFC；地域：北京；行业：金融） 8、东方航空（交易代码：CEA；地域：北京；行业：港口交通） 9、南方航空（交易代码：ZNH；地域：广东；行业：港口交通） 10、中石化（交易代码：SNP；地域：北京；行业：石油化工） 11、中国联通（交易代码：CHU；地域：北京；行业：通讯设备） 12、中国电信（交易代码：CHA；地域：北京；行业：通讯设备） 13、中国网通（交易代码：CN；地域：北京；行业：通讯设备） 14、中国移动（交易代码：CHL；地域：北京；行业：通讯设备） 15、华晨汽车（交易代码：CBA；地域：辽宁；行业：汽车制造） 16、中国石油（交易代码：PTR；地域：北京；行业：石油化工） 17、中国资金（交易代码：CHN；地域：北京；行业：金融） 18、玉柴国际（交易代码：CYD；地域：广西；行业：汽车及配件）
19、中国铝业（交易代码：ACH；地域：北京；行业：金属） 20、飞鹤乳业（交易代码：ADY；地域：黑龙江；行业：生活消费品） 21、亚太卫星（交易代码：ATS；地域：北京；行业：通讯设备） 22、亚洲卫星（交易代码：SAT；地域：北京；行业：通讯设备） 23、无锡尚德（交易代码：STP；地域：江苏；行业：电力热力） 24、新东方（交易代码：EDU；地域：北京；行业：教育） 25、深圳迈瑞（交易代码：MR；地域：广西；行业：医疗器械） 二.美国证交所——AMEX（共6家中国企业） 1、中国科兴（交易代码：SVA；地域：北京；行业：医药） 2、海南金盘（交易代码：JST；地域：海南；行业：机械材料） 3、天狮国际（交易代码：TBV；地域：北京；行业：医药） 4、三乐源（交易代码：AOB；地域：黑龙江；行业：医药） 5、博迪森（美）（交易代码：BBC；地域：陕西；行业：石油化工） 6、新龙亚洲（交易代码：NWD；地域：广东；行业：生活消费品） 三.NASDAQ——纳斯达克（共37家中国企业） 1、中华网（交易代码：CHINA；地域：北京；行业：网络） 2、亚信（交易代码：ASIA；地域：北京；行业：网络） 3、UT斯达康（交易代码：UTSI；地域：北京；行业：软件） 4、新浪（交易代码：SINA；地域：北京；行业：网络） 5、网易（交易代码：NTES；地域：广东；行业：网络） 6、搜狐（交易代码：SOHU；地域：北京；行业：网络） 7、携程网（交易代码：CTRP；地域：上海；行业：网络）
中国公司在美上市指南
中国公司在美上市指南 美国的证券市场概况 美国最大的全国性证券交易所当数纽约证券交易所（NYSE）。在纽约证券交易所交易中，购买和出售的订单传达到中心，由中心的专业人士通过维护系统以使买卖的订单匹配，从而实现交易。在场外交易市场，买卖是通过券商之间连接的计算机终端和报价单来完成的。最著名的场外交易市场就是纳斯达克（NASDAQ），券商作为中介代理人匹配客户之间的订单，或是直接以自己的名义介入证券交易。 纽约证券交易所是世界上最大的股票市场，其筹集的资金居股市之首。纽约证券交易所有将近2800多个上市公司，在2003年，包括了来自51个国家的470个外国公司。2003年，在纽约证交所上市的中国公司为15家，市值达到89亿美元；亚太地区共有82家公司，市值达728亿美元。广泛的市场参与者，包括公司、个人投资人、机构投资人和成员公司，构成了这一交易市场。在证券交易所上市的公司已经满足了最严格的上市标准，其范围包括从最大、最著名的蓝筹公司到许多世界顶级的技术公司和年轻、成长迅猛及私有化的非美国公司。 在美国，大概有35000个公司的股票在场外市场交易。纳斯达克是一个全国范围内的电子询价系统，存储和提供每秒更新的来自全国联网券商的场外报价。有6000多个公司的证券在该系统上询价，现有包括搜狐、新浪、网易三大中国门户网站在内的十几家中国公司在纳斯达克上市。当今的纳斯达克市场已成为纽约证券交易所的竞争对手，许多符合纽约证券交易所上市标准的大公司已选择了纳斯达克，如著名
的微软、英特尔、苹果电脑和升阳公司等。纳斯达克市场分为两个部分：纳斯达克全国市场和纳斯达克小型市场。在全国市场的上市标准更严格，证券更具折现性。对于更小的公司而言，纳斯达克提供了一个“场外交易电子版”，但其并不是纳斯达克市场的一部分，而只是为券商们提供的通过计算机网络查询和估价的途径。最小的公司则可以列于“粉红单”上。 在美上市的优势 中国公司在美国上市的优势主要体现在以下几个方面： 第一，市场的稳定性以及其代表的雄厚的资金来源为企业融资提供最大空间。对于包括中国公司在内的境外公司来说，对美国资本市场趋之若鹜的最大理由无不在于这一市场所容纳的雄厚资金。由于比较健全的法律制度和行之有效的市场运营，不仅是庞大的投资机构，就是零散的个人投资者也能通过很多方式将资金聚集起来，占据着资本市场的重要一隅，使美国成为全球规模最大和最有效的资本市场。美国投资者对非美国公司的股票的投资大约占这些投资人所拥有的资金总额的12％。 第二，有助于提高公司的全球知名度和良好声誉。公司良好的知名度在一定程度上代表着公司的价值，而通过上市在美国的资本市场亮相，借助路演等方式以及媒体的曝光，取得类似促销的效应，能够提高企业的声誉。通常，股市分析师会跟踪公司的业绩，并定期预测公司前景，积极有利的报告将有助于提高公司股票的价格。 第三，强化公司的购并手段。上市使公司的价值能通过具有很高的折
中国美国上市公司一览表
中国美国上市公司一览表 纽约证券交易所(NYSE ) 纽约证券交易所(New York Stock Exchange ， NYSE)，是上市公司总市值第一, 值15万亿美元。至2004年7月，三十间处于道琼斯工业平均指数中的公司除了英特 NYSE 上市。2005 年4月末，NYSE 和全电子证券交易所 (Archip elago )合并，成为一个盈利性机构。纽约证券交易所有限公司的总部位于美 国纽约州纽约市百老汇大街 11号，在华尔街的拐角南侧。纽约证券交易所有大约 2,800 间公司在此上市，全球市值 15万亿美元。至2004年7月，三十间处于道琼斯工业平 均指数中的公司除了英特尔和微软之外都在 NYSE 上市。2006年6月1日，纽约证券 纽约证交所对美国国外公司上市的条件要求 社会公众持有的股票数目不少于 250万股; 有100股以上的股东人数不少于 5000名; 公司的股票市值不少于 1亿美元; 公司必须在最近3个财政年度里连续盈利，且在最后一年不少于 250万美元、 前两年每年不少于 200万美元或在最后一年不少于 450万美元，3年累计不 少于650万美元; 公司的有形资产净值不少于 1亿美元; 对公司的管理和操作方面的多项要求; 其他有关因素，如公司所属行业的相对稳定性， 公司在该行业中的地位， 公司 产品的市场情况，公司的前景，公众对公司股票的兴趣等。 IPO 数量及市值第一，交易量第二的交易所，有大约 2,800间公司在此上市，全球市 尔和微软之外都在 交易所宣布与泛欧证券交易所合并组成纽约泛欧证交所 (NYSE Euro next)。
79. 人人公司 RENN 2011 北京 互联网 80. 网秦 NQ 2011 北京 互联网 81. 诺特 KNOT 2011 北京 互联网 82. 凤凰新媒体 FENG 2011 北京 互联网 83. 正兴集团 ZX 2011 福建 汽车 按地域美国纽交所中国上市企业分布情况如下 按行业美国纽交所中国上市企业分布情况如下 口医药 ■互联网 □新能源 口石油化工 ■教育 □通讯 ■软件 口建筑地产 ■交通 ■金融保险 □电子 □电力 ■其他 其他 19% 福建 6% 江苏 6% 北京 42% 上海 11% 广东 16% □北京 ■广东 □上海 □江苏 ■福建 □其他 金融保险 3% 交通 4% 建筑地产/ 4% 互联网 13% 电力 3% 电子 3% 教育 5% 医药 17% 其他 20% 石油化工 9% 通讯
美国中的中国上市公司
纽约证交所 ACH 中国铝业 ADY 飞鹤乳业集团 AOB 美东生物技术有限公司 ASX 日月光半导体制造股份有限公司ATV 橡果国际 AUO 友达光电股份有限公司 CCM泰和诚 CEA 中国东方航空 CEO 中国海洋石油 CEU 中国教育网络联盟 CGA 鼎天集团 CHA 中国电信 CHC 中国水电公司 CHL 中国移动 CHN 中国资金 CHT 中华电信 CHU 中国联通 CMM广而告之合国际广告 CO 中国血网 CPC 康鹏化学 CSR 安防科技（中国） CTC 21世纪不动产 CYD 中国玉柴机器国际 DGW多元水环保技术产业(中国)有限公司DL 正保远程教育 DYP 多元数码印刷 EDU 北京新东方教育科技集团 EJ 易居(中国)控股 GA 巨人网络科技 GCH 大中华基金 GRO华奥物种集团有限公司 GSH 广深铁路 GSI 通用钢铁 GU 古杉环境能源 HBC 丰银行 HEK Heckmann Corp. HNP 华能国际电力 HTX 和记电讯国际 JFC JF中国区域基金 LDK 江西赛维LDK太阳能高科技 LFC 中国人寿保险 LFT 东南融通
MR 迈瑞医疗国际 NED 诺亚舟教育控股 NIVS 纳伟仕 NPD 中国海王星辰连锁药店 NTE 南泰电子 PTR 中国石油天然气 QXM 侨兴移动通信 SCR 先声药业集团 SHI 中国石化上海石油化工 SMI 中芯国际集成电路制造 SNP 中国石油化工 SOL 浙江昱辉阳光能源 STP 尚德太阳能电力 STV 中国数字电视控股 SVN 七天连锁酒店 SYT 先正达 TCM 同济堂药业 TSL 常州天合光能 TSM 台湾积体电路制造股份有限公司 UMC 联华电子 UTA 旅程天下控股集团 VIT 文思信息技术 VMW中国VMware WH 西姆莱斯石油专用管制造 WX 无锡药明康德新药开发 XIN 鑫苑（中国）置业 YGE 天威英利新能源 YZC 兖州煤业 ZNH 中国南方航空 纳斯达克 ABAT 黑龙江中强能源科技 ACTS 珠海炬力集成电路设计 AMCF 中国船舶燃料服务公司 AMCN 北京航美传媒广告 APWR A-Power Energy Generation System, Ltd. ASIA 亚信科技控股 ATAI ATA公司 AUTC 开元汽车 BEST 赛诺国际 BIDU 百度网络 BJGP BMP太阳石 BSPM 映泰制药公司
中国在纳斯达克上市的公司有哪些范文
中国在纳斯达克上市的公司有哪些？表现如何？ 中华网 2000年7月13日首家在纳斯达克上市的中国网站，上市当天股价从20美元涨到67美元，创造了超额认购40倍，开盘当日股价就翻两倍的纪录 盛大互动娱乐公司 2004年5月13号上市价格每股13美元 网易 2000年6月30号网易的发行价定为每股15.50美元，虽然该股在首个交易日曾冲到17美元，但盘中一度跌至10.75美元，至下午4时收市时，以12.165美元的价格书写了网易上市第一天的历史，跌幅高达20％。 搜狐 2000年7月12日 13.03美元开盘，曾经一度下滑至12.60美元，最后报收于13.00美元。 新浪 2000年4月13日每股定价为17美元，共发行400万普通股，募集资金6800万美元。上市当天开盘价为17.75美元，最高价为29.125美元，最低价为17.75美元，收盘价为20.6875美元。 携程旅行网 2003年12月9日首日纳市交易，发行价18美元，开盘价24.01美元；截至收盘，其股价较发行价涨15.94美元，涨幅88.56%；较开盘价涨9.93美元，涨幅41.36%，至33.94美元。上市当天就暴涨88.6％，成为纳斯达克市场过去三3年来开盘当日涨幅最高的一只股票 无忧招聘网 2004年9月29日开盘价18.98美元，报收于21.15美元，涨幅达51.07%，成交量达6,068,355股。该股在首日交易中最高涨至22.9美元。 e龙旅行网 2004年10月28号发行价为13.5美元，开盘价为22美元，开盘后即一路下跌，最低下探至13.96美元。报收于14.4美元，首日交易涨6.67%，成交量为5,746,614股 Tom Online 2004年3月10号以15.75美元开盘，共发行8亿股美国预托股票。 空中网 2004年7月9日发行1000万股，发行价10美元／股。开市后不久就跌破发行价，一度跌至9.75美元。在最后收盘时，则以10.10美元收盘，比发行价略高。 灵通网 2004年3月4日公司股票以每股19美元高价开盘，当日收于17.47美元。掌上灵通藉此募集资金约为8470万美元。掌上灵通公司此次以发行存托凭证的形式上市，共发行了515万单位ADR，再加上向某些特定的股东发售的91万单位ADR，共计606万单位。其中每单位ADR代表10股普通股。 百渡 2005年8月5日招股说明书显示，2003年百度净亏损人民币8883万元，而在2004年已经扭亏为盈，并且有人民币1.2亿元的盈余。在2002年到2004年期间，百度主营业务收入的年均增长幅度达到了惊人的225%.
中国企业海外上市调查报告
2004年中国企业海外上市调查报告 2004年12月22日，北青传媒的H股股票在香港联交所正式挂牌，伴着一声清脆的锣声在香港联交所交易大厅内响起，标志着2004年中国企业赴海外上市的年度征程终于落下了帷幕。在这值得纪念的一年里，越来越多的中国企业走进了海外的资本市场，开始在国际资本市场的舞台上书写长袖善舞的历程。总体上，2004年延续了2003年国际资本市场上刮起的“红色旋风”，国外投资者在看好中国经济的同时，也更加关注海外上市的中国公司。这些企业是中国最优秀、最活跃与最有潜质公司的代表，投资这些公司便可以间接分享中国经济的发展成果，因此很多中国企业成为海外资本市场的“宠儿”。但是，回首2004年国内企业海外上市之路，我们可以看到，在鲜花与掌声的背后，也有一些隐忧与不安。 图1 2003年与2004年中国企业海外IPO数量与筹资额比较 2003年中国企业海外新上市(IPO)的数量为48家，筹资金额约70亿美元；2004年的数量为84家，筹资金额111.51美元。在海外新上市数量方面，2004年比2003年增长了75%；在筹资额方面，2004年比2003年增长了59%。图1说明近两年中国企业海外上市的增长速度较快，随着中国经济的持续增长，越来越多的中国企业开始将目光转向海外资本市场。国外的投资者与外资的投资银行也
都迫不及待地关注来自中国的上市公司，希望从中找到更好的投资或者业务机会。 而反观国内证券市场，2004年深沪两市发行的98只新股共募资353.46亿元，约42.7亿美金，创下1997年以来首发募资额的最低点，而同期海外IPO的中国企业数量为84家，共筹集资金111.5亿美金，募集资金量约为国内的3倍。(见图2) 图2 2004年中国企业海内外IPO数目与筹资总额对比 同时我们也注意到，尽管2004年国内首发上市的公司数量大于海外新上市中国公司数量，但是中国公司海外新上市募集的资金量远远大于国内(近3倍)。这说明在海外上市的中国公司大多为大型企业，募集的资金量较大。由此，我们可以推论出：大型中国企业更倾向于到海外上市。这与国资委的支持态度、海外资本市场巨大的资金存量以及国内证券市场的低迷等因素是密不可分的。 2004年中国企业赴海外上市的数量继续保持高速增长，主要原因在于国内融资渠道的进一步减少。自国家加大宏观调控力度以来，很多过热行业得到了抑制，作为国内主要融资方式的商业银行贷款规模大幅缩减。很多企业，特别是民营中小企业，对于资金的渴求度进一步上升。由于国内上市的审批与时间上的难
中国公司如何在美国上市
中国公司如何在美国上市？ 很多人都把“上市”和“首次公开发行”（IPO）混为一谈。IPO最为人所知的是能在转眼间将辛苦奋斗的企业家变成百万富翁。但实际上，IPO只是您踏上华尔街的五种途径之一，而且可能还不是最佳的一种。IPO、DPO、买壳上市……到底哪一种最适合您呢？ 1. 首次公开发行（IPO） IPO应该是最广为人知的一个上市途径，但也是最贵、风险最高、需时最长、消耗企业最多资源的途径。大部分的IPO都需要一年或以上的时间才能完成。在过程中，除了消耗管理层许多的精力，使他们无法专注于公司的业务发展外，公司还需要投入数十万，甚至上百万美元的律师费、会计师费等，但却不能保证能够成功上市。即使在成功上市后，承销商的包消费也高达融资总额的3-10%。 IPO的成功与否很大程度上取决于承销商的能力和当时的市场状况。承销商随时会因为市场变化而撒手立场，对一家公司的现金流及士气有极大的影响。IPO最适合于根基稳固、资金雄厚和知名度高的公司。 当然，IPO的好处是在成功上市后，公司可以立即获得新的资金。 2. 自我公开发行（DPO） DPO是小型版的IPO，最适合于尚未达到上述IPO标准的小型的公司。DPO又被称为“自助式”的IPO，公司只需用简化的步骤及表格向监管机构登记发行股票，并且可以自己负责包销，直接向公司的客户、供应商、员工等出售股票。不像在IPO 时，公司必须经过承销商将股票出售予承销商的客户。由于不需要承销商的介入，DPO的融资规模一般较IPO的为小，成本也要比IPO的为低。可是，DPO在登记发行和推广公司股票方面需要花费管理层许多的精力。 3. 根据证券交易法登记 如果公司已经拥有一定的股东群体，可以根据证券交易法登记成为纳斯达克
国内公司在美国上市一览表
国内在美上市公司一览表 一、纽约证券交易所（NYSE） 纽约证券交易所( New York Stock Exchange，NYSE)，是上市公司总市值第一，IPO数量及市值第一，交易量第二的交易所，有大约2,800间公司在此上市，全球市值15万亿美元。至2004年7月，三十间处于道琼斯工业平均指数中的公司除了英特尔和微软之外都在NYSE上市。2005年4月末，NYSE和全电子证券交易所（Archipelago）合并，成为一个盈利性机构。纽约证券交易所有限公司的总部位于美国纽约州纽约市百老汇大街11号，在华尔街的拐角南侧。纽约证券交易所有大约2,800间公司在此上市，全球市值15万亿美元。至2004年7月，三十间处于道琼斯工业平均指数中的公司除了英特尔和微软之外都在NYSE上市。2006年6月1日，纽约证券交易所宣布与泛欧证券交易所合并组成纽约泛欧证交所(NYSE Euronext)。 纽约证交所对美国国外公司上市的条件要求: 社会公众持有的股票数目不少于250万股； 有100股以上的股东人数不少于5000名； 公司的股票市值不少于1亿美元； 公司必须在最近3个财政年度里连续盈利，且在最后一年不少于250万美元、前两年每年不少于200万美元或在最后一年不少于450万美元，3年累计不 少于650万美元； 公司的有形资产净值不少于1亿美元； 对公司的管理和操作方面的多项要求； 其他有关因素，如公司所属行业的相对稳定性，公司在该行业中的地位，公司产品的市场情况，公司的前景，公众对公司股票的兴趣等。
按地域美国纽交所中国上市企业分布情况如下: 42% 16% 6% 其他 按行业美国纽交所中国上市企业分布情况如下: 医药 互联网 13% 3% 3% 3% 其他